液相串联质谱检测方法前处理总结docdeflate.docx
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液相串联质谱检测方法前处理总结docdeflate
首先,作为质检员,不但要掌握专业的检测知识,还需要认真仔细,才能发现
问题,找出问题,解决问题。
所以这三个月培训使我受益匪浅。
在检验之前,
要学会读懂相关的检验标准,并能融会贯通到实际当中去,并且要做好操作,
及时的发现及纠正检验过程中存在的问题。
其次,经过实习,我认为这有助于提高自己的综合素质,全面发展了自己。
古
语说得好:
流水不腐,户枢不蠹。
我在大学期间一直学习食品质量安全与检测
专业及相关知识。
实习这段时间,我又对各种检测项目等基础知识有了一个清
晰的认识。
也是对自己专业知识的重新认识和深化,这也是干好这项工作的业
务基础。
再次,我认为自己培养了该职务所必须的素养和品质。
质检工作要求质检
员的敬业精神比较强,工作认真负责,勤勤恳恳,任劳任怨,干一行,爱一行,
专一行。
尤其是严明的组织纪律性、吃苦耐劳的优良品质、雷厉风行的工作作
风,这是干好一切工作的基础。
同时思想上也要求比较活跃,接受新事物比较
快,爱学习、爱思考、爱出点子,工作中注意发挥主观能动性,超前意识强,
这有利于开拓工作新局面。
其他的如办事稳妥,处世严谨,在廉洁自律信奉诚
实、正派的做人宗旨,能够与人团结共事,而且具有良好的协调能力上更应该
严格的要求自己,这是做好一切工作的保证,也是新人能够更快地进入质检员
角色,开展工作的前提和保障。
实习期间这些方面的要求都有所提高,可谓受
益匪浅。
前处理总结
第一部分 瘦肉精的检测
一尿样
1 试剂:
乙腈(色谱纯)、乙腈水(10+90)(所用水为超纯水)
2 器材:
50ml 离心管、移液枪(200ul、1ml、10ml)、冷冻离心机、超声波清
洗器、旋转蒸发仪、迷你震荡器、25ml 蒸馏瓶、1ml 针管、0.22um 有机滤膜。
3 实验步骤:
吸 2ml 尿样于 2ml 离心管中备用→从尿样中吸取 500ul 于 50ml 离心管中→ 加
10ml 乙腈→涡旋→离心(6000r/min、5min)→上清液转移入 25ml 蒸馏瓶中
40℃水浴减压蒸干→加 2ml 乙腈水(10+90)定容后超声溶解→1ml 针管吸取
0.6-0.7ml 用 0.22um 有机滤膜过滤→上机。
4 理解要点:
1):
样品稀释倍数为 4
2):
加入乙腈提取之前需要加入内标 100ul(10ng/ml),目的是看回收率。
二瘦肉精国标法
1 试剂:
0.03mol/L 盐酸溶液、甲醇、甲醇氨水(95+5)、氨水乙酸乙酯(3+97)、
乙腈水(10+90)、0.2mol/L 乙酸钠溶液(称取 16.4g 溶于 1L 水中,用冰醋酸调
节 PH 值至 5.20)、β-盐酸葡萄糖醛甙酶-芳基硫酸酯酶、同位素内标、标准品。
2 器材:
电子天平、50ml 离心管、10ml 离心管、移液枪(200ul、1ml、10ml)、
冷冻离心机、超声波清洗器、旋转蒸发仪、迷你震荡器(平行振荡器)、25ml
蒸馏瓶、MCX 固相萃取柱、固相萃取装置、1ml 针管、0.22um 有机滤膜。
3 实验步骤:
1) 称取样品 2.00g(±0.02g) →加内标 100ul(10ng/ml)→加 10ml 乙酸钠→加
200ulβ-盐酸葡萄糖醛甙酶-芳基硫酸酯酶→涡旋→超声 15min→37℃恒温孵育
16 小时→离心(6000r/min、5min)→上清液倒入离心管 A 中→下层残渣再加
入 10ml 乙酸钠重复涡旋、超声、离心步骤,上清液合并入离心管 A 中→过滤
上清液于另一离心管中→吸取 10ml 滤液过 MCX 固相萃取柱
2)过柱子顺序:
加甲醇 1 管→加蒸馏水 1 管→加 0.03mol/L 盐酸溶液 1 管→
加 10ml 样夜→加蒸馏水 1 管→加甲醇 1 管→减压抽干→加 5ml 甲醇氨水
(95+5)和 5ml 氨水乙酸乙酯(3+97)→减压收集于 10ml 离心管→转移入
25ml 蒸馏瓶中 40℃水浴减压蒸干→加 1ml 乙腈水(10+90)定容后超声溶解
→1ml 针管吸取 0.6-0.7ml 用 0.22um 有机滤膜过滤→上机。
3) 要点与理解 ;
①每个加入内标 100ul(10ng/ml)的目的是看回收率,选取样品加标品
100ul(10ng/ml)也是看回收率。
②加酶是为了更好地提取莱克多巴胺。
③乙酸钠调 PH 值至 5.20 时,提取效果最好,用冰乙酸调 PH 值,可避免引入
其他杂质离子。
用 10ml 样液过柱子,1ml 乙腈水定容为了和质量相约分,直接
出结果,减少换算麻烦。
④过柱子是用 0.03mol/L 盐酸溶液是提供一个酸性环境,使其更好地吸附克伦
特罗。
⑤先加甲醇是为了活化萃取柱,最后再加甲醇是洗脱杂质。
甲醇氨水(95+5)
和氨水乙酸乙酯(3+97)的作用是洗脱有效成分。
三瘦肉精反向萃取法(对于骨汤、肉馅等含油比较高的样品)
1 试剂:
10%碳酸钠溶液(m/v)、乙酸乙酯,2%甲酸乙腈水、2%甲酸乙腈水
饱和正己烷。
2 器材:
电子天平、50ml 离心管、移液枪(200ul、1ml、10ml)、冷冻离心机、
超声波清洗器、旋转蒸发仪、迷你震荡器(平行振荡器)、50ml 蒸馏瓶、1ml
针管、0.22um 有机滤膜。
3 实验步骤:
称取样品 2.00g(±0.02g)→加内标 100ul(10ng/ml)→加 2ml10%
碳酸钠溶液→涡旋→加 8ml 乙酸乙酯涡旋震荡 2min→超声提取 10min→离心
(6000r/min、5min)→吸取上清液于 50ml 蒸馏瓶中→下层残渣再加入 6ml 乙
酸乙酯提取一次,合并上清液于 50ml 蒸馏瓶中→40℃水浴减压蒸干→加 2%甲
酸乙腈水饱和正己烷(肉馅加 5ml,骨汤、香精加 10ml),和 2ml 2%的甲酸乙腈
水→超声溶解→转移入 50ml 离心管中→离心(6000r/min、5min)→1ml 针管吸
取下层溶液约 1ml 用 0.22um 有机滤膜过滤→上机。
4 要点与理解:
1)加碳酸钠溶液是提供一个碱性环境,便于乙酸乙酯提取。
每个加入内标
100ul(10ng/ml)的目的是看回收率,选取样品加标品 100ul(10ng/ml)也是看
回收率。
2)用饱和正己烷,是为了除去油性杂质。
用 2%甲酸乙腈水去饱和正己烷是为
了和定容试剂保持一致,避免引入其他杂质离子。
定容试剂中加入 2%甲酸是为
了提供一个酸性环境,便于提取克伦特罗,同时和上机流动相保持一致。
3)对于复检样品,超声提取时间可以适当延长。
4)此方法还可以把两次提取液合并于离心管中,分两次加 5ml 盐酸溶液
(0.1mol/L)涡旋离心提取两次,吸出盐酸层,合并盐酸提取液,用 100g/L 氢
氧化钠调节 PH 值至 5.20,过 MCX 固相萃取柱,然后减压蒸干定容的方法。
β-受体激动剂的检测
根据国标 GB/T 22286-2008 不加酶法
样品:
猪肝
编号:
20110803004-1,20110803004-2,20110803005-1,20110803005-
1,20110803005+1,20110803005+2
一、前处理:
①取六个 50mL 离心管,依次按顺序编上号,分别称取样品 2g(±0.02g),
②分别加入内标 100μL(10ng/mL),根据编号加 100μL 外标(10ng/mL)然后
分别加 8mL 无水乙酸钠(PH=5.2),混匀充分提取,涡旋 10min,离心 (6000r,
10min),
③取上清液 4mL 于离心管 A 中,加 5mL0.1mol/L 的高氯酸溶液涡旋混匀,
用高氯酸调到 PH=1(±0.2 大概加用 1mL 针管加 12 滴左右),混匀,离心
(6000r,10min),上清液转移到离心管 B 中,用 400g/L(10mol/L)的氢氧化
钠溶液调到 PH=11(±0.2).
④加入 10mL 饱和氯化钠和 10mL 异丙醇-乙酸乙酯(6+4),充分提取涡旋 15min,离
心(6000r, 10min),上清液转移入离心管 C 中,40℃水浴氮吹至干,加入 10mL
无水乙酸钠溶液,涡旋超声溶解,备用。
二、过 MCX 柱子顺序
甲醇 1 管→水 1 管→2%甲酸水 1 管→样液 10mL→水 1 管→2%甲酸水 1 管→
甲醇 1 管→加压抽干
用 5mL5%氨水甲醇溶液洗脱柱子,洗脱液转移到 25mL 蒸馏瓶中,可在收集
管中加入 1mL5%氨水甲醇溶沿管壁缓缓冲洗加入,该液也转移到对应蒸馏瓶中。
注意:
过柱子时为不完全通液,过样和洗脱时应控制流速大概 2-3 秒 1 滴,
洗脱时最好先用洗脱液浸润 30s 到 1min.
三、蒸干浓缩定容
在旋转蒸发仪上 40℃水浴蒸干,冷凝水 10℃以下,在蒸馏瓶中加入 1mL2%甲酸
乙腈水,超声溶解 1-2min,尽可能最大的把侧壁也超声一下,用 1mL 针管吸取
过 0.22μm 有机滤膜于进样小瓶中,待上机检测。
第二部分硝基呋喃代谢物的检测
1试剂:
0.125mol/L 盐酸溶液(量取 10.6ml 盐酸,定容至 1000mL。
混匀。
)、
0.1mol/L 盐酸溶液、0.5mol/L 磷酸氢二钾缓冲溶液、100g/L 氢氧化钠溶液、甲
醇、甲醇水(5+95)、乙腈水(10+90)、乙酸乙酯、水饱和正己烷,0.2mol/L
Tris 试剂(称取 14.228g 三羟基氨基甲烷溶于 1000mL 水中)、衍生试剂(0.01g
邻硝基苯甲醛溶于 1.25ml 二甲基亚砜)。
.
2 器材:
电子天平、50ml 离心管、10ml 离心管、移液枪(200ul、1ml、10ml)、
冷冻离心机、超声波清洗器、旋转蒸发仪、迷你震荡器(平行振荡器)、50ml
蒸馏瓶、25ml 蒸馏瓶、Strata-X 固相萃取柱、固相萃取装置、1ml 针管、
0.22um 有机滤膜。
3 实验步骤:
1) 称取样品 2.00g(±0.02g) →加 20ml0.125mol/L 盐酸→加 200ul 衍生试剂→涡
旋→超声 10min→37℃恒温避光衍生 16 小时。
2)取出反应后样品冷却至室温,加 1ml0.5mol/L 磷酸氢二钾缓冲溶液,用
100g/L 氢氧化钠调节 PH 值到 7.0-7.5 之间→加 8ml 乙酸乙酯涡旋震荡 2min→
离心(6000r/min、5min)→吸取上清液于 50ml 蒸馏瓶中→下层再加入 6ml 乙
酸乙酯提取一次,合并上清液于 50ml 蒸馏瓶中→40℃水浴减压蒸干→加 5ml
水饱和正己烷和 5ml Tris 试剂→超声溶解→转移入 50ml 离心管 A 中→再向蒸
馏瓶中加 5mlTris 试剂→超声溶解→合并入 50ml 离心管 A 中→离心
(6000r/min、5min)→取下层溶液于离心管 B 中过 Strata-X 固相萃取柱。
3)过柱子顺序:
加甲醇 1 管→加蒸馏水 1 管→加完全部样夜→加甲醇水 1 管→
减压抽干→加 1 管半甲醇减压收集于 10ml 离心管中→移入 25ml 蒸馏瓶中
→40℃水浴减压蒸干→加 1ml 乙腈水(10+90)定容后超声溶解→1ml 针管吸取
0.6-0.7ml 用 0.22um 有机滤膜过滤→上机。
4 要点与理解:
1)衍生试剂现配现用。
2)加 1ml 0.5mol/L 磷酸氢二钾缓冲溶液,是为了方便调 PH 值。
用 100g/L 氢氧
化钠调节 PH 值到 7.0-7.5 之间,是为了提供一个碱性环境,有利于乙酸乙酯的
提取。
2)用水饱和正己烷是出去油性杂质。
3)收集时,用甲醇洗脱有效成分。
4)空白加标是为了在上机检测时建立标准曲线。
5)呋喃四种混标(呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃西林、呋喃妥因)100ng/mL 加
100ul。
第三部分沙星、磺胺类抗生素的检测
1试剂:
无水硫酸钠、乙腈、乙腈饱和正己烷、正丙醇、乙腈水(10+90)、乙
腈水饱和正己烷。
2 器材:
电子天平、50ml 离心管、移液枪(200ul、1ml、10ml)、均质器、冷冻
离心机、超声波清洗器、旋转蒸发仪、迷你震荡器(平行振荡器)、50ml 蒸馏
瓶、1ml 针管、0.22um 有机滤膜。
3 实验步骤:
称取样品 2.00g(±0.02g) →加 3g 无水硫酸钠→加 9ml 乙腈用玻璃棒搅匀或用均
质器均质→涡旋→离心(4000r/min、2min)→上清液转入另一离心管 A 中→下
层再加入 9ml 乙腈如有结块用璃棒搅匀或用均质器均质→涡旋→离心
(6000r/min、5min )上清液并入离心管 A 中。
在离心管 A 中加入 5ml 乙腈饱和正己烷→涡旋→离心(6000r/min、5min )→
下层溶液转入 50ml 蒸馏瓶中→加 2ml 正丙醇→40℃水浴减压蒸干→蒸馏瓶中
再加入 5ml 乙腈水饱和正己烷和 2ml 乙腈水(10+90)→超声溶解转入离心管
B 中→离心(6000r/min、5min)→1ml 针管吸取下层溶液约 1ml 用 0.22um 有机
滤膜过滤→上机。
4 要点与理解
1)样品加入无水硫酸钠,是为了除去样品中多余的水分。
样品加入无水硫酸钠
后,样品易结块不利于提取,要用玻璃棒捣碎或用均质器均质。
第一次离心可
以降低转度、缩短离心时间,减轻样品结块程度。
2)加乙腈饱和正己烷和乙腈水饱和正己烷的目的是为了除去油性杂质。
3)加正丙醇的目的是防止溶液暴沸。
4)标品需要加沙星类混标(4 种混标 1ug/ml加 20ul),磺胺类混标(24 种混
标 1ug/ml 加 50ul)。
第四部分 氯霉素的检测
1 试剂:
无水硫酸钠、氨水乙酸乙酯(3+97)、超纯水、水饱和正己烷。
2 器材:
电子天平、50ml 离心管、移液枪(200ul、1ml、10ml)、均质器、冷冻
离心机、超声波清洗器、氮吹仪、迷你震荡器(平行振荡器)、1ml 针管、
0.22um 有机滤膜。
3 实验步骤:
称取样品 2.00g(±0.02g)→加 3g 无水硫酸钠→加 10ml 氨水乙酸乙酯(3+97)
用均质器均质→涡旋→离心(4000r/min、2min)→上清液转入另一离心管 A 中
→下层用 10ml 氨水乙酸乙酯(3+97)→涡旋→超声 10min→离心
(6000r/min、5min)→上清液并入离心管 A 中→经氮吹仪吹干→加 5ml 水饱
和正己烷和 2ml 超纯水→涡旋→超声 5min→离心(6000r/min、5min )→1ml
针管吸取下层溶液约 1ml 用 0.22um 有机滤膜过滤→上机
4 要点与理解:
1)氯霉素容易被污染,处理样品时不要徒手操作,要带上手套。
不用洗洁精洗
刷容器。
离心管专用。
2)样品加入无水硫酸钠,是为了除去样品中多余的水分。
3)第一次离心可以降低转度、缩短离心时间,减轻样品结块程度。
在第二次提
取时可以延长超声时间使结块松动利于提取。
4)均质器均质以后,需要用另一个离心管装 10ml 氨水乙酸乙酯(3+97)来清
洗均质器。
清洗后的洗液供二次提取用。
再用蒸馏水来清洗均质器两次,避免
样品间的交叉污染。
5)需要做空白样品来检验检测过程是否被污染。
选择样品加标(10ng/L 加
100ul),来检测回收率。
6)用超纯水定容,是为了和上机流动相保持一致。
第五部分:
四环素的检测
1 试剂:
甲醇、甲醇水(5+95)、乙腈水(10+90)、乙酸乙酯、水饱和正己烷、
乙腈水(10+90)、OTC 萃取剂(柠檬酸 12.93g、磷酸氢二钠 27.55g、乙二胺四
乙酸二钠 37.23g 三种试剂混合溶于水,定容至 1L)
2 器材:
电子天平、50ml 离心管、10ml 离心管、移液枪(200ul、1ml、10ml)、
冷冻离心机、超声波清洗器、旋转蒸发仪、迷你震荡器(平行振荡器)、25ml
蒸馏瓶、Strata-X 固相萃取柱、固相萃取装置、1ml 针管、0.22um 有机滤膜。
3 实验步骤:
1)称取样品 2.00g(±0.02g)→加 10mlOTC 萃取剂→涡旋→离心
(6000r/min、5min)→上清液转入另一离心管 A 中→下层再加入 10mlOTC
萃取剂→涡旋→离心(6000r/min、5min )上清液并入离心管 A 中。
2)在离心管 A 中加入 5ml水饱和正己烷→涡旋→离心(6000r/min、5min)
去下层 10ml 过 Strata-X 固相萃取柱。
3)过柱子顺序:
加甲醇 1 管→加蒸馏水 1 管→加完全部样夜→加甲醇水 1 管→
减压抽干→加 2 管乙酸乙酯减压收集于 10ml 离心管中→移入 25ml 蒸馏瓶中
→40℃水浴以下减压蒸干→加 1ml 乙腈水(10+90)定容后超声溶解→1ml 针管
吸取 0.6-0.7ml 用 0.22um 有机滤膜过滤→上机。
4 要点与理解:
1)40℃水浴以下减压蒸干,防止对四环素的破坏。
2)乙酸乙酯洗脱有效成分。
3)标品 1ug/ml 加 100ul(包括土霉素、金霉素、四环素、强力霉素)。
经过实习我充分认识到了自己的不足,而且做实验动手能力更是有待加强,以
后做实验要认真仔细,善于发现问题和思考问题及总结,使自己的检验水平更
上一层楼,也感谢老师对我的培养。
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