微生物学实验报告.docx
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微生物学实验报告
微生物学实验报告
微生物学实验报告
篇一:
微生物学大实验实验报告微生物学大实验实验题目:
土壤微生物的分离纯化与鉴定
一.实验目的:
1.巩固本学期所学的所有微生物实验操作技能。
再次强调无菌操作概念。
3.初步学习微生物鉴定纯化的方法和思路。
4.学会应用相关手册对微生物进行分类。
二.实验原理:
1.培养基的制备、消毒与灭菌:
培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质,用以培养、分离、鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物。
在自然界中,微生物种类繁多,营养类型多样,加之实验和研究的目的不同,所以培养基的种类很多。
但是,不同种类的培养基中,一般应含有水分、碳源、氮源、能源、无机盐、生长因素等。
不同微生物对pH要求不一样,霉菌和酵母的培养基的pH一般是偏酸性的,而细菌和放线菌的培养基的pH一般为中性或微碱性的。
所以配制培养基时,都要根据不同微生物的要求将培养基的pH调到合适的范围。
此外,由于配制培养的各类营养物质和容器等含有各种微生物,因此,已配制好的培养基必须立即灭菌,如果来不及灭菌,应暂存冰箱内,以防止其中的微生物生长繁殖而消耗养分和改变培养的酸碱度所带来不利的影响。
微生物的分离与纯化:
自然界中各种微生物混杂生活在一起,要研究某种微生物的特性,首先须使该微生物处于纯培养状态。
从混杂的微生物群体中获得只含有某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。
土壤是微生物生活的大本营,所含微生物无论是数量还是种类都是及其丰富的。
因此,土壤是微生物多样性的重要场所,是发掘微生物资源的重要基地,人们可以从中分离到很多有价值的菌株。
本实验将采用平板划线分离法。
3.平板分离技术与活菌计数:
值得指出的是从微生物群体中经分离、生长在平板上的单个菌落并不一定保证是纯培养。
因此,纯培养的确定除观察其菌落特征外,还要结合显微镜检测个体形态特征等综合考虑。
有些微生物的纯培养要经过一系列的分离与纯化过程和多种特征鉴定方能得到。
从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。
平板分离法主要有:
(1)平板划线分离法,
(2)稀释涂布平板法。
后者除能有效分离纯化微生物外,还可用于测定样品中活菌数量。
平板菌落计数法是将待测菌液经适当稀释,涂布在平板上;经过培养后在平板上形成肉眼可见的菌落。
统计菌落数,根据稀释倍数和取样量计算出样品中细胞密度。
由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞,平板上形成的每个菌落不一定是单个细胞生长繁殖而成,有的可能来自2个或多个细胞。
因此,平板菌落计数的结果往往比样品中实际细胞数低,这就是现在使用菌落形成单位(olon-formingunit,CFU)取代以前用绝对菌落数来表示样品活菌含量的原因。
4.分离菌株的鉴定:
微生物的分类鉴定是微生物的重要内容,一般从菌落特征、细菌特点及生理生化、分子生物学等方面进行鉴定。
各种细菌在代谢类型上表现了很大的差异。
不同的细菌分解大分子碳水化合物、蛋白质和脂肪的能力不同,所能发酵的类型和最终产物也不一样。
不同细菌对营养的要求不同也说明了它们有不同的合成能力。
所有这些都反映了它们是有不同的酶系统。
细菌的这种生化反应的多样性在自然界产生了两种结果:
第
一、使自然界所有的有机分子都有可能得到分解;第
二、使不同细菌之间有了互相作用和互相依赖的基础。
另一方面,微生物生化反应是微生物分类鉴定中的重要依据之一,细菌的生化反应的多样性也被人们作为细菌的鉴定和分类方法来利用,可以鉴别一些在形态和其它方面不易区别的微生物。
5.生理生化反应:
微生物对大分子物质如淀粉、蛋白质和脂肪等不能直接利用,必须依靠产生的胞外酶将大分子物质分解后,才能被微生物利用。
胞外酶主要为水解酶,通过加水裂解大分子物质为较小化合物,使其能被运输至细胞内。
如淀粉酶水解淀粉为小分子的糊精、双糖和单糖,脂肪酶水解脂肪为甘油和脂肪酸,蛋白酶水解蛋白质为氨基酸等,这些过程均可通过观察细菌菌落周围的物质变化来证实。
糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应,在肠道细菌的鉴定上尤为重要,绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源,但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差异,有些细菌能分解某种糖产生有机酸(如乳酸、醋酸、丙酸等)和气体(如氢气、甲烷、二氧化碳等),有些细菌只产酸不产气。
IMViC是吲哚(indol)、甲基红(methlredtest)、伏-普(Voges-Prokauertest)和柠檬酸盐(itratetest)四个实验的缩写,主要用于快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌,多用于水细菌学检查。
吲哚试验是用于检测吲哚的产生,某些细菌可产生色氨酸酶,分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚和丙酮酸。
对二甲基氨基苯甲醛遇吲哚形成玫瑰吲哚(红色)。
但并非所有的微生物都具有分解色氨酸产生吲哚的能力,因此吲哚试验可以作为一个生物化学检测的指标。
色氨酸水解反应:
吲哚与对二甲基氨基苯甲醛反应:
6.实验整体思路:
在确定取样环境之后,对微生物原样进行梯度稀释,产生合适的浓度进行涂板用于微生物的计数。
染色并镜检,利用形态学方法对微生物做一粗略的定位。
根据镜检设计相关生理生化试验作进一步定位。
根据以上获得的信息确定微生物类群并加以定位。
三.实验器材:
1.实验菌种:
大肠杆菌金黄色葡萄球菌
培养基:
牛肉膏蛋白胨培养基,马铃薯培养基,固体油脂培养基,固体淀粉培养基,葡萄糖发酵培养基试管,乳糖培养基试管(内装有倒置的德汉氏小管),蛋白胨水培养基,葡萄糖蛋白胨水培养基。
3.溶液和试剂:
50%乙醇,20%的甘油,硝酸银染色液、香柏油、二甲苯、0.01%美兰水溶液,卢戈氏碘液,甲基红指示剂,5%孔雀绿水溶液、0.5%番红水溶液,革兰氏染液,草酸铵结晶紫染液,卢戈式(Lugol)碘液,95%乙醇,番红复染液,香柏油,二甲醇等。
4.土样:
山东大学中心校区图书馆前光草坪内地表10m土样。
5.仪器和其他用品:
普通光学显微镜,擦镜纸,酒精灯,载玻片,双层瓶,接种环,试管架,镊子,滴管,二甲苯,香柏油,蒸馏水,盖玻片,吸水纸,无菌平板,无菌试管,U型玻棒,解剖刀,无菌吸管等。
四.操作步骤:
1.培养基的制备与分装。
(1)称量:
按培养基配方依次准确地称取药品。
(2)熔化:
在沸水浴锅中或电炉上加热熔化。
(3)调pH:
用1molLNaOH或1molLHCl调pH至培养基所需pH。
(4)分装:
将溶化的固体培养基趁热加至漏斗上,装试管时,注意管口不要沾上培养基。
液体分装装量不超过试管的1
4,固体分装装量不超过试管的1
5,分装三角瓶的量不超过三角瓶容积的一半,半固体分装装量为试管的1
3,灭菌后垂直待凝。
(5)加棉塞:
培养基分装完毕后,在试管口或三角瓶口塞上棉塞,以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染,并保证有良好的通气性能,然后包扎一层牛皮纸。
试管先捆成一捆后再于棉塞外包扎牛皮纸,贴上标签,注明培养基名称、日期、组别。
2.无菌水的制备。
(1)用量筒量取90ml水于带玻璃珠三角瓶中,塞上棉塞,包扎牛皮纸。
(2)用10ml吸管取9ml水于10支试管中,塞上棉塞,包扎牛皮纸。
3.器皿的准备。
(1)培养皿的包装:
每10套一包,用牛皮纸包扎。
(2)吸管的包装:
首先在吸管的上端塞上一小段棉花,用长纸条包扎、打结。
(3)玻璃涂布棒的包装:
方法同吸管的包装。
(4)枪尖的包装:
放入枪尖盒,牛皮纸包装。
4.高压灭菌。
(1)将所要灭菌物品放入高压蒸汽灭菌锅内,根据需要设定灭菌温度和时间(一般121℃,20min灭菌,若培养基中含有葡萄糖等成分时,113℃,30min灭菌)。
如因特殊情况不能及时灭菌,则应放入冰箱内暂存。
(2)灭菌完毕,将试管培养基搁成斜面,搁置的斜面长度以不超过试管总长度的一半为宜。
培养基冷至50℃左右,倒平板。
5.微生物的分离与纯化。
(1)土壤稀释液的制备:
称取10g土壤,放入灭好菌的无菌水中用玻璃珠打碎土壤,静置30min。
取10mL土壤原液于1号试管中,从中取1mL浸液于装有9mL无菌水的试管中,充分震荡后依次操作,将7支试管按稀释倍数分别记作0,-
1,-
2,-
3,-
4,-
5,-6号试管。
(2)涂布平板:
分别取0度,-2度和-5度的试管中的土壤浸出液0.2ml于细菌培养基平板上,用刮刀涂布均匀。
再分别取0度和-3度稀释液0.2mL于准备好的霉菌培养基平板上,涂布均匀。
相同稀释度的浸液涂布3个平板。
(3)培养:
将细菌培养基平板置于37℃恒温箱培养24h,将霉菌培养基平板置于27℃恒温箱培养3d。
(4)平板计数及菌落描述:
将培养好的细菌进行平板计数(理想为每平板上不多
篇二:
微生物实验报告模板
篇三:
微生物学实验报告微生物学实验报告实验一普通光学显微镜的使用及细菌染色与形态观察第一部分:
显微镜的使用
一、目的要求
1.熟悉普通光学显微镜的构造、油镜的使用原理和显微镜的维护方法。
2.学会正确使用油镜观察细菌的基本形态和特殊构造。
3.了解各种显微镜的主要特征。
二、实验原理
(一)光学显微镜的构造微生物实验室中最常用的是普通光学显微镜,它的构造可分为机械部分和光学部分。
1、机械部分普通复式光学显微镜的机械部分通常包括以下几个部分:
目镜、镜筒、基座回转器、物镜、载物台、光圈、聚光器、光源、镜臂、细调节器、粗调节器等。
2、光学部分:
目镜、物镜、聚光器、光圈、光源。
(二)放大倍数标本首先经物镜放大,在目镜的焦距平面上形成一个实像,再经过目镜放大成最终的虚像。
总的放大倍数是物镜放大倍数与目镜放大倍数的乘积。
物镜的放大倍数愈大,其工作距离(物镜镜头到标本片之间的距离)愈短,这时光圈就要打开得愈大。
显微镜的性能受物镜的分辨距离或分辨力所限制。
分辨距离即透镜所能分辨的两个物点之间的最小距离,分辨距离愈小,透镜的分辨力愈高,物像也就愈清晰。
因此常以分辨距离来衡量显微镜的分辨力。
R=0.61λN.A式中:
R-----分辨距离;λ------作用光的波长;N.A------数值口径。
一些介质的折射率介质空气水玻璃香柏油折射率11355
1.56
三、实验内容
(一)材料:
显微镜,香柏油,擦镜纸。
(二)方法:
细菌很小,须使用油镜方可观察到。
油镜是显微镜上最重要的部件之一,观察时与玻片非常接近,稍不小心即可压碎玻片,更严重的是损坏镜头,故必须极其仔细地学习油镜的使用方法:
1、为使低倍镜取得最适之光源,可将低倍镜头调节到离载物台约1m的高度,将聚光器提高,光圈完全打开,然后调节电压旋钮至视野最合适。
2、滴一滴香柏油,固定于载物台上,用推动器调节到载物台正中。
在双目侧视下,下旋粗调节器,使油镜头浸入油中几乎与标本片相接触。
然后眼睛从目镜观察(如光线不足,可适当增大电源电压),徐徐上旋粗调节器至看到模糊物像之后,再用细调节器调节以使物像清晰。
如镜头已离开油面还未看到物像,则再重新操作。
3、更换标本时应先提高油镜头,再更换玻片,切勿随意移动显微镜的位置。
4、油镜观察完毕后,按“显微镜保护”中
(6)项处理。
5、最后将油镜各部分还原,聚光器下降,反光镜垂直于镜座,镜头转成八字形,以免与聚光器发生碰撞。
四、思考题
1、使用显微镜时为何调节下列构造?
反光镜,光圈,聚光器,粗调节器,细调节器,镜头回转器。
答:
聚光器的位置之升降可影响视野的明亮度,上升则视野明亮,下降则光线减弱。
光圈的放大或缩小也可控制视野明亮程度。
粗调节器和细调节器均是调节焦距的装置。
镜头回转器为装置物镜和转换物镜之用。
2、使用不同放大倍数的物镜时,工作距离与光圈的关系。
如何利用这一原理用好显微镜?
答:
物镜的放大倍数愈大,其工作距离(物镜镜头到标本片之间的距离)愈短。
标本首先经物镜放大,在目镜的焦距平面上形成一个实像,再经过目镜放大成最终的虚像。
总的放大倍数是物镜放大倍数与目镜放大倍数的乘积。
3、为何要选用与玻璃折射率相似的香柏油作为油镜的介质?
油镜的原理是什么?
答:
香柏油只在使用油镜头时(100倍物镜)使用,因为当镜与装片之间的介质为空气时,由于空气(n=
1.5
2)的折射率不同,光线会发生折射,不仅使进入物镜的光线减少,降低了视野的照明度,而且会减少镜口角。
当以香柏油(n=
1.51
5)为介质时,由于它的折射率与玻璃相近,光线经过载玻片后可直接通过香柏油进入物镜而不发生折射,不仅增加了视野的照明度,更重要的是通过增加数值孔径达到提高分辨率的目的。
可见光的波长平均为0.55μm。
当使用数值孔径为0.65的高倍镜时,它能辨别两点之间的距离为0.42μm;而使用数值孔径为
1.25的油镜时,能辨别两点之间的距离则为0.22μm。
选用香柏油是因为它的折射率是
1.515
4、显微镜有哪几种?
各自的主要特征是什么?
答:
光学显微镜中除明视野显微镜外,还有暗视野显微镜、相差显微镜和荧光显微镜;除光学显微镜外,还有电子显微镜。
暗视野显微镜:
在普通光学显微镜载物台下安装一个暗视野聚光器即成暗视野显微镜。
相差显微镜:
相差显微镜成像的原理和普通光学显微镜一样,所不同的是相差显微镜包括有环状光阑、装有相板的相差物镜和全轴调整望远镜三个特殊部分。
荧光显微镜:
荧光显微镜的主要特征是以紫外线为光源,当照射到用荧光素标记的细菌时,荧光素吸收了紫外线的能量后,再发射出可见的橙、黄、浅绿色荧光。
由于用荧光素标记的菌体各种结构中的溶解、吸附或化合情况不一,于是发出不同色调和亮度的荧光,从而可以观察细菌的不同结构。
电子显微镜:
电子显微镜的基本结构和工作原理与普通光学显微镜非常相似,不同的是用电子流代替光线,用电磁圈代替透镜聚焦。
第二部分:
细菌形态学检查方法
一、目的要求
1、了解不染色标本检查法,用悬滴法观察活细菌及其动力。
2、熟悉染色标本的制备过程,掌握革兰氏染色法及其结果判断,了解革兰氏染色法原理。
3、了解其它常用染色法。
二、实验原理检查细菌形态的主要工具是显微镜,可根据不同目的将细菌染色或不染色进行镜检。
常用的碱性染料有结晶紫、美蓝、碱性复红等。
染色法又分单染色法和复染色法两大类。
单染色法即仅用一种染料着色,所有的细菌均被染成一种颜色,无鉴别细菌的作用。
复染色法又称鉴别染色法,通常用二种或二种以上的染料着色,由于不同种类的细菌或同种细菌的不同组成结构对染料有不同的反应性而被染成不同的颜色,从而有鉴别细菌的作用。
2、最常用的细菌复染色法是革兰氏染色法(Gramstain)。
通过革兰氏染色法操作,可把细菌分成两大类:
革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌。
凡能使第一种染料结晶紫保留蓝色的细菌叫革兰氏阳性细菌,凡被洒精脱色后染上对比颜料沙黄或稀释复红而呈红色的细菌叫做革兰氏阴性细菌。
三、实验内容
(一)染色标本的制备及观察
1、复染色法(革兰氏染色法)材料:
葡萄球菌琼脂培养物1支大肠杆菌琼脂培养物1支革兰氏染液一套:
结晶紫、95%酒精、路哥氏碘液、稀释复红各1瓶。
玻片,接种环,酒精灯,吸水纸等。
方法:
(1)涂片用葡萄球菌和大肠杆菌混合涂片。
①取玻片一块,拭净。
②用无菌接种环取生理盐水一滴,放在玻片中央(如被检材料是液体,可不加生理盐水)。
③左手斜持菌种试管,右手将菌种试管棉塞稍加转动,以便拔下。
④右手持接种环,经火焰灭菌后,用右手小拇指拔开菌种试管棉塞,试管口通过火焰,将接种环插入试管中取菌少许(切不可多,更不可将培养基刮下)。
⑤试管口再通过火焰,塞好棉塞。
⑥将接种环上的细菌加入玻片上之水滴内,磨匀,涂成直径为1m大小的薄菌膜。
⑦接种环经火焰灭菌。
.
(2)干燥涂片置于空气中,使其自然干燥。
(3)固定干燥后将涂片在火焰上缓缓通过三次,此为“固定”。
目的是使细菌粘于玻片上,染色和水冲时不易脱落;且细菌为蛋白质,被热凝固可保持完整形态。
(4)染色初染→媒染→脱色→复染
①加结晶紫染液于标本上,使其覆满标本,染1~2分钟。
②细水冲洗。
③加路哥氏碘溶液经1分钟。
④水洗。
⑤加95%酒精于玻片上来回流动,倾去酒精。
如此重复2~3次(约30秒钟)。
⑥水洗。
⑦加稀释复红染液,染约1分钟。
⑧水洗,用吸水纸吸干。
(5)镜检革兰氏阳性菌在结晶紫着色后不易被酒精脱色,故仍为深蓝色或紫色;革兰氏阴性菌在结晶紫着色后易被酒精脱色,故经稀释复红复染后成红色。
三、实验记录革兰氏染色过程:
取玻片一块,在玻片上滴三小滴水(有一定的距离),分别用接种环取EC(大肠杆菌)和BS(金黄色葡萄球菌)与两边的水滴上,并混匀,灼烧接种环后再分别取EC和BS于中间的水滴上混匀(即中间水滴是两种菌的混合物),并在酒精灯下灼烧至干(小心不要将玻片炸裂),用结晶紫进行初染,细水冲洗后,加路哥氏碘液进行媒染,水洗后加酒精脱色2~3次,水冲洗后加稀释复红染液复染一分钟,水洗,并用吸水纸吸干。
大肠杆菌为革兰氏阴性菌,染色后呈紫红色。
普葡萄球菌为革兰氏阳性菌,染色后呈现蓝紫色。
以下为实验观测图:
四、思考题
1.染色法在微生物学上有何实际意义?
染色法可以更方便的观察细菌的具体形态,更方便观察细菌,革兰氏染色法有更重要的意义,可以鉴别细菌,把众多的细菌分为两大类,革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌,在实验方面,可以通过杀死阳性或阴性菌而得到目的菌。
2.比较复染色法与单染色法的优缺点。
答:
单染色法:
优点:
仅用一种染料着色,所有的细菌均被染成一种颜色,简单方便,可用来观察细菌的形态和排列方式。
缺点:
但无鉴别细菌的作用。
复染色法:
优点:
用二种或二种以上的染料着色,由于不同种类的细菌或同种细菌的不同组成结构对染料有不同的反应性而被染成不同的颜色,从而有鉴别细菌的作用。
缺点:
使用试剂较多,过程较单染色法更复杂繁琐。
3.以革兰氏染色法为例,说明它至少要涉及几种试剂?
各起何作用?
答:
至少用到4种试剂。
结晶紫溶液进行初染,路哥氏碘液进行媒染,95%酒精进行脱色,稀释复红染液进行复染。
4.要确证一个未知细菌的革兰氏染色性质,你可用什么方法来说明你的结果是可靠的?
答:
通过在显微镜下的菌体被染的颜色可以判断,凡能使第一种染料结晶紫保留蓝色的细菌为革兰氏阳性细菌,凡被洒精脱色后染上对比颜料沙黄或稀释复红而呈红色的细菌为革兰氏阴性细菌。
附送:
微电影拉赞助策划书
微电影拉赞助策划书
主办:
理工大学社团联合会承办:
青岛兄弟连影视团队中视联动漫产业基地网络支持:
全国百家知名网站联盟(不低于一百家网站,具体数量以站长书面公章回执为准。
),具体负责在当地及全国范围内的网络传播推广。
【摄制计划】前期拍摄:
外景堪景完成前期选景、筹备及摄制准备,实际拍摄周期每集3天后期制作:
实际制作周期4天;音乐合成补录配音,完成制作.发行放映:
201X年1月中旬,完成影片前5集举行公映。
二、宣传计划(要点):
为更好的配合本片的放映,使本片能达到广泛的宣传效果,剧组将根据宣传需要,适时组织电视台及各报纸、杂志、网络等媒体,影视、文化、娱乐相关频道及栏目记者,及时跟进报道本片的摄制进展情况,适时造势宣传,以扩大影响力。
届时本片助方、主创、主要演员及协作团体、合作伙伴、主管机构、友情热心人士及相关领导、嘉宾等均将参与本片相关活动,为宣传本片壮大声势、扩大影响。
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五、投资方案投资商(定制剧)可以按万元每集(可单集购买)的价格购买本剧的版权,购买后投资商可得到本集内的所有广告收入以及今后的播放,发行等产生的收入。
201X—11—30-
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