人尿脱落细胞FISH检测与尿细胞学检测和膀胱镜检测在尿路上皮肿瘤.docx
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人尿脱落细胞FISH检测与尿细胞学检测和膀胱镜检测在尿路上皮肿瘤
人尿脱落细胞FISH检测与尿细胞学检测和膀胱镜检测在尿路上皮肿瘤
经典论文博硕论文文论硕博研究生签名:
浮躺师签导师?
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恸移’(’赂佛密,本,年办,日,学位论文使用授权及知识产权归属承诺河北医科大学日究生学位论文独创性声明研北医科大学河果,指导教师对此进行了审定。
本论文由本人独立撰写,文责自负。
(?
学位论文主要内容相关的论文,第一署名单位为河北医科大学,试文中特别加以标注等内容外,文中不包含其他人已发表或撰写的研究验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。
成与。
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研究生签名:
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经典论文博硕论文文论硕博经典论文博硕论文文论硕博录
图…………………………………………………………………………………………………………个人简
历………………………………………………………………………………(,,综述膀胱癌的分子靶向治疗研究进展……………………(参致
谢……………………………………………………………………………………………………(,,目文摘
要……………………………………………………………………………?
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结论……………………………………………………………………………………………(?
材料与方法……讨论。
前言附,考文
献…………………………………………………………………………,,中表………………………………………………(英文摘
要……………………………………………………………………………((,上皮肿瘤诊断中的应用及对比研究研究论文人尿脱落细胞,,,,检测与尿细胞学检测和膀胱镜检测在尿路结
果…………………………………………………………………………………………………,,,,………,,,经典论文博硕论文文论硕博经典论文博硕论文文论硕博四四嶝统计学意义;,,,,与尿细胞学比较氏及?
,有统计学意义。
,,,对,,、,,例,,,几,例。
皮肿瘤诊断中的应用及对比研究,人,,尿脱落细胞,,,检测与尿细胞学检测和膀胱镜检测在尿路上,,的:
比较尿脱落细胞荧光原位杂交(,,,,)检测、细胞学分析和,,,统计出现不同类型异常情况细胞数目的百分比,建立阈值。
,例患者验,每一探针组合观察,,,个信号清晰的细胞。
,,,检测。
通过,,例正常人的尿液样本,使用说明书中方法进行,,,,实临床决定做膀胱镜的血尿患者为研究对象,对血尿患者的尿脱落细胞进行与阈值相比较判断染色体的异常情况。
,,,阳性判读标准为,、,号染色扩增、碱基改变等。
本实验使用,,,,,,,,,着丝粒探针,以经常规检查,胱镜检查,以膀胱镜活检病理或手术切除标本病理为确诊依据,并对肿瘤酸,并通过荧光显微镜检测荧光信号得出结果。
荧光原位杂交技术可以检进行分期,确定检测结果并比较三种诊断方法的敏感性和特异性。
尿液标荧光原位杂交技术是用已知的荧光标记的核酸为探针,按照碱基互补本要在膀胱镜检查前取,尿量不宜过少,以免影响细胞计数,膀胱镜病理,,例,,,,例,,,体均异常或者一种染色体
的复杂异常。
,例患者同时行尿细胞学检查和膀均行,,,,检测、尿细胞学检查和膀胱镜检查,共有,,例经病理诊断为膀例,包括,例膀胱移行细胞癌复发者和,,例无膀胱癌病史者。
对,,例患者月共收治可疑膀胱移行细胞癌的血尿患者,,例,其中男性,,例,女性,,材料与方法:
河北医科大学第二医院泌尿外科,,,,年,月至,,,,年,程提供理论基础。
膀胱镜检查对恶性血尿诊断的临床有效性,为建立和完善血尿病因诊断流目要摘检查结果与手术切除后病理检查不一致时,以手术切除后病检结果为准。
结果:
,,,检测、尿细胞学检查及膀胱镜检查对膀胱移行细胞癌的胱移行细胞癌,分期为,,总的敏感性分别为,,(,,、,,(,,、,,(,,。
,,,和膀胱镜比较尸,,(,,,无测染色体结构畸变和染色体数目异常,分子水平表现为,,,片段缺失、配对原则,与待检标本中的未知的单链核酸特异性结合,形成杂交双链核中文摘要,经典论文博硕论文文论硕博细胞癌的特异性分别为,,,、,,,,、,,,,。
三者比靴,,(,,、,,、,,几各肿瘤分期检测结果分别为,,(,,、,,(,,、,,(,,、,,,,细胞癌的早期诊断和术后监测有重要意义,可作为一种重要的辅助手段应明显高于尿细胞学检查,三者在特异性上无明显差别。
,,,对膀胱移行关键词:
荧光原位杂交;细胞学;膀胱镜;膀胱癌结论:
,,,检测膀胱移行细胞癌的的敏感性与膀胱镜检查相当,而意义。
为,,(,,、,,(,,、,,,,、,,,,。
,,,、尿细胞学及膀胱镜诊断膀胱移行尿细胞学检查结果分别为,,、,(,,、,,(,,、,,,。
膀胱镜检查结果分别用于临床。
中文摘要经典论文博硕论文文论硕博;,,;,,,,,(,,,;,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,(,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,;,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,(,,,,,,,,,,,,,,,,,,),,,,,;,,,,,,,,,,,;,,;,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,;,,,,,,,,,,,;,,,,:
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经典论文博硕论文文论硕博,(,,),,卿(,,,,,,,,,,;,,;,,,,,,,,,,,,,,,,(,,,,,,,,,,,,,,,,(,,)(,,,,,,,,,,,,:
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,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,;,,,,(,,,;,,,,,;,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,(,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,经典论文博硕论文文论硕博皮肿瘤诊断中的应用及对比研究‘,,检测与尿细胞学检测和膀胱镜检测在尿路上限于尿路上皮和固有层的非肌层浸润性癌(,,,和原位癌【,,,】),,,,,,,,路上皮癌是起源于尿路上皮的一种恶性肿瘤,主要包括膀胱癌、输人尿脱落细胞,色体突变这一思路很有前景,是具有高度敏感性和特异性的诊断工具。
国内外研究显示,荧光原位杂交技术(,,,,)可用于识别尿液中的此类细也是一个多基因位点突变后产生的基因病。
因此检测异常核,,,以及染都未达到一定的诊断准确率【,(,(,,?
与许多其他恶性肿瘤相类似,膀胱癌有,,,〔,,。
如此看来,细胞学检测膀胱癌的敏感性并不理想,所以我们测法(如端粒酶),以及,,,特点分析法(如染色体倍数)。
但是上述方法,,(,,,,之间【,】。
在几家医院(机构)多中心研究中,,,,,,,,,,与其他一系列的检测方法,包括蛋白分析法(如,,,,,,,,或,,,,,),酶活性检异性都较高,,(,,,?
本实验采用,,,,技术检测尿脱落细胞的,、,号染色需要一些可早期检测出肿瘤的、准确度更高的方法〔,,。
因此,衍生出来专家近期发布了一项报告指出,利用尿细胞学检测膀胱癌的整体敏感性仅,,(,,,和,,,,,,,〔,,。
因此对膀胱癌的预防和早诊断尤其重要。
润性膀胱癌五年内的复发率和恶化率取决于癌症的分期和分级,分别位于手术治疗和化疗,患者的存活率也仅有,,,〔,,。
临床研究显示,非肌层浸的肿瘤侵及肌层(,,,)。
尽管所谓的低分级非肌层浸润性肿瘤采取积极地临床诊断及监测的金标准是膀胱镜检查和尿细胞学检测。
膀胱镜检查是一路上皮癌是一种异质性疾病,其发病过程复杂多变。
大多数肿瘤起初呈局尿生殖系统肿瘤中,其发病率和死亡率均占首位且呈逐年上升的趋势。
尿第二大肿瘤,每年新诊断病例达,,,,,,死亡人数,,,,,,?
。
我国男性泌尿管癌和肾盂癌,其中以膀胱癌发病率最高。
在美国,膀胱癌是泌尿系统尿言前胞,且大量文献报道也证实了,,,,技术在膀胱癌的诊断中的敏感性和特目前,尿路上皮癌的检测和监测缺少一种无创性的诊断工具。
当前,查通常与尿细胞学检测相结合,其敏感性在,,(,,,之问,特异性在种侵入性检测方法,而且并没有达到泌尿学家所期望的准确度。
膀胱镜检研究论文经典论文博硕论文文论硕博,试剂和器材移液器,支。
,,,,,,,移液器,支、,,,,,,,,移液器,支、,(,(,,,,移液器,支、,(,,,(,,,离心机,台、,’,冰箱,台、,,,’,冰箱,台、,,,(,,,,,,,,移液器,支、实验耗材有:
水银温度计(重复使用)、计时器(重复使用)、,,,,离烤片机,台、漩涡混合器,台、普通光学显微镜,台(奥林巴斯)、迷你备有:
电热恒温培养箱(,,’,),台(,,,,,,公司)、恒温水浴箱,台、析系统,个(,,,德国耶拿公司)、办公电脑,台;,,,,操作室主要设,)、图像采集分暗房中的设备主要有:
荧光显微镜,台(奥林巴斯,,,,,(,实验主要设备,,,要求清洁、室内温度、湿度较稳定。
作实验室:
面积,,,,,实验场地有:
(,)暗
房:
面积,,,,,,要求清洁、避光;(,),,,,操,,,,实验场地假阴性的结果,确保实验结果准确。
剂要求配制和储存试剂,避免因设备、试剂等问题的干扰而产生假阳性或,,,,实验场地符合所需要求,设备、仪器、耗材齐全,严格按照试,,,,实验场地、设备、试剂、耗材,(,实验所用耗材,例。
例,,,,,,,,例,,,中,,例诊断为膀胱移行细胞癌,临床病理情况:
,,例,,,血尿为主要症状,均行膀胱镜活检病理检查或手术切除标本病理检查,其检测、同时行尿细胞学检查和膀胱镜检查。
,例患者以肉眼血尿和镜下岁。
常规检查后,临床决定做膀胱镜检查前收集晨尿,,,,,左右行,,,,膀胱移行细胞癌的血尿患者,,例,其中男性,,例,女性,,例,年龄,,(,,选取河北医科大学第二医院泌尿外科,,,,年,月至,,,,年,月可疑,试验对象材料与方法立和完善血尿病因诊断流程提供理论基础。
体数目畸变诊断尿路上皮癌,并与细胞学分析和膀胱镜检查作比较,为建研究论文,(,,,,(,,。
经典论文博硕论文文论硕博试剂出现混浊或污染,立即丢弃。
将,,,,,、,,,,,无水乙醇,用去离子水分别稀释至,,,使用期间,(,(,乙醇溶液:
,,乙醇、,,,乙醇立即丢弃,使用期间,(,?
储存。
试剂配制,天后应丢弃,若试剂出现混浊或污染,充分混匀,室温下调节,,值至,(,(,(,,用去离子水定容至,,,,。
去离子水,,,,,,,,调节,,值至,(,,用去离子水定容至甲酰胺,(,(,变性液:
,,(,,,)甲酰胺,,,,,,,,,,(,,,(,浊或污染,立即丢弃。
容至,,。
使用期间,(,?
储存。
试剂配制,个月后应丢弃,若试剂出现混,,,,调节,,值至,(,,,,,(,,用去离子水定充分混匀,室温下,,,立式染缸(考普林瓶)(重复使用)、一次性手套(一次性使用)、一次性氯化钠,,,柠檬酸钠,,,口罩(一次性使用)、记号笔(重复使用)、铅笔(重复使用)、止血钳(重,(,(,缓冲液:
(,?
储存。
试剂配制,个月后或用于,,张玻片杂交后应丢弃,若试剂出,,,,,。
高压灭菌;使用期间,(,?
储存。
试剂配制,个月后应丢弃,若,(,(,缓冲液储存液:
,,,,,,,,充分溶解,室温下,,,去离子水,,,,,复使用)、镊子(重复使用)、载玻片(一次性使用)、盖玻片(一次性使心管(一次性使用)、,,,,离心管(一次性使用)、,,管架(重复使用)、用)、吸水纸(一次性使用)、封口膜(一次性使用)、,,管(一次性使用)、,(,实验相关试剂配制次性使用)。
(一次性使用)、滴管(一次性使用)、量筒(重复使用)、医疗废物盒(一,,,,,加样头(一次性使用)、,,,,,加样头(一次性使用)、,,,,,,,加样头研究论文,,,,,,,,,,,,,,(,,,(,),,,,,(,,,,,,,,,,(,士,(,?
经典论文博硕论文文论硕博,,,,调节,,,,苴至,(唧(,,用去离子水定容至甲酰胺,,砌去离子水试剂出现混浊或污染应丢弃。
去离子水,,,,,用去离子水定容至,,,,,,,,,?
储存。
试剂配制,个月后应丢弃,若,(,(,洗涤液:
(,蚴舯,,,,,×,,,溶液,,,,(,,,:
(,现混浊或污染,立即丢弃。
充分混匀,室温下,,,即丢弃。
(,(,快洗洗涤液:
(,,,,,,,(,,,,,,,洗涤液(用于快速洗涤方案):
,,低渗溶液(,(,,,或污染,立即丢弃。
量取,,,,甲醇和,,,,冰乙酸,充分混合。
使用前新鲜配制。
(,(,固定液(甲醇:
冰乙酸体积比,:
):
染应丢弃。
,。
使用期间,(,?
储存。
试剂配制,个月后应丢弃,若试剂出现混浊或污,,,,调节,,,直至,(,,,(,,用去离子水定容至充分混合,室温下,,,,(,(,甲酰胺洗涤液:
,,(,,,)甲酰胺,,,,,,,,,,,。
使用期间,(,?
储存。
试剂配制,个月后应丢弃,若试剂出现混浊充分混匀,室温下调节溶液,,值至,(,,,(,,用去离子水定容至,,,使用期间,(,,,储存。
试剂配制,天后应丢弃,若试剂出现混浊或污染,立游:
,,,,,研究论文,,(,),,,,,,,,,,,,):
,,(,,,(,),,,,,,(,,,(,),,,,,(,,,,,,,,,(,,。
,,,,,,,,。
,,,,,(,,,,,,,,,,(,(,,,,,,,,,,,(,(,,,,,(,,,,,,经典论文博硕论文文论硕博荧光原位杂交(,,,,)?
蛆探针((,,?
避光保存,保存期,年)、杂瑚怕探针、杂交缓冲液和,,,,复染剂由北京金菩嘉医疗科技有限公司提,(,本实验所用,,,,,,,,,探针包含两种,,妣探针,在间期核与中期染色,尿液标本的留取留取晨尿,,,,,左右(过少影响细胞数目的要求),,小时内送检,时供。
止月经血、白带、精液、粪便、前列腺液、烟灰等异物的混入,给处理标期,年)、无水乙醇(室温保存)、去离子水(室温保存,保存期,天)。
,,,交缓冲液(,,,?
保存,保存期,年)、,,,,复染剂(,,,?
避光保存,保存间不宜过久,保持尿液新鲜,以免出现细胞溶解,尿液成分变化;盛尿容本造成困难;一次收集标本较多时,容器上标明病人姓名、住院号等信息,器保持清洁、干燥,最好是一次性使用,避免不必要的污染;尿液标本防,、,,,染色体着丝粒的荧光信号,特异性均达,,,以上,,,,探针与非目,,,探针分别杂交到人类的荧光信号,敏感性达,,,以上口,,,,、,,,,长为,,,,,,激发波长为,,,,,。
探针杂交到人类的中期细胞染色体产生,,,,,,。
,,,探针荧光信号为橘红色,荧光物质为四甲基罗丹明,发射波荧光信号为绿色,荧光物质为细胞绿,发射波长为,,,,,,激发波长为体上均能产生明亮的杂交信号。
探针为,、,号染色体着丝粒。
,,,探针的染色体无交叉杂交反应。
和胃蛋白酶工作液不可反复使用。
,,溶液,(,,,,,,,混匀。
使用用于实验的,使用校准过的温度计测量考普林瓶中的溶液温度。
为得到好的结果,需确保试剂按照说明书正确配制。
备注:
正确的操作程序保证试剂的质量前新鲜配制。
取,(,,,取,(,,,胃蛋白酶粉剂溶于预热至,,?
的,,,,,(,(,,胃蛋白酶工作液(,(,,,,,,,):
,,,加去离子水定容至,,,,。
取,,,,,,,,、,(,,,,,,,,,研究论文(,,,,(,,,,,、,(,,,,,,,,,(,,,,,:
,,,(,(,,,(,(,,,,,经典论文博硕论文文论硕博低渗。
加入,杂交缓冲液体积(山)名称,(,探针配制。
按以下体系进行。
然干燥。
(,将玻片依次置于,,,乙醇、,,,乙醇、,,,,乙醇中各脱水,,,,,自,(,)溶液中漂洗,,,,。
(,室温下于,,,,,(,,际情况进行调整。
(,消化。
,”,下终浓度,(,,,,,,,甓,蛋白酶工作消化,,分钟,可根据实,(,)溶液中漂洗玻片,,(,室温下于,,,,,(,,玻片预处理程序:
老化玻片。
室温下过夜或,,?
烤片至少,小时。
室温干燥保存。
加适量固定液混匀后滴片。
细胞悬液的制备和保存。
尿细胞悬液离心,去上清,根据细胞量固定。
重复步骤,。
,分钟,期间吹打,次,,,,,,,,,离心,,分钟。
固定。
尿细胞悬液离心后去上清,加入,,,固定液,混匀,静置匀后,,,,,,,,离,,,,分钟。
,,,,固定液(甲醇:
冰乙酸,,:
),轻轻吹打混预固定。
缓慢加入,钟,期间轻轻吹打悬浮细胞,,,,次。
,,溶液,,,?
低渗,,分,,预热至,,?
的,(,,,,去离子水细胞、粘液、杂质含量较多等)。
注意:
收集细胞后可根据情况进行胶原酶,消化(如标本蛋白、血,,,,离心,,分钟。
反复离心,去上清,收集细胞。
(,(,收集,,,,,,左右尿液标本(晨尿最佳)置于,,,,离心管中,玻片制各程序:
片、计时器、温度计、水浴锅、显微镜等。
(,仪器设备:
量筒、移液器、塑料吸管、离心管、镊子、载玻片、盖玻,(,试剂耗材:
,,低渗溶液、甲醇、冰醋酸等。
,,,操作前的玻片制备方便标本处理,不易混淆。
研究论文,(,,(,,,,。
,(,(,,(,(,,(,(,,(,(,,(,(,,(,(,,,,,,,,,,(,,,,经典论文博硕论文文论硕博室温下将玻片置于,(,,删,,×,轮廓不规则,,,,,染色不均匀视为细胞不典型。
所用,,,,,屎针为数过程中首选大的、细胞核不规则或不典型的细胞进行计数。
细胞核增大,所有病例在尿细胞学检查和膀胱镜检查结果前进行,,,,检测,在计,,,,,,,,,探针,荧光显微镜下观察为红色和绿色两种信号。
正常细胞应,,,,结果的评估为,,,,绿,,,,,,,,,,探针常见异常类型为,、,号染色体的非整倍性,,(,室温下将玻片置于,,,乙醇中,漂洗,分钟。
发生光漂白现象。
将含有荧光基团的试剂及玻片置于暗处。
完成杂交的玻片置于(,,?
的冰箱中避光储存。
荧光基团遇到强光会,储存,,”’,,分钟后观察。
将,,山,,,,复染剂加至目标区域,立即盖上盖玻片。
暗处放置玻,(,暗处自然干燥玻片。
复时。
将玻片置于预热的湿盒中,,,?
培养箱中过夜杂交。
染,(,使用前将,(,,,,,,,,,(,,需要根据样本差异进行调节。
特别说明:
快速洗涤方案中,(,,,,,,,,,(,×,,,洗涤液的温度和时间漂洗,分钟;,(,移去盖玻片,将玻片置于,(,,,,,,,,,(,,,,,溶液中,振荡,(,秒,液达到所需温度。
,,置于,,,,水浴箱中至少,,分钟,使溶,(,变性杂交(杂交仪变性)?
片洗涤(快速洗涤方案):
探针,(,离心,(,秒,涡旋混匀后再次短暂离心。
(,杂交仪共变性。
共变性条件:
,?
,,分钟,杂交条件:
,?
,,,小封边。
(,将,,,,探针混合物滴加于玻片杂交区域,立即加盖盖玻片,用橡皮胶,杂交仪变性杂交(自动操作)研究论文,(,,(,,(,,,,,,(,经典论文博硕论文文论硕博
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