实验一油镜的使用和细菌形态观察及革兰氏染色.docx
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实验一油镜的使用和细菌形态观察及革兰氏染色
微生物学实验
指导老师:
实验要求
・坚持课前预习
・不迟到,不早退,更不能无故缺课;
・严格按正确规范实验方法进行实验,作好记录;
・保持实验室整洁
•注意安全
・事实求是地、独立地写好实验报告
实验报告
・姓名、班级和学号
・实验题目
・实验原理(略写)
・实验操作((略写)
•实验结果
-画图
-文字描述
・分析和讨论
・思考题
实验一、显微镜油镜的使用和细菌形态的观察、
细菌的革兰氏染色
教学目标或要求:
※巩固和掌握显微镜油镜的正确使用;
※学习细菌制片和单染色技术;
※对人体微生物染色检查,初步建立无菌操作的概念。
※学习细菌的革兰氏染色方法
显微镜油镜的使用
•油镜头的识别和重要参数
•油镜物镜的工作原理
•油镜的使用方法和注意事项
油镜头的识别和重要参数
工作距离/刚—
100/1.25
160/0.17
蓟值孔径
放大倍数
40/0.65
160/0.17
油镜物镜的工作原理
・使用油质作为玻片与接物镜之间的介质——油浸系
・可以增加显微镜的放大倍数
・可以增加视野的照明度
・可以增大显微镜的分辨率
d=Wa
2Vi4=wXsin
B
油镜的使用方法和注意事项
1、用低倍镜对光。
最大光圈
2、低倍镜观察(寻找观察目标)。
适当缩小光圈
1=
INi
3、高倍镜观察(选取理想的观察目标)。
4、油镜观察:
高倍镜观察后•上升镜筒-油镜转至正下方,在载玻片上加一小滴油-小心地下降镜筒使镜头浸在油里-用粗螺旋将镜筒缓慢上升,寻找目标(物象)用细螺旋调节,使物象清晰-观察记录。
最大光圈
5、观察完毕。
上升镜筒,转动物镜转换器,使油镜物镜偏位。
用干净擦镜纸擦去镜头上的油迹,再取一张擦镜纸醮上二甲苯擦去镜头上残留的香柏油,最后再用一张干净的擦镜纸擦去残留在镜头上的二甲苯。
6、将显微镜各部分还原,放回箱中。
细菌的制片与染色
巴单染色巴复染色
染料
多数染料都是中性有机盐。
据着色基的不同可分为以下类型:
①碱性染料(basicdye)—带正电染料。
其阳离子部
分为发色基团,可与细胞中带负电的组分结合。
如结晶紫沙黄,甲基蓝,碱性复红等。
②酸性染料(Aciddye)—带负电染料。
其阴离子部
分为发色基团,可与细胞中带正电的组分结合。
如刚果红、酸性复红等。
③脂溶性染料一如Sudanblack。
细菌的单染色
涂片
干燥
固定
水洗、吸干
镜检
染色1〜2min
革兰氏染色法(GramStain)
由丹麦医生HansChristianGram于1884年创立。
结果:
革兰氏染色法
•操作步骤
涂片——干燥——固定结晶紫lmin——水洗
V
95%乙醇脱色约10〜20s
水洗
I-KIlmin
水洗
▼
沙黄或石炭酸复红lmin
—水洗干燥一
镜检
•p45
革兰氏染色注意事项
实验内容
1、用美蓝对苏云金芽抱杆菌进行单染色,
在显微镜油镜下观察形态;
2、用混合涂片的方法对大肠杆菌、苏云金
芽抱杆菌进行革兰氏染色
3、自选材料:
用牙签挑取牙垢观察
实验报告
绘出革兰氏染色后大肠杆菌和苏云金芽抱杆菌
的形态图并说明染色结果•思考题:
你认为那些环节会影响革兰氏染色结果的
正确性?
其中最关键的环节是什么?
如何使你的染色
结果可信?
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