参枝苓口服液论文集锦.docx
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参枝苓口服液论文集锦
参枝苓口服液(又名调心方、养心健脑液、参桂健脑口服液、脑瑞康口服液等),源自上海中医药大学原副校长林水淼教授的临床验方,系在中医心主神明理论的指导下,以《千金备急要方》中开心散等为基础,结合现代医学对老年性痴呆的认识研究开发的,用于心气不足型阿尔茨海默病。
参枝苓口服液经历了二十多年的临床和基础研究,研发历程(包括名称的变更)如图1所示,其主要科研项目如表1所示。
截至2014年5月有关参枝苓的文献73篇,其中基础研究51篇,临床研究12篇(SCI1篇),由于篇幅有限,特选10篇成册,仅供参考。
1992
1996
1999
2001
2006
2010
2011
2012
2013
沃华投产
上市
时间
项目
名称
1992-1995
上海市科委
养心健脑液的研制
1993-1996
上海市科委
调心、补肾、益气活血治疗AD的临床与实验研究
1995-2000
国家九五攻关计划
Alzheimer型痴呆的中医辨证治疗及调心方研究
1996-1998
上海市科委
中医辨证治疗Alzheimer病的临床与实验研究
1999-2003
NSFC重点项目
调心方防治Alzheimer型痴呆的机理及配伍研究
2002-2005
上海市科委
轻度认知功能损害及阿尔茨海默病预防的中药干预研究
2004~2006
上海市科委
调心方有效部位TX0201治疗阿尔茨海默型痴呆的新药研究
2006-2011
国家十一五支撑计划
中医辨证治疗阿尔茨海默病的疗效评价研究
`表1
【基础篇】
调心方对杏仁核注射Aβ大鼠记忆行为和胆碱能系统作用的研究*
刘学源,徐品初,林水淼,赵伟康
(上海中医药大学老年医学研究所,上海)
[摘要]目的研究调心方对“痴呆”大鼠模型的空间学习记忆功能及胆碱能系统的影响。
方法通过单侧杏仁核注射Aβ造成“痴呆”大鼠模型,采用Morris水迷宫法及放射免疫法观测调心方对“痴呆”大鼠模型的空间学习记忆能力及胆碱能系统的作用。
结果调心方可显著改善Aβ诱导的大鼠空间学习记忆障碍,提高模型大鼠的ChAT活性及M受体Rt值。
结论调心方对Aβ诱导的大鼠空间学习记忆障碍及胆碱能系统损害具有显著的治疗作用。
[关键词]调心方;阿尔茨海默病;痴呆模型;学习记忆;胆碱能系统
[中图分类号]R749.1[文献标识码]A[文章编号]1007-5496(2001)05-0048-02
阿尔茨海默病(Alzheimerdisease,AD)是发生于老年前期和老年期以记忆力进行性减退并影响生活和社会能力为特征的大脑退行性疾病,是老年期痴呆最常见的类型之一。
目前本病的病因、诊断、治疗尚无突破性进展,尤其是治疗,尚缺乏理想的方法和药物。
调心方是根据中医益心气、振心阳、豁痰开窍的治疗原则在《千金要方》“开心散”基础上组成的中药复方。
临床治疗AD取得了较好疗效[1],实验研究表明,该方对电解损毁前脑基底核造成痴呆大鼠模型的学习记忆功能,胆碱能系统和肾上腺素能等系统均有明显作用[2]。
本文以E2020为对照,观测调心方对单侧杏仁核注射β-淀粉样蛋白(Aβ)造成“痴呆”大鼠模型的空间学习记忆功能及胆碱能系统的影响。
为该方的临床应用提供实验依据。
1对象与方法
1.1资料
选Sprauge-Dawley(SD)雄性大鼠,清洁级,体重250±30g,购自中国科学院上海实验动物中
心。
大鼠单笼饲养,自由摄食与饮水,室温18~20℃,日光辅助照明,维持每日光照12h。
随机分为5组:
正常对照组、假手术组、类AD模型组、调
心方组、E200组。
1.2方法
大鼠以2%的异戊巴比妥钠(40mg/100g体重)腹腔麻醉,立体定向仪固定头部,切开皮肤,暴露头骨,于前囟后3.2mm,右侧旁开4.3mm,深度8.5mm进针。
A(25-35Sigma公司)每次注射5.0nmol(用0.1%的三氟乙酸溶解),手术对照组注射等量溶剂(0.1%三氟乙酸),注射时平稳进针,6min内注射完毕,留针5min后缓慢退出。
1.3药物组成及用药
调心方由党参、茯苓、远志、桂枝、菖蒲等中药组成,配成含生药4.67g/ml的水煎剂,备用。
以上各组动物于造摸前1周开始给药,每天灌胃1次,连续3周。
迷宫训练期间,于训练前30min给药。
调心方组用药剂量为23.35(生药)/kg,(依标准动物体重等效剂量法,分别相当于成人每天用量的10倍)。
迷宫训练期间,于训练前30min给药,其余各组用等量的双蒸水灌胃。
·关键提示·
·AD缺乏理想的动物模型和治疗方法,即往的中枢胆碱能神经系统破坏模型,实验性自身免疫性痴呆模型,自然衰老模型等,但这些模型均不能全面反映出AD的病理特征。
本文采用新的Aβ单侧杏仁核注射的方法,造成Aβ沉积脑组织大鼠模型,这使本研究结果更为可靠。
·调心方以党参补气,安神明;以菖蒲、远志、茯苓等化痰浊,通心窍;在临床改善AD患者记忆、智力、认知功能及生活方面有较好效果。
1.4空间学习记忆力测试
采用Morris水迷宫法[3]。
水迷宫由中国科学院上海药物研究所提供,平台设于迷宫东北象限正中,水平面高出平台1.5cm,水温保持在19~20℃大鼠连续训练6d,2次/d,设定最长游动时间为70s,以秒表记时,记录大鼠找到平台所需时间,或称潜伏期。
1.5胆碱乙酰化转移酶(ChAT)活性测定
采用(1-14C)Ac-CoA掺入法[4](1-14C)Ac-CoA为Amersham公司产品,比放射性51.0Ci/mmol。
1.6乙酰胆碱酯酶(AchE)活性测定
采用改良的微量羟胺比色法[5]。
1.7M-受体结合容量(Rt值)测定
采用3H-QNB受体结合法[6]。
3H-QNB:
Am
-ersham公司产品,比放射性51.0Ci/mmol。
1.8统计方法
水迷宫数据采用重复测量设计的方差分析,应用6.12统计软件在PC上处理,并用Duncan或SNK进行组间两两比较。
2结果
2.1调心方对A(25-35单侧杏仁核注射类AD大鼠空间学习记忆力的影响
随着训练天数的增加,各组平均潜伏期(EL)逐渐缩短。
组间比较,与正常组及手术对照组比,模型组EL明显延长,第4天开始有显著差异(P<0.05);与模型组比较,调心方组从第3天开始EL即有显著差异(P<0.05),E2020组从第4天开始EL开始有显著差异(P<0.05)。
而正常组与手术对照组、调心方组及E2020组间均无显著差异(P<0.05)。
表明调心方、E2020组均能显著改善βA诱导的大鼠空间学习记忆障碍,而调心方的作用最为显著,见表1。
2.2对ChAT及AchE活性的影响
如表2所示,与正常组及手术对照组比较,模型组海马ChAT活性明显降低(P<0.05);与模型组比较,调心方组ChAT活性明显升高(P<0.05),而E2020组变化不明显,且显著低于正常组及手术对照组(P<0.05)。
提示调心方能显著提高A(诱导降低的ChAT活性,而E2020作用不明显。
与此作用不同的是,与正常组及手术对照组比较,模型组AchE活性无明显变化,与模型组比较,调心方组AchE活性无显著差异,而E2020组的AchE活性则明显降低(P<0.05)。
提示E2020能显著降低A(大鼠AchE活性,调心方则作用不明显。
2.3对M受体Rt值的影响
与正常组、手术对照组比较,模型组皮层M受体Rt值显著降低(P<0.05);与模型组比较,调心方组M受体Rt值则明显升高(P<0.05),E2020组M受体Rt值虽然较模型组显著升高,但亦显著低于正常组及手术对照组(P<0.05)。
提示调心方组能有效提高A(诱导降低的M受体Rt值,E2020的作用则明显低于调心方。
表1调心方对Aβ类AD大鼠水迷宫实验结果
的影响(
±s)
组别
n
第1天
第2天
第3天
正常组
8
58.68±6.86
47.13±8.79
43.18±11.3
假手术组
8
58.37±5.23
50.18±6.73
44.25±8.59
模型组
8
60.18±6.69
57.43±4.83
5487±9.29
调心方组
8
59.44±8.30
53.68±6.64
39.87±6.06*
E2020组
8
61.50±7.9
55.50±9.21
49.20±10.87
组别
n
第4天
第5天
第6天
正常组
8
32.56±8.42*
23.50±4.96*
18.00±5.11*
假手术组
8
34.18±12.87*
26.25±8.80*
25.00±6.72*
模型组
8
52.18±7.15
51.37±10.67
50.37±10.08
调心方组
8
33.93±7.09*
24.31±3.89*
22.75±7.69*
E2020组
8
39.25±10.26*
36.18±7.87*
30.50±4.39*
注:
与模型组比较*P<0.05
表2调心方对Aβ类AD大鼠ChAT、AchE活性和M受体Rt值的影响(
±s)
组别
n
ChAT
(海马,μmol/h·g)
AchE
(皮层,μmol/h·g)
正常组
8
14.06±1.72*
0.193±0.026
假手术组
8
12.07±2.33*
0.192±0.034
模型组
8
7.16±1.52
0.161±0.021
调心方组
8
13.21±2.75*
0.162±0.022
E2020组
8
7.99±0.82
0.082±0.023*
注:
与模型组比较:
*P<0.05
3讨论
AD是一种严重危害人类健康的疾病之一,近几年其发病率呈逐渐增高的趋势[7,8],由于其发病机理未明,因而缺乏理想的动物模型和治疗方法。
以往主要有中枢胆碱能神经系统破坏模型、实验性自身免疫性痴呆模型、自然衰老模型等,但这些模型均不能全面反映出AD的病理特征,限制了其临床应用[9]。
近几年重点转移到研制具有AD和神经原纤维缠结特征的AD模型。
本研究采用AD单侧杏仁核注射的方法,造成AD沉积脑组织的大鼠模型[10]。
水迷宫实验结果表明模型大鼠存在明显的空间学习记忆障碍,ChAT活力及M受体Rt值均显著下降。
中医认为心为君主之官,主血脉,司神明,与人的生命活动、思维意识、记忆等活动密切相关。
若心气不足,则心血不旺,血行不畅而神明失养;心气不足又可导致痰浊上蒙,闭窍蒙神,致神明失用。
调心方以党参补气,安神明;以菖蒲、远志、茯苓等药化痰浊,通心窍,在临床改善AD患者记忆力、智力、认知功能及生活方面有较好效果。
本实验结果表明该方能显著改善AD杏仁核注射大鼠的空间学习记忆障碍,并可显著提高ChAT和M受体结合位点数。
提示该方对AD的防治作用,可能不仅与提高中枢M受体Rt值有关,还可能与增加中枢ChAT活性有密切关系。
综上所述,调心方对AD患者的治疗是多环节、多方面的,其对Aβ的沉积及神经原纤维缠结的作用有待进一步的研究。
[参考文献]
[1]林水淼,杨柏灿.参枝苓口服液治疗Alzheimer痴呆的临床研究[J].上海中医药大学学报,1997,11
(1):
44.
[2]赵伟康,戴向东.调心方对痴呆大鼠模型N受体和神经肽的作用研究[J].中国中西医结合杂志,1995,(基础理论研究特集):
194.
[3]MorrisR.Developmentsofawatermazeprocedureforstudyingspatiallearningintherat[J].JNeurosciMethods,1984,11:
47.
[4]FonnumF.Arapidradiochemicalmethodforthedetermina
-tionofcholineacetyltransferase[J].JNeurochem,1975,24:
407.
[5]EllmanGL,CourtneyKD,AndreVJ,etal.Anewandrapidcolorimetricdeterminationofacetylcholinesteraseactivity[J].BiochemPharmacol,1961,7:
88.
[6]YamamuraH.Neurotransmitterreceptorbinding[M].NewYork:
RavenPress,1978.57.
[7]谢惠君,郑惠民,张志锁.脑血管恢复痴呆与Alzheimer病患者局部区域的血流量[J].现代康复,1999,12
(2):
81-82.
[8]于杰,张明波,周鸿飞.活血开窍法治疗血管性痴呆作用机理探讨[J].现代康复,2000,4
(2):
1826-1827.
[9]GamesD,AdamesD,AlessandriniR,etal.Alzheimer-typeneuropathologyintransgenicmiceoverexpressionV717F(-amyloidprecursorprotein[J].Nature,1995,373:
523.
[10]SigurdssonEM,LorensSA,HejnaMJ,etal.Localanddista
-nthistopathologicaleffectsofunilateralamyloid-β25-35
InjectionsintotheamygdalaofyoungF344rats[J].Neurob
-iologyofAging,1996,17(6):
893.
中药调心方对氧化损伤型类Alzheimer病大鼠线粒体呼吸链酶活性和钙稳态的影响
金国琴,邱宏,张学礼,戴薇薇,赵伟康1,林水淼1
(上海中医药大学基础医学院生化教研室,上海)
[摘要]目的观察调心方对氧化损伤型类Alzheimer病(AD)大鼠线粒体呼吸链酶活性和钙稳态的影响。
方法采用二羟延胡索酸(DHF)+FeCl3+ADP左侧脑室注射法建立氧化损伤型类AD大鼠模型。
Morris水迷宫法观察大鼠空间学习记忆能力;Clark氧电极法观察脑皮层线粒体呼吸链氧化酶活性;原位杂交法观察脑皮层线粒体细胞色素氧化酶Ⅱ型亚基(COⅡ)mRNA表达;Fura2/AM-荧光法测定脑皮层和海马Ca2+含量以及调心方对AD大鼠上述各项指标变化的影响。
结果与正常对照组比较,AD模型大鼠空间学习记忆能力、脑线粒体细胞色素氧化酶活性和皮层COⅡmRNA表达明显降低,皮层和海马神经元内Ca2+含量显著增高;调心方对上述各项指标有不同程度的改善作用。
结论调心方具有改善AD大鼠空间学习记忆能力、脑线粒体细胞色素氧化酶活性、皮层COⅡmRNA表达和钙稳态失衡的作用。
[关键词]Alzheimer病;细胞色素氧化酶;钙稳态;调心方
[中图分类号]R223[文献标识码]A[文章编号]1005-9202(2003)06-0364-03
Alzheimer病(AD)归为中医“神病”范畴。
林水淼教授根据中医“心主神明”理论和长期临床治疗AD的经验,研制出“从心论治”方药——调心方,在改善AD症状方面已取得了较好的临床疗效[1]。
以往的实验观察到,调心方对单侧电解损毁大脑基底核造成的“痴呆”大鼠模型具有明显的提高记忆功能、改善胆碱能神经系统等多方面作用[2]。
本文采用二羟延胡索酸(DHF)+FeCl3+ADP氧自由基发生系统[4],左侧脑室注射法建立氧化损伤型类AD大鼠模型,观察调心方对AD模型大鼠空间学习记忆能力、脑皮层线粒体呼吸链氧化酶活性及皮层细胞色素氧化酶Ⅱ型亚基(COⅡ)mRNA表达和皮层、海马神经元内Ca2+含量等变化的影响,以期从能量代谢和钙稳态等角度探讨调心方防治AD的作用机理,为临床推广运用调心方提供实验依据。
1材料与方法
1.1材料
SD雄性大鼠,清洁级,体重200±10g,由上海中医药大学实验动物中心提供。
随机分为5组:
正常(对照)组,手术(对照)组,AD模型组,模型+调心方组(中药组)和模型+Donepezil组(西药组)。
大鼠单笼饲养,室温18℃~22℃,自由摄食与饮水。
调心方由党参、桂枝、茯苓、菖蒲和远志等中药组成,采用水提酒沉法制成含生药7.45g/ml口服液,由上海中医药大学老年医学研究所提供;西药Donepezil片剂,5mg/片,为美国FDA认证的临床用于治疗AD的药物,英国Boots公司生产。
中药调心方用药量按临床成人每千克体重日服剂量的10倍,Donepezil按临床成人每千克体重日服等效剂量给药。
两用药组均从造模前1w开始每天灌胃1次,连续4w。
1.2方法
1.2.1动物造模参照文献[5]方法,大鼠以戊巴比妥钠(40mg/kg体重)腹腔注射麻醉,立体定向仪固定大鼠头部,于左侧脑室部位(P0.9、L1.4、H3.9)埋置套管,给以模型组、中药组和Donepezil组各注射DHF(2.4mmol/L)-FeCl3(4.3mmol/L)-ADP(1.56μmol/L)5μl/次,每两天注射1次,共3次,手术对照组注射等量溶剂。
1.2.2大鼠空间学习记忆能力测试Morris水迷宫法[6]观察大鼠空间学习记忆能力。
记录大鼠找到平台所需时间(潜伏期)。
1.2.3线粒体呼吸链氧化酶活性测定Clark氧电极法[7]测定大鼠脑线粒体呼吸链氧化酶活性。
分离线粒体:
大鼠断头,剥取大脑双侧皮层,加入预冷的分离介质(25mmol/LTris-HCl缓冲液、pH7.4,内含225mmol/L甘露醇、75mmol/L蔗糖、1mmol/LEDTA、0.25%BSA)8ml制成匀浆,800g离心8min,吸取上层液10000g离心10min,保留沉淀。
按上法重复洗涤、离心2次。
沉淀加入分离介质制成线粒体悬液,取适量测蛋白浓度,其余部分分别测定琥珀酸脱氢酶、NADH脱氢酶和细胞色素C氧化酶活性。
1.2.4观察COⅡmRNA表达原位杂交法[8]检测鼠脑皮层COⅡmRNA表达变化。
大鼠经左心室灌注固定(4%多聚甲醛、0.1mol/L磷酸缓冲液,pH7.2)。
剥取大脑,按常规固定、脱水,冰冻切片,切片厚
30μm。
以地高辛标记寡核苷酸5’-GCTCTTC-TATA
ATAGGGGATGTGGCGTCTT-3’作探针,按武汉博士德公司试剂盒说明书操作,DAB显色并进行图像处理,计算阳性细胞数和平均光密度。
1.2.5神经元胞浆钙离子浓度的检测Fura-2/AM负载法[9]测定大鼠脑神经元胞浆钙离子浓度。
大鼠断头取脑,用无钙Hanks液冲洗,剪碎,置于10ml含0.18%胰蛋白酶的Hanks液中,37℃消化15min,然后用冰冷的10ml含10%BSA的Hanks液终止消化,用吸管吹打沉淀,200目筛网过滤。
将滤液离心,1500r/min、5min,再用Hanks液洗脱1次,离心,沉淀悬于Hanks液中,台盼蓝检查细胞存活率>95%,细胞数调至2×106个/ml。
将细胞悬液置37℃预温5min,加入用DMSO配制的浓度为0.5mg/ml的Fura-2/AM8μl,37℃震荡温浴45min。
将反应液离心,1500r/min、5min,沉淀用含0.2%BSA的Hanks液洗脱1次,离心,再将沉淀悬于含0.2%BSA的Hanks液中,待测荧光强度。
采用日立F-4500型双波长荧光分光光度计,发射波长510nm,激发波长340nm和380nm。
首先测得两波长的基态荧光值(F340、F380),然后加入20μl10%的TritonX-100测得两波长的最大荧光值(Fmax340、Fmax380),再加入50μl200mmol/L的EGTA测得两波长的最小荧光值(Fmin340、Fmin380)。
按公式[Ca2+]=Kd(R-Rmin)Fmin380/(Rmax-R)Fmax380nmol/L由电脑软件自动计算,式中Kd=224nmol/L,R=F340/F380。
2结果
2.1各组大鼠空间学习记忆能力的变化
见表1。
AD模型鼠潜伏期明显比正常对照组延长,手术对照组变化不显著;而调心方和Donepezil均能明显缩短AD模型鼠潜伏期,改善AD大鼠空间学习记忆能力。
表1调心方对AD模型大鼠空间记忆能力
的影响(s,
±s)
组别
n
潜伏期
第1天
第3天
第5天
正常组
16
20.8±8.3
14.1±9.3
9.9±6.7
手术对照组
12
30.1±12.9
16.4±8.9
8.3±5.5
AD模型组
20
43.9±17.91)
31.8±25.11)
22.2±24.91)
中药组
20
27.6±14.12)
15.9±9.12)
11.3±10.22)
西药组
20
31.8±16.82)
17.2±13.62)
8.4±3.62)
与正常组比较:
1)P<0.05;与AD模型组比较:
2)P<0.05;下表同
2.2大鼠脑皮层线粒体呼吸链氧化酶活性变化
见表2。
AD模型鼠脑皮层线粒体呼吸链细胞色素氧化酶活性显著低于正常组;调心方和Donepezil均能显著提高AD大鼠脑皮层细胞色素氧化酶活性,改善能量代谢。
各组大鼠琥珀酸脱氢酶和NADH脱氢酶活性变化不显著。
2.3大鼠脑皮层COⅡmRNA表达变化
见表3。
AD模型鼠大脑皮层COⅡmRNA表达的阳性细胞数和平均光密度(OD)显著低于正常组;调心方对上述指标有明显改善作用,而Donepezil有增高趋势,但未至显著程度。
表2调心方对AD模型大鼠脑皮层线粒体呼吸链
氧化酶活性的影响(nmolO2/min.mg.Pr,
±s)
组别
n
琥珀酸脱氢酶
DADH脱氢酶
细胞色素氧化酶
正常组
6
20.77±5.68
150.31±36.91
344.94±55.53
模型组
8
18.92±3.73
130.54±30.03
248.55±42.621)
中药组
8
19.08±4.25
135.49±38.23
305.86±49.592)
西药组
6
20.37±3.30
148.76±26.55
304.75±25.612)
表3调心方对AD模型大鼠脑皮层COⅡmRNA
表达的影响(
±s)
组别
n
阳性细胞数
OD
正常组
6
307.3±54.6
0.135±0.010
手术组
6
300.3±59.5
0.125±0.010
模型组
8
93.3±12.61)
0.087±0.0081)
中药组
8
283.0±38.32)
0.130±0.0302)
西药组
6
123.5±33.9
0.101±0.017
2.4大鼠脑皮层和海马神经元胞浆钙离子浓度变化
见表4。
AD模型鼠脑皮层和海马神经元胞浆钙离子浓度明显高于正常组;而调心方和Donepezil均能显著降低AD鼠脑皮层和海马神经元胞浆钙离子浓度,从而利于改善神经元结构与功能。
表4调心方对AD模型大鼠脑神经元胞浆钙离子
浓度的影响(nmol/L,
±s)
组别
n
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