1、参枝苓口服液论文集锦参枝苓口服液（又名调心方、养心健脑液、参桂健脑口服液、脑瑞康口服液等），源自上海中医药大学原副校长林水淼教授的临床验方，系在中医心主神明理论的指导下，以千金备急要方中开心散等为基础，结合现代医学对老年性痴呆的认识研究开发的，用于心气不足型阿尔茨海默病。 参枝苓口服液经历了二十多年的临床和基础研究，研发历程（包括名称的变更）如图1所示，其主要科研项目如表1所示。截至2014年5月有关参枝苓的文献73篇，其中基础研究51篇，临床研究12篇（SCI 1篇），由于篇幅有限，特选10篇成册，仅供参考。199219961999200120062010201120122013沃华投产 上
2、市 时间项目名称19921995上海市科委养心健脑液的研制19931996上海市科委调心、补肾、益气活血治疗AD的临床与实验研究19952000国家九五攻关计划Alzheimer型痴呆的中医辨证治疗及调心方研究19961998上海市科委中医辨证治疗Alzheimer病的临床与实验研究19992003NSFC重点项目调心方防治Alzheimer型痴呆的机理及配伍研究20022005上海市科委轻度认知功能损害及阿尔茨海默病预防的中药干预研究20042006上海市科委调心方有效部位TX0201治疗阿尔茨海默型痴呆的新药研究20062011国家十一五支撑计划中医辨证治疗阿尔茨海默病的疗效评价研究 表1
3、【基础篇】调心方对杏仁核注射A大鼠记忆行为和胆碱能系统作用的研究*刘学源，徐品初，林水淼，赵伟康 （上海中医药大学老年医学研究所，上海 ）摘要 目的 研究调心方对“痴呆”大鼠模型的空间学习记忆功能及胆碱能系统的影响。方法 通过单侧杏仁核注射A造成“痴呆”大鼠模型，采用Morris水迷宫法及放射免疫法观测调心方对“痴呆”大鼠模型的空间学习记忆能力及胆碱能系统的作用。结果 调心方可显著改善A诱导的大鼠空间学习记忆障碍，提高模型大鼠的ChAT活性及M受体Rt值。结论 调心方对A诱导的大鼠空间学习记忆障碍及胆碱能系统损害具有显著的治疗作用。关键词 调心方；阿尔茨海默病；痴呆模型；学习记忆；胆碱能系统中
4、图分类号 R749.1 文献标识码 A 文章编号 1007-5496（2001）05-0048-02阿尔茨海默病（Alzheimer disease，AD）是发生于老年前期和老年期以记忆力进行性减退并影响生活和社会能力为特征的大脑退行性疾病，是老年期痴呆最常见的类型之一。目前本病的病因、诊断、治疗尚无突破性进展，尤其是治疗，尚缺乏理想的方法和药物。调心方是根据中医益心气、振心阳、豁痰开窍的治疗原则在千金要方“开心散”基础上组成的中药复方。临床治疗AD取得了较好疗效1，实验研究表明，该方对电解损毁前脑基底核造成痴呆大鼠模型的学习记忆功能，胆碱能系统和肾上腺素能等系统均有明显作用2。本文以E202
5、0为对照，观测调心方对单侧杏仁核注射-淀粉样蛋白（A）造成“痴呆”大鼠模型的空间学习记忆功能及胆碱能系统的影响。为该方的临床应用提供实验依据。1 对象与方法1.1 资料选Sprauge-Dawley（SD）雄性大鼠，清洁级，体重25030g，购自中国科学院上海实验动物中心。大鼠单笼饲养，自由摄食与饮水，室温1820，日光辅助照明，维持每日光照12h。随机分为5组：正常对照组、假手术组、类AD模型组、调心方组、E200组。1.2 方法大鼠以2%的异戊巴比妥钠（40mg/100g体重）腹腔麻醉，立体定向仪固定头部，切开皮肤，暴露头骨，于前囟后3.2mm，右侧旁开4.3mm，深度8.5mm进针。A（
6、25-35Sigma公司）每次注射5.0nmol（用0.1%的三氟乙酸溶解），手术对照组注射等量溶剂（0.1%三氟乙酸），注射时平稳进针，6min内注射完毕，留针5min后缓慢退出。1.3 药物组成及用药调心方由党参、茯苓、远志、桂枝、菖蒲等中药组成，配成含生药4.67g/ml的水煎剂，备用。以上各组动物于造摸前1周开始给药，每天灌胃1次，连续3周。迷宫训练期间，于训练前30min给药。调心方组用药剂量为23.35（生药）/kg，（依标准动物体重等效剂量法，分别相当于成人每天用量的10倍）。迷宫训练期间，于训练前30min给药，其余各组用等量的双蒸水灌胃。关键提示AD缺乏理想的动物模型和治疗方
7、法，即往的中枢胆碱能神经系统破坏模型，实验性自身免疫性痴呆模型，自然衰老模型等，但这些模型均不能全面反映出AD的病理特征。本文采用新的A单侧杏仁核注射的方法，造成A沉积脑组织大鼠模型，这使本研究结果更为可靠。调心方以党参补气，安神明；以菖蒲、远志、茯苓等化痰浊，通心窍；在临床改善AD患者记忆、智力、认知功能及生活方面有较好效果。1.4 空间学习记忆力测试采用Morris水迷宫法3。水迷宫由中国科学院上海药物研究所提供，平台设于迷宫东北象限正中，水平面高出平台1.5cm，水温保持在1920大鼠连续训练6d，2次/d，设定最长游动时间为70s，以秒表记时，记录大鼠找到平台所需时间，或称潜伏期。1.
8、5 胆碱乙酰化转移酶（ChAT）活性测定采用（1-14C）Ac-CoA掺入法4（1-14C）Ac-CoA为Amersham公司产品，比放射性51.0Ci/mmol。1.6 乙酰胆碱酯酶（AchE）活性测定采用改良的微量羟胺比色法5。1.7 M-受体结合容量（Rt值）测定采用3H-QNB受体结合法6。3H-QNB：Am-ersham公司产品，比放射性51.0Ci/mmol。1.8 统计方法水迷宫数据采用重复测量设计的方差分析，应用6.12统计软件在PC上处理，并用Duncan或SNK进行组间两两比较。2 结果2.1 调心方对A（25-35单侧杏仁核注射类AD大鼠空间学习记忆力的影响随着训练天数的
9、增加，各组平均潜伏期（EL）逐渐缩短。组间比较，与正常组及手术对照组比，模型组EL明显延长，第4天开始有显著差异（P0.05）；与模型组比较，调心方组从第3天开始EL即有显著差异（P0.05），E2020组从第4天开始EL开始有显著差异（P0.05）。而正常组与手术对照组、调心方组及E2020组间均无显著差异（P0.05）。表明调心方、E2020组均能显著改善A诱导的大鼠空间学习记忆障碍，而调心方的作用最为显著，见表1。2.2 对ChAT及AchE活性的影响如表2所示，与正常组及手术对照组比较，模型组海马ChAT活性明显降低（P0.05）；与模型组比较，调心方组ChAT活性明显升高（P0.05
10、），而E2020组变化不明显，且显著低于正常组及手术对照组（P0.05）。提示调心方能显著提高A（诱导降低的ChAT活性，而E2020作用不明显。与此作用不同的是，与正常组及手术对照组比较，模型组AchE活性无明显变化，与模型组比较，调心方组AchE活性无显著差异，而E2020组的AchE活性则明显降低（P 0.05）。提示E2020能显著降低A（大鼠AchE活性，调心方则作用不明显。2.3 对M受体Rt值的影响与正常组、手术对照组比较，模型组皮层M受体Rt值显著降低（P 0.05）；与模型组比较，调心方组M受体Rt值则明显升高（P 0.05），E2020组M受体Rt值虽然较模型组显著升高，但
11、亦显著低于正常组及手术对照组（P 0.05）。提示调心方组能有效提高A（诱导降低的M受体Rt值，E2020的作用则明显低于调心方。表1 调心方对A类AD大鼠水迷宫实验结果的影响（s）组别n第1天第2天第3天正常组858.686.8647.138.7943.1811.3假手术组858.375.2350.186.7344.258.59模型组860.186.6957.434.8354879.29调心方组859.448.3053.686.6439.876.06*E2020组861.507.955.509.2149.2010.87组别n第4天第5天第6天正常组832.568.42*23.504.96*1
12、8.005.11*假手术组834.1812.87*26.258.80*25.006.72*模型组852.187.1551.3710.6750.3710.08调心方组833.937.09*24.313.89*22.757.69*E2020组839.2510.26*36.187.87*30.504.39*注：与模型组比较*P95%，细胞数调至2106个/ml。将细胞悬液置37预温5min，加入用DMSO配制的浓度为0.5mg/ml的Fura-2/AM8l，37震荡温浴45min。将反应液离心，1500r/min、5min，沉淀用含0.2%BSA的Hanks液洗脱1次，离心，再将沉淀悬于含0.2%B
13、SA的Hanks液中，待测荧光强度。采用日立F-4500型双波长荧光分光光度计，发射波长510nm，激发波长340nm和380nm。首先测得两波长的基态荧光值（F340、F380），然后加入20l10%的TritonX-100测得两波长的最大荧光值（Fmax340、Fmax380），再加入50l 200 mmol/L的EGTA测得两波长的最小荧光值（Fmin340、Fmin380）。按公式Ca2+=Kd（R-Rmin）Fmin380/（Rmax-R）Fmax380nmol/L由电脑软件自动计算，式中Kd=224nmol/L，R=F340/F380。2 结果2.1 各组大鼠空间学习记忆能力的变化
14、见表1。AD模型鼠潜伏期明显比正常对照组延长，手术对照组变化不显著；而调心方和Donepezil均能明显缩短AD模型鼠潜伏期，改善AD大鼠空间学习记忆能力。表1 调心方对AD模型大鼠空间记忆能力的影响（s，s）组别n潜伏期第1天第3天第5天正常组1620.88.314.19.39.96.7手术对照组1230.112.916.48.98.35.5AD模型组2043.917.91）31.825.11）22.224.91）中药组2027.614.12）15.99.12）11.310.22）西药组2031.816.82）17.213.62）8.43.62）与正常组比较：1）P0.05；与AD模型组比较
15、：2）P0.05；下表同2.2 大鼠脑皮层线粒体呼吸链氧化酶活性变化见表2。AD模型鼠脑皮层线粒体呼吸链细胞色素氧化酶活性显著低于正常组；调心方和Donepezil均能显著提高AD大鼠脑皮层细胞色素氧化酶活性，改善能量代谢。各组大鼠琥珀酸脱氢酶和NADH脱氢酶活性变化不显著。2.3 大鼠脑皮层COmRNA表达变化见表3。AD模型鼠大脑皮层CO mRNA表达的阳性细胞数和平均光密度（OD）显著低于正常组；调心方对上述指标有明显改善作用，而Donepezil有增高趋势，但未至显著程度。表2 调心方对AD模型大鼠脑皮层线粒体呼吸链氧化酶活性的影响（nmolO2/min.mg.Pr，s）组别n琥珀酸脱
16、氢酶DADH脱氢酶细胞色素氧化酶正常组620.775.68150.3136.91344.9455.53模型组818.923.73130.5430.03248.5542.621）中药组819.084.25135.4938.23305.8649.592）西药组620.373.30148.7626.55304.7525.612）表3 调心方对AD模型大鼠脑皮层CO mRNA表达的影响（s）组别n阳性细胞数OD正常组6307.354.60.1350.010手术组6300.359.50.1250.010模型组893.312.61）0.0870.0081）中药组8283.038.32）0.1300.0302）西药组6123.533.90.1010.0172.4 大鼠脑皮层和海马神经元胞浆钙离子浓度变化见表4。AD模型鼠脑皮层和海马神经元胞浆钙离子浓度明显高于正常组；而调心方和Donepezil均能显著降低AD鼠脑皮层和海马神经元胞浆钙离子浓度，从而利于改善神经元结构与功能。表4 调心方对AD模型大鼠脑神经元胞浆钙离子浓度的影响（nmol/L，s）组别n
