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紫外可见吸收光谱法
第十二章紫外-可见吸收光谱法
【知识目标】
1.掌握:
紫外-可见吸收光谱的产生及其特性,影响紫外-可见吸收光谱的因素。
2.熟悉:
紫外-可见吸收光谱与分子结构的关系,电子跃迁类型和吸收带;定性分析方法,混合组分定量方法。
3.了解:
电磁辐射和电磁波谱;光谱分析法的分类。
【能力目标】
1.识记:
电磁辐射和电磁波谱,光谱分析法的分类;溶剂极性对紫外-可见吸收光谱的影响;仪器的类型;定性分析和纯度检查方法。
2.理解:
紫外-可见吸收光谱的产生,电子跃迁类型和吸收带;仪器测量误差。
案例分析12-1紫外-可见吸收光谱法测定青霉素钠中杂质限量
青霉素钠又称青霉素,是临床治疗中常用的抗生素类药物。
青霉素钠在生产过程中可能引入过敏性杂质,如果不进行检查控制,在治疗使用时,若未对患者做过敏试验,就有可能导致患者过敏性休克,甚至造成心衰死亡。
因此,在生产青霉素钠过程中,必须对其中杂质做限量和纯度检查。
《中国药典》(2010年版二部)规定,用紫外-可见吸收光谱法测定青霉素钠中杂质限量。
该方法具有准确、灵敏、操作简单方便等优点。
问题:
1.什么是紫外-可见吸收光谱法?
有何特点?
2.紫外-可见吸收光谱法在药物分析及食品检验中有哪些应用?
3.应用:
测量条件的选择;定性分析方法和纯度检查,混合组分定量测定方法。
研究物质在紫外-可见光区(200nm~760nm)分子吸收光谱的分析方法,称为紫外-可见吸收光谱法(ultraviolet-visibleabsorptionspectroscopy,UV-vis)。
它广泛用于无机和有机物质的定性和定量分析,在药物、食品中应用也较多。
第一节光谱分析法概述
一、电磁辐射和电磁波谱
表12-1电磁波谱范围表
光谱名称
波长范围
跃迁类型
光谱类型
γ射线
10–4~10–3nm
核能级跃迁
γ射线光谱、莫斯鲍尔光谱
X射线
10–3~10nm
内层电子能级跃迁
X射线光谱
远紫外区
10~200nm
外层电子能级跃迁
真空紫外光谱
近紫外区
200~400nm
价电子或成键电子跃迁
紫外-可见吸收光谱、
发射和荧光光谱
可见光区
400~760nm
近红外区
0.76~2.5μm
分子振动能级跃迁
红外光谱、
拉曼散射光谱
中红外区
2.5~50μm
远红外区
50~1000μm
分子转动能级及低能级振动跃迁
微波区
0.1~100cm
电子自旋及核自旋跃迁
微波谱、电子自旋共振波谱
射频区
1~1000m
电子自旋及核自旋跃迁
核磁共振光谱
电磁辐射又称电磁波,是以巨大速度通过空间、不需要以任何物质作为传播媒介的一种能量。
电磁辐射具有波粒二象性,即波动性和粒子性。
将电磁辐射按波长的长短顺序排列起来,称为电磁波谱。
表12-1列出了各电磁波谱区的名称、波长范围、相应的能级跃迁类型及对应的光谱类型。
二、光谱分析法的分类
光学分析法分为非光谱法与光谱法。
非光谱法是指不以光波长为特征讯号,仅利用物质与电磁辐射的相互作用,测量电磁辐射的反射、折射、干涉、衍射和偏振等性质变化的分析方法。
主要分析方法包括折射法、旋光法、比浊法、X射线衍射法等。
光谱法是基于电磁辐射能量与物质作用时,测定由物质内部发生量子化的能级之间跃迁而产生吸收、发射或散射的波长和强度,进行定性、定量和结构分析的方法。
光谱法可分为吸收光谱法、发射光谱法等。
由气态原子或离子的外层电子在不同能级间跃迁而产生的光谱,称为原子光谱(atomicspectrum)。
由分子外层电子跃迁或分子内部振动转动能级跃迁而产生的光谱,称为分子光谱(molecularspectrum)。
(一)吸收光谱法
利用物质的特征吸收光谱进行分析的方法,称为吸收光谱法(absorptionspectroscopy)。
根据吸收光谱所在光谱区不同,吸收光谱法可分为X射线吸收光谱法、原子吸收光谱法、紫外-可见吸收光谱法、红外吸收光谱法和核磁共振波谱法等。
本章主要讨论紫外-可见吸收光谱法。
(二)发射光谱法
通过测量物质的特征发射光谱进行分析的方法,称为发射光谱法(emissionspectroscopy)。
根据发射光谱所在光谱区和激发方式不同,发射光谱法可分为γ射线光谱法、X射线荧光光谱法、原子发射光谱法、原子荧光光谱法、分子荧光光谱法和分子磷光光谱法等。
第二节紫外-可见吸收光谱与分子结构的关系
紫外-可见吸收光谱法是基于分子外层价电子跃迁产生的吸收光谱进行分析的方法。
它属于分子吸收光谱。
分子在紫外-可见区的吸收与其电子结构相关。
一、紫外-可见吸收光谱的产生和电子跃迁
(一)紫外-可见吸收光谱的产生
分子具有电子能级、振动能级和转动能级,这些能级都是量子化。
在每一电子能级上有许多间距较小的振动能级,在每一振动能级上又有许多更小的转动能级。
若用ΔE电子、ΔE振、ΔE转分别表示电子能级、振动能级、转动能级差,有ΔE电子ΔE振ΔE转,如图12-1所示。
图中S代表电子能级,代表振动能级,r代表转动能级,下标0、1、2、···代表相应能级的基态、第一激发态、第二激发态、···。
分子吸收外来电磁辐射后,它的能量变化ΔE为其振动能量变化ΔE振、转动能量变化ΔE转以及电子能量变化ΔE电子的总和,即
(12-1)
当用波长为λ(或频率)的电磁照射分子,该分子的较高能级与较低能级之差ΔE恰好等于该电磁波能量h时,即有
(12-2)
则该波长(或频率)的光被该物质选择性地吸收,价电子从基态跃迁到激发态。
此时,在微观上表现为分子由较低能级跃迁到较高能级。
在宏观上则为体现物质吸收光。
图12-1双原子分子能级示意图
若用连续的电磁辐射按波长大小顺序分别照射分子,记录物质分子对电磁辐射的吸收。
物质分子对辐射吸收程度随波长变化的关系,称为分子吸收曲线,又称分子吸收光谱。
分子中电子能级间能差约为1~20eV(相应的波长为1.25μm~60nm)。
因此,由电子能级跃迁产生的吸收光谱,称为称为紫外-可见吸收光谱,又称为电子光谱(electronicspectrum)。
在电子能级跃迁过程中,还会伴随有振动能级和转动能级的跃迁,因而产生的一系列谱线连成的谱带。
因此,紫外-可见吸收光谱实际上是电子-振动-转动光谱。
(二)电子跃迁类型
紫外-可见吸收光谱是分子中价电子能级的跃迁产生的,因此,这种吸收光谱决定于分子中价电子分布和结合情况。
在有机化合物中有三种不同性质的价电子:
形成单键的σ电子、形成双键的π电子和未参与成键的孤对电子n电子(或p电子)。
根据分子轨道理论,这三种电子的能级顺序为:
σ<π σ、π表示成键分子轨道,σ*、π*表示反键分子轨道,n表示非键分子轨道。 当外层价电子吸收紫外光或可见光后,就从基态向激发态(反键轨道)跃迁。 分子中的价电子跃迁方式与键的性质有关,即与化合物的结构有关。 电子跃迁(electrontransition)主要类型有: σ→σ*、n→σ*、π→π*、n→π*。 如图12-2所示。 各种电子跃迁所需能量ΔΕ大小顺序为: σ→σ*>n→σ*>π→π*>n→π* 图12-2电子能级及电子跃迁示意图 1.σ→σ*跃迁 由单键构成的化合物,如饱和碳氢化合物,由于只有σ电子,只能发生σ→σ*跃迁。 σ→σ*跃迁所需能量在所有跃迁类型中最大,所吸收的辐射波长最短,其吸收发生在远紫外区,波长小于200nm。 有机饱和烃中C—C键属于这类跃迁,例如,甲烷的最大吸收波长λmax在125nm,乙烷的最大吸收波长λmax为135nm。 由于仅能产生σ→σ*跃迁的物质在200nm以上波长没有吸收,故它们在紫外-可见吸收光谱法中常用作溶剂。 2.n→σ*跃迁 含有未共用电子对的杂原子(N、S、O、P和卤素原子等)的饱和有机化合物,都含有n电子,因此都可发生这种跃迁。 实现这类跃迁所需要的能量较高,但比σ→σ*跃迁所需能量小,n→σ*跃迁比σ→σ*跃迁所引起的吸收峰波长长,为150~250nm,大部分在远紫外区和近紫外区。 例如,CH3OH的吸收峰为183nm,CH3NH2的吸收峰为213nm。 由n→σ*跃迁产生的吸收峰多为弱吸收峰,它们的摩尔吸光系数(εmax)一般在100~300范围内,因而在紫外区有时不易观察到。 3.π→π*跃迁(K带) 含有π电子基团的不饱和烃、共轭烯烃和芳香烃类等有机物可发生此类跃迁。 π→π*跃迁所需能量比σ→σ*跃迁小,与n→σ*跃迁差不多,吸收峰一般处于近紫外光区,在200nm附近,其特征是摩尔吸光系数大,一般εmax为104以上,属强吸收带。 如乙烯(蒸气)的最大吸收波长λmax为162nm。 若有共轭体系,π→π*跃迁所需能量减少,波长向长波方向移动,相当于200nm~700nm的紫外-可见光区。 4.n→π*跃迁(R带) 含有杂原子双键(如C=O,—N=O,C=S,—N=N—等)的不饱和有机化合物可发生这种跃迁。 实现这种跃迁所需能量最小,因此其最大吸收波长一般出现在近紫外光区(200nm~400nm)。 由n→π*跃迁产生的吸收带(R带)的特点是εmax小,一般为10~100。 摩尔吸光系数的差别显著,是区别π→π*跃迁和n→π*跃迁的方法之一。 例如,乙醛分子中羰基n→π*跃迁所产生的吸收带为290nm,εmax只有17。 5.电荷迁移跃迁 所谓电荷迁移跃迁(chargetransfertransition)是指用电磁辐射照射化合物时,电子从给予体向接受体相应的轨道上跃迁。 所以,电荷迁移跃迁实质是内氧化-还原过程。 所得到的吸收光谱称为电荷迁移吸收光谱。 电荷迁移产生的吸收带指的是许多无机物(如碱金属卤化物)和某些由两类有机化合物混合而得的分子配合物。 例如,某些取代芳烃可产生这种分子内电荷迁移跃迁吸收带。 其特点是这种跃迁谱带较宽,吸收强度较大,εmax可大于104。 6.配位场跃迁 配位场跃迁包括d-d跃迁和f-f跃迁。 元素周期表中第四、五周期的过渡金属元素分别含有3d和4d轨道,镧系和锕系元素分别含有4f和5f轨道。 在配体存在下,过渡元素的五个能量相等的d轨道和镧系元素七个能量相等的f轨道分别,分裂成几组能量不等的d轨道和f轨道。 当它们的离子吸收光后,低能态的d电子或f电子可以分别跃迁至高能态的d或f轨道,这两类跃迁分别称为d-d跃迁和f-f跃迁。 由于这两类跃迁必须在配体的配位场作用下才可能发生,因此又称为配位场跃迁(ligandfieldtransition)。 这种d-d跃迁所需能量较小,只需能量较小的可见光就可实现这一跃迁,它们的吸收峰多在可见光区,强度较弱(εmax=0.1~100)。 f-f跃迁带在紫外-可见光区。 图12-3比较形象地表示出这几种常见吸收光谱在光谱区中的位置和大致强度。 横坐标是波长,纵坐标是吸光强度(用摩尔吸光系数lgεmax表示)。 由图可知,π→π*跃迁引起的吸收谱带的吸光强度最大,电荷转移吸收光谱的次之,而配位场吸收谱带最小。 图12-3产生紫外可见吸收光谱的几种电子跃迁示意图 在紫外和可见光谱区范围内,有机化合物的吸收带主要由σ→σ*、π→π*、n→σ*、n→π*及电荷迁移跃迁产生。 无机化合物的吸收带主要由电荷迁移和配位场跃迁(即d-d跃迁和f-f跃迁)产生,电子跃迁的类型与分子结构及其存在的基团有密切联系。 因此,可以根据分子结构来推测可能产生的电子跃迁。 例如,饱和烃只有σ→σ*跃迁,烯烃有σ→σ*跃迁、也有π→π*跃迁,脂肪族醚则有σ→σ*跃迁和n→σ*跃迁。 (三)常用术语 1.生色团(发色团) 生色团(chromophore)是指有机化合物分子中含有能产生*、n→*跃迁的,并且能在紫外-可见光范围内产生吸收的基团。 例如,羰基、硝基、苯环等。 2.助色团 助色团(auxochrome)是指带有非键电子对的基团(如—OH、—OR、—NHR、—SH、—Cl、—Br等),它们本身不吸收紫外-可见光。 但是当它们与生色团相连时,会使生色团的吸收峰向长波方向移动,并且增加其吸光度。 对应的跃迁类型是n→σ*跃迁。 3.红移与蓝移(紫移) 由取代基或溶剂效应引起的使吸收峰向长波方向移动,称为红移(redshift),又称长移。 使吸收向短波长方向移动,称为蓝移(blueshift),又称紫移(或短移)。 吸收强度即摩尔吸光系数ε增大或减小的现象,分别称为增色效应(hyperchromicity)或减色效应(hypochromiceffect),如图12-4所示。 图12-4红移、蓝移、增色、减色效应示意图 (四)吸收带 吸收带是指吸收峰在紫外-可见光谱中的波带位置。 根据电子及分子轨道的种类可将紫外光谱的吸收带分为四种类型,在解析光谱时,可以从这些吸收带的类型推测有机化合物的分子结构。 1.R吸收带 由化合物n→π*跃迁而产生的吸收带。 它是含杂原子的不饱和基团,如、—N=O、—NO2、—N=N—等发色团产生的吸收带。 其特点是能量最小,处于长波方向,吸收峰位于200~400nm之间,为弱吸收强度,一般摩尔吸光系数ε小于100。 2.K吸收带 由共轭双键中的π→π*跃迁产生的吸收带,是共轭分子的特征吸收带。 可据此判断化合物中共轭结构,是紫外光谱中应用最多的吸收带。 其特点是跃迁所需的能量较R带大,一般λmax位于210~250nm,为强吸收(ε>104)。 随着共轭体系的增长,K带吸收向长波方向移动(红移)。 3.B吸收带(苯吸收带) 由苯环本身振动及闭合环状共轭双键π→π*跃迁而产生的吸收带,是芳香族(包括杂环芳香族)的主要特征吸收带。 其特点是为弱吸收带(230~270nm),具有精细结构,摩尔吸光系数ε约为200。 常用来识别芳香族化合物,如图12-5所示。 但溶剂的极性、酸碱性等对精细结构的影响较大。 在极性溶剂中测定,或苯环上有取代基时,精细结构消失。 图12-5苯在乙醇中的紫外吸收光谱 4.E吸收带 由苯环结构中环状共轭体系的π→π*跃迁产生的,分为E1(185nm)和E2(204nm)吸收带。 可以分别看成乙烯和共轭烯烃的吸收带。 也是芳香结构化合物的特征谱带。 吸收强度E1为ε>104,E2约为ε>103,均属强带吸收。 E带主要用于研究取代苯的结构。 当苯环上有助色团(如—C1、—OH等)取代时,E2出现红移,但一般在210nm左右;当有生色团取代并与苯环共轭时,则E带常与K带合并,有B和K两种吸收带。 取代苯中,E2带和B带研究最为广泛,而E1带在远紫外区,较少研究。 二、影响紫外-可见吸收光谱的因素 (一)溶剂效应 由溶剂的极性强弱引起紫外-可见吸收光谱的吸收峰波长发生移动,吸收强度和吸收曲线形状发生改变的现象,称为溶剂效应。 1.溶剂极性对紫外吸收光谱的影响 (1)溶剂极性对最大吸收峰波长的影响 改变溶剂的极性会引起吸收带的最大吸收波长λmax发生变化,表12-2列出了亚异丙酮在不同极性溶剂中吸收波长的变化情况。 当溶剂极性增大时,由π→π*跃迁产生的吸收带发生红移,而由n→π*跃迁产生的吸收带则发生蓝移。 因此,在测定紫外吸收光谱曲线时,应注明在何种溶剂中测定。 表12-2溶剂对亚异丙酮吸收带的影响 吸收带 正己烷 乙腈 氯仿 甲醇 水 波长位移 π→π* λmax(nm) 230 234 238 237 243 红移 n→π* λmax(nm) 329 314 315 309 305 蓝移 溶剂极性改变使吸收带位移的原因,一般认为是极性溶剂对n、π、π*轨道的溶剂化作用不同所引起的。 图12-6(a)是π→π*跃迁和n→π*跃迁的能级受溶剂极性影响所发生变化的示意图。 分子吸收光能后,成键轨道上的电子会跃迁至反键轨道形成激发态。 一般情况下分子的激发态极性大于基态。 溶剂极性越大,分子与溶剂的静电作用越强,使激发态稳定,能量降低。 即π*轨道能量降低大于p轨道能量降低,因此波长红移。 而产生n→π*跃迁的n电子由于与极性溶剂形成氢键,基态n轨道能量降低大,n→π*跃迁能量增大,吸收带蓝移。 极性溶剂极性越大,位移幅度也越大。 因此,可以利用溶剂效应来鉴别这两种跃迁引起的吸收谱带。 (a)溶剂极性对π→π*和n→π*跃迁能量的影响(b)苯酚的B吸收带(1.在庚烷溶液中2.在乙醇溶液中) 图12-6溶剂效应 (2)溶剂极性对吸收光谱精细结构的影响 当溶剂从非极性变为极性时,常会导致化合物精细结构完全消失,吸收峰减少,并使吸收曲线趋于平滑,成为一条宽而低的吸收带。 图12-6(b)说明溶剂极性对苯环精细结构的影响。 2.溶剂的选择 化合物吸收光谱的特性与所用的溶剂有密切关系,在进行紫外光谱分析时,必须正确选用溶剂。 选择溶剂的原则: (1)溶剂应能很好地溶解被测试样,溶剂对溶质应该是惰性的。 即所配成溶液应具有良好的化学和光化学稳定性。 (2)在溶解度允许情况下,应尽量选择极性较小的溶剂。 (3)溶剂在试样的吸收光谱区应无明显吸收。 表12-3列出紫外吸收光谱中常用溶剂,同时给出了各种溶剂使用的最短波长极限。 所选溶剂必须在大于最低波长极限的范围内使用。 表12-3紫外吸收光谱分析常用溶剂 溶剂 可使用的最短波长极限(nm) 溶剂 可使用的最短波长极限(nm) 水 200 乙酸 250 正庚烷 200 甲酸 255 环己烷 200 乙酸乙酯 255 甲醇 210 四氯化碳 265 乙醇 210 苯 280 乙醚 215 石油醚 297 氯仿 245 吡啶 305 二氯乙烷 245 丙酮 330 需要注意的是光谱分析用溶剂应当是高纯度的,至少是分析纯,必要时应预先检查溶剂中是否含有杂质,以免得出错误结论。 (二)pH的影响 无论是在紫外或可见光区,溶液pH变化常引起被测物质的化学变化,从而影响其吸收光谱。 例如,苯胺在中性条件λmax为230nm,次吸收峰为280nm,ε分别为8600和1400,但苯胺在酸性介质中会形成苯胺阳离子,其吸收峰分别为203nm和254nm,与苯的λmax几乎相同。 这是由于苯胺阳离子不带有孤对电子对,即不存在n→π*共轭,导致吸收峰蓝移,吸光度减小。 利用苯胺成盐前后的变化可确定分子中是否有N取代苯胺存在。 由此可见,在测定不同pH下易发生变化的化合物时,一定要控制溶液pH值。 (三)温度的影响 在室温范围内,温度对吸收光谱的影响不大。 但在低温时,由于分子的热运动减慢,分子的碰撞频率降低,邻近分子间的能量交换减少,产生红移,吸收峰变得比较尖锐,吸收强度有所增大。 但有些显色反应在室温下进行缓慢,需要加热才能完成,这时分子的热运动加快,邻近分子的碰撞频率增加,谱带变宽,使谱带精细结构消失。 因此,应根据反应性质选择合适温度条件。 第三节紫外-可见分光光度计 紫外-可见分光光度计的类型很多,就其基本原理、仪器结构与第十章分光光度计相似,由辐射光源、单色器、吸收池、检测器、信号处理及显示系统五部分组成。 图12-7是双光束紫外-可见分光光度计的结构示意图。 一、主要部件的性能与作用 1.辐射光源 辐射光源的作用是提供激发能,使待测分子产生吸收。 对光源的要求: 在较宽的波长范围内,能够提供足够强的连续光谱;有良好的稳定性、较长的使用寿命;辐射能量随波长无明显变化。 常用的光源有热辐射光源和气体放电光源。 热辐射光源用于可见光区,如钨灯和卤钨灯,使用的波长范围在320~2500nm。 气体放电光源用于紫外光区,如氢灯和氘灯,可在160~375nm范围内产生连续光源。 图12-7双光束紫外-可见分光光度计的结构示意图 2.单色器 单色器的作用是使光源发出的光变成所需波长的单色光。 通常由入射狭缝、准直镜、色散元件、聚焦透镜和出射狭缝构成,如图12-8所示。 入射狭缝用于限制杂散光进入单色器,准直镜将入射光束变为平行光束后进入色散元件。 色散元件将复合光分解成单色光,然后通过聚焦透镜将平行光聚焦于出射狭缝。 出射狭缝用于限制谱带宽度。 常用的色散元件是光栅(raster)和棱镜(prism)。 单色器的性能直接影响入射光的单色性,从而也影响到测量的灵敏度、选择性及校准曲线的线性关系等。 (a)光栅单色器(b)棱镜单色器 图12-8光栅和棱镜单色器构成图 3.吸收池 又称比色皿,是用来盛放被测试样的。 按制作材料可分为石英吸收池和玻璃吸收池。 前者适用于紫外-可见光区,后者只适用于可见光区。 吸收池厚度在0.1~10cm之间,常用的吸收池厚度为1cm,根据被测试样的浓度和吸收情况来选择合适的吸收池。 使用吸收池时,应先用溶剂洗涤吸收池,然后再用被测试样溶液冲洗3次。 拿取吸收池时,应拿吸收池毛玻璃的两面,不要触摸透光面。 吸收池外沾有液体时,应小心地用擦镜纸或脱脂棉擦净,保证其透光面上没有斑痕。 避免测定含强酸或强碱的溶液。 4.检测器 又称光电转换器(photolectrictransducer),它的功能是检测透过吸收池的光信号,并将光信号转变成可测量的电信号。 常用的有光电池、光电管或光电倍增管,后者较前者更灵敏,它具有响应速度快、放大倍数高、频率响应范围广的优点,特别适用于检测较弱的辐射。 近年来还使用光导摄像管或光电二极管阵列作检测器,具有快速扫描功能。 5.信号处理及显示系统 它的作用是放大电信号,并以适当方式显示或记录下来。 由于透过试样后的光很弱,所以射到光电管产生的光电流很小,因此需要放大才能测量出来,放大后的信号可直接输入记录式电位计。 常用的信号处理及显示系统有检流计、数字显示仪、微型计算机等。 二、紫外-可见分光光度计类型 紫外-可见分光光度计,可分为单光束分光光度计、双光束分光光度计和双波长分光光度计。 1.单光束分光光度计 经单色器分光后的一束平行单色光,轮流通过参比溶液和试样溶液,以进行吸光度的测定。 这种简易型分光光度计结构简单,操作方便,易于维修,适用于测定特定波长的吸收,进行定量分析。 其原理如图12-9(a)。 图12-9三种类型分光光度计原理图 2.双光束紫外-可见分光光度计 双光束仪器中,从光源发出的光经单色器分光后,再经旋转折光器分成两束,交替通过参比池和试样池,测得的是透过试样溶液和参比溶液的光信号强度之比。 双光束仪器克服了单光束仪器由于光源不稳引起的误差,并且可以对全波段进行扫描。 其原理如图12-9(b)。 3.双波长紫外-可见分光光度计 该仪器既可用作双波长分光光度计,又可用作双光束仪器。 其原理如图12-9(c)。 由同一光源发出的光被分成两束,分别经过两个单色器,得到两个不同波长的单色光λ1和λ2,由斩光器并束,使其在同一光路交替通过同一吸收池,由光电倍增管检测信号,得到的信号是两波长处吸光度之差ΔA。 双波长仪器的主要特点: (1)不需参比液,克服了电源不稳而产生的误差,灵敏度高、选择性高。 (2)对混浊试样进行测定时,可消除背景吸收。 (3)适当选择波长,简化混合组分同时测定过程。 (4)可测定导数光谱(derivativespectrum)。 三、分光光度计的校正 为保证测量的精密度和准确度,紫外-可见分光光度计要定期进行波长校正和吸光度校正。 一般用镨铷玻璃或钬玻璃校正分光光度计的波长标尺,前者用于可见光区,后者对紫外和可见光区都适用。 用K2CrO4标准溶液来校正吸光度标度。 第四节应用和典型工作任务 紫外-可见吸收光谱法不仅可用于有机化合物的定性分析和结构分析,而且可以进行定量分析及测定某些化合物的物
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