不同TgAb浓度对血清Tg放免法浓度测值影响的研究.docx
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不同TgAb浓度对血清Tg放免法浓度测值影响的研究
不同TgAb浓度对血清Tg放免法浓度测值影响的研究
[摘要]目的探讨不同浓度的抗甲状腺球蛋白抗体(TgAb)对甲状腺球蛋白(Tg)测量值的干扰。
方法通过混合Tg和TgAb标准品,混合患者的血清高Tg低TgAb和高TgAb低Tg产生实验样本,用放射免疫法测量Tg。
比较混合前后Tg浓度值。
结果Ⅰ组试验样本的变异系数为(4.21±3.51)%(0~14.82)(r=0.998);Ⅱ组试验样本的变异系数为(2.83±2.23)%(0.87~11.21)(r=0.999);Ⅰ组样本中,增加TgAb浓度,Tg的测量值呈比例下降,呈明显的直线负相关趋势(P均<0.01);Ⅱ组样本中,随着TgAb浓度增高,Tg的测量值呈比例下降,呈明显的直线负相关趋势(P均<0.05)。
结论血清TgAb浓度过高,Tg的测定值显著会低于实际Tg浓度值,且TgAb的浓度越高,对Tg分析产生的干扰越大。
所以临床工作中,分析血清Tg测定值,需要结合血清TgAb测定值。
[关键词]甲状腺球蛋白;甲状腺球蛋白抗体;分化型甲状腺癌;放射免疫法
[中图分类号]R736.1 [文献标识码]A [文章编号]2095-0616(2014)08-07-04
StudyofinfluenceofdifferentTgAbconcentrationsonradioimmunoassaymeasurementofserumTgconcentrations
HE Jian1,2 PAN Mingzhi2 HUANG Rui2 TANG Gongshun2
1.DepartmentofNuclearMedicine,ChengduSecondPeople'sHospital,Chengdu610017,China;2.DepartmentofNuclearMedicine,WestChinaHospitalofSichuanUniversity,Chengdu610041,China
[Abstract]ObjectiveToevaluatetheinterferenceofdifferentconcentrationsofanti-thyroglobulinantibodies(TgAb)onthemeasurementvaluesofthyroglobulin(Tg).MethodsThroughblendingTgandTgAbstandards,thepatients'serumhighTgandlowTgAbandhighTgAbandlowTgwereblendedtoproduceexperimentalsamples.TheradioimmunoassaywasusedtomeasureTg.TheTgconcentrationvaluesbeforeandafterblendingwerecompared.ResultsThevariationcoefficientoftheexperimentsamplesingroupIwas(4.21±3.51)%(0-14.82)(r=0.998);ThevariationcoefficientoftheexperimentsamplesingroupⅡwas(2.83±2.23)%(0.87-11.21)(r=0.999).InthesamplesofgroupI,whenincreasingtheTgAbconcentration,theIgmeasurementvaluedroppedproportionally,presentingasignificantlinearnegativecorrelationtrend(P<0.01forall);InthesamplesofgroupⅡ,astheTgAbconcentrationincreased,theIgmeasurementvaluedroppedproportionally,presentingasignificantlinearnegativecorrelationtrend(P<0.05forall).ConclusionWhentheserumTgAbconcentrationisexcessivelyhigh,themeasurementvalueofTgissignificantlylowerthantheactualTgconcentrationvalue,andthehighertheTgAbconcentrationis,thelargertheinterferenceproducedbyTgis.Therefore,inclinicalwork,analysisofserumTgmeasurementvalueshouldcombineserumTgAbmeasurementvalue.
[Keywords]Thyroglobulin;Thyroglobulinantibodies;Differentiatedthyroidcancer;Radioimmunoassay
血清甲状腺球蛋白(thyroglobulin,Tg)是甲状腺滤泡上皮细胞合成的一种二聚体糖蛋白,贮存在细胞或者滤泡腔内,以胶体形式在细胞和腺腔内循环,仅微量Tg进入血液循环内。
分化型甲状腺癌(differentiatedthyroidcancer,DTC)患者经手术切除和131I清甲治疗后,血清Tg应小于1ng/mL或者检测不到,如血清Tg水平升高,提示有可能存在DTC临床复发或转移。
因此,准确检测血清Tg浓度是判断分化型甲状腺癌(DTC)患者有无复发和转移的一种特异性高的检查方法[1-3]。
血清Tg刺激产生甲状腺球蛋白抗体(thyroglobulinantibody,TgAb),由于TgAb的存在,干扰了血清Tg的测量[4]。
当TgAb存在时,测量TSH刺激状态的Tg浓度,将导致评判甲状腺癌复发或转移的失败。
有人认为TgAb对Tg影响的大小与TgAb浓度有关[5]。
为了评估TgAb对血清Tg的影响,作者在各种TgAb浓度下用放免法测量Tg的浓度。
1 资料与方法
1.1 标本收集
收集四川大学华西医院2012年9~11月期间,已行甲状腺全切术、中央区淋巴结清扫术、131I清甲
表2 Ⅱ组实验样本等体积混合后浓度,表示为Tg(Ⅱa)(ng/mL)-TgAb(Ⅱb)(IU/mL)
Tg(Ⅱa)-TgAb(Ⅱb)Tg(Ⅱa)-TgAb(Ⅱb)Tg(Ⅱa)-TgAb(Ⅱb)Tg(Ⅱa)-TgAb(Ⅱb)Tg(Ⅱa)-TgAb(Ⅱb)
4.7~3.54.7~5.24.7~18.84.7~643.04.7~930.0
18.5~3.518.5~5.218.5~18.818.5~643.018.5~930.0
111.0~3.5111.0~5.2111.0~18.8111.0~643.0111.0~930.0
246.0~3.5246.0~5.2246.0~18.8246.0~643.0246.0~930.0
表3 Ⅰ组样本Tg的测量值()
已知的Tg浓度
(ng/mL)不同TgAb浓度条件下的Tg测值(ng/mL)相关系数P
10.0(U/mL)30.0(U/mL)100.0(U/mL)300.0(U/mL)1000.0(U/mL)
25.1±0.14.0±0.23.4±0.12.6±0.11.8±0.1-0.8440.000
12.511.0±0.58.8±0.48.2±0.77.0±0.35.9±0.3-0.8200.000
25.026.4±1.823.6±1.020.7±1.120.1±1.215.3±0.5-0.8980.000
100104.1±3.2103.7±2.088.2±1.076.7±2.565.5±3.0-0.8800.000
表4 Ⅱ组样本Tg的测量值()
已知的Tg浓度
(ng/mL)不同TgAb浓度条件下的Tg测值(ng/mL)相关系数P
3.5(U/mL)5.2(U/mL)18.8(U/mL)643.0(U/mL)930.0(U/mL)
4.74.5±0.24.5±0.23.4±0.62.1±0.12.0±0.2-0.9230.000
18.517.6±0.318.7±0.411.3±0.49.1±0.96.7±0.6-0.8500.000
111.0102.3±5.1100.5±5.156.0±3.445.3±0.439.3±2.2-0.7930.000
246.0235.8±6.2234.8±4.2121.1±1.999.4±12.285.9±5.2-0.7800.001
治疗的DTC患者血清标本20例。
纳入标准为:
(1)均停服优甲乐3周,禁碘饮食3周。
(2)由四川大学华西医院检验科Roche公司MODULARE170电化学发光系统测定TSH、Tg及TgAb。
(3)TSH值(77.2±18.5)IU/L,高Tg浓度~TgAb浓度,高TgAb浓度~低Tg浓度。
排除标准:
(1)未手术,或未甲状腺全切,中央区淋巴结未清扫。
(2)未行131I清甲治疗。
(3)未停服优甲乐或停药后TSH值低于30IU/L。
1.2 试验样本准备
Ⅰ组:
Tg标准品浓度分别为10,25,50,100和200.0ng/mL,TgAb标准品浓度分别为30,100,300,1000和3000IU/mL。
等体积两两混合Tg和TgAb标准品,分别获得混合后不同浓度Tg和TgAb的样本(表1)。
Ⅱ组:
ⅡaDTC患者低水平TgAb(<10U/mL),不同的Tg浓度(9.3,37.6,221.9和492.0ng/mL)的血清样本;ⅡbDTC患者低水平Tg(<0.1ng/mL)不同的TgAb浓度(7.0,10.4,37.5,1286.0和1860.0IU/mL)的血清样本。
Ⅱa与Ⅱb等体积两两混合血清样本,分别获得不同浓度Tg和TgAb的血清标本。
见表2。
1.3 Tg和TgAb测量
Tg测量使用RIA法,试剂盒购自潍坊三维生
表1 Ⅰ组标准品等体积混合后浓度,表示为Tg(ng/mL)-TgAb(IU/mL)
Tg-TgAbTg-TgAbTg-TgAbTg-TgAbTg-TgAb
5.0~15.05.0~50.05.0~150.05.0~500.05.0~1500.0
12.5~15.012.5~50.012.5~150.012.5~500.012.5~1500.0
25.0~15.025.0~50.025.0~150.025.0~500.025.0~1500.0
100~15.0100~50.0100~150.0100~500.0100~1500.0
物工程集团有限公司,其检测低限为1μg/L,批内变异系数3.2%~6.8%,批间变异系数4.7~8.5%。
TgAb测量采用IRMA法,由自潍坊三维生物工程集团有限公司提供,其检测低限为3IU/mL,批内变异系数<10%,批间变异系数<15%。
Ⅰ组和Ⅱ组,每一浓度,一式三份,进行Tg的重复性测量。
1.4 统计学方法
将每一混合后样本作Tg含量测定,测定结果用四格表Kappa检验,SPSSversion11软件分析,进行Spearman相关分析,|r|>0.95存在显著性相关;|r|≥0.8高度相关;0.5≤|r|<0.8中度相关;0.3≤|r|<0.5低度相关,以P<0.05为差异有统计学意义。
评估样本中不同浓度TgAb对Tg测量的影响。
2 结果
2.1 Tg测量的重复性
Ⅰ组试验样本的变异系数为(4.21±3.51)%(0~14.82)(r=0.998)。
Ⅱ组试验样本的变异系数为(2.83±2.23)%(0.87~11.21)(r=0.999)。
2.2 TgAb对Tg的影响
Ⅰ组样本中,增加TgAb浓度,Tg的测量值呈比例下降,呈明显的直线负相关趋势(P均<0.01)。
低浓度(10U/mL)的TgAb样本中,Tg浓度测量值高于已知的Tg浓度的样品(表3);Ⅱ组样本中,随着TgAb浓度增高,Tg的测量值呈比例下降,呈明显的直线负相关趋势(P均<0.05)。
见表4。
3 讨论
约10%~25%的DTC患者清甲治疗后有转移或复发[6-7],而Tg被视为预测DTC转移或复发的敏感和特异性的肿瘤标志物。
TgAb与存留的抗原刺激相关,40%的DTC患者TgAb呈阳性,较正常人群增高[8,15]。
范群等[9]认为TgAb持续阳性可能表明病灶复发或转移,然而,其他的研究已经报道TgAb水平和病灶残留没有相关性[10]。
因此,血清高浓度的TgAb对Tg值的干扰,将影响DTC患者下一步的治疗决策。
内源性TgAb干扰Tg测量,因此我们可以在一定TgAb浓度下预测Tg浓度。
当存在TgAb时,即使TgAb的浓度很低,由放免测定Tg的值通常也低于其真实值[11]。
Tg测量值取决于TgAb浓度,其程度与TgAb的浓度呈正相关[12]。
在本文研究中,通过A组和B组的实验样品测试Tg,来评估TgAb对Tg测量的影响。
本研究发现,在高浓度的TgAb中,Tg已知值是的测量值的2倍多。
如表4中,Tg已知值为4.7ng/mL的血清,在含有1860IU/mLTgAb的样品中测得值仅为2ng/mL。
可以认为,当RIA测量值Tg为2.0ng/mL,而TgAb大于1860IU/mL的患者,其Tg值可能大于4.7ng/mL。
因此,当应用Tg值为2.0ng/mL来评估患者时,患者可能被错误归类为低风险患者[13],而停止进一步治疗。
一个Tg已知值为18.5ng/mL的血清样本,当含有gAb浓度为1286IU/mL时,测量值为9.1ng/mL。
即TgAb大于1286IU/mL时,Tg值为18.5ng/mL的患者,Tg测定值可能低于10ng/mL。
因此,当Tg值为10ng/mL,而影像学检查无阳性发现时,患者可能被误认为未发生远处转移[14]。
相比早期诊断疾病复发或转移的患者,疾病的处理将被延迟,导致患者预后差。
在本研究中,我们使用从患者得到的人类TgAb血清,对Tg测量的影响进行评估,在已知的Tg浓度值范围内,验证人类TgAb的影响。
本研究的结果表明,在参考范围内,人类TgAb浓度可致Tg测值降低,高浓度的TgAb可以导致Tg值更低;因此,考虑到伴随TgAb浓度的高低,Tg测量方法的发展,将决定临床医生参考其临床意义。
与使用患者的血清的试验相反,低浓度的TgAb导致过高地估计的Tg,在本研究中没有进一步论证。
Tg测值的影响不只依赖分析方法类别,还有被患者TgAb的识别的Tg抗原决定簇类型。
因此,本次研究可能不适合应用到所有的检测方法和所有患者。
然而,研究预测的Tg值,比未考虑TgAb干扰测量的Tg值更最接近真实的Tg值。
对于DTC患者,可能在预测病灶复发或癌症复发上更有价值[16]。
本研究的可靠性有赖于医生在临床中进行临床实践。
本研究是有一定局限性。
首先,患者标本是依据电化学发光筛选的,而本研究运用的是放射免疫法,方法学上存在差异。
其次,尽管尽力规范实验室Tg测定操作,实验室之间的差异仍然存在,这可能与基因多态性相关,比如蛋白质一级结构变化的介导,可能会导致改变蛋白质加工、修改或交联糖基化途径[8]。
血清TgAb检测的结果因抗原决定部位而存在差异,尤其是在患者没有甲状腺炎的情况下[5]。
第三,用血清Tg、TgAb测量值,来估计的真实的Tg值,而真实的TgAb值应该是一个决定性因素。
纳入标准的标本,我们没有评估血清Tg对TgAb的影响力。
第四,在本研究中,我们只用四个浓度的血清Tg和五个浓度的TgAb,估算已知Tg浓度不是最准确的,还需要大样本进一步的研究真正的Tg浓度。
综上所述,用Tg和TgAb测量浓度预测真正的Tg浓度,用于评估DTC患者病灶复发或转移,将对DTC患者进一步临床治疗提供更多信息,可能比单纯放免法测量Tg更有价值。
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(收稿日期:
2014-01-27)
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