基因工程技术操作陶正.docx
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基因工程技术操作陶正.docx
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基因工程技术操作陶正
基因工程操作技术(调整)
1.为什么要学习基因工程技术操作?
1)只有在实验室才能真正学会和掌握基因工程的重要概念和相关原理。
2)只有在实验室才能真正增长知识和才干。
3)只有亲手做过的实验才能记忆犹新。
2.珍惜实验课的体会:
1)基因工程实验的开设来之不易。
2)实验课上的学习内容将为你今后的科学生涯打下宝贵的基础。
3.实验室常见的仪器设备及用途:
1)纯水仪:
用途:
制纯水
注意事项:
防止爆炸,防止发水。
2)天平:
托盘天平(配平实用)
电子天平(0.01、0.001、0.0001)
3)磁力搅拌器(具有加热功能)4)酸度计
用途:
配置药品调PH值
注意事项:
防止腐蚀保护电极
4)高压灭菌锅(手动、半自动、全自动)
用途:
灭菌。
注意事项:
使用前检查锅内水是否充足
使用前设定好灭菌的温度、压力和时间
打开和关闭灭菌锅是注意同时旋转对称的螺旋
至少待灭菌无稍微冷却后方可去除
5)超低温冰箱(--80。
C)7)普通冰箱(--20。
C)
用途:
用于贮藏药品、材料等。
注意事项:
确保冰箱门关严防止冻伤
6)超净工作台:
用途:
用于植物组织培养、微生物接种。
注意事项:
⑴确保使用状态时紫外灯必须关闭
⑵保持清洁
⑶不要用酒精擦拭有机玻璃挡板
7)恒温培养箱:
用途:
用于液体培养基中对细菌的培养
注意事项:
使用前调好温度计转速
8)高速冷冻离心机(台式、立式)
用途:
用于DNA、RNA等提取过程中的高速冷冻离心
注意事项:
⑴使用前要预冷,调好温度转速等
⑵必须调平
⑶使用后要关电源,擦拭干净(离心机内部的水珠)
9)PCR仪:
用途:
用于基因扩增
注意事项:
⑴使用前设好程序
⑵使用后关闭电源
10)移液器:
(0.2—1000μl)
用途:
用于微量液体的移取
注意事项:
⑴使用前必须看清楚量程,并在量程范围内使用。
⑵使用时要缓慢用力
⑶切记避免有机溶剂腐蚀枪杆
⑷使用后调至最大量程
11)微波炉:
用途:
融化琼脂糖凝胶,或琼脂粉
注意事项:
⑴注意微波时间
⑵避免污染物污染
12)凝胶电泳装置:
用途:
用于核的电泳的检测
注意事项:
⑴使用前要注意电泳的方向与电泳槽的正负极是否吻合,设定拟使用的电压,电流等。
⑵使用时要戴PE手套,并注意不要产生大量的污染物。
13)UV投射仪及凝胶成像系统:
用途:
用于核算条带的观察及照相
注意事项:
⑴不要造成EB污染
⑵使用时要先开电源,再开紫外,关闭是相反。
⑶使用后将凝胶几时拿走放回收处,并使仪器内部保持清洁。
14)烘箱:
用途:
用于烘干器皿
注意事项:
⑴防止器皿水分过多,造成短路。
⑵塑料凳器皿切记不要高温烘烤
⑶玻璃器皿等高温烘烤后,注意及时断电,千万不能过夜。
15)分子杂交炉:
用途:
用于Southern、Northern等分子杂交。
注意事项:
⑴正确设定杂交温度,时间等。
⑵防止同位素遗漏,污染。
16)恒温培养箱、培养室:
用途:
生物材料的培养
注意事项:
⑴正确设定培养温度、湿度、光照时间等培养条件。
⑵防止培养箱,培养是污染。
⑶注意温度的调节。
17)制冰机:
用途:
制碎冰。
注意事项:
⑴使用时先接通水源。
⑵使用后要关闭水源。
18)蛋白质、核算分析仪:
用途:
测定核算及菌液的浓度。
注意事项:
⑴使用时要先预热。
⑵使用前要调零。
⑶要调好光源。
19)测序仪:
用途:
对核算进行测序。
注意事项:
防止污染、按程序操作。
20)基因枪:
用途:
用于转基因。
注意事项:
无菌操作,保持清洁。
使用时检查是否漏气。
21)其他:
恒温水浴锅、研钵研杵、液氮罐、电炉子、通风橱、涡旋器、同位素室及暗室。
4.常见的有害化学物质:
A.苯酚、氯仿、异戊醇。
B.溴化乙锭(EB)。
C.十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)。
D.焦乙酸二乙脂(DEPC).
E.放射性元素32P、35S
5.安全规程:
1)熟悉所有有害物质的标识。
2)在不知道正确操作程序时不要使用实验室的药品及仪器。
3)不要认为扩大污染源,或随意丢弃污染垃圾。
4)如果不小心将有害物质弄到皮肤或衣服上,马上采取有效措施处理。
5)严禁在实验室吸烟、饮食、以免误事和吸入有害物质。
6)不要穿拖鞋进实验室。
实验一大肠杆菌感受态细胞的制备
一:
实验目的:
掌握大肠杆菌感受态细胞的方法和技术。
二:
实验原理:
感受态细胞是经物理化学方法增强获取DNA能力的细菌细胞,其
原理是处于0。
C的CaCl2低渗溶液中,细菌细胞膨胀呈球形,此
时,细菌处于容易吸收外源DNA的状态。
三:
实验仪器及药品:
1.仪器:
制冰机、恒温摇床、天平、酸度计
2.材料:
大肠杆菌DH5α,10ml离心管,1.5ml离心管
3.试剂:
0.1mol/lCaCl2溶液,80%甘油,LB液体培养基(1L),pH7.0-7.3
胰蛋白胨10g,酵母提取物5g,NaCl10g。
四:
实验内容:
1.用划线法将大肠杆菌DH5α接种于无抗性固体培养基上,与37。
C倒置培
养1--2天。
2.从菌落上挑取一个单菌落接至3ml液体培养基中,37。
C振荡培养过夜。
3.取0.5ml菌液转到一个装有50mlLB液体培养基的锥形瓶中,37。
C振荡培
养2--3h
4.将菌液转移至10ml离心管中,冰上放置10min。
5.4。
C离心10min(4000r/min)回收细胞。
6.倒出上清液,将管倒置1min,以便培养液洗尽。
7.用冰冷的2ml0.1mol/lCaCl2溶液悬浮细胞沉淀,立即放在冰上保温30min.
8.4。
C离心10min(4000r/min)回收细胞。
(其上清)
9.用冰冷的0.1mol/lCaCl20.4ml悬浮细胞(务必放在冰上)
10.分装细胞:
200μl/份,加30μl无菌甘油,混匀置-80。
C冰箱中保存,
此细胞即为感受态细胞。
思考题:
1.感受态细胞制备过程中的注意事项?
整个操作过程均应在无菌条件下进行,所用器皿,如离心管,移液枪
头等最好是新的,并经高压灭菌处理。
所有的试剂都要灭菌,且注意
防止被其它试剂、DNA酶或杂DNA所污染,否则均会影响转化效率或
杂DNA的转入。
整个操作均需在冰上进行,不能离开冰浴,否则细胞
转化率将会降低。
2.Ca2+感受态细胞中的作用?
促进大肠杆菌转化。
实验二质粒DNA转化大肠杆菌
实验目的:
掌握质粒DNA转化大肠杆菌的方法技术。
实验原理:
转化是指质粒DNA或以它为载体构建的重组子导入细菌的过程,其原
理是细菌处于0。
CCaCl2低渗溶液中,细菌细胞膨胀呈球形,转化混
合物的DNA形成抗DNA酶的羟基-钙磷酸复合物贴附于表面,经42。
C
短时间热击,促进细胞吸收DNA复合物,将细菌放置在培养基中保温
一段时间,促使在转化过程中获得新表型得到表达,然后将细菌培养
物涂在含有Amp的选择培养基中。
实验仪器:
超净工作台、恒温摇床、制冰机、恒温箱、-70。
C冰箱、水浴锅
实验材料:
大肠杆菌DH5α,PUC1g质粒,离心管
实验试剂:
LB固体培养基20mg/mlX--gal40μl200mg/mlPTG40μl
实验内容:
1.取200μl新配的感受态细胞加入DNA2μl混匀,冰浴30min,同
时用PUC1g做两个对照:
受体对照:
200μl感受态细胞+2μl无菌水
质粒对照:
200μl感受态细胞0.1MCaCl2溶液+2μl质粒DNA
2.将管放在42。
C冰浴中90s。
3.冰浴2min。
4.每管加800μl液体培养基,培养45min
5.加4μlIPTG和40μlX--gal混匀。
6.将混合液移至含有Amp(50mg/ml)的培养皿中,再用无菌涂布棒
将菌液均匀涂满平板。
7.将适当体积(100μl)转化的感受态细胞涂在备好的培养基上。
8.倒置平皿37。
C培养12--16h,出现菌落。
实验结果:
含抗生素
不含抗生素
结果分析
受体对照组
DNA对照组
转化实验组
转化数:
=菌落数*稀释倍数*转化反应原液体积/涂菌板体积
思考题:
如何提高转化率?
1)载体DNA及重组DNA2)受体细胞3)转化操作
4)试剂纯度与器皿的洁净度
实验三大肠杆菌质粒DNA的提取
实验目的:
通过本实验学习和掌握碱裂解法提取大肠杆菌质粒DNA。
实验原理:
碱裂解法提取质粒是根据共价闭合环状质粒DNA在拓扑学上的差异来
分离它们,在pH值介于12.0--12.5这个窄小的范围,线性的DNA双
螺旋结构解开而被断裂,尽管在这样的条件下,共价闭环质粒DNA的
氢键会被断裂,但现在两条互补链彼此相互盘绕,仍会紧密的结合在
一起,当加入pH4.8的乙酸甲高盐缓冲液回复pH至中性时,共价闭合
环状的质粒DNA两条互补链仍保持在一起,因此,复兴迅速而准确,
而线性的染色体DNA的两条互补链彼此已完全分开,复性就不会迅速
而准确,它们缠绕成网状结构,通过离心,是染色体DNA与不稳定的
大分子RNA,Pr--SDS复合物等一起沉淀下来被除去。
仪器材料与试剂:
(1):
仪器:
恒温摇床等。
(2):
材料:
葡萄糖,Tris、EDTA、SDS等
(3):
试剂:
1.溶液
:
50mmol/l葡萄糖、25mmol/l三羟基氨基甲烷TrisHCL
10mmol/l乙二胺四乙酸EDTA
(去除细胞壁,保护DNA)
2.溶液
:
0.4mol/lNaOH(10ml)2%SDS(10ml)用前等体积混合
(破坏细胞膜,使DNA变性)
3.溶液
:
5mol/l乙酸甲(60ml)冰乙酸(11.5ml)水(28.5ml)
(使溶液恢复中性,使质粒DNA复性)
4.TE缓冲液(10ml):
10mmol/lTrisHCL1mmol/lEDTAddH2O(灭)
5.70%乙醇,放-20。
C冰箱中用后即放回。
6.胰RNA酶。
7.凝胶加样缓冲液:
40%蔗糖,0.25%溴酚蓝。
8.氯仿/异戊醇按24:
1的体积进行配制。
实验步骤:
1.将2μl含相应抗生素(50μg/ml)的LB培养基加入到试管中,接
入上述含质粒的大肠杆菌,37。
C振荡培养液。
2.取1.5ml培养物倒入微量离心管中4000r/min离心2min。
3.吸取培养液使细胞沉淀,尽可能干燥。
4.细胞沉淀悬浮于100μl溶液
中,充分混匀,室温放置10min。
5.加200μl溶液
盖紧管盖,混匀内容物,将离心管放在冰上5min。
6.加入150μl溶液
(冰上预冷),盖紧管盖,颠倒数次,是指混
匀,冰上放置15min。
7.12000r/min离心5min,将上清液转移至另一离心管中。
8.向上清中加入等体积氯仿/异戊醇。
反复混匀,12000r/min离心
5min,倒去上清液,把离心管倒扣在吸水纸上吸干液体。
9.向上请中加入2倍体积无水乙醇,混匀后,-20。
C放置15--20min,
12000r/min离心5min,倒上清液,把离心管倒放在吸水纸上吸干
液体。
10.用1ml70%乙醇洗涤质粒DNA沉淀振荡并离心倒去上清液,真空抽
干或空气中干燥。
11.加入20μlTE缓冲液,其中含有20μg/ml的胰蛋白酶时DNA完全
溶解-20。
C保存。
操作要点:
1.溶液
必须新鲜配制,最好使用一次,将剩余的液体弃掉。
2.加入溶液
时,要把液体充分混匀,并在冰上孵育足够的时间,
使沉淀完全,如果为充分将细菌裂解物与溶液
混匀,将会影响
质粒DNA纯度。
实验结果:
大肠杆菌质粒DNA提取的质量好坏需通过琼脂糖凝胶电泳进行检测。
思考题:
1.为什么溶液
要现用现配?
放置空气中的二氧化碳进入到氢氧化钠中,使氢氧化钠变性,降低溶液
的PH,增加了破碎细胞膜的难度。
2.为什么加完溶液
要冰上放置?
防止DNA变性。
实验现象:
加溶液
:
沉淀溶解,溶液浑浊
加溶液
:
溶液稍澄清
加溶液
:
白色絮状物生成
加氯仿/异戊醇:
(去除蛋白质)溶液分层
无水乙醇作用:
沉淀DNA.
70%乙醇作用:
洗涤沉淀表面的异戊醇等杂质
实验四PCR基因扩增
实验目的:
通过本次实验学习PCR反应的基本原理与实验技术。
实验原理:
聚合酶链反应(PCR)的原理类似于天然复制过程,在待扩增的DNA
片段两侧和与其两侧互补的两个寡核苷酸引物经变性、退火、延伸、
若干个循环后,DNA扩增2n倍。
1.变性:
加热使模板DNA在高温(94。
C)下变性,双链间的氢键断裂
而形成两条单链,即为变性。
2.退火:
使溶液温度降至50-60。
C,模板DNA引物按碱基互补配对原
则互不结合,即退火阶段。
3.延伸:
溶液反应温度升至42。
C,耐热DNA聚合酶以单链DNA为模
板,在引物的引导下,利用反应混合物中的4种脱氧核苷三磷酸
(dNTP)按5,--3,方向复制出互补的DNA,即引物的延伸阶段。
上诉3步为1个循环,即高温变性,低温退火,中温退火3个阶段,
从理论上讲每经过1个循环,样品中的DNA量应增加1倍,新形成的
链又可称为下一个循环的模板,经过25--30个循环后,DNA可扩增
106--109倍。
典型PCR反应体系由以下部分组成:
DNA模板、反应缓冲液、dNTP、
Mg2+人工合成的DNA引物
、
、耐热Taq聚合酶
实验仪器:
材料与试剂
(一)仪器:
PCR热循环仪。
(二)材料:
DNA模板、4种dNTP、引物
、
、Taq酶、DNA相对分子
量标准物。
(三)10%缓冲液、4种dNTP、Taq酶、DNA模板、
引物
:
5,--ATGGGCGTCTCTGCTGTT--3,
引物
:
5,--GCTAAGCAAAACACTCCGCCC--3,
实验步骤:
1.在0.2mlEppendorf管内配制25μl反应体系
反应物体积/μl
ddH2O17
10*PCR缓冲液2.5
2.5mmol/ldNTP2.2
引物
1.0
引物
1.0
Taq酶0.3
2.按下述程序进行扩增:
94。
C预变性5min
94。
C变性55s
57。
C退火55s
72。
C延伸1min20s
重复
--
30次
72。
C后延伸8min
注意事项:
换柜头、试剂打入液面下、PCR仪的使用。
1.引物的设计原则:
引物的长度为15--30bp引物GC含量:
40%--60%
引物自身不能发生互补引物特异性由3,端决定
(3,端最后的碱基为T5,端决定引物扩增的长度)
2.10*PCR缓冲液中的TrisHCl的作用:
维持溶液的碱性环境。
10*PCR缓冲液中的KCL的作用:
有利于引物的退火,浓度不宜过高,过高会
影响Taq酶的活性。
10*PCR缓冲液中的Mg2+的作用:
Taq的辅酶,浓度过高会影响PCR反应的特异
性,浓度过低会影响Taq的活性,使反应量减小。
3.dNTP中4种脱氧核苷酸要等浓度。
4.模板的种类:
基因组DNA、质粒DNA、RNA反转录的cDNA。
5.PCR的反应体系:
25μl、50μl、100μl。
6.酶单位:
5个单位/μl。
7.预变性的作用:
使双链充分打开。
8.后延伸的作用:
确保DNA链完全延伸。
实验五琼脂糖凝胶电泳检测
实验目的:
通过本次实验学习琼脂糖凝胶电泳检测DNA的方法和技术。
实验原理:
DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应,DNA分子
在高于等电点的PH溶液中带负电荷,在电场中向正极移动,由于
糖--磷酸骨架在结构上的重复性质相同数量的双链DNA几乎具有等
量的净电荷,因此它们能以同样的速度向正极方向移动,在一定的
电场强度下,DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应,即DNA分子本
身的大小和构型具有不同的相对分子质量的DNA片段泳动速度不同,
可进行分离DNA分子的迁移速度与相对分子质量的对数值成反比关
系,凝胶电泳不仅可分离不同相对分子质量的DNA,也可以分离相对
分子质量相同,但构型不同的DNA分子。
仪器:
材料与试剂
(一)仪器:
琼脂糖电泳系统、紫外线投射仪
(二)材料:
Tris、硼酸、EDTA、核酸染料、上样缓冲液
(三)10*TBE10*TBETris:
108gEDTA:
7.44g硼酸:
55g。
实验步骤:
(一)制胶:
称取0.8g琼脂糖放入三角瓶中,加入80ml0.5*TBE缓冲
液置于电炉上加热,至完全融化,待60。
C加入核酸染料混匀。
(二)胶板制备:
1.将制胶器放入制胶槽中,并放好样品梳子。
2.将冷却至60。
C的琼脂糖凝胶液缓缓倒入大板中,直至形成一层均
匀的胶面(不要形成气泡)。
3.待胶凝后,取出梳子,将大阪放在电
泳槽内。
4.加入缓冲液至电泳槽中。
(三)加样:
用移液枪将2μl上样缓冲液和10μlPCR产物质粒混匀,
加入加样孔。
(四)电泳:
1.接通电泳槽与电泳仪的电源,DNA的迁移速度与电压
成正比,最高电压不超过5V/cm。
2.当溴酚蓝染料移动到距凝胶前
沿1--2cm处停止电泳。
(五)观察:
将凝胶取出,放入紫外线投射仪中,观察条带。
1.核酸染料是溴化乙锭的代替物,其作用是改变碱基间的距离。
2.加核酸染料的凝胶在紫外下为荧光绿色。
3.DNA在凝胶过程中有3中形式:
超螺旋结构、开环结构、线性结构
凝胶后3中结构距胶口由近及远的顺序分别是:
开环结构、线性结构、超螺旋
结构。
4.上样缓冲液中40%蔗糖的作用:
沉淀DNA,使要上的样更好地进入点样口。
5.上样缓冲液中25%溴酚蓝的作用:
指示剂。
6.上样缓冲液:
上的样品=1:
5
7.电泳的电压要求:
<5V/cm。
实验六质粒载体的限制酶消化及电泳检测
实验目的:
学习质粒载体的限制酶切及电泳检测的方法。
实验原理:
酶切包括单酶切和双酶切,单酶切操作比较简单,只需要将限制酶最
适的缓冲液、目的DNA和相应限制酶混合,用灭菌的ddH2O补足体
积,在37。
C孵育1--3h即可,但是对于双酶切特别是两种酶所用的
缓冲液成分不同(主要是盐离子浓度不同)或反应温度不一致,采用
以下措施解决:
1)先用一种酶切,然后乙醇沉淀回收DNA分子后再用另一种酶切。
2)先进行低盐要求的酶切热失活酶后添加盐离子浓度到高盐的酶反应
要求,加入第二种酶进行酶切。
3)使用通用缓冲液进行双酶切。
实验材料:
1.材料:
质粒DNA:
pUC19
2.试剂:
限制酶、ddH2O、10*HBuffer、DNAMarker、10*Loading
Buffer、核酸染料
3.仪器:
微量移液枪、离心机、恒温孵育器、电泳仪、紫外投射观
测仪。
实验步骤:
1.在一灭菌的1.5ml离心管中依次加入质粒DNA2μl(约2μg)
ddH2O15μl,10*缓冲液2μl,限制酶至总体积20μl。
2.混匀,稍离心。
3.37。
C孵育1--3h。
4.70。
C孵育10min终止酶切反应。
5.电泳,检测酶切效果。
思考题:
1.假设一种限制酶在重组质粒上有两个酶切位点,酶切后的电泳显示
有3条带,分析可能的原因,并采取何种措施解决?
1)酶反应浓度较低,不足以切开两个酶切位点,仅切开一个酶切位点
或为切开,所以出现3条带。
2)酶反应时间不够,不完全。
解决措施:
增大酶的浓度,延长酶反应时间。
2.影响酶切反应的因素?
酶的影响、pH值的影响、温度的影响、DNA样品纯度及用量
选择填空:
1.基于构造的分离质粒DNA的制备方法:
1)碱变性法2)溴乙锭--氯化铯密度梯度离心3)质粒扩增。
2.E.coil质粒DNA提取时用的溶液
的组成:
1)mol/l乙酸甲(60ml)2)冰乙酸(11.5ml)3)水(28.5ml)其中乙酸甲的作用是:
恢复pH至中性,使DNA复性。
3.TE缓冲液的作用是:
回溶DNA并长期保存。
TE缓冲液成分:
1)10mmol/lTris.HCL:
10ml。
2)1mmol/lEDTA:
2μl
3)DD水:
988μl。
4.胰RNA酶的作用:
提纯质粒,除去离心后上清液的RNA。
5.苯酚:
氯仿:
异戊醇=25:
24:
1。
其中苯酚和氯仿的作用是:
使蛋白质变性,除去离心后上清液中多余的蛋白质和胰RNA酶。
异戊醇的作用是:
使溶液分三层,防止液相交界面的杂质,易于后期分离。
6.10*LoadingBuffer(加样缓冲液)的成分:
蔗糖、溴酚蓝
10*LoadingBuffer的作用:
1)前沿指示剂2)增加比重,浓缩DNA,使点样后的DNA能够沉于电极缓冲液液面下。
7.10*HBurffer(酶缓冲液)的成分有:
1)Tris。
HCL:
PH7.42)Nacl3)Mg2+
4)DTT(二硫苏糖醇):
其中二硫苏糖醇的作用是:
还原剂,保持酶活性。
8.酶切反应的终止方式有:
1)70。
C孵育10--15min2)加入EDTA
3)加入苯酚。
9.根据10*HBurffer(酶缓冲液)中NaCl的浓度可以将酶分为
1)低盐酶(0--50mmol/l)2)中盐酶(50--100mmol/l)3)高盐酶(100--150mmol/l)
10.酶的星号活性:
在不是酶的最适条件下进行酶切,可能会导致酶的特异性降低,以至于一种酶可识别和切割更多的位点。
以大肠杆菌EcoR
为例:
正常的识别是5,--GAATTC--3,星号活性下EcoR
的识别位点是:
5,--NAATTN--3,。
11.回文结构:
是指从DNA双链来说,在各自的方向上的阅读结果都相同。
限制性核酸内酶切识别4--8个核酸回文结构。
12.PCR反应变性、退火、延伸各段所持续的时间主要是由DNA的长度来决定的。
引物的设计是PCR反应的关键步骤。
13.PCR反应引物是指位于待扩增的DNA两端互补的寡核苷酸序列。
PCR反应模板是待增的序列,可以是质粒DNA,基因组DNA、cDNA。
14.大肠杆菌质粒DNA提取时用的溶液
加入时,要把液体充分混合并置于冰上孵育足够的时间,使沉淀完全,如果为充分将细菌裂解物与溶液
混匀,将会影响质粒DNA的纯度。
15.DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应。
在一定的电场强度下,DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应。
DNA分子的迁移速度与相对分子量的对数值成反比关系。
凝胶电泳可以分离不同分子质量的DNA,相对分子质量相同但构型不同的DNA分子。
16.琼脂糖凝胶范围100bp--60kb。
EB是橘红色光、Gelview是绿色光。
17.大肠杆菌感受态细胞的制备始终要置于0。
C下操作,从--80。
C中取出来的大肠杆菌要置于冰盒中0。
C降温,不要放置室温降温。
18.质粒DNA转化大肠杆菌的试验中有受体菌对照(阴性对照)和质粒对照(阳性对照)两个对照试验,其中受体菌对照实验是验证菌体本身是否为
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