糖的呈色反应和还原糖的鉴定实验报告Word文档下载推荐.docx
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后者与间苯二酚结合生成鲜红色的化合物,反应迅速,仅需20—30s。
在同样条件下,醛糖形成羟甲基糠醛较慢。
只有糖浓度较高时或需要较长时间的煮沸,才给出微弱的阳性反应。
蔗糖被盐酸水解生成的果糖也能给出阳性反应。
4(Bial反应(甲基间苯二酚反应)
戊糖与浓盐酸加热形成糠醛,在有Fe3+存在下,它与甲基间苯二酚(地衣酚)缩合,形成深蓝色的沉淀物。
此沉淀物溶于正丁醇。
己糖也能发生反应,但产生灰绿色甚至棕色的沉淀物。
(二)还原糖的鉴定
含有自由醛基(一CHO)或酮基(C==O)的单糖和二糖为还原糖。
在碱性溶液中,
还原糖能将金属离子(铜、铋、汞、银等)还原,糖本身被氧化成
酸类化合物,此性质
常用于检验糖的还原性,并且常成为测定还原糖含量的各种方法的依据。
1(Fehling反应
费林试剂是含有硫酸铜与酒石酸钾钠的氢氧化钠溶液。
硫酸铜与碱溶液混合加热,则生成黑色的氧化铜沉淀。
若同时有还原糖存在,则产生黄色或砖红色的氧化亚铜沉淀。
上述反应可用下列方程式表示:
在碱性条件下,糖不仅发生烯醇化、异构化等作用。
也能发生糖分子的分解、氧化、还原或多聚作用等。
由这些作用所形成的复杂混合物具有强烈的还原作用,因此企图用简单的氧化还原作用来写出反应平衡式是不可能的。
为了防止铜离子和碱反应生成氢氧化铜或碱性碳酸铜沉淀,Fehling试剂中加入酒石酸钾钠,它与Cu2+形成的酒石酸钾钠络合铜离子是可溶性的络离子,该反应是可逆的。
平衡后溶液内保持一定浓度的氢氧化铜。
费林试剂是一种弱的氧化剂,它不与酮和芳香醛发生反应。
2.Benedict反应
Benedict试剂是Fehling试剂的改良。
它利用柠檬酸作为Cu2+的络合剂,其碱性比Fehling试剂弱,灵敏度高,干扰因素少,因而在实际应用中有更多的优点。
3(Barfoed反应
该反应的特点是在酸性条件下进行还原作用。
在酸性溶液中,单糖和还原二糖的还原
速度有明显差异。
单糖在3min内就能还原Cu而还原二糖则需20min。
所以,该反应可用于区别单糖和还原二糖。
当加热时间过长,非还原性二糖被水解也能呈现阳性反应,如蔗糖在10min内水解而发生反应。
还原二糖浓度过高时,也会很快呈现阳性反应,若样品中含有少量氯化钠也会干扰此反应。
2+
三、实验试剂和材料仪器
1.测试糖液
2,阿拉伯糖,葡萄糖,果糖,麦芽糖,蔗糖,1,淀粉溶液和2种未知糖液。
2.试剂
?
Molish氏试剂
称取α,萘酚2克,溶于95,乙醇中并定容到100ml。
注意临用前,新鲜配制,贮于棕色瓶中。
蒽酮(Anthrone)试剂
溶解0.2g蒽酮于100mL浓硫酸(A.R(,比重1.84,含量95%)中。
当日配制、使用。
Fehling氏试剂
试剂A:
将34.5g硫酸铜(CuSO4?
5H20)溶于500mI。
蒸馏水中。
试剂B:
将125g氢氧化钠和137g酒石酸钾钠溶于500mL蒸馏水中,储于带橡皮塞瓶中。
临用时,将试剂A和B等量混合。
Benedict氏试剂
溶解85g柠檬酸钠(Na3C6HO,?
llH20)及50g无水碳酸钠于400mI。
水中;
另溶8.5g硫酸铜于50mL。
热水中。
将硫酸铜溶液缓缓倾人柠檬酸钠一碳酸钠溶液中,边加边搅,如有沉淀,可过滤(本试剂可长期使用。
如放置过久,出现沉淀(可取用其上清液。
Bial氏试剂
溶解1.5g地衣酚(orcin01)于500mL,浓盐酸并加20—30滴10,三氯化铁溶液。
?
Seliwanoff氏试剂
溶解50mg问苯二酚(resorcin01)于100rnl(,盐酸(盐酸:
水=1:
2V,V)中。
临用前配制。
盐酸浓度不宜超过12,,否则,它将导致糖形成糠醛或其衍生物。
浓硫酸。
3.器材
试管,试管架,煤气灯和沸水浴等。
四、实验方法
(一).糖的呈色反应
1(Molish反应
取8支已标号的试管,分别加入各种测试糖液lmL(约15滴),再各加入Molish试剂2滴,摇匀。
逐一将试管倾斜,分别沿管壁慢慢加入浓硫酸lmL,然后,小心竖直试管,使糖液和硫酸清楚地分为两层,观察交界处颜色变化。
如几分钟内无呈色反应,可在热水浴中温热几分钟。
记录各管出现的颜色,说明原因,检定
未知糖液。
取8支标号的试管,分别加入lmL蒽酮溶液,再将测试糖液分别滴加到各试管内,混匀,观察颜色变化,鉴定未知糖液。
3(Seliwanoff反应
取试管8支,编号,各加人Seliwanoff试剂ImL。
再依次分别加入测试糖液各4滴,混匀,同时放人沸水浴中,比较各管颜色变化及出现颜色的先后顺序,分析说明原因。
注意蔗糖的反应。
4.bial反应
将2滴测试糖液加到装有1mlBial试剂的试管中,沸水浴中加热,观察颜色变化.
如遇到未知糖呈色不明显,可以3倍体积水稀释,并加入1ml戊醇,摇动,醇液呈蓝色,即为阳性反应。
取8支试管,各加Fehling试剂A和B各lmL。
摇匀后,分别加人测试糖液各4滴,沸水浴煮2—3min,取出冷却,观察沉淀和颜色的变化。
于8支试管中先各加入Benedict试剂2ml,再分别加入测试糖各4滴,沸水浴中煮2-3min,冷却后,观察颜色变化.
3.barfoed反应
分别加入测试糖液2-3滴到含有1mlBarfoed试剂的试管中,煮沸约3min,放置20min以上,比较各管颜色变化及红色出现的先后顺序.
五、注意事项
1.Molisch反应非常灵敏,0(001,葡萄糖和0(0001,蔗糖即能呈现阳性反应。
因此,不可使碎纸屑或滤纸毛混入样品中。
过浓的果糖溶液,由于硫酸对它的焦化作用,将呈现红色及褐色而不呈紫色。
需稀释糖溶液后重做。
2.果糖在Seliwanoff。
试剂中反应十分迅速,呈鲜红色,而葡萄糖所需时间长,且只能产生黄色至淡红色。
戊糖亦与Seliwanoff试剂反应,戊糖经酸脱水生成糠醛,与间苯二酚缩合。
生成绿色到蓝色产物。
3.酮基本身并没有还原性,只有在变为烯醇式后,才显示还原作用。
4.糖的还原作用生成氧化亚铜沉淀的颜色决定于颗粒的大小,Cu2O颗粒的大小又决定于反应速度。
反应速度快时,生成的Cu2O颗粒较小,呈黄绿色;
反应慢时,生成的Cu2O颗粒较大,呈红色。
有保护胶体存在时,常生成黄色沉淀。
实际生成的沉淀含有大小不同的Cu2O颗粒,因而每次观察到颜色可能略有不同。
溶液中还原糖的浓度可以从生成沉淀的多少来估计,而不能依据沉淀的颜色来区别。
5.Barfoed反应产生的Cu2O沉淀聚集在试管底部,溶液仍为深
蓝色。
应注意观察试管底部红色的出现,它与一般还原性实验不相同,观察不到反应液由蓝色变绿变黄或变红的过程。
六、思考题
篇二:
1糖的呈色反应和还原糖的检验(讲稿)
糖的呈色反应和还原糖的检验(讲稿)
本次实验目的是了解鉴定糖和还原糖的原理以及方法,并通过实验操作予以验证。
2人一组,前1-18组1个实验室。
二、实验原理。
糖的鉴定:
与一元酚如α-萘酚(转载于:
wWW.xIElw.COM写论文网:
糖的呈色反应和还原糖的鉴定实验报告)作用,形成三芳香环甲基有色物质。
与多元酚如间苯二酚作用,则形成氧杂蒽有色物质。
常用的酚类为α-萘酚、甲基苯二酚、间苯二酚和间苯三酚等,有时也用芳香胺、胆酸、某些吲哚衍生物和一些嘧啶类化合物等。
还原糖和非还原糖的鉴别:
含有自由醛基(-CHO)或酮基(C=O)的单糖和二糖为还原糖。
在碱性溶液中,还原糖能将金属离子(铜、铋、汞、银等)还原,糖本身被氧化成酸类化合物,此性质常用于检验糖的还原性,并且常成为测定还原糖含量的各种方法的依据。
三、实验内容
本次实验一共采用了6种糖液作为测试糖液,2,葡萄糖,果糖,麦芽糖,蔗糖,1,淀粉溶液和1种未知糖液,每种糖液均有专门的移液管移取(贴有标签,有些实验可能只需加几滴,可以在移液管头部套上胶头滴加),不要弄混,所有试剂都有相应的移液管移取(大概4个组公用1套),用后请放回原位,方便别的同学使用。
实验包括2个部分,共7个实验。
1(Molish反应(α-萘酚反应)
糖在浓酸作用下形成的糠醛及其衍生物与α-萘酚作用,形成红紫色复合物。
在糖溶液与浓硫酸两液面间出现紫环,因此又称紫环反应。
步骤:
取6支已标号的试管,分别加入各种测试糖液lmL(约15滴),再各加入Molish试剂2滴,摇匀。
记录各管出现的颜色,说明原因,检定未知糖液。
该实验希望大家注意:
1、按书上步骤操作,尽量不要让糖液和浓硫酸混合,以方便观察出现的紫环。
2、该实验阳性只能说明有糖的存在。
3、Molisch反应非常灵敏,0(001,葡萄糖和0(0001,蔗糖即能呈现阳性反应。
因
此,不可使碎纸屑或滤纸毛混入样品中。
糖经浓酸水解,脱水生成的糠醛及其衍生物与蒽酮(10-酮-9,10-二氢蒽)反应生成蓝-绿色复合物。
取6支标号的试管,分别加入lmL蒽酮溶液,再将测试糖液分别滴加到各试管内,混匀,观察颜色变化,鉴定未知糖液。
注意:
加入糖液的量会影响颜色的变化,本次实验加入量不要太多,几滴即可,(太多形成的颜色不再是蓝绿色)
后者与间苯二酚结合生成鲜红色的化合物,反应迅速,仅需20-30s。
取试管6支,编号,各加人Seliwanoff试剂ImL。
注意:
1、该反应注意观察颜色出现(反应)的先后顺序,并记录下来。
可将出现颜色的试管及时取出,避免干扰。
2、这是鉴别醛糖和酮糖的反应,注意蔗糖比较特殊,为什么,
将2滴测试糖液加到装有1mlBial试剂的试管中,沸水浴中加热,观察颜色变化。
如遇到未知糖呈色不明显,可以3倍体积水稀释,并加入1ml戊醇,摇动,醇液呈蓝色,即为阳性反应。
本次实验提供的已知糖液全为己糖
(课堂上讲的那些糖属于还原糖,)
也能发生糖分子的分解、氧化、还
原或多聚作用等。
于8支试管中先各加入Benedict试剂2ml,再分别加入测试糖各4滴,沸水浴中煮2-3min,冷却后,观察颜色变化。
在酸性溶液中,单糖和还原二糖的还原速度有明显差异。
单糖在3min内就能还原
Cu2+而还原二糖则需20min。
还原二
糖浓度过高时,也会很快呈现阳性反应,若样品中含有少量氯化钠也会干扰此反应。
步骤:
分别加入测试糖液2-3滴到含有1mlBarfoed试剂的试管中,煮沸约3min,放置20min以上,比较各管颜色变化及红色出现的先后顺序。
1、本实验需要比较红色出现的先后顺序,因此在20分钟的放置过程中,需不时拿起试管观察底部。
2、理论上是出现Cu2O红色沉淀,但试剂反应时若反应速度快则生成的Cu2O颗粒较小,呈黄绿色;
三、实验试剂的配制
以上实验中,有4种试剂需要在临用前配制:
溶解50mg间苯二酚(resorcin01)于100rnl,盐酸(盐酸:
以上3种以实验室为单位配置。
Barfoed试剂
溶解33.3g中性结晶的乙酸铜与约400ml蒸馏水中,加3ml冰乙酸,以蒸馏水定容至500ml,临用时配制。
以上2个班共配置1份。
另外,Fehling试剂已经配好A液和B液,临用时,将试剂A和B等量混合。
四、其他注意事项
1、注意水浴加热时烧杯里面水不要太满;
烧杯底部外壁不要沾上水,否则容易被烧裂。
2、实验过程中使用移液管移取试剂后及时用水清洗,切忌乱甩。
3、取用硫酸时可以使用镊子开内盖。
4、不要乱动实验室其他仪器。
5、实验完成后等待老师检查签字,经允许后方可离开。
6、值日安排。
五、实验报告要求以及思考题
1、判断实验结果,推测未知糖液。
2、应用Molish反应和Seliwanoff反应分析未知样品时应注意那些问题,
3、运用本实验的方法,设计一个鉴定未知糖的方案。
篇三:
DNS比色法测定还原糖及总糖实验报告
DNS比色法测还原糖标准曲线绘制及测定Tr21培养液中初
始和最终还原糖及总糖含量实验报告
1.研究背景
木霉菌在发酵过程中,利用碳源导致发酵液中糖含量的变化,其中还原糖是一个主要的反映参数。
还原糖与3,5-二硝基水杨酸(DNS)在碱性条件下生成棕红色物质(3-氨基-5-硝基水杨酸),在一定范围内,棕红色物质颜色深浅的程度与还原糖的含量呈一定的比例关系。
糖含量的不同变化一定程度上体现着Tr21不同的生长阶段,从而为控制及优化发酵过程提供科学依据。
2.实验目的3,5-二硝基水杨酸比色法测定Tr21发酵液中还原糖含量,利用糖含量这个参数,控制发酵过程。
3.实验原理
在NaOH和丙三醇存在下,3,5,二硝基水杨酸(DNS)与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。
在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色,在540nm波长处有最大吸收,在一定的浓度范围内,还原糖的量与光吸收值呈线性关系,利用比色法可测定样品中的含糖量。
黄色桔红色
4.实验材料发酵液(5天):
Tr121(A2)
实验材料:
3,5-二硝基水杨酸,氢氧化钠,苯酚,亚硫酸钠,酒石酸钾钠,葡萄糖,蒸馏水
实验器材:
可见分光光度计,电子天平,真空干燥箱,数显恒温水浴锅,离心机,移液器,枪头,500ML容量瓶,试管,500ml烧杯,1000ml量筒
5.实验方法5.1试剂配制
(1)1mg/ml葡萄糖标准溶液:
准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg,加少量蒸馏水溶解后,以蒸馏水定容至100ml,即含葡萄糖为1.0mg/ml。
(2)3,5—二硝基水杨酸试剂:
称取6.3g3,5—二硝基水杨酸并量取262ml2mol/LNaOH加到酒石酸钾纳的热溶液中(182g酒石酸钾纳溶于500ml水中),再加5g结晶酚和5g亚硫酸氢钠溶于其中,搅拌溶解,冷却后定容到1000ml贮于棕
色瓶中。
(3)碘,碘化钾溶液:
称取5g碘,10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。
(4)6NNaOH:
称取120gNaOH溶于500ml蒸馏水中。
(5)0.1%酚酞指示剂。
(6)6mol/LHCl溶液
5.2、葡萄糖标准曲线制作
取8支15mm×
180mm试管,按下表加入1.0mg/ml葡萄糖标准液和蒸馏水。
管号
试剂葡萄糖标准液(ml)蒸馏水(ml)水杨酸溶液(ml)葡萄糖含量(mg)
将各管溶液混合均匀,在沸水中加热5min,取出后立即用冷水冷却
到室温,再向每管加入21.5ml蒸馏水,摇匀。
λ=540nm处测定吸光度
以葡萄糖含量(mg)为横坐标,光吸收值为纵坐标,绘制标准曲线,如图一:
5.3.1培养液中初始总糖与还原糖的测定
准确量取5ml培养液,定容至50ml,作为还原糖测定样品液。
准确量取1ml发酵液并加蒸馏水定容至10ml放在锥形瓶中,加入6mol/LHCl10ml,在沸水浴中加热0.5h,取出1,2滴置于白瓷板上,加1滴I-KI溶液检查水解是否完全。
如已水解完全,则不呈现蓝色。
水解毕,冷却至室温后加入1滴酚酞指示剂,以6NNaOH溶液中和至溶液呈微红色,并定容到50ml,用于
0.0770.20.3190.4240.5430.6550.7610.8560
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
1.2
1.4
1.6
1.5
2.0
1.8
1
2
3
4
5
6
7
8
总糖测定。
试剂样品溶液(ml)蒸馏水(ml)水杨酸(ml)
空白02.01.50
还原糖1.01.01.50
总糖1.01.01.50
将各管溶液混合均匀,在沸水中加热5min,取出后立即用冷水
冷却到室温,再
向每管加入21.5ml蒸馏水,摇匀。
样品溶液中还原糖和总糖
0.311
0.228
00.5940.44
5.3.2发酵液中最终总糖与还原糖的测定
发酵液2500rpm离心20min,取5ml,作为还原糖测定样品液。
准确量取5ml发酵液悬液放在锥形瓶中,加入6mol/LHCl5ml,在沸水浴中加热0.5h,取出1,2滴置于白瓷板上,加1滴I-KI溶液检查水解是否完全。
水解毕,冷却至室温后加入1滴酚酞指示剂,以6NNaOH溶液中和至溶液呈微红色,并定容到50ml,用于总糖测定。
将各管溶液混合均匀,在沸水中加热5min,取出后立即用冷水冷却到室温,再
0.15
0.014
00.2990.05
测定后,取样品的光吸收值在标准曲线上查出相应的糖量。
6.结果处理
按下式计算出样品中还原糖和总糖的浓度:
还原糖浓度(g/ml)=m/V*稀释倍数/1000总糖浓度(g/ml)=m/V*稀释倍数*0.9/1000
式中:
m?
反应液中还原糖或总糖的质量:
mg;
V?
反应液的体积:
ml;
1000?
mg换算成g的系数。
得:
初始培养液中:
还原糖浓度(g/ml)=0.594/1*10/1000
=5.94/1000
总糖浓度(g/ml)=0.44/1*50*0.9/1000=19.8/1000最终培养液中:
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- 反应 还原 鉴定 实验 报告