复方参鹿颗粒治疗肾阳虚型再生障碍性贫血疗效观察及对CD4 T细胞亚群的影响.docx
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复方参鹿颗粒治疗肾阳虚型再生障碍性贫血疗效观察及对CD4T细胞亚群的影响
复方参鹿颗粒治疗肾阳虚型再生障碍性贫血疗效观察及对CD4+T细胞亚群的影响
摘要:
目的观察复方参鹿颗粒联合西药治疗肾阳虚型再生障碍性贫血(AA)临床疗效及对CD4+T细胞亚群的影响,探讨其作用机制。
方法将40例AA患者随机分为治疗组和对照组各20例。
治疗组予复方参鹿颗粒联合西药治疗,对照组单用西药治疗。
疗程均为6个月,随访1年以上。
观察2组临床疗效及治疗前后外周血CD4+T细胞亚群变化。
结果治疗组临床疗效优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。
治疗后2组血细胞计数均较治疗前改善,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。
治疗组治疗后红细胞计数、血红蛋白含量均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。
与治疗前比较,治疗组治疗后CD4+CD25+细胞/CD4+细胞、CD4+CD25+FoxP3+细胞/CD4+CD25+细胞比例升高,Th1、Th2细胞比例降低,差异有统计学意义(P<0.05);对照组治疗后仅Th2细胞比例降低,差异有统计学意义(P<0.05)。
结论复方参鹿颗粒可提高肾阳虚型AA治疗效果,其机制可能与减少Th1细胞数量、增加CD4+CD25+调节性T细胞数量、提高其FoxP3的表达有关。
关键词:
复方参鹿颗粒;再生障碍性贫血;CD4+T细胞亚群
中图分类号:
R259.565文献标识码:
A文章编号:
1005-5304(2016)05-0020-04
EfficacyObservationofFufangShenluGranuleforKidney-yangDeficiencyAplasticAnemiaandItsEffectsonCD4+TLymphocyteSubsetsZHAOLin,QIUZhong-chuan,CHENPei,HUANGZhong-di,HUXiao-ying,ZHUXiao-qin,QUWei-ying(ShuguangHospitalAffiliatedtoShanghaiUniversityofTCM,Shanghai200021,China)
Abstract:
ObjectiveToobservetheclinicalefficacyofFufangShenluGranuleforkidney-yangdeficiencyaplasticanemia(AA)anditseffectsonCD4+Tlymphocytesubsets,andexploreitsmechanism.MethodsFortyAApatientswererandomlydividedintotreatmentgroupandcontrolgroup,20casesineachgroup.ThetreatmentgroupwastreatedwithFufangShenluGranulecombinedwithconventionalwesternmedicinetherapy,whilethecontrolgroupwasonlytreatedwithconventionalwesternmedicinetherapy.Thetreatmentlastedfor6months,andfollow-upvisitslastedforatleastoneyear.TheclinicalefficacyandTlymphocytesubsetsratiochangesbeforeandaftertreatmentinthetwogroupswereobserved.ResultsTheclinicalefficacyoftreatmentgroupwasbetterthanthatofcontrolgroup(P Keywords:
FufangShenluGranule;aplasticanemia;CD4+Tlymphocytessubsets
再生障碍性贫血(aplasticanemia,AA)是免疫介导的以全血细胞减少为主要临床表现的骨髓衰竭性疾病。
既往研究认为,CD8+T细胞介导的造血干细胞免疫损伤是AA发生的病理基础[1]。
近年来研究发现,CD4+T细胞亚群在AA发病中发挥更重要的作用[2-3]。
AA为临床常见的难治性血液系统疾病,中西医结合治疗该病的效果已得到认可。
复方参鹿颗粒为本院院内制剂,该方重用温肾益髓药物,临床用于AA治疗20余年。
本研究采用随机对照试验,进一步验证复方参鹿颗粒联合西药治疗AA疗效的可靠性,观察其对CD4+T细胞亚群的影响,探讨作用机制。
1资料与方法
1.1一般资料
经本院医学伦理委员会批准,选择2012年5月-2014年12月在本院血液科就诊的AA患者40例。
采用随机数字表将入组患者分为治疗组和对照组各20例。
治疗组男10例,女10例;年龄18~70岁,平均(47.25±12.80)岁;病程最短3个月,最长30年,平均(1.82±1.25)年;初治17例,复治3例;重型AA7例,轻型AA13例。
对照组男11例,女9例;年龄20~70岁,平均(43.50±19.32)岁;病程最短2个月,最长28年,平均(1.95±1.78)年;初治15例,复治5例;重型AA8例,轻型AA12例。
2组患者性别、年龄、病程、血象、骨髓象方面比较差异均无统计学意义(P>0.05),具有可比性。
1.2诊断与纳入标准
符合《血液病诊断及疗效标准》AA诊断标准[4]和《中药新药临床研究指导原则(试行)》AA肾阳虚证诊断标准[5],并签署知情同意书。
1.3排除标准
①有明显兼夹证或合并证者。
②年龄在18岁以下或70岁以上,妊娠期或哺乳期妇女,过敏体质及对本药过敏者。
③合并严重心、脑、肝、肾疾病及精神病患者。
④未按规定用药,无法判断疗效,或资料不全等影响疗效或安全性判断者。
⑤参加其他临床研究者。
1.4治疗方法
2组均予司坦唑醇片(广西南宁百会药业集团有限公司,批号1201015),6~8mg/d,分2~3次口服。
重型AA者加用环孢霉素A(杭州中美华东制药有限公司,批号120932),3~6mg/(kg?
d),分早晚2次口服,血药浓度维持在100~300ng/L。
治疗组同时予复方参鹿颗粒(本院院内制剂,沪药制字Z06100005,由本院药剂科制备,批号20120302),每次12g,每日3次,开水冲服。
2组疗程均为6个月。
随访1年以上。
2组均予支持治疗:
如血红蛋白<60g/L,予红细胞悬液输注;如血小板计数<5.0×109/L(无出血危险因子)或<20.0×109/L(有明显出血倾向或存在出血危险因子),予血小板悬液输注及对症止血治疗;如合并感染,根据感染部位及严重程度及时给予有效抗感染治疗。
1.5观察指标
1.5.1外周血细胞计数每2周用COULTERLH750全自动血细胞分析仪检测1次。
1.5.2CD4+T细胞亚群比例分别于治疗前后采用BDFACScantoII流式细胞仪检测CD4+T细胞亚群1次。
所用单克隆抗体CD3-PerCp、CD4-FITC、CD25-APC、FoxP3-PE、IL-17-PE、IFN-γ-PE、IL-4-PE及其同型阴性对照抗体均购自BDpharmingen公司,破膜/固定剂购自eBioscience公司,佛波酯和离子霉素购自Sigma公司。
用CellQuest软件分析数据。
1.6疗效标准
根据《血液病诊断及疗效标准》[4]判断临床疗效。
基本治愈:
贫血和出血症状消失,血红蛋白男性达120g/L、女性达110g/L,白细胞达4×109/L,血小板达100×109/L,随访1年以上未复发。
缓解:
贫血和出血症状消失,血红蛋白男性达120g/L、女性达100g/L,白细胞达3.5×109/L左右,血小板有一定程度增加,随访3个月病情稳定或继续进步。
明显进步:
贫血和出血症状明显好转,不输血,血红蛋白较治疗前1个月内常见值增长30g/L以上,并能维持3个月。
判定以上3项疗效者均应3个月内不输血。
无效:
经充分治疗后,症状、血象未达明显进步。
1.7统计学方法
采用SPSS19.0统计软件进行分析。
正态分布的计量资料用―x±s表示,计数资料用频数表示。
计量资料满足正态分布且方差齐性,组间比较采用成组t检验,同组治疗前后比较采用配对t检验。
若资料呈偏态分布,进行相应的变量变换后呈正态分布且方差齐性者采用t检验,若变换后仍不服从正态分布或方差仍不齐,采用非参数的秩和检验。
等级资料组间比较采用秩和检验。
P<0.05表示差异有统计学意义。
2结果
2.12组临床疗效比较
治疗组基本治愈3例,缓解7例,明显进步7例,无效3例;对照组基本治愈1例,缓解4例,明显进步8例,无效7例。
治疗组疗效优于对照组,差异有统计学意义(Z=-2.129,P=0.040)。
2.22组治疗前后外周血细胞计数
治疗前2组外周血细胞计数比较差异无统计学意义(P>0.05),治疗后2组血细胞计数均较治疗前改善(P<0.05,P<0.01)。
治疗后治疗组红细胞计数、血红蛋白含量均高于对照组(P<0.05)。
结果见表1。
2.32组治疗前后外周血CD4+T细胞亚群分析
2组分别有16例患者进行了CD4+T细胞亚群检测。
治疗前2组CD4+T细胞亚群比例比较差异无统计学意义(P>0.05)。
治疗组治疗后CD4+CD25+细胞/CD4+细胞、CD4+CD25+FoxP3+细胞/CD4+CD25+细胞比例较治疗前升高,差异有统计学意义(P 治疗组治疗后Th1、Th2细胞比例较治疗前降低,对照组仅Th2细胞比例较治疗前降低,差异有统计学意义(P<0.05),见表3。
3讨论
AA是由于效应T细胞的过度激活导致造血组织衰竭的一种自身免疫性疾病,以贫血、出血和感染为主要临床表现,属于中医“虚劳”“髓劳”等范畴。
以“肾虚为本”论治已得到多数医家的认同。
我们认为,生化之道,阳居主位,“邪之所凑,其气必虚”,肾中阳气亏虚,则卫外不固,营不内守,气不摄血,血不循经,故AA易继发感染和出血;在感染和出血之后,由于火热和亡血耗气伤阴,可见阴血亏虚或阴阳俱虚症状。
“损者益之,劳者温之”(《素问?
至真要大论篇》),“补气在补血之先……而养阳在滋阴之上”(《医宗必读》),对气血阴阳俱损之虚劳AA治宜温阳益气为先。
复方参鹿颗粒重用红参须、鹿角片、附子等药物温阳益气以促进骨髓造血恢复。
阳附于阴,阳生阴长,故以熟地黄、龟甲等滋补肾阴药物同用,既可达到阳得阴助则生化无穷之效,又可去除温阳药物耗伤阴血之弊。
本研究结果显示,对于辨证属肾阳虚型AA,以复方参鹿颗粒联合西药治疗,可有效改善AA患者外周血象,疗效优于单用西药组,尤其是对红细胞、血红蛋白有显著提高作用,其中治疗组治疗后的血红蛋白量接近正常。
免疫机制异常是AA关键的发病机制,而CD4+T细胞是这种免疫反应发生的重要驱动者和参与者。
CD4+T细胞包括IFN-γ?
CproducingCD4+T细胞(Th1细胞)、IL-4?
CproducingCD4+T细胞(Th2细胞)、调节性T细胞(regulatoryTcells,Tregs)、IL-17?
CproducingCD4+T细胞(Th17细胞)等,Th1和Th2、Th17和Tregs在分化及功能上相互拮抗,在自身免疫疾病的发生发展中起着重要的作用[6]。
有研究发现,与正常对照比较,AA患者存在Th1细胞数显著增加,而Th2细胞数无变化,导致Th1细胞反应亢进,造血负调控因子产生增加,骨髓正常造血受抑[7]。
但也有研究发现,AA患者Th1、Th2细胞数量均显著高于正常对照,Th1细胞数量与疾病严重程度不相关,而Th2细胞数量增加仅见于重型、极重型AA[2],可能由于重型AA的Tregs数量显著减少,诱导Th2细胞凋亡功能障碍[8]。
本研究结果显示,治疗组治疗后Th1、Th2细胞比例均降低,可能与本研究纳入了重型AA有关。
虽然Th1/Th2比值同时也呈下降趋势,但差异并无统计学意义。
与健康人群相比,AA患者存在Tregs数量减少,转录因子FoxP3蛋白和mRNA表达水平显著下降,和疾病严重程度相关[9]。
Tregs数量减少、功能障碍,免疫耐受调节功能受抑,导致效应T细胞的异常增殖活化,是AA发生的主要原因之一。
AA残存造血组织中IL-17+T细胞数量增多,而治疗有效者Th17细胞比例及绝对值较治疗前明显减低,并且与Tregs数量存在负相关[10]。
但也有研究发现,AA患者外周血Th17细胞数量及其特异性转录因子RORC的表达并无增加,提示Th17免疫应答在AA发病中的作用可能并不重要[11]。
在本研究中,治疗组经治疗后,CD4+CD25+Tregs比例显著上升,FoxP3表达增加,而Th17细胞数量与治疗前相比并无明显改变,与Tregs数量并不存在负相关。
CD4+T细胞各亚群之间存在复杂的相互作用,其与AA发病的关系仍有许多疑问未阐明。
在本研究中,我们发现,复方参鹿颗粒至少可以降低AA患者Th1细胞比例,改善Th1细胞极化,增加CD4+CD25+Tregs的数量,提高其FoxP3的表达,从而增强Tregs的免疫抑制功能,而对Th17细胞无明确的作用。
但是,复方参鹿颗粒是否对Th1细胞有直接的抑制和逆转作用,亦或通过增强Tregs的免疫抑制功能来改善Th1细胞极化,尚待进一步研究。
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