全自动化学发光免疫分析仪Immulite标准操作规程概要.docx
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全自动化学发光免疫分析仪Immulite标准操作规程概要
IMMULITE®2000
全自动化学发光免疫分析仪
标准操作程序
本文件仅供参考,各实验室需根据各自情况建立自己的操作规程
IMMULITE®2000全自动化学发光免疫分析系统标准操作规程
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[目的]描述IMMULITE®2000全自动化学发光免疫分析系统的使用和维护。
[范围]适用IMMULITE®2000全自动化学发光免疫分析系统的操作。
项目
检测代码
项目
检测代码
雌二醇E2
E2
胰岛素
INS
促卵泡生成激素
FSH
C-肽
CPE
促黄体生成激素
LH
白蛋白
ALB
泌乳素
PRL
促肾上腺皮质激素
ACT
孕酮
PGN
皮质醇
COR
总睾酮
TES
生长激素
GH
人绒毛膜促性腺激素
HCG
胰岛素样生长因子结合蛋白-3
BP3
游离Beta-人绒毛膜促性腺激素
FBC
胰岛素样生长因子1
IG1
人绒毛膜促性腺激素-快速法
RHC
促红细胞生成激素
EPO
硫酸去氢表雄酮
DHS
铁蛋白
FER
性激素结合球蛋
SBG
叶酸
FOL
雄烯二酮
AND
白介素-6
I6
非结合雌三醇
FE3
全段甲状旁腺激素
iPT
总三碘甲状腺原氨酸
T3
降钙素
CAL
总甲状腺素
T4
地高辛
DGX
游离三碘甲状腺原氨酸
T3F
总IgE
TIE
游离甲状腺素
T4F
β-2微球蛋白
BMG
第三代促甲状腺素
TSH
甲状腺结合球蛋白
TBG
甲状腺球蛋白
TG
抗甲状腺球蛋白抗体
ATG
抗甲状腺过氧化物酶抗体
ATA
甲胎蛋白
AF
前列腺酸性磷酸酶
PAP
肌酸激酶同工酶
CMB
肌红蛋白
MYO
肌钙蛋白I
TPI
高灵敏度C-反应蛋白
HSC
同型半胱氨酸
HCY
[仪器工作原理和检测过程]
1IMMULITE2000使用包被特定抗体的聚苯乙烯珠子作为固相,包被珠放在一个特定的反应杯中,从而进行温育,清洗以及信号发生。
2.样本与结合了碱性磷酸酶的试剂温育反应结合之后,通过高速离心将剩余试剂甩到与反应杯同轴的废液管路中。
系统在几秒钟内完成四次离心清洗,以便与系统的其他同步。
去除未包被试剂的包被珠仍然保留在反应杯中。
3.包被珠上的结合标记随后同发光底物进行定量发光。
当包被珠上结合的碱性磷酸酶标记同化学发光底物反应时,就产生发光。
发光强度同样本中待测物的含量有关。
仪器通过光电倍增管检测发光强度,随后计算出每个样本的结果。
4.操作者在IMMULITE2000上运行测试时,需要做下列操作:
:
4.1进行每日探针清洗工作。
4.2选择RUNIMMULITE2000按钮。
4.3查系统状态指示,加满或者清空耗材或者废物。
4.4初始化样本和试剂加样器、蒸馏水喷嘴和底物喷嘴。
4.5使用图像扫描器扫描试剂转盘上的过敏原试剂楔。
4.6在样本转盘上装载病人血清、质控、校正液和稀释液。
注意:
运行仪器需要用到的试剂都在IMMULITE2000试剂盒中。
只有需要预稀释的测试项目才会有稀释液。
4.7在工作列表列表界面为样本指定测试项目以及编号。
4.8检查试剂以及与之匹配的包被珠是否足够完成所需测试。
4.9选择RUN开始实验。
5.仪器自动检测过程:
在操作者按下RUN按钮之后,Immulite2000自动开始检测并输出检测结
果。
5.1在反应杯中加入一个包被珠。
5.2样本,特定的试剂和水加入到包被珠上。
5.3反应杯运到温育圈,在37°C(98.6°F)的环境中震荡温育。
5.4清洗测试杯。
5.5加入底物,发光。
5.6光电倍增管(PMT)检测光子强度,计算结果并打印。
[免疫分析原理]
1.双抗体夹心法:
双抗体夹心法使用ALP标记的抗体在检测单位中进行反应。
1.1标记的抗体的液相试剂加到检测单位中,标记有ALP的特异性抗体(Ab※ALP)与样品中的相应抗
原反应。
1.2充分反应后形成抗体捕获-抗原-抗体ALP的复合物。
1.3通过高速离心将游离物分离。
1.4底物加入后,在发光区发光,根据光量子数,对应曲线,系统马上计算出抗原的浓度。
1.5双抗体夹心法中,病人样品中的抗原浓度与光量值成正相关。
如下图:
2.竞争法:
竞争法使用ALP标记的抗原在检测单位中进行反应。
2.1标记抗原的液相试剂加到检测单位中,标记有ALP的抗原(Ag※ALP)与样品中的抗原共同竞争捕
获抗体。
2.2充分反应后形成抗原-抗体-抗原ALP的复合物。
2.3通过高速离心将游离物分离。
2.4底物加入后,在发光区发光,根据光量子数,对应曲线,系统马上计算出抗原的浓度。
2.5竞争法中,病人样品中的抗原浓度与光量值成负相关。
如下图
3.抗体捕获法:
抗体捕获形式是指被测量样本中的物质是抗体。
试剂是使用一种抗人的特种抗体。
抗体捕获形式通常使用两次孵育和洗涤,第一次孵育和洗涤是为了除去样品中过多的干扰物质。
第二次孵育和洗涤是为了测量样品中的抗体。
抗体捕获形式主要是检测人体内的IgG和IgM。
下面以检测体内IgG为例来说明抗体捕获类型:
3.1固相试剂,包括抗人IgG抗体结合的聚苯乙烯珠,加到样品中37℃孵育。
样品中的IgG抗体
就会与固相上的抗IgG抗体结合。
3.2经过离心洗涤,洗涤掉未反应的余物。
3.3液相试剂,包括有ALP标记的抗IgG抗体。
加入到检测单位中,37℃孵育,标记物与样品中
的IgG抗体相结合。
3.4再次经过离心洗涤时,多余的标记物就会被洗掉。
3.5加入底物后发光。
光量值与病人样品中的抗体浓度存在着直接关系。
[标本要求]
1.种类
血清、血浆和尿液。
2.收集与准备
参照各检测项目标准操作规程。
3.保存
参照各检测项目标准操作规程。
[试剂]
1.本试剂仅供体外诊断使用。
2.2-8℃冷藏保存,有效期参见未打开的试剂盒。
3.防腐剂叠氮钠的浓度小于0.1g/dL。
废弃时,要用大量的水进行冲洗以防其在铅、铜排水管道中生成潜在的爆炸性的叠氮化金属。
4.对于所有组分使用的注意事项和预防措施都要将其视为存在传染疾病原来处理。
源自人血清的原材料全部经过检验,与梅毒、HIV1&2抗体、HBsAg和HCV抗体无反应。
5.化学发光底物避免污染和日光直射。
(详见说明书)
6.系统水使用蒸馏水或去离子水。
[运行条件]
为保证分析系统正常运行,必须在满足下列条件和维持相应环境的情况下运行仪器:
1.IMMULITE2000必须置于水平地板。
2.仪器不可以放置在阳光直射、空调出风口、暖风出风口或者其它热源附近。
3.使用专用的、良好接地的电源,用于仪器、打印机和计算机。
4.电源要求
仪器在出厂时设定为220VAC输入电源电压,电源电压波动不大于10%,电源频率是50Hz或者
60Hz。
5.建议为仪器系统配置配不间断电源。
6.不要将仪器放在靠近离心机、超声波、X线机、核磁共振等发射强烈电磁波的场所。
7.为保持良好空气流通,仪器背面和四周需要至少留有4英寸空间.
8.IMMULITE2000散发热量为3,413BTU/hr.
9.环境要求
室温保持在18-32°C,32°C时的最大相对湿度不可以超过80%。
10.仪器必须使用蒸馏水或去离子水,要符合NCCLS类型1的试剂用水标准。
在使用蒸馏水或去离子水之前,要经过碱性磷酸酶污染检测。
通常使用本仪器来检测蒸馏水或去离子水。
[系统设置]
在安装仪器后,必须进行系统设置;系统参数设置选项详见仪器操作手册。
[开机程序]
1.打开仪器电源。
2.选择RUNIMMULITE2000按钮,启动屏幕显示:
注意:
如果前一位操作者在他工作结束之后没有退出系统,这个启动屏幕不会显示出来。
点击工具条上的LOGOFF(退出)按钮可以退出系统。
系统会花费几分钟进行一次初始化操作。
首先一个检查系统时钟的信息显示出来,然后显示下面的窗口:
如果点击Yes按钮,则删除任何没有结果和只有错误结果的记录;如果点击No按钮,则保留工作单中的所有记录。
3.当系统初始化完成之后,显示下列窗口:
选择OK按钮。
出现主屏幕及工具条:
4.扫描仪器上有更改的过敏原试剂。
扫描时会显示详细窗口。
确认信息选择OK按钮。
5.检查控制条上的系统状态指示器,开始每日维护工作。
要检查系统水瓶、系统等清洗液瓶、底物瓶、固体废物容器、液体废物容器和反应杯贮槽。
状态显示为近似量,下图为实例:
如果必要,注满消耗品或清空废物桶I
6.检查打印机纸张
7.选择COVER按钮,打开上盖。
移开显示器
8.按下绿色的PRIME按钮(位于双精度注射泵旁边),初始化样本和试剂加样器,直到管路和注射器中没有气泡。
注意:
点击控制条上的PRIME按钮,同样可以让仪器进行初始化。
在弹出的初始化窗口上,选择初始
化次数,然后点击OK按钮。
9.初始化蒸馏水喷嘴。
9.1从包被珠清洗站中抽出蒸馏水喷嘴,将蒸馏水喷嘴插入试剂加样探针清洗站中。
注意:
抽出蒸馏水喷嘴时,试剂加样探针会自动离开试剂加样探针清洗站。
9.2按下绿色初始化按钮,直到喷嘴中喷出稳定的水流,而且管路中没有气泡。
9.3把蒸馏水喷嘴插入包被珠清洗站。
注意:
试剂加样探针会自动回复原位。
10.初始化底物喷嘴。
10.1从包被珠清洗站抽出底物喷嘴,将底物喷嘴插入试剂加样探针清洗站中。
注意:
抽出蒸馏水喷嘴时,试剂加样探针会自动离开试剂加样探针清洗站。
10.2按下绿色初始化按钮,直到喷嘴中喷出稳定的水流,而且管路中没有气泡。
10.3将底物喷嘴插入包被珠清洗站
注意:
试剂加样探针会自动回复原位。
11.关闭仪器顶盖。
[装载和更换试剂楔]
1.打开试剂舱小盖子,仪器进入PAUSE模式,试剂状态窗口即出现。
2.点击空位的方块或需要更换的试剂的方块,试剂转盘旋转,试剂空位或试剂楔转到银白色箭头前面。
重要提示:
:
如果更换过敏原试剂瓶,在取出试剂楔以前进行下面的操作:
a.打开试剂舱小盖子
b.确认仪器已经进入PAUSE模式
c.使用试剂状态窗口选择试剂楔位置
d.更改试剂楔中过敏原试剂瓶的位置后,在加载试剂前重新扫描试剂楔。
3.加载新试剂楔:
将试剂楔的条码向外,放置到试剂转盘上的分割条之间;首先将试剂楔有条码的一面向下倾斜,让试剂楔下部的卡榫到位,然后向下压另一边,把试剂楔锁住;向内推动试剂楔的滑盖,检查它是否动作灵活。
注意:
加载过敏原试剂楔和试剂瓶要用图形扫描器扫描,然后加载。
4.取出需要替换更换的试剂楔:
提起位于试剂转盘中央的楔子的窄端,向外倾斜楔子,将楔子向试剂转盘中央滑动,直到楔子突出的卡子完全脱离试剂转盘的小缺口,此时可以容易地取出试剂楔;装载更换的新试剂楔。
5.如果试剂楔有气泡:
5.1取出试剂楔。
5.2仔细打开试剂楔滑盖。
5.3擦干滑盖及其周边区域,特别是探针插入的部分。
5.4放回滑盖,重新装载试剂。
6.如果过敏原试剂楔顶部潮湿:
6.1取出试剂楔。
6.2打开试剂楔。
6.3干燥或更换隔膜帽并擦干。
6.4关闭试剂楔重新加载
7.关闭试剂舱盖,直到复位。
注意:
试剂楔最多可以在仪器中放置90天。
当超过试剂盒标签上的失效期之后,就不要再使用该试剂;如果过敏原每天都从仪器上取出,并且用标准瓶盖盖住,然后冷冻,那么过敏原在保质期前一直是可用的;
如果过敏原一直放在仪器上,那么打开后90天后就会由于挥发而过期。
如果过敏原一直放在仪器上,每天最多可能挥发5µL。
8.选择RUN按钮刷新状态窗口。
注意:
如果新试剂盒还没有输入,则会出现一个错误信息。
9.点击Close按钮返回主屏幕。
[装载和更换包被珠]
1.移开显示屏支架,打开包被珠舱盖。
仪器进入包被珠暂停状态,同时打开包被珠状态窗口。
2.选择空位的方块或需要更换的包被珠的方块,包被珠转盘转动,包被珠空位或指定的包被珠转到黑色箭头前面。
3.装载新的包被珠:
3.1将包被珠盒的条码向外,放置到包被珠转盘上的分割条之间。
3.2将包被珠盒没有条码的一面向下倾斜插入。
3.3向下压有条码的一边,把包被珠盒锁住。
4.取出需要更换的包被珠:
4.1提起包被珠有条码的一边,将其向转盘中心倾斜。
4.2将包被珠包装向外滑动,一直到包被珠的柱塞离开转盘中心,此时包被珠可以容易地取出。
4.3装载更换的新包被珠。
5.关闭包被珠贮藏室盖子。
注意:
包被珠最多可以在仪器中放置90天。
当超过试剂盒标签上的失效期之后,就不要再使用该包被珠。
6.选择RUN按钮扫描更新包被珠状态界面。
注意:
如果新试剂盒还没有输入,则会出现一个错误信息。
7.选择CLOSE关闭包被珠状态界面,回到主屏幕。
[检查试剂楔或者过敏原试剂楔的状态]
1.点击主屏幕的REAGENTS(试剂)圆圈。
2.进入试剂状态界面:
3.试剂窗口显示所有的试剂状态,包括:
试剂楔检测代码或过敏原试剂楔IDs、过敏原试剂状态、试剂批号、错误信息、校正状态、试剂余量和试剂位置。
4.试剂楔按检测代码字母排序,不是按位置排序。
每种试剂以方形图案表示,每个方块的背景颜色指示了试剂状态。
请参考下表:
背景颜色
状态
White,白色
无错误
Gray,灰色
试剂位置空或是过敏原试剂楔
lightbrown,浅棕色
存在错误,试剂仍可使用,错误包括:
试剂楔试剂量少
过敏试剂过期
校正过期
试剂盒过期
Red,红色
试剂状态不正常,试剂楔不可以使用,可能原因是:
条码未输入
试剂楔空
过敏原试剂空
过敏原试剂楔未输入
试剂楔条码不可读
匹配的包被珠不在系统
试剂盒从未校正,当将运行
5.如果试剂楔发生错误,在试剂状态窗口会在方形中显示。
一个+符号出现在错误信息右面,提示第二次出现相关错误。
两个+符号提示存在两次或更多的错误。
下表为错误信息实例和在试剂状态窗口如何显示。
错误信息
例子
KitExpired+
试剂盒过期而且试剂或包被珠也过期,或者校正过期
KitExpired++
试剂盒过期而且包被珠和试剂都过期了
AdjustmentDue+
校正过期而且剩余检测数太少了
ExpiredBeads+orExpiredMatchingBeads+
包被珠过期而且校正过期
ExpiredReagent+orExpiredMatchingReagent+
试剂过期而且校正过期
6.查看试剂楔详细信息,仪器在RUN模式下在状态窗口选择试剂的方形图案。
[检查包被珠状态]
1.点击主屏幕的BEADS(包被珠)圆圈。
2.进入包被珠态界面:
3.屏幕显示了包被珠转盘中包被珠盒的状态,包括:
包被珠名称、包被珠批号、错误信息
包被珠剩余的检测数和包被珠位置。
4.每种包被珠以方形图案表示,每个方块的背景颜色指示了包被珠状态。
请参考下表:
背景颜色
状态
White,白色
无错误
Gray,灰色
包被珠转盘上的空位置
lightbrown,浅棕色
包被珠盒状态不正常,但是包被珠盒还可以用来进行检测,可能的不正常状态是:
包被珠剩余检测数太少
校正过期
Red,红色
包被珠状态不正常,包被珠盒不可以使用,可能原因是:
试剂盒没有输入
包被珠已经用尽
包被珠盒的条码没有被读出
仪器中没有相应的试剂楔
试剂盒未校正,将要运行
5.如果包被珠发生错误,在试剂状态窗口会在方形中显示。
一个+符号出现在错误信息右面,提示第二次出现相关错误。
两个+符号提示存在两次或更多的错误。
6.查看包被珠详细信息,仪器在RUN模式下在状态窗口选择包被珠的方形图案。
[试剂盒输入]
1.本仪器使用稳定的内置曲线,不用每天或者每次都专门做一条标准曲线。
每条内置曲线都是在厂家生成的。
每个试剂盒的盒盖内侧都有四个条码,条码中就包含了这条标准曲线的信息:
高值和低值校正液的厂家cps计数值以及曲线的四个参数。
另外,测试杯批号、试剂楔等试剂盒组分批号也记录在这四个条码中。
在使用新批号的试剂盒之前,要将这些条码信息输入到仪器数据库中去。
2.使用2D扫描器扫描2D试剂盒条码:
2.1保持扫描器距2D条码2-3英寸,保持扫描器与条码平行。
2.2按住触发按钮,出现橙色的扫描光线。
2.3在2D条码上方的空白区域开始。
2.4移动扫描器连续扫描条码。
条码读完后,扫描器鸣叫几声,一声响亮的长声鸣叫表示条码扫描成功。
试剂盒屏幕(显示试剂盒信息的屏幕)会自动出现。
Pointscannerhere
3.使用图形扫描器扫描2D试剂盒条码(适用于过敏原试剂盒的扫描器):
3.1保持扫描器距2D条码5-7英寸,保持扫描器与条码平行。
3.2按住触发按钮,出现橙色的扫描光线。
3.3在条码中间扫描。
注意:
不要像2D扫描器那样移动扫描整个条码。
Pointscannerhere
3.4按住扫描按钮直到条码读取成功,试剂盒窗口即显示试剂盒信息:
重要提示:
仪器软件针对每个检测项目只能存储三个批号试剂的信息。
第四个批号的某检测项目的试剂盒条码被扫描输入,仪器软件会提示操作者选择一个被覆盖掉的试剂盒批号。
如果一个试剂盒批号被重复第二次扫描,系统会提示操作者是否要覆盖掉原有信息。
如果选择Yes(是),则校正信息也会被覆盖掉。
[过敏原和过敏原试剂楔]
1.每个试剂盒含有的试剂楔必须在实验前加载到仪器。
如果过敏原试剂盒已经加载,过敏原实验前必须至少加载一个过敏原试剂楔。
过敏原检测需要特异性过敏原,含特异性过敏原瓶子的2D条码必须在实验前单独逐个输入。
过敏原瓶子必须加载至过敏原试剂楔(每个试剂楔可以加载6个过敏原),加载的试剂楔必须通过图形扫描器输入系统。
过敏原试剂楔放入试剂舱后可建立过敏原在仪器上的位置。
每个特异性过敏原瓶子上都有两个含2D条码的标签;相同的条码确定相同的过敏原,如d1。
2.扫描每个将要装载到过敏原试剂楔的过敏原瓶子上的2D条码。
在过敏原试剂盒界面,显示关于过敏原的信息。
注意:
运行校正时,每种试剂楔必须对应一种校正抗体。
确认校正抗体条码与其他过敏原条码已经输入。
3.去除在第二步中扫描过的标签,过敏原瓶子上还保留一个含2D条码的标签。
4.用薄膜瓶盖替换原有过敏原小瓶上的标准瓶盖,然后将过敏原瓶子放入过敏原试剂楔上。
确保每一过敏原瓶条码标签向外,以便试剂楔关闭时机器可以读出。
薄膜瓶盖(septum)标准瓶盖
5.手持扫描器,距离过敏原试剂楔大约5英寸,确认试剂楔和过敏原瓶上的条码完好。
6.按住扫描器启动按钮,将光线指向过敏原条码中央;过敏原条码,过敏原试剂楔条码或者试剂楔空位置上的条码一次扫描成功。
7.进入过敏原试剂楔详细信息界面,显示扫描的过敏原试剂楔的详细信息。
注意:
如果信息显示红色,表示有错误,重新扫描。
8.选择Close按钮关闭过敏原试剂楔详细信息界面。
9.将过敏原试剂楔装到试剂转盘上。
[运行校正]
1.IMMULITE2000使用预置的标准曲线,不需要每次检测都做一条标准曲线。
每个试剂盒的主曲线都是在厂家生成的。
曲线参数编码在试剂盒条码中;使用一个新的试剂盒之前,必须将试剂盒条码输入仪器(参阅试剂盒输入)。
然后,试剂盒必须被校正,校正可以消除厂家仪器同用户仪器之间的差别。
注意:
如果试剂盒没有校正,那么检测结果是不可信的。
此外,每个批号的试剂盒还要定期重新校正。
校正周期在试剂盒说明书中注明。
定期重新校正可以消除试剂的“漂移”。
运行试剂盒校正后需要马上运行相关质控。
2.从试剂盒中取出校正液条码。
3.将A校正液的条码贴到一个样本试管上,将B校正液的条码贴到另一个样本试管上。
注意:
如果试剂盒仅仅有一个校正液,使用A校正液标签。
4.从试剂盒中取出校正液,将其倒入相应的试管中。
5.校正过敏原测试项目:
5.1将校正液抗体小瓶装在到过敏原试剂楔上。
5.2使用图像扫描器输入过敏原试剂楔信息。
5.3将过敏原试剂楔装到试剂转盘上。
6.选择HOME按钮显示主界面。
7.当仪器处于暂停状态或者停止模式时,选择装载校正液的样本架编码,样本转盘将会转到相
应的托架位置。
8.打开样本仓门,用手抓住样本架,向后拉出。
9.将校正液装载到样本架上,条码朝外。
注意:
样本架不要挡住条码,整个条码都要露在外面;当前一个校正还在运行时,不允许校正这个试剂盒。
10.关闭样本仓门。
11.选择RUN按钮,扫描样本转盘。
12.样本转盘读取完毕后,选择WORKLIST按钮,进入工作列表界面。
13.在工作列表界面显示A校正液信息。
A校正液显示水平为01。
如果装载的校正液带有条码
,使用Previous和Next按钮浏览记录。
14.在KitLot#栏输入校正的试剂盒批号。
15.如果校正过敏原试剂盒,在AdjAllergenLot#栏输入第四步装载的校正液抗体批号。
16.选择ACCEPTADJUSTOR,如果系统在运行模式,会显示下一个条码记录。
注意:
A校正必须首先接受。
17.如果试剂盒中有B校正液,需要重复13-16部定义B校正液的试剂盒批号。
B校正液的水平
为02。
18.选择Display/Edit按钮,进入显示工作列表界面。
19.选择UPDATESCREEN更新样本状态。
[运行样本检测]
1.把条码标签固定在样本试管上,确认标签出现在试管阅读窗中,或者位于试管阅读窗上面;保持标签下沿距离试管底部至少1/2(13mm)。
注意:
IMMULITE2000可以识别5种条码:
Code39,Code-A-Bar,UPC,Code128和I-2of5。
2.如果样本需要在机稀释,将在机稀释液倒入16x100mm
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- 全自动 化学 发光 免疫 分析 Immulite 标准 操作规程 概要