电泳实验报告思考题.docx
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电泳实验报告思考题
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电泳实验报告思考题
篇一:
质粒DnA的提取及其琼脂糖凝胶电泳实验报告及思考题
1.实验目的:
(1)通过本次实验学习和掌握碱裂解法提取质粒;
(2)通过本次实验学习琼脂糖凝胶电泳检测DnA的方法和技术;
2.实验材料及用品
(1)实验仪器(apparatus):
恒温培养箱(constanttemperatureincubator)、恒温摇床(constanttemperatureshakingtable)、高速离心机(highspeedcentrifuge)、漩涡振荡器(Vortexmixer)、超净工作台(bechtop)、高压灭菌锅(Autoclave)、微量加样器(pipettes)、烧杯(beaker)、量筒(graduatedcylinder)、玻璃棒(stirbar)、微波炉(microwave)、天平(panbalance)、电泳梳子(comb)、电泳槽(electrophoresistank)、电泳器(electro-phoresissystem)、紫外灯(ultraviolettransilluminator)
3)、材料与试剂(Reagents):
①溶液I(solutionⅠ):
50mmol/L葡萄糖;25mmol/L三羟基甲基氨基甲烷(Tris)Tris-hcl(ph8.0);10mmol/L乙二胺四乙酸(eDTA)ph8.0
溶液I可成批配制,每瓶约100ml,10磅高压蒸气灭菌15分钟,贮存于4℃。
②溶液Ⅱ(solutionⅡ):
新鲜配制,等体积混合
0.2mol/Lnaoh(临用前用10mol/L贮存液现用现稀释);1%sDs(可用10%贮存液稀释配制)注意:
sDs易产生气泡,不要剧烈搅拌。
③溶液III(solutionⅢ,100mL):
加上后混匀会形成絮状沉淀
60mL5mol/LKAc,
11.5mL冰醋酸,
28.5mLh2o(该溶液钾离子浓度为3mol/L,醋酸根离子浓度为5mol/L)
④Te液缓冲液:
10mmol/LTris-hcl(ph8.0);1mmol/LeDTA(ph8.0)
⑤70%乙醇;
⑥平衡酚:
氯仿1:
1:
将量取25mlTris-hcl(ph8.0)平衡苯酚,加入24ml氯仿和1ml异戊醇,充分混合后,移入棕色玻璃瓶中,4℃保存。
⑦Lb培养基:
胰化蛋白胨10g
酵母提取物5g
nacl15g
ph7.0
⑧琼脂糖(Agarose);
⑨1liter(升)5×Tbe备用溶液(stocksolution):
54gtrisbase,27.5g硼酸(boricacid),20ml0.5mol/LeDTA,ph8.0;
⑩6×凝胶加样缓冲液:
0.25%溴酚蓝(bromophenolblue),40%蔗糖(sucroseinwater);
另外还有的试剂是:
胰RnA酶、DnAmarker、硼酸、gelview试剂
(2)实验材料:
含有puc19质粒的大肠杆菌等。
3.实验原理:
1)质粒DnA的提取:
(1)关于质粒:
质粒是一类存在于几乎所有细菌中染色体之外(细胞质中)呈游离状态的双链、闭环的DnA分子。
质粒通常携带有染色体上所不存在的能够表达产生抗生素、耐受重金属等重要性状的基因。
细菌质粒的大小范围从1kb至200kb以上不等,且拥有自己的复制起始位点,可不依赖于染色体而进行独立自主复制。
一些小的质粒利用宿主细胞的酶进行复制,而较大的质粒则自身携有复制与编码的有关酶。
(2)一般分离质粒DnA的方法都包括3个步骤:
①培养细菌,使质粒DnA大量扩增;
②收集和裂解细菌;
③分离和纯化质粒DnA。
分离制备质粒DnA的方法很多,其中常用的方法有碱裂解法、煮沸法、sDs法、羟基磷灰石层析法等。
在实际操作中可以根据宿主菌株类型、质粒分子大小、碱基组成和结构等特点以及质粒DnA的用途进行选择。
(3)碱裂解法提取大肠杆菌质粒DnA的原理:
碱裂解法提取质粒DnA是根据共价闭合环状质粒DnA和线性染色体DnA在拓扑学上的差异来分离质粒DnA。
在ph值介于12.0~12.5这个狭窄的范围内,线性的DnA双螺旋结构解开而变性,尽管在这样的条件下,共价闭环质粒DnA的氢键会被断裂,但两条互补链彼此相互盘绕,仍会紧密地结合在一起。
当加入ph4.8乙酸钾高盐缓冲液恢复ph至中性时,共价闭合环状的质粒DnA的两条互补链仍保持在一起,因此复性迅速而准确;而线性的染色体DnA的两条互补链彼此已完全分开,因复性较缓慢且不准确而相互缠绕形成不溶性网状结构。
而复性的质粒DnA恢复原来构型,保持可溶性状态。
通过离心,染色体DnA与不稳定的大分子RnA,蛋白质-sDs复合物等一起沉淀下来而被除去,最后用酚氯仿可以抽提纯化上清液中的质粒DnA。
2)质粒DnA的琼脂糖凝胶电泳:
(1)关于电泳技术:
电泳常用于分离和纯化那些分子大小、电荷性状或分个构象有所不同的生物大分子——尤其是蛋白质和核酸。
正因为如此,电泳已成为生物化学和分子生物学中应用最为广泛的技术之一,其中在分子生物学实验中最为常用的是琼脂糖凝胶电泳。
琼脂糖是一种海藻多糖,琼脂糖胶分离范围很大,但其分辨率却相对较低。
通过改变琼脂糖凝胶的浓度,应用标准的电泳技术可以分离200到50,000bp大小的DnA片断。
一般琼脂糖胶浓度在0.5%到4%之间,且琼脂糖凝胶浓度越大,凝胶就越硬。
较高浓度的琼脂糖胶有利于较小的DnA片断分离,而较低浓度的琼脂糖胶则可以分离较大的DnA片断。
(2)琼脂糖凝胶电泳条带的观察:
通过观察示踪染料的迁移距离可以判断DnA的迁移距离。
溴酚蓝染料在琼脂糖凝胶的迁移速率大小与300和4000bp大小的双链DnA片断相同。
当迁移足够距离后,就可以通过gelview染色来观察DnA片断。
gelview是一种荧光染料。
它可以在做胶时混入其中在电泳
时进行染色,也可以待电泳完成后将凝胶浸泡在稀释的gelview溶液中进行染色。
但必须将凝胶置于紫外透射仪中才可以对凝胶中的DnA或RnA进行观察。
(3)质粒DnA的琼脂糖凝胶电泳分离:
DnA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应,DnA分子在高于等电点的ph溶液环境中带负电荷,在电场中向正极移动,由于磷酸骨架在结构上的重复性质,相同数量的双链DnA几乎具有等量的净电荷,因此它们能以相同的速度向正极移动。
在一定的电场强度下,DnA分子的迁移速度取决于分子筛效应,即DnA分子本身的构型和大小。
具有不同分子质量或者不同构型的DnA分子泳动速率不一样,可以进行分离。
未切割的质粒DnA在其泳道上也许会出现几个条带,之所以这样是由于质粒DnA在琼脂糖凝胶中的迁移距离是由其分子构象及其碱基对大小所决定的。
质粒DnA以下列三种主要构象中的任何一种形式存在:
①超螺旋DnA:
尽管质粒通常以开环的形式进行描述,然而在细菌细胞内DnA链即是盘绕在组蛋白周围形成一种致密的结构。
这就是所谓超螺旋结构,由于其结构致密,它在凝胶中的泳动速度最快。
②线性DnA:
当DnA损伤在DnA双链相对应的两条链上同时产生切口时,就会出现线性质粒DnA,这种DnA的泳动速率介于超螺旋与切口质粒DnA之间。
③开环DnA:
在质粒DnA复制过程中,拓扑异构酶I会在DnA双螺旋中的一条链中引入一个切口,解开质粒的超螺旋。
在质粒分离过程中由于物理剪切和酶的切割作用同样也会在超螺旋质粒中引入切口从而产生松散的开环结构。
这种形式的质粒迁移速率最慢,其“松散”的分子形式阻碍了它在琼脂糖凝胶中的运动。
4.实验方法步骤及注意事项
1)实验方法步骤
第一部分:
质粒DnA的提取及酶切
(1)取1.4ml含puc19这里的大肠杆菌培养物于1.5ml微量离心管中,4000r/min离心2分钟,吸去上清液,并使细胞沉淀尽可能干燥;
(2)加100ml溶液Ⅰ悬浮细菌沉淀,充分混和均匀,室温放置10min;
(3)加200(:
电泳实验报告思考题)ml溶液Ⅱ(新鲜配制),盖紧管口,轻缓上下4-6次颠倒离心管以混合内容物。
将离心管静置冰上5min(使溶液变透明,粘稠);
(4)加200ml溶液Ⅲ(事先冰上预冷),盖紧离心管口后上下轻缓颠倒4-6次,置冰上15min(溶液出现白色沉淀);
(5)12000rpm离心15min,转移上清液至另一离心管(弃沉淀);
(6)向上清液中加入等体积的酚:
氯仿(1:
1),反复混匀,12000rpm离心5min,取上清液移至另一离心管中;
(7)加2倍体积无水乙醇,振荡混匀,静置10min,12000rpm离心5-10min。
弃上清液,将离心管倒置于吸水纸,将附于管壁的残余液滴除净。
(8)加200ml70%乙醇洗涤沉淀物,12000rpm离心2min,弃上清液,将沉淀在室温下晾干(或在50℃-60℃的烘箱中也可)。
(9)沉淀加20μlTe,反复吹打使质粒DnA充分溶解,-20℃保存。
第二部分:
质粒DnA的琼脂糖凝胶电泳
Ⅰ.凝胶的制备(preparationofthegel)
(1)制备1%琼脂糖凝胶:
称取0.5g琼脂糖,放人锥形瓶中,加入50mL的0.5×Tbe缓冲液,放入微波炉加热至完全溶化,则为0.5%琼脂糖凝胶液(由于蒸发作用,溶解前在容量瓶上作一个记号,溶解后用三蒸水补足);
(2)制胶器的安装:
①取多功能制胶器,洗净,晾干;
②将多功能制胶器放置于一水平位置,选择12×6cm制胶架,然后选择1.5mm18teeth的梳子(最大加样量25μl);
③将所选择规格的梳子插入制胶架的定位槽中;
(3)将熔化的琼脂糖凝胶液转入gelview专用的三角瓶中,然后加入gelview5μl;
(4)将冷到60℃左右的琼脂糖凝胶液,缓缓倒入所选择的制胶槽内,直至有机玻璃板上形成一层均匀的胶面(注意不要形成气泡);
(5)待胶凝固后(30-60min),轻轻拔掉梳子,将凝胶盘从制胶槽中取出,放入电泳槽内;
(6)加入电泳缓冲液(0.5×)至电泳槽中;
Ⅱ.加样(LoadingDnAsamples):
用移液枪缓慢将DnA样品及其经过酶切的质粒DnA样品垂直加入加样孔直至开口下方(记录点样顺序,以便作为对照和分析),各加样量如下:
DnAsamples:
15μl酶切的DnA样品:
3μl
Loadingbuffer:
2μlDnAmarkers:
6μl
(DnAsamples与Loadingbuffer总共加入20μl)
Ⅲ.电泳(gel):
(1)接通电泳槽与电泳仪的电源(注意正负极,DnA片段从负极向正极移动)。
保持电压120V;
(2)当溴酚蓝染料移动到凝胶总长度一半处时,停止电泳;
Ⅳ.gelInterpretation(凝胶图像解释):
将电泳后的凝胶放在紫外灯的照射下进行DnA电泳条带的观察,并用凝胶电泳成像系统进行拍照、分析。
2)注意事项
(1)加溶液I后,必须要将菌体悬浮彻底,不得有块状或大颗粒状呈现,是质粒DnA提取的首要关键;
(2)
(3)TAe和Tbe均为常用的缓冲液。
Tbe比TAe有相对高的缓冲能力。
加样染料溴酚蓝可与长度约为0.5kb的DnA一起迁移,可用于指示迁移率最高的片段。
(4)DnA的迁移速率取决于以下因素:
①DnA的分子大小—分子量越小,迁移越快。
②琼脂糖浓度—浓度越低,迁移越快。
③DnA的构象—环状的或带切口环状的DnA通常比线状的DnA迁移要快。
④两个电极之间单位厘米的电压——电压越高,迁移越快。
(5)如果DnA条带不够窄且不够均匀,可能是内以下原因所引起:
①DnA过载②电压过高③加样孔破损④凝胶中有气泡
(6)在紫外灯下观察凝胶电泳所得结果应该戴上防护眼镜,因为紫外线对眼睛有伤害作用;
二.实验内容
1.实验现象与结果:
将电泳后的凝胶放在紫外灯的照射下观察到的和用凝胶电泳成像系统进行拍照得到的DnA电泳条带图如下所示意:
图注:
x’:
代表经过酶切的质粒DnA样品的电泳条带;
x:
代表未经过酶切的质粒DnA样品的电泳条带(x相同的互为对照组);
marker:
DnA相对分子质量标准物。
puc19质粒DnA标准参照条带图像:
2.对实验现象、实验结果的分析及其结论:
对实验现象的分析及其结论:
从上述所示的DnA电泳条带图可以看出:
不管在DnAsample中还是在经过酶切处理后的DnA样品中均具有电泳迁移速率处于中间的线性质粒DnA。
而在此次试验中出现线性质粒DnA是因为puc质粒DnA在提取的过程中DnA双链在相对应的两条链上同时产生切口。
这说明质粒制备过程个出现线性DnA说明存在核酸酶污染或实验操作有问题。
可能在其中混有少量的蛋白质(图中,位置在marker组最后一电泳条带后方的很可能就是蛋白质组分),或者在实验的提取过程中加入溶液Ⅱ所经历的时间过长,在碱性条件下基因组DnA片断会慢慢断裂,从而使提取的质粒DnA样品混入了基因组DnA。
但是其中各组也存在超螺旋DnA(与marker组对照,电泳速率最快,跑在最前面的)。
标号为1、2和3组的电泳条带存在开环质粒DnA(与marker组的最后一条带相比较,同在一条水平线上且较亮的一条条纹即为开环质粒DnA),而且只出现在未经过酶切的质粒DnAsample中,这说明在此次实验过程中酶切是彻底的。
从总体上观察,所有电泳条带的亮度并不高,可能是提取的质粒DnA量较少(浓度过低)或电泳前加样量过少所致。
5.作业
1.简要叙述溶液Ⅰ、溶液Ⅱ和溶液Ⅲ的作用,以及实验中分别加入上述溶液后,反应体系出现的现象及其成因?
①溶液Ⅰ的作用:
悬浮大肠杆菌菌体,而且加溶液I后,必须要将菌体悬浮彻底,不得有块状或大颗粒状呈现,是质粒DnA提取的首要关键。
且其中含有的溶霉菌可以水解菌体细胞壁的主要化学成分肽聚糖中的β-1,4糖苷键,因而具有溶菌作用。
另外葡萄糖的作用是使悬浮后的大肠杆菌不会很快沉积到管子的底部,增加溶液的粘度,维持渗透压及防止DnA受机械剪切力作用而降解。
eDTA是ca2+和mg2+等二价金属离子的螯合剂,在溶液I中加入eDTA,是要把大肠杆菌细胞中的二价金属离子都螯合掉,从而起到抑制Dnase对DnA的降解和抑制微生物生长的作用。
另外也可保证溶菌酶活性。
溶液Ⅱ的作用:
提供碱性条件,在naoh与sDs的共同作用下使大肠杆菌瞬间裂解,并变性核DnA。
当细胞悬浮于naoh和十二烷基酸钠(sDs)溶液中使,在高ph(碱性环境)的作用下细胞发生裂解,此外蛋白质和染色体DnA发生变性与细胞碎片一起沉淀下来。
这是由于细胞膜发生了从bilayer(双层膜)结构向micelle(微囊)结构的相变化。
新配制的溶液Ⅱ避免作为最佳溶解细胞的试剂—naoh接触空气中的co2过久而减弱了碱性。
用不新鲜的0.4mnaoh,即便有sDs也无法有效溶解大肠杆菌。
因此必须使用新鲜的0.4mnaoh试剂进行配制。
溶液Ⅲ的作用:
该溶液所含有的高浓度钾离子与溶液体系中的十二烷基硫酸钠(即sDs与naoh所形成的可溶性物质)发生反应形成十二烷基硫酸钾(potassiumdodecylsulfate,pDs),从而将与之结
篇二:
生化实验思考题参考答案
生化实验讲义思考题参考答案
实验一淀粉的提取和水解
1、实验材料的选择依据是什么?
答:
生化实验的材料选择原则是含量高、来源丰富、制备工艺简单、成本低。
从科研工作的角度选材,还应当注意具体的情况,如植物的季节性、地理位置和生长环境等,动物材料要注意其年龄、性别、营养状况、遗传素质和生理状态等,微生物材料要注意菌种的代数和培养基成分的差异等。
2、材料的破碎方法有哪些?
答:
(1)机械的方法:
包括研磨法、组织捣碎法;
(2)物理法:
包括冻融法、超声波处理法、压榨法、冷然交替法等;
(3)化学与生物化学方法:
包括溶胀法、酶解法、有机溶剂处理法等。
实验二总糖与还原糖的测定
1、碱性铜试剂法测定还原糖是直接滴定还是间接滴定?
两种滴定方法各有何优缺点?
答:
我们采用的是碱性铜试剂法中的间接法测定还原糖的含量。
间接法的优点是操作简便、反应条件温和,缺点是在生成单质碘和转移反应产物的过程中容易引入误差;直接法的优点是反应原理直观易懂,缺点是操作较复杂,条件剧烈,不易控制。
实验五粗脂肪的定量测定─索氏提取法
(1)本实验制备得到的是粗脂肪,若要制备单一组分的脂类成分,可用什么方法进一步处理?
答:
硅胶柱层析,高效液相色谱,气相色谱等。
(2)本实验样品制备时烘干为什么要避免过热?
答:
防止脂质被氧化。
实验六蛋白质等电点测定
1、在分离蛋白质的时候,等电点有何实际应用价值?
答:
在等电点时,蛋白质分子与分子间因碰撞而引起聚沉的倾向增加,所以处于等电点的蛋
白质最容易沉淀。
在分离蛋白质的时候,可以根据待分离的蛋白质的等电点,有目的地调节溶液的ph使该蛋白质沉淀下来,从而与其他处于溶液状态的杂质蛋白质分离。
实验七氨基酸的分离鉴定-纸层析法
1、如何用纸层析对氨基酸进行定性和定量的测定?
答:
将标准的已知氨基酸与待测的未知氨基酸在同一张层析纸上进行纸层析,显色后根据斑点的Rf值,就可以对氨基酸进行初步的定性,因为同一个物质在同一条件下有相同的Rf值;将点样的未知氨基酸溶液和标准氨基酸溶液的体积恒定,根据显色后的氨基酸斑点的面积与点样的氨基酸质量成正比的原理,通过计算斑点的面积可以对氨基酸溶液进行定量测定。
3、纸层析、柱层析、薄层层析、高效液相层析各有什么特点?
答:
实验八蛋白质含量的测定
(1)简述紫外分光光度法测定蛋白质浓度的原理及优点。
答:
原理:
由于蛋白质分子中酪氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键,因此蛋白质具有吸收紫外线的性质,吸收高峰在280nm波长处。
在此波长范围内,蛋白质溶液的光吸收值(oD280)与其含量呈正比关系,可用作定量测定。
优点:
迅速、简便、不消耗样品,低浓度盐类不干扰测定。
实验十影响酶活性的因素
(1)本实验中如何通过淀粉液加碘后的颜色的变化来判断酶促反应快慢的?
答:
在唾液淀粉酶的作用下,淀粉水解,经过一系列被称为糊精的中间产物,最后生成麦芽糖和葡萄糖。
变化过程如下:
淀粉→紫色糊精→红色糊精→麦牙糖、葡萄糖
淀粉、紫色糊精、红色糊精遇碘后分别呈蓝色、紫色与红色。
麦芽糖和葡萄糖遇碘不变色。
因此反应后颜色如为蓝色说明酶活力低,淡黄色则说明酶活力高。
(2)如何通过加入班氏试剂后生成沉淀多少来反映酶促反应快慢的?
答:
淀粉与糊精无还原性,或还原性很弱,对本尼迪克特试剂呈阴性反应。
麦芽糖、葡萄糖是还原糖,与本尼迪克特试剂共热后生成红棕色氧化亚铜的沉淀。
因此,产生红棕色氧化亚铜的沉淀越多说明酶活力越高。
(3)通过本实验,结合理论课的学习,小结出哪些因素影响唾液淀粉酶活性?
是如何影响的?
答:
温度、ph、激活剂、抑制剂等。
高于或低于最适温度或ph,酶活力都会降低;激活剂和抑制剂不是绝对的,只是相对而言,随着浓度的变化而变化。
实验十二碱性磷酸酶的分离提取及比活力的测定
(1)试说明用硫酸铵分级分离酶的方法及应注意的事件。
答:
用盐分级沉淀是一种应用非常广泛的方法。
由于硫酸铵在水中溶解度很大(20℃,每升可溶760克),并且对许多酶没有很大的影响,因此它是最常用的盐。
例如:
某酶(或蛋白质)发生盐析的范围为35-65%饱和硫酸铵的浓度,因此可先选择30%饱和硫酸铵浓度,去沉淀杂蛋白,然后选择70%饱和硫浓度酸铵,留沉淀(含所要的酶)。
注意事项:
在用硫酸铵沉淀酶蛋白时,要注意缓冲液的ph值和温度,盐的溶解度随温度不同而有较大的变化,同时酶的溶解度亦随温度的改变而改变。
在加硫酸铵时,需事先将硫酸铵粉末研细。
加入过程需缓慢并及时搅拌溶解。
搅拌要缓慢,尽量防止泡沫的形成,以免酶蛋白在溶液中表面变性。
(2)用正丁醇处理匀浆液可以有效地使碱性磷酸酶酶蛋白释放,使酶的产量大大提高,这是
为什么?
答:
因为碱性磷酸酶酶是一种膜蛋白,正丁醇处理后可使结合在膜上的蛋白质更多地释放出
来。
(3)酶活力测定时,为什么必需先将酶液对缓冲液透析后才测定?
答:
去除盐离子的影响。
实验十三凝胶过滤层析纯化碱性磷酸酶
1.在本实验中要注意哪些重要环节?
答:
1)注意区分柱子的上下端。
2)各接头不能漏气,连接用的小乳胶管不要有破损,否则造成漏气、漏液。
3)装柱要均匀,既不过松,也不过紧,最好在要求的操作压下装柱,流速不宜过快,避免
因此凝胶。
4)始终保持柱内液面高于凝胶表面,否则水分蒸发,凝胶变干。
也要防止液体流干,使凝
胶混入大量气泡,影响液体在柱内的流动。
5)核酸蛋白检测仪,记录仪,部分收集器要正确连接。
6)要控制一定流速。
7)收集得到的液体要进行酶活力的检测。
实验十四底物浓度对酶活力的影响(米氏常数的测定)
1.在测定酶催化反应的米氏常数Km和最大反应速度Vm时,应如何选择底物浓度范围?
答:
底物浓度选择范围[s]?
0.2-5.0Km为宜。
底物浓度选取还应该注意其倒数能均匀分布。
1/v1/v
01/[s]01/[s]底物浓度太大底物浓度太小
2.试说明米氏常数Km的物理意义和生物学意义。
答:
(1)Km是酶的一个极重要的动力学特征常数,Km物理含义:
es络合物消失速度常数与形成速度常数之比;其数值相当于酶活性部位的一半被底物占据时所需的底物浓度。
(2)可根据Km估计底物浓度的水平。
(3)Km可作为同工酶的判断依据。
(4)鉴别最适底物。
(5)有助于在酶学研究中对底物浓度的选择。
选用[s]>10Km浓度进行活力测定
3.为什么说米氏常数Km是酶的一个特征常数而Vm则不是?
答:
某种酶的Km在给定的体系中不随酶浓度改变而改变,也与酶的纯度无关,因此是酶的一个特征常数。
但Vm随酶浓度改变而改变。
实验十七sDs-pAge电泳
(1)简述sDs聚丙烯酰胺凝胶电泳测定分子量的原理;
答:
1)sDs能使蛋白质的氢键、疏水键打开,并结合到蛋白质分子上,形成蛋白质–sDs复合物。
2)sDs带有大量负电荷,当它与蛋白质结合时,消除或掩盖了不同种类蛋白质间原有电荷的差异,使sDs与蛋白质的复合物都带上相同密度的负电荷。
3)sDs-蛋白质复合物在水溶液中的形状一样,都是近似于雪茄烟形的长椭圆棒。
4)不同的sDs-蛋白质复合物都带有相同密度的负电荷,并具有相同形状;因此在一定浓度的凝胶中,由于分子筛效应,则电泳迁移率就成为蛋白质分子量的函数。
(2)是否所有的蛋白质用sDs聚丙烯酰胺凝胶电泳方法测定得到的分子量都完全可靠?
答:
不是。
如电荷异常或构象异常的蛋白质,带有较大辅基的蛋白质(如某些糖蛋白)以及一些结构蛋白如胶原蛋白等。
例如组蛋白F1,它本身带有大量正电荷,因此,尽管结合了正常比例的sDs,仍不能完全掩盖其原有正电
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- 电泳 实验 报告 思考题