1、中药生产设备清洗的分析方法微生物检查验证方案方案名称：中药生产设备清洗的分析方法(微生物检查)验证方案方案登记号：MVa-P0011-00*制药有限公司验证方案目录1.验证方案审批 12.验证概述 23.验证目的 24.验证范围 25.验证日期 26.验证组织及职责分工及资格确认 27.验证用仪器及校正 28.残留微生物检查方法验证准备 39试样准备 410擦拭法清洗后设备残留微生物限度检查方法验证 411 棉签擦拭法取样回收率试验 612淋洗法清洗后设备残留微生物限度检查方法验证 713 淋洗法取样回收率试验 914 验证过程偏差分析 915 验证结论与综合评价 1016.再验证 101.验
2、证方案审批起草：方案起草签名日期分析中心审核：方案审核签名日期质量管理部/QA分析中心/主任批准：方案的批准签名日期质量管理部部长2.验证概述我公司中药提取车间、中药制剂车间，生产设备共线生产多个品种。为保证最大限度降低药品生产过程中污染及交叉污染等风险，我公司根据GMP（2010年版）的要求，制定共线生产设备清洗验证方案。根据设备的具体情况确定可操作的清洗方法（如淋洗法，擦拭法等），并根据不同的清洗方法，通过测定微生物限度和总有机碳确定残留污染物的限度。设备清洗使用擦拭法进行清洗验证的，相应的残留微生物检查，采使用棉签擦拭法进行采集检查试样，平皿法进行细菌和霉菌的计数检查；设备清洗使用淋洗法
3、进行清洗验证的，相应的残留微生物检查，采集淋洗液作为检查试样，薄膜过滤法进行细菌和霉菌的计数检查。在3035培养72小时，细菌和霉菌合并计数。3.验证目的通过方法验证，确保该方法能够准确可靠的检测出共线生产设备清洗后的残留污染物符合预期的限度标准。4.验证范围本方案适用于中药提取车间、中药制剂车间等共线生产相关设备清洗后，采集样品的微生物限度检测方法的方法验证。5.验证日期 6.验证组织及职责分工及资格确认6.1验证人员名单及职责分工人员组成姓名部门职务/职称培训档案编号职责组长分析中心主任/工程师负责验证期间各部门的协调及整个验证过程的具体实施；确保验证过程能按方案规定的程序进行；负责验证方
4、案和报告的审核；负责验证过程中偏差的调查和评价，负责验证文件的管理归档。成员分析中心工程师负责验证方案的起草及具体实施，负责对各种验证资料（验证结果）的整理，验证记录的填写，并将验证资料及时交于相关责任人审核评价，整理归档。分析中心工程师质量管理部工程师负责验证方案的审核以及验证报告的评价。 设备工程部计量员保证检验用仪器、设施、计量器具、仪表被确认并在有效期内；保证验证过程中动力设备的正常运行。6.2参与验证的所有人员已经过相关SOP及验证知识的培训，具备从事分析验证的工作能力，并经过质量管理部负责人签字认可后方可进行验证工作。7.验证用仪器及校正7.1验证用仪器验证工作开始前应准备好验证所
5、需的仪器仪表，这些仪器仪表必须经过校验并且在有效期内，否则不能用于验证工作。7.2仪器的校正仪器名称型号仪器编号生产厂家测量精度校验证书号校验有效期至电热恒温鼓风干燥箱电子天平隔水式恒温培养箱隔水式恒温培养箱8. 残留微生物检查方法验证准备8.1培养基品名生产厂家配制批号配制日期有效期营养琼脂培养基营养肉汤培养基改良马丁培养基改良马丁琼脂培养基0.9%无菌氯化钠溶液pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液8.2验证试验用菌种：菌种菌种来源传代代数编号大肠埃希菌CMCC(B) 44 102金黄色葡萄球菌CMCC(B) 26 003枯草芽孢杆菌CMCC(B) 63 501白色念珠菌CMCC(F) 98
6、001黑曲霉CMCC(F)98 0038.3菌液制备：8.3.1制备方法： 菌种菌液制备大肠埃希菌分别接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中3035培养1824小时，分别用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为50100cfu(菌落形成单位)的菌悬液金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌白色念珠菌接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，2328培养2448小时，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为50100cfu(菌落形成单位)的菌悬液黑曲霉接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，2328培养57天，加入35ml 0.9%无菌氯化钠溶液制成每
7、1ml含孢子数50100cfu(菌落形成单位)的孢子悬液8.3.2制备记录菌种稀释度浓度接种量大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌白色念珠菌黑曲霉9试样准备9.1擦拭法清洗试样准备设备清洗结束，用在无菌注射用水中浸过的无菌棉签擦拭25cm2的表面，剪下棉签头部，置装有5ml 0.9%无菌氯化钠溶液的20ml具塞试管中，振摇3分钟，作为微生物限度检查供试液。9.2淋洗法清洗试样准备设备清洗结束，用最后的淋洗水，作为微生物限度检查供试液。10擦拭法清洗后设备残留微生物限度检查方法验证验证分为四组，并进行3次独立的平行试验，分别计算供试品组和对照组试验的菌回收率。在三次独立的平行试验中，稀释剂对照组
8、的菌回收率均应不低于70%，若试验组的菌回收率均不低于70%，照该计数法测定；若任一次试验中试验组的菌数回收率低于70%，则应建立新的方法，消除供试液的抑菌活性，并重新验证。10.1试验组：取供试液1ml，加菌50100cfu，分别注入平皿中，立即倾注营养琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，按平皿法测定其菌数。10.2菌液组：测定所加的试验菌数。10.3供试品对照组：取规定量供试液，按平皿法测定供试品本底菌数。 10.4稀释剂对照组：考察供试液制备过程对微生物的影响程度，用相应的稀释液替代供试液，加菌50100cfu，按试验组的供试液制备方法和菌落计数方法测定其菌数。10.5试验组的菌回收
9、率（%）=10.6稀释剂对照组的菌回收率（%）=10.7验证过程记录菌种名称金黄色葡萄球菌培养时间 年 月 日 时至 年 月 日 时试验次数试验组菌落数菌液组菌落数供试品对照组菌落数试验组菌回收率%稀释剂对照组菌落数稀释剂对照组 菌回收率%123小结：检查人： 复核人： 日期： 菌种名称枯草芽孢杆菌培养时间 年 月 日 时至 年 月 日 时试验次数试验组菌落数菌液组菌落数供试品对照组菌落数试验组菌回收率%稀释剂对照组菌落数稀释剂对照组 菌回收率%123小结：检查人： 复核人： 日期： 菌种名称大肠埃希菌培养时间 年 月 日 时至 年 月 日 时试验次数试验组菌落数菌液组菌落数供试品对照组菌落数
10、试验组菌回收率%稀释剂对照组菌落数稀释剂对照组 菌回收率%123小结：检查人： 复核人： 日期：菌种名称黑曲霉培养时间 年 月 日 时至 年 月 日 时试验次数试验组菌落数菌液组菌落数供试品对照组菌落数试验组菌回收率%稀释剂对照组菌落数稀释剂对照组 菌回收率%123小结：检查人： 复核人： 日期： 菌种名称白色念珠菌培养时间 年 月 日 时至 年 月 日 时试验次数试验组菌落数菌液组菌落数供试品对照组菌落数试验组菌回收率%稀释剂对照组菌落数稀释剂对照组 菌回收率%123小结：检查人： 复核人： 日期： 10.8结论：判定平皿计数法检查擦拭法清洗设备残留微生物限度的方法适合性 检查人： 复核人：
11、 日期：11 棉签擦拭法取样回收率试验取表面光滑的不锈钢平板一块，划出25cm2的区域。取1ml含菌数为50100cfu的枯草芽孢杆菌菌悬液，均匀涂敷在划出的25cm2区域，晾干，用在无菌注射用水中浸过的无菌棉签擦拭该区域，剪下棉签头部，置装有5ml pH7.0的无菌氯化钠蛋白胨溶液的20ml具塞试管中，振摇3分钟，得擦拭法取样回收率样品溶液。重复配制6份取样回收率样品溶液，分别进行平皿法计数培养。计算回收率，平均回收率应大于70% 。菌种名称白色念珠菌培养时间 年 月 日 时至 年 月 日 时试验次数123456菌落数菌悬液计数回收率平均回收率结论：检查人： 复核人： 日期： 12淋洗法清洗
12、后设备残留微生物限度检查方法验证验证分为四组，并进行3次独立的平行试验，分别计算供试品组和对照组试验的菌回收率。在三次独立的平行试验中，稀释剂对照组的菌回收率均应不低于70%，若试验组的菌回收率均不低于70%，照该计数法测定；若任一次试验中试验组的菌数回收率低于70%，则应建立新的方法，消除供试液的抑菌活性，并重新验证。12.1试验组：取供试液10ml用薄膜滤过，冲洗稀释液100ml，同时加入50 100cfu试验菌，滤过，取出滤膜，菌面朝上贴于营养琼脂培养基平板上，按薄膜过滤法测定其细菌数。每株试验菌平行制备2个平皿，按薄膜过滤法测定其菌数。12.2菌液组：测定所加的试验菌数。12.3供试品
13、对照组：取规定量供试液，测定供试品本底菌数。 12.4稀释剂对照组：考察供试液制备过程对微生物的影响程度，用相应的稀释液替代供试液，加菌50100cfu，按试验组的供试液制备方法和菌落计数方法测定其菌数。12.5试验组的菌回收率（%）=12.6稀释剂对照组的菌回收率（%）=12.7验证过程记录菌种名称金黄色葡萄球菌培养时间 年 月 日 时至 年 月 日 时试验次数试验组菌落数菌液组菌落数供试品对照组菌落数试验组菌回收率%稀释剂对照组菌落数稀释剂对照组 菌回收率%123小结：检查人： 复核人： 日期： 菌种名称枯草芽孢杆菌培养时间 年 月 日 时至 年 月 日 时试验次数试验组菌落数菌液组菌落数
14、供试品对照组菌落数试验组菌回收率%稀释剂对照组菌落数稀释剂对照组 菌回收率%123小结：检查人： 复核人： 日期： 菌种名称大肠埃希菌培养时间 年 月 日 时至 年 月 日 时试验次数试验组菌落数菌液组菌落数供试品对照组菌落数试验组菌回收率%稀释剂对照组菌落数稀释剂对照组 菌回收率%123小结：检查人： 复核人： 日期：菌种名称黑曲霉培养时间 年 月 日 时至 年 月 日 时试验次数试验组菌落数菌液组菌落数供试品对照组菌落数试验组菌回收率%稀释剂对照组菌落数稀释剂对照组 菌回收率%123小结：检查人： 复核人： 日期： 菌种名称白色念珠菌培养时间 年 月 日 时至 年 月 日 时试验次数试验组
15、菌落数菌液组菌落数供试品对照组菌落数试验组菌回收率%稀释剂对照组菌落数稀释剂对照组 菌回收率%123小结：检查人： 复核人： 日期： 12.8结论：判定平皿计数法检查淋洗法清洗设备残留微生物限度的方法适合性 检查人： 复核人： 日期：13 淋洗法取样回收率试验取表面光滑的不锈钢平板一块，划出25cm2的区域。取1ml含菌数为50100cfu的枯草芽孢杆菌菌悬液，均匀涂敷在划出的25cm2区域，晾干，用无菌注射用水淋洗该区域，接受淋洗液100ml，得淋洗法取样回收率样品溶液。重复配制6份取样回收率样品溶液，分别进行薄膜过滤法计数培养。计算回收率，平均回收率应大于70% 。菌种名称白色念珠菌培养时
16、间 年 月 日 时至 年 月 日 时试验次数123456菌落数菌悬液计数回收率平均回收率结论： 检查人： 复核人： 日期：14 验证过程偏差分析清洗验证工作结束后，由验证组长对验证的结果和可能出现的偏差进行分析和总结，得出具体结论。如果存在偏差应提出解决方案，报验证小组领导批准后进行整改，并重新进行验证。验证过程是否存在偏差：是 否 。偏差描述及评价：评价人： 日期：15 验证结论与综合评价整个验证工作结束后，验证小组负责收集各项验证结果及记录，根据验证试验结果起草验证报告，拟定修改方案，报质量管理部审批。质量管理人员对验证报告进行系统审查，评价验证工作的可靠性，并根据验证报告的内容和结果得出验证结论和最终评价及建议。验证结论：最终评价及建议：评价人： 日期：16.再验证16.1再验证条件16.1.1对检验方法进行了修订或检测条件发生了变化。16.1.2周期性再验证。16.2再验证周期每五年进行一次再验证，以证实验证的状态没有发生漂移。
