1、 1.眼睑及睑缘等处皮肤病变区的刮片方法。 （1）若病变区处分泌物多时，可先用灭菌生理盐水湿棉签将分泌物沾去，或用生理盐水冲洗，把表面分泌物去除干净。 （2）刮刀刮取标本。 2.结膜组织刮片方法。 （1）刮去前，先滴表面麻醉药如0.5%丁卡因眼水，对结膜进行表面麻醉。 （2）若结膜病变处分泌物多时，可先用灭菌湿棉签将分泌物沾去，或用生理盐水冲洗。 （3）翻转眼睑暴露睑结膜。 （4）左手固定睑结膜，右手持灭菌刮匙。 （5）根据病变情况和检查需要，选择刮取部位并刮取标本。（6）刮取标本后，滴用抗菌药物滴眼液。 3.角膜组织刮片方法。 （1）结膜囊滴用表面麻醉药，进行表面麻醉。 （2）若病变处分泌物
2、多时，可先用灭菌生理盐水湿棉签将分泌物沽去。 （3）用手指将睑裂开大，轻压眼球使其固定，或用开睑器撑开眼睑，以镊子或棉签固定眼球。 （4）选角膜溃疡的进行缘或基底部刮取标本。 （5）刮取标本后，滴抗菌药物滴眼液。 4.将刮取标本涂片、固定、染色后，在显微镜下观察结果并记录。 【注意事项】 1.用刮匙刮取标本应使刮刀与组织表面垂直，刮取时动作要轻柔准确。 2.在病变组织的同一部位不要反复刮取。 3.若需刮取角膜溃疡基底组织时，勿过度向下用力，以防造成角膜孔。 4.尽量在发病初期，使用抗菌药物之前刮取标本，以提高阳性检出率。 5.根据细菌种类不同选择固定和染色的方法。 6.采集标本时，注意无菌操作
3、。 7.标本量少时易于干燥，应及时固定后立刻送检，送检中应避免污染。二、拭子涂抹法采集细菌学检查标本 3.怀疑眼睑及睑缘等处皮肤有细菌感染。 4.怀疑泪道的细菌感染。 5.内眼手术前结膜囊细菌培养。 1.因精神因素或全身情况不适合检查者。 2.角膜溃疡已经有穿孔倾向者。 1.眼睑及睑缘等处皮肤病变区的涂抹法采集标本。 （1）若损害处浮游性分泌物多时，可先用灭菌湿棉签将浮游性分泌物沾去，或用生理盐水冲洗。 （2）然后用无菌试子往返擦拭病变组织表面采集标本。 2.结膜组织涂抹法采集标本。 （1）先滴用表面麻醉药，对结膜进行表面麻醉。 （2）若结膜病变处浮游性分泌物多时，可先用灭菌湿棉签将浮游性分泌
4、物沾去，或用生理盐水冲洗。 （4）左手固定睑结膜，右手持灭菌拭子，用拭子自一端向另端水平方向涂拭穹隆部结膜;旋转拭子的另一面与结膜接触，往返再涂擦1次。 （5）采集标本后，滴用抗菌药物滴眼液。 3.角膜组织涂抹法采集标本。 （1）采集前，滴用表面麻醉药，进行表面麻醉。 （2）用手指将睑裂开大，轻压眼球使其固定，或用开睑器撑开眼睑，以镊子固定眼球。 （3）用灭菌拭子轻轻捻转涂拭溃疡基底部和溃疡进行的边缘。 （4）标本采集后，滴抗菌药物滴眼液。 4.泪道标本的涂抹法采集。 （1）采集泪囊标本时，用手分开近内毗上下眼睑，压挤泪囊区，使囊内容物流进人结膜囊，再用灭菌拭子采集结膜囊标本。 （2）采集泪小
5、管标本时，先局部行表面麻醉，而后将一拭子放置在泪小管区后方，压迫泪小管皮肤面，用另一拭子擦取泪小点处泪小管反流物。 5.将采集的标本涂片、固定、染色后，在显微镜下观察结果并记录。1.选用涂抹法采集标本进行细菌培养时，应同时做药敏实验。2.根据细菌种类不同选择固定和染色方法。3.采集标本的器械注意消毒处理，应注意无菌操作。4.涂片不可过厚，以免影响显微镜检查。一、 穿刺法采集眼部细菌学检查标本【适应证】怀疑眼内细菌性感染者。【禁忌证】1.因精神因素或全身情况不适合检查者。2.有明显出血倾向者。【操作方法及程序】1.前房水采集法。（1）结膜囊滴用表面麻醉药。（2）生理盐水冲洗结膜囊。 （3）用开睑
6、器撑开眼睑。 （4）在手术显微镜下，用1ml一次性注射器针头，在角膜缘部穿刺进入前房，并抽吸房水0.1-0.2ml。 （5）针头拔出后，结膜囊内涂抗菌药物眼膏包扎术眼。 2.玻璃体标本采集法。 （1）常规消毒眼睑皮肤及结膜囊，结膜囊滴用表面麻醉药。 （2）生理盐水冲洗结膜囊。 （4）在手术显微镜下，用带有20或21号针头lml注射器，在角膜缘后约4mm相当于睫状体扁平部指向眼球中心方向，逐渐进针1cm左右。 （5）确定针头进人无误后，抽吸玻璃体0.2-0.3m1。 （6）针头拔出后，结膜囊内涂抗菌药物眼膏，包扎术眼。 3.将所采集的标本进行涂片、细菌培养和药敏实验。 1.若表面麻醉不充分时，可
7、加局部浸润麻醉或球后麻醉。 2.进行前房水采集时，注意勿损伤虹膜和晶状体。 3.根据细菌种类不同选择固定和染色方法。 4.采集标本的器械注意消毒，操作注意无菌。5.怀疑厌氧菌感染时，应将标本立即接种，并送检厌氧菌培养。第二节 真菌学检查标本采集1.怀疑真菌性角膜炎。2.怀疑真菌性结膜炎。3.怀疑眼睑及睑缘等处皮肤有真菌性感染。4.怀疑泪道的真菌感染。5.怀疑眼内真菌性感染者。因精神因素或全身状况不适合检查者。1.眼部真菌学标本采集具体方法参见细菌学标本采集操作步骤。 2.采集标本的直接镜检法 （1）将采集标本放置于洁净的载玻片上，滴加5%-10%氢氧化钾少许，覆以盖玻片。 （2）在弱火焰上缓加
8、温，使杂质溶化清晰。 （3）在显微镜下，直接观察菌体、菌丝和抱子等的形态。 （4）必要时可以加温固定，用过碘酸雪夫染色法、抗酸染色法或革兰染色法等，作进一步的鉴别观察。 3.采集标本培养法鉴定 （1）将采集标本根据组织来源部位不同接种于相应培养基上，如Sabouraud葡萄糖或麦芽糖琼脂培养基、血液琼脂培养基等。 （2）放置在培养箱内孵育1-4周，每周观察3次。培养温度为22-28C，湿度为4O%-50%。 （3）依据真菌生长速度、菌落外观、菌丝、抱子或菌细胞形态等参考指标来判断结果。 1.在进行真菌鉴别时，必要情况下，可应用生化反应、血清学反应或动物接种等方法。 2.采集的标本进行培养时，可在培养基内加人抗菌药物，以防细菌污染。3.采集标本的器械注意灭菌处理。
