1、在各种干扰和最差条件下，评估灭菌工艺、人员更衣、行为习惯、 A/B级气流模式、无菌环境的建立、消毒维持方法和物料的传递控制等整个流程的无菌保证水平。3风险评估经验证小组人员共同对培养基模拟灌装试验验证进行风险评估， 对存在的质量风险提出了预防和纠正措施建议，具体见下表：风险 因素风险影响现有控制措施可能性P重性S检 测 性D风险 优先 数RPN风 险 级 别建议采取措施未按更衣程 序更衣及不 规范动作。污染无菌环 境，使产品 受到污染按相应SOP进行培 训。人员进行更衣试 验。34224中人员定期进行相关 培训并进行更衣 确认。分装线 生产前 检查及 准备灭菌设备故 障，人员操 作不当。所灭菌
2、部件 灭菌不彻底，污染产品设备经过验证且定期 维护，人员培训。人员进行相关设备 操作培训。灭菌设 备定期验证。无菌生 产中的 正常干扰人员无菌操 作不规范。无菌操作失 败，使产品 受到污染进入无菌生产区的操 作人员经培养基灌装 试验确认。48高人员无菌培训，人 员经培养基灌装试 验确认。A级区沉降 菌采样无菌操作 失败在A级区放置的沉降 碟的操作平面低于产 品的操作平面，避免对 产品的影响。18低取样人员进行相关SOP及无菌操作 培训。原料进入A/B级区未按SOP要 求清洁、消毒污染无菌环 境，间接污 染到产品严格执行SOP 人员培训12定期监测， 加强监控环境环境未得到 控制环境对产品 产生
3、污染检查相关验证情况，控 制关键操作区人数，定 期监测定期监测， 定期消毒。时限性设备、器具、 环境未及时 清洁、未确 定有效期微生物滋 生，产品残留于设备 中，导致交 叉污染制定相应SOP，人员 培训36SOP规定清洁时 间、方法和有效期， 人员培训到位。年 月曰评估人 4.验证参考标准4.1药品生产质量管理规范（2010年版）4.2药品生产质量管理规范（2010年版）指南4.3中国药典2010年版（二部）4.4药品生产验证指南（2003年版）专业资料5.验证范围验证。本方案适用粉针车间生产的全过程。包括：人员更衣、各房间的清洁消毒、物料传递、容器 工具的处理、内包材的处理、中控取样、动态下
4、环境监测、无菌分装、轧盖过程，并在分装过程 中模拟正常与非正常干扰活动。方案中还规定瓶子、胶塞和铝盖灭菌后存放有效期的6.验证职责6.1验证委员会6.1.1负责验证方案的审批， 质量副总进行批准。6.1.2负责验证的协调工作，以保证本验证方案的顺利实施。6.1.3负责验证数据及结果的审核。6.1.4负责验证报告的审批。6.1.5验证证书由验证委员会主任批准后，由质量管理部发放，验证文件由质量管理部归档保存。6.1.6负责再验证周期的确认。6.2验证小组6.2.1负责验证方案的起草和验证实施。6.2.2负责验证数据、记录及结果的收集、整理。6.2.3负责起草验证报告，报验证委员会批准。6.3设备
5、部6.3.1.负责组织所需仪器、设备的验证。6.3.2负责设备的维护保养。6.3.3.负责验证所需设备和 HVAC系统、水系统及其他公用工程系统正常运行。6.3.4.负责生产辅助设施和公用工程系统的操作和清洁。6.4质量管理部6.4.1负责验证方案的审核。6.4.2负责生产过程的监控和取样计划的制订。6.4.3负责取样及对样品的检验并发放检验报告。6.4.4负责收集验证记录，并加以分析。6.5粉针车间6.5.1负责组织验证方案的实施。6.5.2负责合理安排验证生产人员。7验证前提条件7.1验证中使用的文件是最新版本并已生效 （见下表）。文件名称文件编号验证总计划管理规程SOP-0101-ZL-
6、025 / 01确认与验证管理规程SOP-0101-ZL-019 / 01人员进出生产车间管理规程SOP-O2-SC-O14 / 01生产区卫生管理规程SOP-O2-SC-OO1 / 01无菌生产洁净区人员行为规范标准操作规程SOP-O2-SC-O37 / 00一般区物料传递岗位标准操作规程SOP-O2O3-PS-OO1 / 01火菌岗位标准操作规程SOP-0203-PS-002 / 01DMH-百级净化双扉干热灭菌柜标准操作规程SOP-O2O3-E-OO1 / 01XG1.D型机动门脉动真空灭菌器标准操作规程SOP-0203-E-002 / 01洗瓶岗位标准操作规程SOP-0203-PS-0
7、04 / 01KQCL60抗生素瓶立式超声波清洗机标准操作规程SOP-0203-E-003 / 01KSZ620/60型隧道式灭菌干燥机标准操作规程SOP-0203-E-006 / 01胶塞清洗火菌岗位标准操作规程SOP-0203-PS-005 / 01KJCS-10ES全自动湿法超声波胶塞清洗机标准操作规程SOP-0203-E-005 / 01铝盖清洗灭菌岗位标准操作规程SOP-0203-PS-006 / 01KJSL-12ES全自动湿法铝盖清洗机标准操作规程SOP-0203-E-004 / 01FILGUARD-212A型完整性测试仪操作规程分装岗位标准操作规程SOP-0203-PS-00
8、7 / 01KFG300D型抗生素瓶螺杆分装机标准操作规程SOP-0203-E-007 / 01轧盖岗位标准操作规程SOP-0203-PS-008 / 01ZG300C型抗生素瓶轧盖机标准操作规程SOP-0203-E-008 / 01中间产品传递岗位标准操作规程SOP-0203-PS-009 / 01灯检岗位标准操作规程SOP-0203-PS-010 / 01表面微生物监测操作规程SOP-0102-T-047/00沉降菌监测操作规程SOP-0102-T-006/01浮游菌监测操作规程SOP-0102-T-005/01悬浮粒子监测操作规程SOP-0102-T-007/01培养基适用性检查标准操作
9、规程SOP -0102-T-009/01洁净区监测管理规程SOP-0101-ZL-028/01偏差处理管理规程SOP-0101-ZL-016/01变更管理规程SOP-0101-ZL-017/017.2参与验证实施人员都已接受相应的培训和本方案的培训，并考核合格。7.3粉针车间洁净空调净化系统、纯化水系统、注射用水系统、纯蒸汽系统、压缩空气、车间生 产设备、称量衡器及培养室温度分布等已经过验证。7.4相关物料的准备。名称规格（编号）生产厂家胰蛋白胨大豆肉汤培养基250g /瓶北京陆桥技术有限公司无菌乳糖200目广州天润药业有限公司注射用无菌粉末用卤化丁 基橡胶塞20-B2江阴兰陵瓶塞有限公司抗生
10、素瓶用铝塑组合盖 20 X 7.1烟台福山区誉兴制盖有限公司低硼硅管制注射剂瓶10ml江苏潮华玻璃制品有限公司白色念珠菌98 001湖北省食品药品监督管理局检验研究院枯草芽孢杆菌63 501铜绿假单孢菌10 104金黄色葡萄球菌26 003大肠埃希菌64 941注：乳糖经过辐射灭菌。8验证批次和时间按本方案连续进行三批培养基模拟灌装，每批灌装的数量大于 5000瓶。序号批号模拟试验时间第1批20110901第2批20110902第3批201109039验证步骤9.1模拟灌装试验前确认9.1.1模拟灌装用无菌乳糖溶解性试验20称取模拟灌装用乳糖 10g，于含胰蛋白 胨大豆肉汤培养基为 3%的10
11、0ml溶液中,25 C的温度条件下，经轻微地振摇应全部溶解。9.1.2模拟灌装用乳糖微生物生长性试验的确认。9.1.3胰蛋白胨大豆肉汤培养基的 无菌试验的确认。9.1.4胰蛋白胨大豆肉汤培养基的 灵敏度试验的确认。9.2灌装前准备9.2.1培养基灌装试验生产操作流程培养基、乳糖内包材相应传递间脱外包层流传递窗（铝塑盖、培养基、乳糖） （胶塞、管制瓶）分装间（先分装乳糖，再灌装培养基） 轧盖间制品传出922工衣清洗灭菌，瓶子、胶塞、铝盖、分装机部件和器具按相应岗位 SOP的要求进行清洗灭菌后进入分装间。9.2.3培养基配制：培养基由操作人员按一般区物料传递岗位标准操作规程（SOP -0203-p
12、s-001/01）传至器具清洗间，取胰蛋白胨大豆肉汤培养基 5瓶（250g/ 瓶），分成两桶配制，先量取10000ml的注射用水（约 70 C）加入洁净的密封桶（65L）,缓慢加入培养基1000g，搅 拌10分钟，再量取15000ml的注射用水（约 70 C）加入密封桶中，再搅拌 10分钟。取第二只洁净的密封桶（65L）,先加入6700ml的注射用水（约 70 C）,缓慢加入培养基 750g，搅拌10 分钟，再量取10000ml的注射用水（约70 C）搅拌10分钟。配制后培养基 pH值应在7.3 0.2 之间。将胰蛋白胨大豆肉汤培养基溶解完全稀释至浓度为 30g/L溶液。按XG1.D脉动真空灭
13、菌器标准操作规程（sop-0203-E-002/01） 操作，121 C、20分钟灭菌后，传入分装间 A级区。9.3模拟灌装过程9.3.1培养基冷却至室温后，按分装岗位标准操作规程 （SOP -0203-ps-007/01）和KFG300D抗生素瓶螺杆分装机标准操作规程 （SOP -0203-E-007/01）进行操作，将无菌乳糖按每支 0.5g分装于10ml西林瓶中，按BT300-1F蠕动泵标准操作规程 （SOP -0203-E-010/01）进行操作，将灭菌的胰蛋白胨大豆肉汤培养基按每支灌装 7ml，扣好胶塞后按 ZG300C型抗生素瓶轧盖机标准操作规程（SOP -0203-E-008/0
14、1 ）轧盖密封，在轧盖后缓冲间收集到不锈钢盘中（每个收集 盘装载200支左右）。按分装时间对 每个盛装培养基小瓶的托盘编号，并记录每盘的分装时间。9.3.2模拟最差生产条件：人数最多，时间最长。 分装人数为8人，轧盖4人；为加大操作人员疲劳程度和考察对产品的影响，模拟灌装超过工艺规程规定时限，时间为 8小时，正常生产中午休息1小时。9.3.3培养基模拟灌装试验操作过程9.3.3.1 7 : 30 至 8: 30 装机。9.3.3.2灌装量：每支西林瓶分装无菌乳糖 0.5g，灌装培养基7ml。9.3.3.38 : 30装机后装原粉桶， 按照分装岗位标准操作规程和 BT300-1F蠕动泵标准操作规
15、程调节装量 0.5小时。9.3.3.430分钟。9 : 00开始以2000支/小时速度分装无菌乳糖和灌装培养基9.3.3.5轧盖爆瓶停机15分钟。9.3.3.6中间模拟运行1小时。9.3.3.7以2000支/小时分装无菌乳糖和灌装培养基 30分钟。9.3.3.8拆装原粉桶0.5小时。9.3.3.9以2000支/小时分装无菌乳糖和灌装培养基 30分钟。9.3.3.1012 : 15至13 : 15操作人员出来吃饭 。9.3.3.11模拟设备维修1小时，之后用消毒剂对分装机台面上各部件进行擦拭 10分钟，调整装量5分钟，自净15分钟，继续分装。9.3.3.12以2000支/小时分装无菌乳糖和灌装培
16、养基 30分钟。9.3.3.13分装机拨瓶盘错位调整 15分钟。9.3.3.14模拟运行0.5小时。9.3.3.15以3000支/小时分装无菌乳糖和灌装培养基至结束。9.3.4灌装培养基的过程中进行各种正常干扰和非正常干扰的模拟。9.3.4.1正常干扰因素因素次数具体实施1装机分装机分装部件的组装胶塞转移胶塞清洗机出料，转移至分装机旁的隔离器内装原粉桶，调装量装原粉桶和换原粉桶灌装速度2000支/小时分装无菌乳糖和灌装培养基53000支/小时分装无菌乳糖和灌装培养基6模拟运行1次1小时、1次0.5小时7装量检查10每次分装无菌乳糖和灌装培养基检查 2次8处理胶塞轨道堵塞每次分装无菌乳糖和灌装培
17、养基处理一次9处理掉塞空瓶扶瓶每次分装无菌乳糖和灌装培养基扶瓶一次11轧盖爆瓶停机15分钟中间休息中午休息、吃饭13胶塞上料25每次分装无菌乳糖和灌装培养基上料 5次14环境监测分装过程中15分装机操作工穿越轨道生产过程中 分装机操作工穿越轨道次数为 8次。16人员表面微生物中午休息出去时、使用结束时 J9.341非正常干扰因素出轨后倒瓶每次分装无菌乳糖和灌装培养基倒瓶一次设备维修第三次灌装结束后，停止灌装 60分钟，打开分装机台面下控制 箱，模拟检查维修。维修时间约 60分钟，之后用消毒剂对分装 机台面上各部件进行擦拭，调整装量，继续灌装分装爆瓶爆瓶，停机处理拨瓶盘调整挤瓶导致拨瓶盘错位9.
18、4试验过程监测9.4.1西林瓶的无菌检查及有效期验证西林瓶按KQCL60抗生素瓶立式超声波清洗机标准操作规程 （SOP -0203-E-003/01）进行清洗，按KSZ620/60型隧道式灭菌干燥机标准操作规程 （SOP -0203-E-006/01）进行灭菌后进入分装间。9.4.1.1测试方法：每次取 6只西林瓶按直接接种法，其中3支放入300ml硫乙醇酸盐流体培养 基中、3支放入300ml改良马丁培养基中，同时做阴性对照，分别在 23-28 C和30-35 C培养 14天；逐日观察并记录。9.4.1.2.判定标准：全部样品和阴性对照管培养 14天后液体澄清，不得有菌生长。9.4.1.3取样
19、时间：试验前（9点取样，存放 8h ）、试验中（12点取样，存放 6h ）、试验后（16 点取样，存放4h、。9.4.2.胶塞的无菌检查及有效期验证胶塞按KJCS-10ES全自动湿法超声波胶塞清洗机标准操作规程 （SOP -0203-E-005/01）清洗、灭菌后出料存放于分装间 A级区。9.4.2.1.测试方法：每次取 20只胶塞按直接接种法，其中10只放入100ml硫乙醇酸盐流体培养基中、10只放入100ml改良马丁培养基中，同时做阴性对照， 分别在23-28 C和30-35 C培养14天；9.4.2.2.判定标准：9.4.2.3取样时间为：试验前（8点取样，存放 36h、试验中（11点取
20、样，存放 40h、试验后 （15点取样，存放44h、。943铝塑盖的无菌检查及有效期验证铝塑盖按KJSL-12ES全自动湿法铝盖清洗机标准操作规程 （SOP -0203-E-004/01）清洗、灭菌后出料存放于轧盖间 A级区。9.4.3.1.测试方法：每次取 20只铝塑盖按 直接接种法，其中10支放入300ml硫乙醇酸盐流体培 养基中、10支放入300ml改良马丁培养基中， 同时做阴性对照，分别在 23-28 C和30-35 C培养14天；9432判定标准：9.4.3.3取样时间为：试验前（8点半取样，存放 36h ）、试验中（11点半取样，存放 40h ）、试 验后（15点半取样，存放 44
21、h ）。9.4.4生产过程环境监测及表面微生物监测9.4.4.1测试方法：参见浮游菌测试标准操作规程 （SOP-0102-T-005/01 ）、沉降菌测试标准操作规程（SOP-0102-T-006/01 ）、悬浮粒子测试标准操作规程 （SOP-0102-T-007/01 ）、表面微生物监测标准操作规程 （SOP-0102-T-047/00 ）。9442判定标准9.4.4.2.1悬浮粒子洁净度级别静态动态 0.5um 5.0umA级3520B级293520002900C级35200002900094422微生物动态监测标准浮 游cfu/m 3菌沉降菌cfu/4小时（C 90mm ）表面微生物接触
22、（C 55mm ） cfu/碟5指手套cfu/手套V 1100509.4.4.3取样计划及取样点取样点见下表。取样操作参见洁净区监测管理规程 （SOP-0101-ZL-028/01 ）。分装流程图：进瓶转盘（处理倒瓶） 分装（上料、装量检查、添加胶塞、卡瓶、堵塞、停机维修、人员进出、环境监测）轧盖（添加铝塑盖、堵盖、环境监测）风险因素取样位置级别监测项目取样方法取样频率1.人员操作及数 量、着装更换。2.装量检查。3.物料转运操作。4.各种无菌操 作。人员五指手套、手肘、胸 部、腹部、头部、口罩、 护目镜A/B级表面微生物0 55mm接触中途更衣前试验结束后进瓶转盘悬浮粒子沉降菌浮游菌粒子传感
23、器0 90mm平皿浮游菌采集器在线监测实时监控分装头实时监控 试验结束后胶塞振荡器分装机隔离器表面、 隔离器手套分装间墙面、门把手、地面轧盖机操作台面轧盖机隔离器表面、隔轧盖间墙面、地面10.试验样品的培养和检查10.1将试验正常样品和不良样品先置 2328 C培养7天，再置3035 C培养7天，培养时一半正立，另一半倒置，第 7天后交换；第7天观察培养基灌装品的微生物生长情况，并对污染的瓶中的微生物进行总结其特点。若发现污染应明确记录样品灌装时间及数量，若有破损情况应记录 并检查其破损原因。对于微生物污染的样品应进行鉴别试验。10.2如果培养基灌装产品存在污染， 将污染瓶中的污染菌在营养琼脂
24、培养基或玫瑰红钠琼脂培养基上划线和分离培养，挑取单个菌落形态进行形态学观察、革兰染色等初步鉴别。11.试验结果评价11.1样品可接受标准11.1.1所有样品均进行培养，全部样品无浑浊出现，则为阴性，合格。11.1.2若有1支出现浑浊现象需进行调查，并记录污染产生的原因。11.1.3有2支污染则视为验证失败。需进行调查，填写异常情况报告，根据调查所确定的或可能 发生的原因制定纠正或改进方案并实施， 在调查结束并采用相应的措施后重复进行无菌模拟分装试验。11.1.4出现阳性的样品应进行密封性检查，剔除所有渗漏的样品。11.1.5物料平衡的统计培养基灌装记录物料平衡部分应包括完整的数据统计和对该批丢弃的数量的描述。 此外，根据无菌灌装验证的具体情况，采用分灌装瓶数进行物料平衡计算。合格标准为 100 %。11.2最终判断标准：11.2.1无菌灌装验证判定为合格必须满足以下三条：所有样品均为阴性（无浑浊现象）样品的促生长试验合格（都有浑浊）物料平衡结果符合要求（为 100 %）11.2.2如果其中的任何一项不合格则表明无
