1、对照组 单味 中风 32 32.25 80.60治疗组 片仔癀 急性咽炎 416 75.50 96.64对照组 片仔癀 急性咽炎 102 80.38 97.06治疗组 单味 牙周炎 148 90.54 99.32 对照组 单味 牙周炎 39 84.61 94.87治疗组 单味 疖肿 110 76.36 96.36对照组 单味 疖肿 39 66.67 94.87备注：治疗组用体外培育牛黄；对照组用天然牛黄。体外培育牛黄与天然牛黄对比研究资料（1）、牛黄形成机理（2）、体外培育牛黄机理与工艺研究（3）、天然牛黄与体外培育牛黄质量标准对比分析（4）、不同产地的天然牛黄成分及含量的分析研究（5）、体外
2、培育牛黄、天然牛黄、人工牛黄比较表（6）、体外培育牛黄成分含量的分析研究（7）、体外培育牛黄、天然牛黄相关仪器检测对比性研究（8）、体外培育牛黄、天然牛黄游离胆红素含量对比性研究（9）、体外培育牛黄指纹图谱研究（10）、体外培育牛黄、天然牛黄主要药效学对照性研究（11）、体外培育牛黄、天然牛黄一般药理对照性研究（12）、体外培育牛黄耐缺氧、中枢神经作用的研究（13）、体外培育牛黄急性毒性试验（14）、体外培育牛黄长期毒性试验（15）、体外培育牛黄致突变试验（16）、体外培育牛黄培养细胞染色体畸变试验（17）、体外培育牛黄对小鼠微核试验（18）、体外培育牛黄生殖毒性试验（19）、体外培育牛黄与天
3、然牛黄II、III期临床对比研究汇总（20）、安宫牛黄丸（体外培育牛黄）治疗痰热闭窍证（中风） 期临床试验总结206例临床试验分析（21）、安宫牛黄丸（体外培育牛黄）治疗暑温（乙脑）II期临床试验总结150例临床研究分析（22）、片仔癀胶囊（体外培育牛黄）治疗上焦热毒证（急性咽炎）期临床试验总结-203例临床试验分析（23）、体外培育牛黄治疗牙周炎期临床试验总结80例临床试验分析（24）、体外培育牛黄治疗疖肿期临床试验总结63例临床试验分析（25）、体外培育牛黄治疗中风期临床试验总结339例临床（26）、体外培育牛黄治疗暑温（乙脑）期临床试验总结278例临床试验分析（27）、体外培育牛黄治疗上
4、焦热毒证（急性咽喉炎）期临床试验总结319例临床试验分析（28）、体外培育牛黄治疗牙周炎期临床试验总结112例临床试验分析（29）、体外培育牛黄治疗疖肿期临床试验总结102例临床试验分析（1）、牛黄形成机理:在历经十多年研究胆红素钙结石形成的原因和机理的基础上，基于对胆红素型牛胆结石的认识，模拟体内结石形成的原理和生物化学过程。根据天然牛黄的性状、结构、成分、含量特点，应用可调控牛黄质量的配方，在可控条件下的牛胆结石体外培育，并获得性状、结构、成分、含量、药效、临床疗效与天然牛黄相一致的体外培育牛黄。工艺步骤：成石牛胆汁的生成；结石核心的形成；结石的分层培育；结石的真空干燥。工艺路线：分层培育
5、干燥成品质量标准对比表：类项体外培育牛黄（国家药品标准）牛黄（药典2000版）来源本品为以牛科动物牛的新鲜牛胆汁液,配成成石胆汁,在体外培育所得的牛胆红素钙结石。本品为牛科动物牛干燥的胆结石。宰牛时，如发现有牛黄，即滤去胆汁，将牛黄取出，除出外部薄膜，阴干。性状呈球形、类球形，直径0.5-3cm，表面光滑，呈黄红色至棕黄色，体轻，质松脆，有同心层纹。气香，味苦而后甘，有清凉感，嚼之易碎，不粘牙。呈卵形、类球形，直径0.6-3（4.5）cm，表面黄红色至棕黄色，体轻，质松脆，有同心层纹。鉴别粉末加清水调和，涂于指甲，能将指甲染成黄色。加清水调和，涂于指甲上，能将指甲染成黄色。显微鉴别呈正反应胆红
6、素鉴别呈正反应胆酸鉴别呈正反应去氧胆酸鉴别呈正反应无检查按药典附录水份测定法测定不得过9.0%游离胆红素吸收度不得超过0.70含量测定按药典测定薄层扫描法胆酸含量不得少于6.0%。按药典薄层扫描法测定胆酸含量不得少于4.0%。按药典分光光度法测定胆红素含量不得少于35.0%。功能主治清心，豁痰，开窍，凉肝，息风，解毒。用于热病神昏，中风痰迷，惊厥抽搐，癫痫发狂，咽喉肿痛，口舌生疮，痈肿疔疮。用法用量0.15-0.35g。多入丸散用；外用适量，研末敷患处。贮藏置阴凉干燥处，遮光，密闭保存，防潮防压。遮光，密闭，置阴凉干燥处，防潮，防压。参照国内外有关学者对天然牛黄成分含量的分析方法和结果，对国内
7、外五个不同产地的优质牛黄进行了分析研究，其结果如下成分含量（%）产 地澳大利亚牛黄1西藏牛黄2京牛黄3进口牛黄1进口牛黄2水 分6.96.87.06.7灰 7.1胆 红 素36.700.67*39.621.39*35.800.55*29.290.72*40.900.67*胆 酸20.101.48*15.001.13*14.900.88*15.301.03*17.040.92*去氧胆酸6.480.77*4.900.76*4.860.75/10.630.86*7.150.63*牛 磺 酸6.420.49*5.920.73*6.250.78*4.660.74*6.460.55*胆 固 醇4.801.
8、09*5.451.08*5.790.72*10.550.41*4.400.66*磷 脂1.750.38*1.700.39*1.901.302.960.37*无 机 盐3.363.583.453.732.96氨 基 酸0.6550.6330.7480.5650.688糖 蛋 白1.742.052.591.992.06合 计95.7092.3590.1992.6297.37项 目品 名天 然 牛 黄人工牛黄粉性 状外 观棕黄色球、类球形、质轻、松、脆 直径0.5-3cm无形状、粉末、浅黄色断 面断层金黄色，有同心层纹结构无结构气 味气香、味苦而后甜微腥，微苦显 微观 察光 学 镜10 倍取少许粉末
9、加50%甘油乙醇液装片，镜下见絮状、团絮状棕色胆红素钙颗粒大量淀粉颗粒，呈圆形、多面形扫 描电 镜呈网状结构，网孔7-350u含 量35%以上0.7%胆 酸12%以上7%以上12.5%去氧胆酸5%以上4%以上猪去氧胆酸15%通过对体外培育牛黄处方、制备工艺及其原理的研究，对所生产出的产品成分含量的研究分析如下：批 号901102901128901220910220920418水 分灰 分7.37.235.580.62*36.610.66*37.370.9036.8737.960.8214.450.50*16.900.59*16.850.60*16.360.99*6.800.48*6.790.4
10、0*6.616.600.40*0.68*6.700.44*6.720.46*6.830.48*0.44*5.950.29*5.201.16*5.005.100.71*5.30磷 脂1.770.30*1.801.880.25*0.36*0.15*3.683.403.353.433.280.7880.6950.6980.6700.7622.572.262.432.491.98合 计92.4794.4695.1694.6295.26* n=12 * n=6红外光谱分析结果：天然牛黄与体外培育牛黄在1730-1350cm-1区间，均有胆红素盐及胆红素高聚物质的特征峰。傅立叶变换红外分光光谱仪分析结果：
11、体外培育牛黄与天然牛黄均见1690cm-1为羧酸类；1629-1565cm-1为酰胺类；1404cm-1为羟基类。高效液相色谱分析结果：胆酸、去氧胆酸对照品的图谱与体外培育牛黄、天然牛黄中的胆酸、去氧胆酸一致。薄层色谱分析结果：体外培育牛黄、天然牛黄色谱中，在与胆酸、去氧胆酸对照品相应的位置上显相同颜色的荧光斑点。微量元素含量测定结果：体外培育牛黄与天然牛黄的微量元素及其含量均基本一致。氨基酸含量测定结果：体外培育牛黄与天然牛黄含有相同的17种氨基酸。游离胆红素含量对比表批 号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 平均值天然牛黄 4.420 3.238 2.026 3.703 4.
12、300 4.50 3.36 2.756 1.294 1.27 3.82 3.153体外培育牛黄0.500 0.500 0.490 0.630 0.670 0.622 0.550 0.526 0.480 0.460 0.532 0.544体外培育牛黄与天然牛黄三个提取部位（包括酸水、酸醇和二甲亚砜提取液）的成分，即胆汁酸类、胆红素类等，均基本一致，但某些成分的比例有差异。10批体外培育牛黄三个提取部位（包括酸水、酸醇和二甲亚砜提取液）的HPLC指纹图谱有较好的相似性，说明人工体外培育牛黄的工艺是稳定的。4批天然牛黄的之间成分也基本一致，但某些成分，尤其是胆汁酸类成分的比例有较明显差异。指纹图谱（
13、胆红素类、胆酸类、氨基酸及肽类）的对比分析表明，体外培育牛黄与天然牛黄成分一致，且比天然牛黄更稳定。（10）、体外培育牛黄、天然牛黄主要药效学对照性研究：体外培育牛黄（TPN ）灌胃给药能显著抑制小鼠巴豆油性耳廓水肿，大鼠角叉菜胶性足肿胀、大鼠巴豆油芽囊肿的渗出和增生，抑制白细胞游走反应，对抗前列腺素E2致毛细血管通透性增加；对酵母致大鼠发热和伤寒副伤寒三联疫苗侄家兔发热均有明显抑制作用，TPN对安钠咖致小鼠惊厥，吗啡致小鼠竖尾反应有明显的对抗作用，而与戊巴比妥钠台用则有协同催眠作用；TPN能显著减低感染金色葡萄球菌小鼠的死亡率。试验方法：1、TPN的抗炎作用1.1对小鼠巴豆油性耳廓水肿的影响
14、1.2对大鼠角叉菜胶性足肿胀的影响1.3对大鼠肉芽囊肿的影响1.4对白细胞游走反应的影响1.5对大鼠肾上腺素内抗坏血酸含量的影响1.6对大鼠毛细血管通透性的影响2、TPN的解热作用2.1对酵母致大鼠发热的影响2.2对伤寒副伤寒三联疫苗致家兔发热的影响3、TPN的中枢作用3.1对安钠咖致小鼠惊厥的影响3.2对戊巴比妥钠阈下催眠的影响3.3对吗啡致小鼠竖尾反应的影响3.4对尼可刹致小鼠惊厥的影响3.5对士的宁致惊厥的影响4、体外培育牛黄（TPN）的抗菌作用结论：抗炎作用：体外培育牛黄对小白鼠的巴豆油性耳廓水肿，大鼠的角叉菜胶性足肿胀，羧甲基纤维素所致的白细胞游走反应均有明显的对抗作用，表明TPN对
15、急性炎症的渗出和白细胞的趋化均有抑制作用。TPN的抗炎作用强度与天然牛黄相近。其抗炎作用可能与对抗前列腺素有关。解热作用：TPN对酵母所致的大鼠的发热及对伤寒副伤寒三联疫苗致家兔发热均有显著的抑制作用，其作用强度与天然牛黄相似。中枢抑制作用：TPN对安钠咖致小鼠惊厥，吗啡致小鼠竖尾反应有明显的对抗作用，TPN与戊巴比妥钠有协助催眠作用。以上作用强度均与天然牛黄相近。人工牛黄粉则无上述中枢抑制作用（11）、外培育牛黄、天然牛黄一般药理对照性研究体外培育牛黄灌胃给药对动物的一般活动无明显影响，对小鼠协调运动有抑制作用，并具有一定的镇静和抗惊厥作用；能显著降低大鼠的血压，但不影响心率和心电图；对大鼠
16、的呼吸的幅度和频率无明显的影响。方法：1、对中枢神经系统的影响1.1对动物一般活动的影响1.2镇痛作用1.3对协调运动的影响1.4对戊巴比钠阈下催眠剂量的影响1.5对小鼠惊厥的影响1.5.1对安钠咖致小鼠惊厥的影响1.5.2对尼可刹米致小鼠惊厥的影响1.5.3对士的宁致小鼠惊厥的影响1.5.4对吗啡致小鼠竖尾反应的影响2、对大鼠心血管及呼吸系统功能的影响对中枢神经系统的影响：TPN具有镇静、抗惊厥作用，无镇痛作用。TPN对中枢神经系统的作用与天然牛黄相同。对心血管系统的影响：TPN能明显降低大鼠的血压，但不影响心率的心电图。这一作用与天然牛黄一致。对呼吸系统的影响：TPN和天然牛黄对大鼠的呼吸
17、频率和幅度均无明显影响。体外培育牛黄的主要药效集中反映在中枢作用方面：除了前述抗惊厥、镇静、解热作用外，还有耐缺氧、清除自由基，保护脑细胞，保护心功能的作用。（1）体外培育牛对小鼠密闭缺氧耐受力的影响组别动物数剂量给药途径成活时间XSD（min）NS1020ml/Kgig31.042.88ICCB800mg/Kg37.572089*1200mg/Kg39.542.70*1600mg/Kg40.023.06*PPN20 mg/Kg38.012.95*:p0.001（2）体外培育牛对缺氧小鼠的血清及脑、心、肝组织匀浆SOD活性影响SOD（Nu/mgprc） XSD脑肝血清心931.2010.798
18、0.00115.5726.1960.449.2939.905076*94.6814.86*203.1623.73*69.878.71*: p0.005 *: p0.01（3）体外培育牛对缺氧小鼠的脑、心、肝组织及血清MDA含量的影响MDA nmol/mg（XSD）5.900.998.451.968.761.906.890.714.701.11*5.511.40*7.291.55*1.02 p0.05 *: p0.01 *: p0.001（4）缺氧小鼠脑组织超微结构改变之电镜所见对照组治疗组神经元细胞水肿，胞浆内细胞器不同程度变性，线粒体肿胀，粗面内质网扩张，核糖体数量减少，部分胶质细胞核周积液
19、，胞浆空亮，细胞器溶解，部分有髓神经纤维的髓鞘结构紊乱，部分无髓神经纤维肿胀，呈大小不等泡状，神经丝消失，见局限性神经纤维溶解灶。毛细血管管径不等，内皮细胞肿胀，胞浆内空泡增多，大部分毛细血管周围见积液性间隙。仅少量神经元细胞轻微变性。线粒体轻度肿胀，粗面内质网无明显扩张。核糖体数量基本正常，少数胶质细胞核周间隙增宽，有髓及无髓神经纤维的髓鞘结构规则。毛细血管内皮细胞无明显肿胀，毛细血管周围无积液性间隙。体外培育牛黄按6.55-16.00剂量予小鼠灌胃给药，动物出现活动减少，摄食量下降，排黄色软便，部分动物死亡。死亡动物肠胃空虚，轻度胀气。存活动物于给药后1-3天内恢复正常，LD50为9.0（
20、8.0-10.1）g/kg，是临床用量（0.3g/60kg或5mg/kg）的1800倍。大鼠口服体外培育牛黄的LD5010g/kg，是临床用量的2000倍以上。受试动物按性别和体重随机分组。口服途径按体重剂量一次灌胃给予受试动物，小白鼠的给药容量为40ml/kg，大白鼠为25ml/kg，对照组给予等量蒸馏水。腹腔注射途径按体重剂量一次腹腔注射给药，给药容量为20ml/kg，对照组予以等量生理盐水。给药后即观察动物的活动、摄食、呼吸、大便、毛色及死亡情况共7天。死亡动物及时尸检；存活动物7天后处死并进行尸检。从急性毒性试验结果可以看出，体外培育牛黄给予小鼠和大鼠口服后的急性毒性很低。小鼠口服TP
21、N的LD50为9.0（8.0-10.1）g/kg，是人口服用量（0.3g或5mg/kg）的1800倍。大鼠口服TPN的LD50大于10g/kg，是人口服用量的2000倍以上。在长期毒性试验中，大鼠耐受体外培育牛黄1500mg/kg/天，达35天；犬耐受体外培育牛黄500mg/kg/天，共33天；对大鼠和犬各器官、系统的形态、结构和功能均无不良影响。用药组体重增长均高于对照组。各剂量大鼠的血红蛋白和红细胞计数均明显高于对照组。大鼠的长期毒性试验1、一般情况：逐日观察动物的毛色、精神、呼吸、进食、活动、粪便和中毒表现。每周固定时间测量记录体重一次。2、血液指标：末次给药后一天，处死动物取血做红细胞计数（RBC）、血红蛋白定量（Hb）、白细胞计数（WBC）及分类（DC）、血小板计数（Pl）和凝血时间（CT）。3、血液生化指标：谷丙转氨酸（GPT）、碱性磷酸酶（AKP）、总蛋白（TP）、
