1、饮用天然矿泉水检验方法H饮用天然矿泉水检验方法H表19大肠菌群(MPN)检索表(总接种量,其中5份10mL水样,5份1mL水样,5份水样)接种量,mLMPN/100mL接种量,mLMPN/100mL10110100001014001210260024103800351041000471051200591104010211160114112801261131001371141201491151401511120602041218021612210022712312023912415024*025131308030613110031713212032913315033111331703413135
2、1903515140110408141130419142150421114317043131441904415145220451715013050915115051111521705213153190531515422054171552405519200510022017表19接种量,mLMPN/100mL接种量,mLMPN/100mL10110120293152720312320142041432117205163222021073232421193242721212325312131433017214173312121519332242209333282211233432222143353
3、622317340212241934124225223422823012343322311434436232173454023320350252342235129235253523224015353372411735441242203554524323400132442540117245284022125017403252512040430252234053625326410172542941121255324122630084133130111414363021341542303164202230420421263052342232310114233831114424443121742550
4、31320430273142343133续表19接种量,mLMPN/100mL接种量,mLMPN/100mL101101432395141104334551513043452520494345952170440345229444140523120442475241504435452518044462530794456953111045041532140451485331804525653421045364535250454725401304558154117050023542220501315432805024354435050358545430504765502405059555135051
5、03355254051146553920512635541600513845551600可饮用的矿泉水矿泉水出厂水或准备饮用的矿泉水,一般不应有污染,需要经常检验可按下法进行接种。推测性检验用10mL的灭菌吸管向5支盛有10mL双料乳糖胆盐发酵培养液的试管中,每管接种10mL水样。置361培养箱中培养24h,观察每支管的产气情况,如有气体产生,则认为推测性检验阳性。证实性检验以下操作同矿泉水水源水检验。MPN值的计算例如经过证实性检验后,大肠菌群有3管阳性,从表20查得MPN为/100mL。表20用5管10mL水样时各种阳性和阴性结果组合的MPN值及其95%的可信限阳性反应管数MPN/100m
6、L95%可信限下限上限000123416516无限滤膜法测定范围本法适用于大肠菌群的测定。方法提要滤膜是一种微孔薄膜,孔径为m,能滤过大量水样,并将水中所含的细菌截留在滤膜上,然后将滤膜贴在选择性鉴别培养基上,经37培养24h后,大肠菌群细菌在滤膜上长出具有特征性的菌落,直接计数典型菌落数,计算出每100mL水样中所含的大肠菌群数。培养基和试剂远藤琼脂(品红亚硫酸钠)培养基成分蛋白胨10g酵母浸膏5g牛肉膏5g乳糖10g琼脂1520g磷酸氢二钾无水亚硫酸钠5g5%碱性品红酒精溶液20mL蒸馏水1000mL制法储备培养基的制备:先将琼脂加到500mL蒸馏水中,煮沸溶解,于另一500mL蒸馏水中,
7、加入磷酸氢二钾、蛋白胨、酵母浸膏和牛肉膏,加热溶解,倒入已溶解的琼脂,补足蒸馏水至1000mL,混匀后调PH为,再加入乳糖,分装,115灭菌20min,储存于冷暗处备用。平皿培养基的配制:将上法配制的储备培养基加热融化,用灭菌吸管按比例吸取一定量的5%碱性品红酒精溶液置于灭菌空试管中,再按比例称取所需的无水亚硫酸钠置于另一个灭菌试管中,加灭菌水少许,使其溶解后,置沸水浴中煮沸10min以灭菌。用灭菌吸管吸取已灭菌的亚硫酸钠溶液,滴加于碱性品红酒精溶液内至深红色褪成粉色为止。将此亚硫酸钠与碱性品红的混合液全部加到已融化的储备培养基内,并充分混匀(防止产生气泡),立即将此种培养基15mL倒入已灭菌
8、的空平皿内。待冷却凝固后置冰箱内备用。此种已制成的培养基于冰箱内保存不宜超过二周。如培养基已由淡粉色变成深红色,则不能再用。乳糖蛋白胨培养液成分蛋白胨10g牛肉膏3g乳糖5g氯化钠5g%溴甲酚紫乙醇溶液1mL蒸馏水1000mL制法将蛋白胨、牛肉膏、乳糖及氯化钠置于蒸馏水中加热溶解,调pH为,再加入%溴甲酚紫乙醇溶液,充分混匀,分装于装有倒管的试管中,以11520min高压灭菌,储备冷暗处备用。革兰氏染色法结晶紫染色液结晶紫1g95%酒精20mL1%草酸铵溶液80mL注:结晶紫不可用龙胆紫代替,前者是纯品,后者不是单一成分,易出现假阳性。结晶紫溶液放置过久会产生沉淀,不能再用。革兰氏碘液碘1g碘
9、化钾2g蒸馏水300mL将碘与碘化钾先进行混合,加入蒸馏水少许,充分振摇,待完全溶解后,再加入其余的蒸馏水。注:当溶液由棕色变为淡黄色时即应弃去。脱色剂:95%乙醇。沙黄复染液沙黄95%酒精10mL蒸馏水90mL将沙黄溶解于酒精中,待完全溶解后加入蒸馏水。染色法将培养1824h的培养物涂片。将涂片在火焰上固定,滴加结晶紫染色液,染1min,水洗。滴加革兰氏碘液,作用1min,水洗。滴加脱色剂,摇动玻片,直至无紫色脱落为止,约30s,水洗。滴加复染剂,复染1min,水洗,待干,镜检。呈紫色者为革兰氏阳性菌;呈红色者为革兰氏阴性菌。仪器滤器。滤膜:孔径为m,直径根据滤器规格,目前常用的有和两种。抽
10、滤设备。无齿镊子。显微镜。载玻片。其他仪器同。检验步骤先将滤膜放入烧杯中,加入蒸馏水,置沸水浴中煮沸灭菌3次,每次15min。前两次煮沸后需更换水,再蒸馏水洗涤2次,以除去残留溶剂。用灭菌镊子夹取灭菌滤膜边缘部分,将粗面向上,贴放在已灭菌的滤床上,固定好滤器,加100mL水样,在负压大气压下抽滤。水样滤完后,取下滤器,用灭菌镊子夹住滤膜边缘部分,移放到远藤培养基上,滤膜截留细菌面向上,滤膜应与培养基完全贴紧,两者间不得留有气泡,然后将平皿倒置,放入37培养箱培养1824h。大肠菌群在远藤培养基上具有以下特征:紫红色,具有金属光泽的菌落;深红色,不带或略带金属光泽的菌落;淡粉色,中心较深的菌落。
11、挑取可疑菌落涂片、染色、镜检。凡系革兰氏阴性无芽胞杆菌,再接种乳糖蛋白胨培养液,经37培养24h后,如产酸产气则判定为大肠菌群阳性。计算滤膜上的大肠菌群菌落数,以每100mL水样中的大肠菌群数报告之。数出的总大肠菌群菌落数100每100mL水中大肠菌群菌落数-(97)过滤的样品量(mL)附录A饮用天然矿泉水参考指标检验方法(参考件)A1铍桑色素荧光分光光度法测定范围本法适用范围为g/L,最低检测浓度为g/L。方法提要铍在碱性溶液中与桑色素反应生成黄绿色的荧光化合物,测定荧光强度定量。低量的铍在pH58与乙酰丙酮形成可被四氯化碳萃取的化合物予以富集。试剂刚果红试纸。盐酸溶液50g/L,1mol/L和6mol/L三种浓度。氢氧化钠(40g/L):4g氢氧化钠溶于100mL纯水中。乙二胺四乙酸二钠溶液(100g/L):称取10g乙二胺四乙酸二钠,置于50mL烧A
