1、四、方法原理 本产品采用双抗体夹心法原理进行检测。用抗-HBs抗体包被磁微粒，用 辣根过氧化物酶标记的抗-HBs抗体制备酶结合物。通过免疫反应形成抗体- 抗原-抗体-酶复合物，该复合物催化发光底物发出光子，发光强度与HBsAg 含量成正比。五、标本的采集与处理5.1. 采用正确医用技术收集血清/血浆样本，推荐对于使用普通管采血的样 本，离心前样本应37孵育至少1h；对于使用促凝管采血的样本，离 心前样本应37孵育至少0.5h，离心条件10000g/min，10min；对于使 用抗凝管采血的样本，离心条件10000g/min，10min。抗凝管推荐使用 肝素作为抗凝剂，避免使用枸橼酸钠和EDTA
2、抗凝剂。 5.2. 样本中的沉淀物和悬浮物可能会影响试验结果，应离心除去，并确定样 本未变质方可使用。第2 页 共62 页 5.3.溶血或脂血的样本不能用于测定。 5.4. 样本收集后在室温放置不可超过8小时；如果不在8小时内检测需将样 本放置在28的冰箱中；若需48小时以上保存或运输，则应冻存于 -20以下，避免反复冻融。使用前恢复到室温，轻轻摇动混匀。 5.5.避免反复冻融。六、标本拒收标准 1）严重溶血、脂血 2）标本标识不明 七、仪器与材料 7.1.仪器：AutoLumo A2000化学发光检测仪 7.2.试剂：AutoLumo A2000专用乙型肝炎病毒表面抗原试剂 7.2.1.试剂
3、准备：本试剂为即用型试剂，可以直接放在仪器上。 7.2.2.试剂盒于28储存，有效期12个月。 7.2.3.试剂盒应防止冷冻，避免强光照射。 7.2.4.试剂盒开启使用后，28保存可使用1个月。 7.2.5.试剂盒可适应1周内常温运输，运输过程中应轻拿轻放，避免重压，防止雨雪淋湿和阳光曝晒。 7.2.6.试剂机载稳定性 7.2.6.1.试剂包（磁微粒混悬液、酶结合物）竖直向上存放， 在2 10C环境下冷藏保存2小时后，才可上机使 用。首次使用后，机载或在2 10C 环境下稳定期 为28天。 7.2.6.2.校准品开瓶后保存于28C，稳定期可维持1个月； 若需使用更长时间，应根据需要进行分装，于
4、-20 冻存（可以保存2个月），但应避免反复冻融。八、检验方法第3页 共62 页 8.1.消耗品检查： 8.1.1. 根据仪器说明装载或检查消耗品是否充足。 8.1.2.参考相应的仪器系统操作说明。 8.2.试剂包装载： 8.2.1.试剂包首次上机前，轻轻地倒转试剂包多次以混合新试剂包内的成 份，避免产生气泡。不要倒转已经打开的试剂包。 8.2.2.仪器通过扫描试剂包条码自动获取测试所需的参数。 8.2.3.如果特殊情况下仪器无法识别条码，可以手工输入。 8.2.4.参考相应的仪器系统操作说明。 8.3.测试： 8.3.1.将样本容器放置在仪器配套样本架中，每次测试样本量为150l。 8.3.
5、2.装载样本架，在仪器软件界面中输入样本信息。 8.3.3.选择“运行”开始测试，系统自动进行试验操作。 8.3.4.参考相应的仪器系统操作说明。 8.4.定标： 8.4.1.仪器通过扫描条码卡自动获取测试所需的参数。 8.4.2.如果特殊情况下仪器无法识别条码卡，可以手工输入。 8.4.3.将校准品转移至样本容器，放置在仪器配套样本架中。 8.4.4.装载样本架，在仪器软件界面中输入定标信息。 8.4.5.选择“运行”开始测试，生成定标曲线。 8.4.6.定标曲线有效期为28天。 8.4.7.参考相应的仪器系统操作说明。 8.4.8.出现以下情况需要进行定标曲线的重新生成： 8.4.8.1.
6、质控结果经重复测定后仍然超出范围； 8.4.8.2.试剂盒或发光底物液的批号更改；第4 页 共62 页 8.4.8.3.超出定标曲线的有效期限； 8.4.8.4.仪器重要部件更换或维修。 8.5.质控： 8.5.1.使用至少两个分析物水平的质控品进行质控。 8.5.2.出现以下情况需要进行质控： 8.5.2.1.测试试剂盒使用超过24小时； 8.5.2.2.更换新的试剂盒； 8.5.2.3.重新生成定标曲线； 8.5.2.4.停机。 8.5.3.各实验室需根据自身情况建立适合本实验室的可接受范围，以确 保合适的测试性能。 8.5.4.质控值应落在规定的范围内，如出现失控，应采取纠正措施。 8.
7、6.稀释 8.6.1.使用手工稀释或仪器自动稀释功能，仪器自动稀释的最大比例为 1:100。 8.6.2.手工稀释使用系统通用样品稀释液进行稀释，将得到的检测结果 乘以稀释倍数计算最终结果。 8.6.3.选择仪器自动稀释功能，可以得到准确的检测结果，参考相应的仪 器系统操作说明以及帮助系统。 8.6.4.稀释后的样本含量应不低于0.05IU/ml。 8.7.结果计算： 选择适当的曲线拟合方式，本试剂盒推荐采用四参数拟合方式，以校 准品浓度值为x轴，以校准品发光强度log值为y轴建立定标曲线。根据 待测样本的发光强度值回算相应的浓度值。仪器自动操作系统可通过存储 的定标曲线以及样本测试得到的发光
8、值自动计算样本测试结果。第5页 共62页九、参考范围 检测1040例样本，用ROC曲线方法确定正常参考值为0.05IU/ml； 建议各实验室根据自己实际条件及接触人群建立正常参考值。本试剂盒 仅作为诊断的辅助手段之一，供临床医生参考。十、检验结果的解释 10.1. 用本试剂盒检测结果浓度值为0.040.06IU/ml的弱反应性可疑样本， 建议复孔重新测定，如果双孔复查浓度值均小于0.05IU/ml，结果判为 阴性，如果单份或双份测定不低于0.05IU/ml，结果判为有反应性，有 条件的实验室建议做中和确证实验，同时动态观察。 10.2.本试剂盒测定范围为0.05250IU/ml，浓度值大于25
9、0IU/ml的样本， 其结果是通过定标曲线外延得出的计算结果。如果要获得其更准确的结 果，需对样本进行稀释后重新测定，推荐稀释比例为1/500，使用系统 通用样品稀释液进行稀释。稀释后仍超出线性范围的建议手工稀释并增 大稀释比例。 10.3.由于方法学或免疫特异性等原因，使用不同生产商的试剂对同一份样 本进行检测可能会得到不同的检测结果，因此不同试剂检测所得结果 不应直接相互比较，以免造成错误的医学解释，建议实验室在检测报 告中注明所用试剂特征。系列监测中，如果改变试剂类型，则应进行 额外的连续性检测并与原有试剂结果进行平行比较以重新确定基线 值。十一、检验方法的局限性 11.1.本试剂盒仅作
10、为诊断的辅助手段之一，临床诊断应与临床检查、病史 及其他检测相结合。 11.2.样本中的异嗜性抗体或类风湿因子会干扰检测结果。此类样本不适合 用本试剂盒进行检测。第6 页 共62 页 11.3.溶血、脂血或浑浊的样本可能会造成不正确的检测结果。十二、产品性能特征 12.1.阴性参考品符合率：检测国家阴性参考品20份，不出现假阳性。 12.2. 阳性参考品符合率：检测国家阳性参考品3份，不出现假阴性。 12.3.最低检出量：用国家灵敏度参考品进行检测，符合相应参考品要求。 12.4.精密性：10孔平行检测浓度值为0.5IU/ml样本，CV%15.0%；10 孔平行检测浓度值为1.5IU/ml样本
11、，CV%10.0%。 12.5.线性：在0.05IU/ml250IU/ml范围内，线性相关系数（r）不低于 0.9900。 12.6.分析特异性：与抗-HIV（1+2）、抗-HCV、抗-HAV等病毒性抗体无 交叉反应。2.5mg/ml血红蛋白、200mg/L胆红素、20g/L甘油三酯和 500mg/dl胆固醇对检测结果无显著干扰。 十三、参考文献 1.Lok ASE, McMahon BJ. AASLD practice guidelines：chronic hepatitis B. Hepatology, 2004, 34: 1225-1241. 2.Lavanchy D. Hepatiti
12、s B virus epidemiology, disease burden, treatment, and current and emerging prevention and control measures. J Viral Hepat, 2004, 11:97-107. 3.巴德年,1998年.当代免疫学技术与应用.北京医科大学中国协和医科大学联 合出版社. 4.陶义训, 1997年第二版,免疫学与免疫学检验.人民卫生出版社. 5.中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会. 病毒性肝炎防治方案.中华传染病杂志, 2001, 19:56-62.乙型肝炎病毒表面抗体定量测定第7页 共
13、62 页1、目的：规范乙型肝炎病毒表面抗体测定的标准操作程序，确保乙型肝炎病毒表面 抗体测定的结果准确有效。2、适用范围： 表面抗体。 大约有3亿乙肝病毒携带者。 表面抗体（Anti-HBs）是一种保护性抗体，是乙肝感染后痊愈或趋向治愈 的象征；全程（3针）疫苗接种结束后1个月检测保护性表面抗体（Anti-HBs） 的浓度，能够判定免疫效果。关于表面抗体与保护力的关系，世界标准未完 全统一，目前普遍认为普通人群表面抗体浓度值10mIU/ml，就有足够的保 护作用；高危人群表面抗体浓度值100mIU/ml，具有足够的保护作用。肝 移植、血液透析及免疫抑制等病人定期检测表面抗体浓度值，每次检测值
14、100mIU/ml为宜。 本产品采用双抗原夹心法原理进行检测。用表面抗原包被磁微粒，用辣 根过氧化物酶标记表面抗原制备酶结合物。通过免疫反应形成抗原-抗体-酶 标抗原复合物，该复合物催化发光底物发出光子，发光强度与表面抗体的含 量成正比。第8 页 共62 页 肝素钠作为抗凝剂，避免使用枸橼酸钠和EDTA抗凝剂。5.2. 样本中的沉淀物和悬浮物可能会影响试验结果，应离心除去，并确定样5.4.样本收集后在室温放置不可超过8小时；适用于AutoLumo A2000化学发光检测仪。AutoLumo A2000专用乙型肝炎病毒表面抗体试剂 用。若 需使用更长时间，应根据需要进行分装，于-20冻第9页 共
15、62页 存（可以保存2个月），但应避免反复冻融。 8.1.1.根据仪器说明装载或检查消耗品是否充足。 8.3.1.将样本容器放置在仪器配套样本架中，每次测试样本量为50 8.4.7. 参考相应的仪器系统操作说明。第10 页 共62 页 8.5.2.4. 停机。 8.5.3.各实验室需根据自身情况建立适合本实验室的可接受范围，以确保 合适的测试性能。 8.5.4.质控值应落在规定的范围内，如出现失控，应采取纠正措施。 8.6.4.稀释后的样本含量应不低于5mIU /ml。第11 页 共62页 正常参考值：10mIU/ml 10.1. 用本试剂盒检测结果浓度值为8.012.0 mIU/ml的弱反应
16、性可疑样 本，建议双份重新测定，如果双份复查浓度值均小于10 mIU/ml，结果 判为阴性，如果单份或双份测定不低于10 mIU/ml，结果判为阳性，同 时建议动态观察。 10.2.本试剂盒测定范围为51000mIU/ml，浓度值大于1000mIU/ml的样本， 果，需对样本进行稀释后重新测定，推荐稀释比例为1/100，使用系统 11.1. 本试剂盒仅作为诊断的辅助手段之一，临床诊断应与临床检查、病 史及其他检测相结合。第12 页 共62 页 11.3. 溶血、脂血或浑浊的样本可能会造成不正确的检测结果。 十二、产品性能特征 12.1. 符合率：与SFDA批准的试剂平行检测1024份临床样本，
17、阴性符合率 99.58%，阳性符合率99.02%，总符合率99.41%。 12.2. 最低检出限：10mIU/ml。 12.3. 精密性：10孔平行检测浓度值为10mIU/ml样本，CV%15.0%；10孔 平行检测浓度值为100mIU/ml样本，CV%10.0%。 12.4.线性：在51000mIU/ml范围内，线性相关系数（r）不低于0.9900。 12.5.分析特异性：与抗-HIV（1+2）、抗-HCV、抗-HAV等病毒性抗体无交叉 反应。2.5mg/ml血红蛋白、200mg/L胆红素、10g/L甘油三酯和500mg/dl 胆固醇对检测结果无显著干扰。 12.6.HOOK效应：测定HBsAb浓度值为30000mIU/ml的样本，未出现HOOK 效应引起的假阴性结果。十三、参考文献乙型肝炎病毒e抗原定量测定第13 页 共62 页规范乙型肝炎病毒e抗原测定的标准操作程序，确保乙型肝炎病毒e抗原 测定的结果准确有效。在AutoLumo A2000化
