1、3.加去离子水将溶液定容至100ml4高温高压灭菌后，室温保存。5）PBS Buffer137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO41. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。NaCl 8g KCl 0.2g Na2HPO4 1.42g KH2PO4 0.27g 2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。3. 滴加浓盐酸将pH值调节至，然后加入去离子水将溶液定容至1 L。4. 高温高压灭菌后，室温保存。上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。6）10 M 醋
2、酸铵 10 M 醋酸铵100 ml1. 称量 g醋酸铵置于100200 ml烧杯中，加入约30 ml的去离子水搅拌溶解。2. 加去离子水将溶液定容至100 ml。3. 使用 mm滤膜过滤除菌。4. 密封瓶口于室温保存。醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。7）苯酚/氯仿/异戊醇 （25 : 24 : 1）1. 说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/氯仿/异戊醇（25 : 1）。氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。2. 配制方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24 : 1）混合均匀后，移入棕色玻璃瓶中4保存。8）10
3、 （W/V） SDS10 （W/V）SDS1.称量10g高纯度的SDS置于100-200ml烧杯中，加入约80ml的去离子水，68加入溶解 2.滴加浓盐酸调节pH值至3.将溶液定容至100ml后，室温保存。9）2 N NaOH2 N NaOH1. 量取80 ml去离子水置于100200 ml塑料烧杯中（NaOH溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂）。2. 称取8 g NaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。3. 待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至100 ml。4. 将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。10） N HCl N HCl1. 在 ml的去离子水中加入 ml的浓盐
4、酸（ N），均匀混合。2. 室温保存。11）5 M NaCl5 M NaCl1. 称取292.2 g NaCl置于1 L烧杯中，加入约800 ml的去离子水后搅拌溶解。2. 加去离子水将溶液定容至1 L后，适量分成小份。3. 高温高压灭菌后，4保存。11）20 （W/V） Glucose20 （W/V） Glucose1. 称取20 g Glucose置于100200 ml烧杯中，加入约80 ml的去离子水后，搅拌溶解。12）Solution I（质粒提取用）25 mM Tris-HCl（, 10 mM EDTA, 50 mM Glucose1M Tris-HCl（） 25ml 0.5M ED
5、TA（） 20Glucose（1.11M） 45ml dH2O 910ml 2. 高温高压灭菌后，4保存。3. 使用前每50 ml的Solution I中加入2 ml的RNase A（20 mg/ml）。13）Solution II（质粒提取用）200mM NaOH，1（W/V）SDS500ml1.量取下列溶液，置于500ml烧杯中 10 SDS 50ml2N NaOH 50ml 2.加灭菌水定容至500ml，充分混匀 3.室温保存，此溶液保存时间最好不要超过一个月 SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌14）Solution III（质粒提取用）3 M KOAc, 5 M CH3COOH500 ml
6、1. 称量下列试剂，置于500 ml烧杯中。KOAc 147g CH3COOH 2. 加入300 ml去离子水后搅拌溶解。3. 加去离子水将溶液定容至500 ml。4. 高温高压灭菌后，4保存。15）0.5 M EDTA0.5 M EDTA称取 g Na2EDTA2H2O，置于1 L烧杯中。2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌。3. 用NaOH调节pH值至（约20 g NaOH）。pH值至时，EDTA才能完全溶解。4. 加去离子水将溶液定容至1 L。5. 适量分成小份后，高温高压灭菌。6. 室温保存。16）1 M DTT1 M DTT20 ml1. 称取 g DTT，加入到50 ml塑
7、料离心管内。2. 加20 ml的 M NaOAc（，溶解后使用 mm滤器过滤除菌。3. 适量分成小份后，-20保存。17）10 mM ATP 10 mM ATP1. 称取121 mg Na2ATP3H2O，加入到50 ml塑料离心管内。2. 加20 ml的25 mM Tris-HCl（，搅拌溶解。一.常用贮液与溶液1mol/L亚精胺（Spermidine）: 溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20。1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：将77.1g
8、乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用孔径的滤膜过滤除菌。10mg/ml牛血清蛋白（BSA）：加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于水中（为减少变性， 须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20。1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加水，分成小份贮存于-20。或转移100mg的二硫苏糖醇 至微量离心管，加的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。8mol/L乙酸钾（potassium acetate）：溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定
9、容到100ml。1mol/L氯化钾（KCl）：溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。3mol/L乙酸钠（sodium acetate）：溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至，再加水定容到100ml。L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（L），混合后形成EDTA的三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。1mol/L HEPES：将溶于约90ml的水中，用NaOH调pH（），然后用水定容至100ml。1mol/L HCl：加的浓盐酸至的水中。25mg/ml IPGT：溶解250m
10、g的IPGT（异丙基硫代-D-半乳糖苷）于10ml水中，分成小份贮存于-20。1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCl26H2O于足量的水中，定容到100ml。100mmol/L PMSF：溶解174mg的PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中，定容到10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹 或贮存于-20。20mg/ml蛋白酶K（proteinase K）：将200mg的蛋白酶L加入到水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。10mg/mlRnase（无DNase）（DNasefree RNase）：溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中（pH ）。溶解后
11、于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用1mol/L的TrisHCl调pH至，于-20贮存。（配制过程中要戴手套）5mol/L氯化钠（NaCl）：溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至100ml。10N氢氧化钠（NaOH）：溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中（磁力搅拌器搅拌），氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。10SDS（十二烷基硫酸钠）：称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1L。2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）：溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中使终体积为100ml。100三氯乙酸（TCA）:在装有500
12、gTCA的试剂瓶中加入100ml水，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。（稀释液应在临用前配制） Xgal（5-溴-4-氯-3-吲哚-半乳糖苷）：溶解25mg的Xgal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF）,用铝箔包裹装液管，贮存于-20。100Denhardt试剂（Denhardts regent）成分及终浓度 配制100ml溶液各成分的用量 2聚蔗糖（Ficoll，400型） 2聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40） 2BSA（组分V） 水 2g 加水至总体积为100ml 依照上表称取各组分，溶于水中定容。过滤除菌及杂质，分装成小份于-20贮存。10标准DNA连接酶缓冲液（standard DNA ligas
13、e buffer）（粘端、平端连接）配制10ml溶液各成分的用量 L Tris-HCl100mmol/L MgCl2100mmol/L DTT2mmol/L ATP5mmol/L 盐酸亚精胺（可选） ml BSA（组分V）（可选） 5ml 1mol/L 贮液 1ml 1mol/L 贮液 200ul 100 mmol/L 贮液 50ul 1 mmol/L 贮液 10 mg/mL 贮液 将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于-20 。100 mmol/L dNTP 溶液（dNTP solutions） 可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液，-80可贮存至少6个月。10mmol/L dNTP混合
14、液配制20ul溶液各成分的用量 10mmol/L dATP10mmol/L dCTP 10mmol/L dGTP10mmol/L dTTP2ul 100 mmol/L dATP 贮液 2ul 100 mmol/L dCTP 贮液 2ul 100 mmol/L dGTP 贮液 2ul 100 mmol/L dTTP 贮液 12ul 20PEG 8000/2.5M NaCl质量浓度为20聚乙二醇 L 氯化钠 20g 50ml 5 mol/L 氯化钠 或 14.6g 固体氯化钠 补足100ml 加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中，加水至终体积100ml，用磁力搅拌器搅拌溶解。20SSC配制1L溶液各成分
15、的用量 300mmol/L 柠檬酸三钠（二水） 3mol/L 氯化钠 88.2g 175.3g 补足1L 溶解柠檬酸三钠（二水）和氯化钠于约0.9L水中，加几滴10N NaOH溶液调pH为，用水补足体积至1L。DEPC（焦碳酸二乙酯）处理水 加100ul DEPC 于 100ml 水中，使DEPC的体积分数为。在37温浴至少12h，然后在15 psi 条件下高压灭菌20min，以使残余的DEPC失活。DEPC会与胺起反应，不可用DEPC处理Tris缓冲液。甲酰胺（deionized formamide） 直接购买或加Dowex XG8 混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中，用磁力搅拌器轻轻搅拌1h
16、，可去除甲酰胺中的离子。经Whatman 1号滤纸过滤除去树脂后分成小份，充氮气于-80贮存（防止氧化）。磷酸缓冲液（phosphate buffer） 按照下表所给定的体积，混合1 mol/L 的磷酸二氢钠（单碱）和1mol/L 磷酸氢二钠（双碱）贮液，获得所需pH的磷酸缓冲液。配制1 mol/L 的磷酸二氢钠（NaH2PO4H2O）贮液：溶解138g于足量水中，使终体积为1L;1mol/L 磷酸氢二钠（Na2HPO4）贮液:溶解142g于足量水中使终体积为1L。1mol/L磷酸二氢钠（ml）磷酸氢二钠（ml）最终pH值877850815775735685625565510450390330
17、280123150185225265315375435490550610670720TE（用于悬浮和贮存DNA）成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量10mmol/L TrisHCl1mmol/L EDTA水1ml 1mol/L Tris-HCl（，25） 200ul mol/L EDTA（pH ） Tris缓冲液（Tris-HCl buffer） 将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中，再根据所要求的pH（25下）加一定量的浓盐酸（），用水调整终体积至1L。浓盐酸的体积（ml）pH14213846566676二.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液电泳缓冲液50Tris-乙酸（TAE）缓冲液
18、2mol/L Tris碱 1mol/L 乙酸 100 mmol/L EDTA242g ml的冰乙酸（ mol/L） 200ml的 mol/L EDTA（pH ） 5Tris-硼酸（TBE）缓冲液445 mmol/L Tris碱 445 mmol/L 硼酸盐 10 mmol/L EDTA54g 27.5g 硼酸 20 ml的 mol/L EDTA（pH ） 染料1溴酚蓝（bromophenol blue） 加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。1二甲苯青FF（xylene cyanole FF） 溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。10mg/ml的溴化
19、乙锭（ethidium bromide） 小心称取1g溴化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管，于4贮存。凝胶上样液（gel loading solutions） 6碱性凝胶上样液（室温贮存）配制10ml溶液各成分用量 N 氢氧化钠 6 mmol/L EDTA18聚蔗糖（400型） 溴甲酚绿 二甲苯青FF300ul 10N 氢氧化钠 120ul L EDTA（） 1.8g15mg25mg补足到10ml 聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）溴酚蓝 5 mmol/L EDTA15聚蔗糖（400型） 1溴酚蓝 1二甲苯青FF100ul L EDTA（） 1.5
20、g溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）1.5g 甘油凝胶上样液（4贮存）50甘油 3ml 蔗糖凝胶上样液（室温贮存）40聚蔗糖 4g 十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液（室温贮存）200 mmol/L EDTASDS20mg4ml L EDTA100ul 10 SDS5ml三.常用培养基1） LB培养基 将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨 10g 酵母提取物 5g 氯化钠 如果需要用1N NaOH（1ml）调整pH至，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。SOB培养基 0.5g 1 mol/L 氯化钾 用水补足体积到1L。分成100ml的小
21、份，高压灭菌。培养基冷却到室温后，再在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。2）SOC培养基 成分、方法同SOB培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后，除了在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外，再加2ml灭菌的1mol/L葡萄糖（18g葡萄糖溶于足够水中，再用水补足到100ml，用的滤膜过滤除菌）。3）TB培养基 12g 24g 甘油 4ml 各组分溶解后高压灭菌。冷却到60，再加100ml灭菌的170mmol/L KH2PO4/ mol/L K2HPO4的溶液（的KH2PO4和溶在足量的水中，使终体积为100ml。高压灭菌或用的滤膜过滤除菌）。4）2Y
22、T培养基 16g 5）YPD培养基 葡萄糖 用水补足体积为1L后，高压灭菌。建议在高压灭菌之前，对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加色氨酸，因为YPD培养基是色氨酸限制型培养基。为了配制平板，需要在高压灭菌前加入20g琼脂粉。四.常用抗生素1）氨苄青霉素（ampicillin）（100mg/ml） 溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20贮存。常以25ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。2）羧苄青霉素（carbenicillin）（50mg/ml） 溶解羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。3）甲氧西林（methicillin）（100mg/ml） 溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。常以ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。4）卡那霉素（kanamycin）（10mg/ml） 溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。常以10ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。5）氯霉素（chloramphenicol）（25mg/ml） 溶解250mg氯霉素
