1、A .探针 B . cDNA C .逆转录酶 D . RNA E . dNTP 11 .关于 PCR 的基本成分叙述错误的就是 A .特异性引物 B .耐热性 DNA 聚合酶 C . dNTP D .含有 Zn 2+ 的缓冲液 E .模板 12 . DNA 链末端合成终止法不需要 A . ddNTP B . dNTP C .引物标记 D . DNA 聚合酶 E .模板 13 . cDNA 文库构建不需要 A .提取 mRNA B .限制性内切酶裂解 mRNA C .逆转录合成 cDNA D .将 cDNA 克隆入质粒或噬菌体 E .重组载体转化宿主细胞 14 .标签蛋白沉淀就是 A .研究蛋白
2、质相互作用的技术 B .基于亲与色谱原理 C .常用标签就是 GST D .也可以就是 6 组氨酸标签 E .以上都对 15 .研究蛋白质与 DNA 在染色质环境下相互作用的技术就是 A .标签蛋白沉淀 B .酵母双杂交 C .凝胶迁移变动实验 D .染色质免疫沉淀法 E .噬菌体显示筛选系统 16 .动物整体克隆技术又称为 A .转基因技术 B .基因灭活技术 C .核转移技术 D .基因剔除技术 E .基因转移技术 17 .目前主要克隆的致病基因就是 A .糖尿病致病基因 B .恶性肿瘤致病基因 C .单基因致病基因 D .多基因致病基因 E .高血压致病基因 18 .基因疫苗主要就是指
3、A . DNA 疫苗 B . RNA 疫苗 C .反义核酸 D .核酶 E .小干扰 RNA 19 .目前基因治疗中选用最多的基因载体就是 A .噬菌体 B .脂质体 C .逆转录病毒 D .腺病毒相关病毒 E .腺病毒 20 .目前基因治疗多采用的方法就是 A .基因增补 B .基因置换 C .基因矫正 D .基因灭活 E .基因疫苗 （二） B 型题 A . Southern blotting B . Northern blotting C . Western blotting D . dot blotting E . in situ hybridization 1 .不需要电泳、转膜等程
4、序 2 .电泳前不需进行限制性内切酶消化 3 .靠电转移完成生物大分子的转移 4 .直接在组织切片或细胞涂片上进行杂交 A .逆转录 PCR B .原位 PCR C .实时 PCR D .多重 PCR E . RFLP 5 .将目的基因扩增与定位相结合 6 .能动态检测反应过程中的产物量 7 .将 RNA 的逆转录与 PCR 反应联合应用的一项技术 8 .在同一反应中采取多对引物 A .功能克隆 B .定位克隆 C .转基因技术 D .核转移技术 E .基因剔除 9 .也叫基因靶向灭活 10 .该技术中,被导入的目的基因称为转基因 11 .从对基因编码产物的功能的了解出发克隆致病基因 A .基
5、因疫苗 B .基因矫正 C .基因置换 D .基因增补 E .基因失活 12 .目前基因治疗采用最多的方法就是 13 .将致病基因的异常碱基进行修正的基因治疗方法就是 14 .将正常基因经体内基因同源重组原位替换致病基因的基因治疗方法就是 15 .利用特定的反义核酸阻断变异基因异常表达的基因治疗方法就是 A .酵母双杂交技术 B .标签蛋白沉淀 C .电泳迁移率变动测定 D .染色质免疫沉淀 E .荧光共振能量转换效应分析 16 .凝胶阻滞实验 17 .需要设计诱饵基因 18 .近年该技术与芯片技术结合在一起,成为一项鉴定特定核蛋白的 DNA 结合靶点的新技术 （三） X 型题 1 .核酸探针
6、可以就是 A .人工合成寡核苷酸片段 B .基因组 DNA 片段 C . RNA 片段 D . cDNA 全长或部分片段 E .核苷酸 2 .核酸分子杂交可以形成的杂化双链有 A . DNA/DNA B . RNA/RNA C . DNA/RNA D .寡核苷酸 /RNA E .寡核苷酸 /DNA 3 . PCR 技术主要用于 A .目的基因的克隆 B .基因的体外突变 C . DNA 与 RNA 的微量分析 D . DNA 序列测定 E .基因突变分析 4 .分子杂交技术的原理涉及 A .分子杂交特性 B .基因文库 C .印迹技术 D .生物芯片 E .探针技术 5 .关于 DNA 链末端
7、合成终止法正确的就是 A .需加入的链终止剂 ddNTP B . dNTP 需要标记 C .引物也需要标记 D .又称 Sanger 法 E . ddNTP 缺乏 5 -OH 6 .基因组 DNA 文库建立需要 A .基因组进行限制性内切酶消化 B . DNA 片段克隆到相应载体中 C .重组体感染宿主菌 D .筛选目的基因可以通过核酸分子杂交的方法进行 E .以 噬菌体为载体的人基因组 DNA 文库的克隆数目至少应在 10 6 以上 7 .用于构建基因组 DNA 文库的载体有 A .酵母人工染色体 B .粘粒 C . 噬菌体 D .腺病毒 E .脂质体 8 .基因诊断较常规诊断其特点有 A
8、.属于病因诊断 B .特异性强 C .适用范围窄 D .灵敏度高 E .有放大效应 9 .基因失活的常用技术包括 A .基因疫苗 B .核酶 C .小干扰 RNA D .反义核酸 E .基因置换 10 .克隆羊多莉的产生属于 A .同种异体细胞转移技术 B .同种异体细胞核转移技术 C .试管内受精 D .无性繁殖 E .同种异体细胞转基因技术 11 .疾病动物模型可用于 A .探讨疾病的发生机制 B .克隆致病基因 C .新治疗方法的筛选系统 D .新药物的筛选系统 E .新疾病模型的筛选系统 12 .蛋白质芯片主要应用于 A .蛋白质结构的研究 B .蛋白质表达谱的研究 C .蛋白质功能的
9、研究 D .蛋白质之间的相互作用研究 E .疾病的诊断与新药的筛选 13 .研究蛋白质相互作用的技术包括 A .标签蛋白沉淀 B .酵母双杂交 C .凝胶阻滞实验 D .噬菌体显示筛选系统 E . DNA 印迹 14 .基因治疗的基本程序包括 A .治疗性基因的选择 B .基因载体的选择 C .靶细胞的选择 D .基因转移 E .回输体内 15 .目前可用作基因治疗的基因载体包括 A .腺病毒相关病毒 B .噬菌体 C .腺病毒 D .逆转录病毒 E .粘粒 二、就是非题 1 . Southern blot 主要用于 RNA 的定性与定量分析。 2 .蛋白质印迹分析技术中蛋白质的转移,可以用电
10、转移,也可以靠毛细作用转移。3 .实时 PCR 技术与普通 PCR 技术相比,它可以动态监测反应过程中产物的量。4 . Sanger 法在测定核酸序列时,反应管中加入的 dNTP 仅标记一种即可。5 .生物芯片可以就是 DNA 芯片、 cDNA 芯片或蛋白质芯片。6 .酵母双杂交技术就是分析 DNA 蛋白质相互作用的一项重要技术。7 .核转移技术,就是指将动物体细胞核全部导入另一个体去除了胞核的卵细胞内,使之发育成个体。8 .基因矫正就是用正常的基因通过体内基因同源重组,替换致病基因来达到治疗目的。9 .目前基因治疗多采用基因增补的方式。10 . RNA 印迹技术中, RNA 分子在转移前需进
11、行限制性内切酶切割。11 . PCR 反应中变性主要就是使模板 DNA 完全变性为单链。12 .实时 PCR 技术中, TagDNA 聚合酶在链延伸过程中遇到荧光探针,可发挥 3 5 核酸外切酶活性。13 .酵母双杂交系统可用于证明两种已知基因序列的蛋白质可以相互作用的生物信息学推测。14 .转基因技术即动物克隆技术,就是无性繁殖。15 .内源基因结构突变发生在生殖细胞可引起恶性肿瘤。16 .基因转移与基因剔除技术在医学中最重要的用途就是建立疾病动物模型。17 .定位克隆就是指从对基因编码产物的功能的了解出发来克隆致病基因。18 .目前 DNA 序列分析就是找出患者有关基因变异所在的最为直接与
12、确切的基因诊断法。三、填空题 1 .分子杂交就是利用 DNA 与 这一基本性质来进行 DNA 或 RNA 定性、定量分析的。2 .在印迹技术中,将 DNA 片段在琼脂糖凝胶中 使其成为 ,利用 使胶中的生物大分子转移到 膜上,使之成为固相化分子。3 .印迹技术的基本流程依次为 、 、 与 。4 . Southern blotting 主要用于 定性与定量分析,亦可用于 与 的分析。5 . Northern blotting 主要用于检测 的表达水平,敏感性较 PCR ,但其具有 与 的优点。6 . Western blotting 主要用于检测样品中 的存在、细胞中 以及 的相互作用研究等。7
13、 . PCR 的基本反应步骤包括 、 、 。8 .基因芯片适用于分析不同组织细胞或同一细胞不同状态下的 ,其原理就是基于 。9 .在转基因技术中,被导入的目的基因称为 ,目的基因的受体动物称为 。10 .标签融合蛋白结合实验主要用于证明 就是否存在直接的物理结合,分析结合的 及筛选细胞内与融合蛋白相结合的 。11 .染色质免疫沉淀法就是目前可以研究 与 相互作用的主要方法。12 .目前克隆致病相关基因主要有 与 两大策略。13 .根据受体细胞的类型不同,基因治疗分为 的基因治疗与 的基因治疗两大类。14 .目前使用的基因载体有 与 两大类。15 .在人类基因治疗实施中,导入基因的方式有 与 两
14、大类。四、名词解释 1 . probe 2 . blotting technologe 3 . gene libary 4 .核转移技术 5 . gene chip 6 . gene therapy 7 . gene diagnosis 8 .基因疫苗 9 . gene inactivation 10 . gene replacement 11 . gene augmentation 12 . PCR 13 . ex vivo 五、问答题 1 .简述印迹技术的分类及应用。2 .简述 PCR 反应体系的基本成分、 PCR 的基本反应步骤与主要用途。3 .简述 PCR 技术的基本原理。4 .简述逆
15、转录 PCR 、原位 PCR 与实时 PCR 技术的基本原理与主要区别。5 .简述 DNA 链末端合成终止法（ Sanger 法）测序的基本原理。6 .简述基因转移与基因剔除技术在医学发展中的作用。7 .简述酵母双杂交技术的基本原理及应用。8 .试述染色质免疫沉淀法基本原理及用途。9 .简述基因诊断的概念及特点。10 .何为基因治疗,目前基因治疗有哪些基本策略？11 .试述基因治疗的基本程序。12 .欲生产一种药用多肽,科学家已经将此多肽的基因与某真核表达质粒重组在一起。请您设计一个实验,利用 PCR 方法鉴定此重组表达质粒就是否含有这一多肽的基因。13 .请设计一个实验,利用酵母双杂交系统检
16、测从某一癌组织中提取、纯化的一种未知蛋白质 X 与两种已知蛋白质 a 、 b 之间就是否有相互作用。14 .请为某一单基因遗传病（低表达或不表达）的患者设计一个基因治疗方案。参考答案 1 . B 2 . C 3 . D 4 . E 5 . B 6 . D 7 . B 8 . A 9 . D 10 . A 11 . D 12 . C 13 . B 14 . E 15 . D 16 . C 17 . C 18 . A 19 . D 20 . A 1 . D 2 . B 3 . C 4 . E 5 . B 6 . C 7 . A 8 . D 9 . E 10 . C 11 . A 12 . D 13
17、 . B 14 . C 15 . E 16 . C 17 . A 18 . D 1 . ABCD 2 . ABCDE 3 . ABCDE 4 . ACE 5 . ABD 6 . ABCDE 7 . ABC 8 . ABDE 9 . BCD 10 . BD 11 . ACD 12 . BCDE 13 . AB 14 . ABCD 15 . ACD 1 . B 2 . B 3 . A 4 . A 5 . A 6 . B 7 . B 8 . B 9 . A 10 . B 11 . A 12 . B 13 . A 14 . B 15 . B 16 . A 17 . B 18 . A 1 .变性 复性
18、2 .变性 单链 毛细作用 NC 3 .电泳 转移 杂交 放射自显影或化学显色 4 . DNA 重组质粒 噬菌体 5 . mRNA 差 特异性强 假阳性率低 6 .特异性蛋白质的存在 特异性蛋白质的半定量分析 蛋白质分子 7 .变性 退火 延伸 8 .基因差异表达情况 双色荧光探针杂交 9 .转基因 转基因动物 10 .两种蛋白质分子 具体结构部位 未知分子 11 .体内 DNA 蛋白质 12 .功能克隆 定位克隆 13 .体细胞 生殖细胞 14 .病毒载体 非病毒载体 15 .直接体内疗法 间接体内疗法 1 .探针,就是指带有特殊可检测标记（放射性核素或其它化合物标记）的核酸片段,它具有特定
19、的序列,能够与待测的核酸片断互补结合,因此可用于检测核酸样品中特定的基因。2 .印迹技术,就是指将在凝胶中分离的生物大分子转移或直接放在固定化介质上并加以检测分析的技术。它包括 DNA 印迹技术、 RNA 印迹技术与蛋白质印迹技术等。3 .基因文库,就是指一个包含了某一生物体全部 DNA 序列的克隆群体。基因文库可以分为基因组 DNA 文库与 cDNA 文库。4 .核转移技术 , 即所谓动物整体克隆技术,就是指将动物体细胞核全部导入另一个体去除了胞核的激活的卵细胞内,使之发育成个体。这样的个体所携带的遗传性状仅来自一个父亲或母亲个体,因而为无性繁殖。从遗传角度上讲,就是一个个体的完全拷贝,故称
20、之为克隆。5 .基因芯片,又称 DNA 微阵列,包括 DNA 芯片 （DNA chip） 与 cDNA 芯片 （cDNA chip） ,就是指将许多特定的 DNA 片段或 cDNA 片段作为探针,有规律地紧密排列固定于支持物上,然后与待测的荧光标记样品进行杂交,杂交后用荧光检测系统等对芯片进行扫描,通过计算机系统对每一位点的荧光信号做出检测、比较与分析,从而迅速得出定性与定量的结果。6 .基因诊断,就是指利用现代分子生物学与分子遗传学的技术与方法,直接检测基因结构及其表达水平就是否正常,从而对疾病作出诊断的方法。7 .基因治疗,从广义上讲,就是指将某种遗传物质转移到患者细胞内,使其在体内发挥作
21、用,以达到治疗疾病目的的方法。8 .基因疫苗 , 主要就是指 DNA 疫苗,就是第三代疫苗。其将编码外源性抗原的基因插入到真核表达质粒中,直接导入人体内,抗原基因在一定时间内持续表达,不断刺激机体免疫系统,达到治病或防病目的。9 .基因失活,就是指将特定的序列导入细胞后,在转录或翻译水平阻断某些基因的异常表达,已达到治疗疾病的目的。10 .基因置换,就是指用正常的基因通过体内基因同源重组,原位替换致病基因,使细胞内的 DNA 完全恢复正常状态。11 .基因增补,就是指将目的基因导入病变细胞或其它细胞,不去除异常基因,而通过目的基因的非定点整合,使其表达产物弥补缺陷基因的功能或使原有的功能增强。
22、12 .聚合酶链反应,指以 DNA 分子为模板,以一对与模板序列相互补的寡核苷酸片段为引物,在 DNA 聚合酶的作用下,完成新的 DNA 的合成,重复这一过程使目的 DNA 片段得到扩增。这一技术可以将微量目的 DNA 片段扩增一百万倍以上。13 .间接体内疗法,就是指在体外将外源基因导入靶细胞内,再将这种基因修饰过的细胞回输病人体内,使带有外源基因的细胞在体内表达相应产物,已达到治疗的目的。答:印记技术就是指将在凝胶中分离的生物大分子转移或直接放在固定化介质上并加以检测分析的技术。它主要包括 DNA 印迹技术 （Southern blot） 、 RNA 印迹技术 （Northern blot
23、） 与蛋白质印迹技术 （Western blot） 等。DNA 印迹技术主要用于基因组 DNA 的定性与定量分析,例如对基因组中特异基因的定位及检测等,此外亦可用于分析重组质粒与噬菌体。RNA 印迹技术主要用于检测某一组织或细胞中已知的特异 mRNA 的表达水平,也可以比较不同组织与细胞中的同一基因的表达情况。蛋白质印迹技术,也叫免疫印迹,用于检测样品中特异性蛋白质的存在、细胞中特异蛋白质的半定量分析以及蛋白质分子的相互作用研究等。2、 简述 PCR 反应体系的基本成分、 PCR 的基本反应步骤与主要用途。组成 PCR 反应体系的基本成分包括模板 DNA 、特异性引物、耐热性 DNA 聚合酶、
24、 dNTP 以及含有 Mg 2+ 的缓冲液。PCR 的基本反应步骤包括:（1） 变性:将反应体系加热至 95 ,使模板 DNA 完全变性为单链,同时因物自身以及引物之间存在的局部双链也得以消除。（2） 退火:将温度下降至适宜温度使引物与模板结合。（3） 延伸:将温度升至 72 , DNA 聚合酶以 dNTP 为底物催化 DNA 的合成反应。PCR 主要用途: （1） 目的基因的克隆; （2） 基因的体外突变; （3）DNA 与 RNA 的微量分析; （4）DNA 序列测定; （5） 基因突变分析。3 .简述 PCR 技术的基本原理及应用。 PCR 技术类似于 DNA 的体内复制。以 DNA 分
25、子为模板,以一对与模板序列互补的寡核苷酸片段为引物,在 DNA 聚合酶作用下,利用 4 种脱氧核苷酸,完成新的 DNA 的合成,重复这一过程使目的 DNA 片段得到扩增。这一技术可以将微量目的 DNA 片段扩增 100 万倍以上。基本步骤就是首先待扩增 DNA 模板加热变性解链,随之将反应混合物冷却至某一温度,这一温度可使引物与它的靶序列发生退火,再将温度升高使退火引物在 DNA 聚合酶作用下得以延伸。这种变性 - 复性 - 延伸的过程就就是一个 PCR 循环, PCR 就就是在合适条件下的这种循环的不断重复。主要用于目的基因的克隆、基因的体外突变、 DNA 与 RNA 的的微量分析、 DNA
26、 序列测定与基因突变分析等。4、 简述逆转录 PCR 、原位 PCR 与实时 PCR 技术的基本原理与主要区别。逆转录 PCR 就是将 RNA 的逆转录与 PCR 反应联合应用的一种技术。即首先以 RNA 为模板,在逆转录酶的作用下合成 cDNA ,再以后者为模板通过 PCR 反应来扩增目的基因。原位 PCR 就是在固定液固定、石蜡包埋的组织切片或细胞涂片上的单个细胞内进行的 PCR 反应,然后用特异性探针进行原位杂交,即可检出待测 DNA 或 RNA 就是否在该组织或细胞中存在。实时 PCR 的基本原理就是引入了荧光标记分子,并使荧光信号强度与 PCR 产物量成正比,对每一反应时刻的荧光信号
27、进行实时分析,计算出 PCR 产物量。根据动态变化数据,可以精确计算出样品中最初的含量差异。逆转录 PCR 与传统 PCR 相比,将 RNA 的逆转录与 PCR 反应联合起来,可以对已知序列的 RNA 进行定性及半定量分析。常规 PCR 或 RT-PCR 技术的产物不能在组织细胞中定位原位,因而不能与特定的组织细胞特征表型相联系,原位 PCR 技术可以将目的基因的扩增与定位相结合。实时 PCR 技术与传统 PCR 反应相比,在常规正向与反向引物之间,增加了一特殊引物作为探针。该技术可以通过动态监测反应过程中的产物量,消除了产物堆积对定量分析的干扰。5、 简述 DNA 链末端合成终止法（ San
28、ger 法）的基本原理。 DNA 链末端合成终止法基本原理就是:将 2 , 3 - 双脱氧核苷酸 （ddNTP） 代替部分 dNTP 作为底物掺入到新合成的 DNA 链中,由于 ddNTP 缺乏 3 -OH ,一旦 ddNTP 掺入到 DNA 链中,就不能与下一核苷酸形成磷酸二酯键,因此合成反应终止。测定时,首先将模板分为四组,每一组分别加入引物与 DNA 聚合酶及由 32 P 或 35 S 标记的 dNTP ,启动 DNA 合成,一定时间后,每一组加入四种 ddNTP 中的一种,就可以获得在不同部位终止的、长短不同的 DNA 链,经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离这些片段,通过反射自显影就可以读出 DNA 的序列。6、 简述基因转移与基因剔除技术在医学发展中的作用。基因转移与基因剔除技术在医学中最重要的用途就是建立疾病动物模型。以往的遗传疾病动物模型主要就是自然发生或用化学药物、放射诱导等方式获得。基因转移与基因剔除技术为直接建立动物模型提
