1、急性单核细胞白血病有时须与组织细胞白血病或恶性组织细胞病鉴别，异常组织细胞的过氧化物酶呈阴性反应，而白血病性幼单核细胞和单核细胞呈弱阳性反应。2）成熟中性粒细胞过氧化物酶活性的变化：活性增高：可见于再生障碍性贫血、感染（特别是化脓菌感染）、急性淋巴细胞白血病和慢性淋巴细胞白血病。活性减低：可见于急性粒细胞白血病、慢性粒细胞白血病、急性单核细胞白血病、骨髓增生异常综合征、放射病及退化性中性粒细胞。过碘酸-雪夫反应（糖原染色、PAS）过碘酸是氧化剂，使含乙二醇的多糖类物质氧化，形成双醛基。醛基与雪夫试剂中的无色品红结合，形成紫红色化合物，附着在含有多糖类的胞质中。红色的深浅与细胞内能反应的乙二醇基
2、的量成正比。阳性结果为胞质内出现红色颗粒、块状或呈弥漫状红色。（），胞质无色，无颗粒。（），胞质淡红色或有少量红色颗粒，通常10个颗粒。 （），胞质红色或有10个以上红色颗粒。（），胞质呈暗红色或有粗大红色颗粒，可出现红色块状。（），胞质呈紫红色或有粗大红色块状。过碘酸-雪夫反应（糖原染色、PAS）模式图原始粒细胞为阴性反应；自早幼粒细胞至中性分叶核粒细胞均呈阳性反应，并随细胞的成熟，阳性反应的程度逐渐增强；嗜酸性粒细胞的颗粒本身不着色，而颗粒之间的胞浆呈红色；嗜碱性粒细胞为阳性反应，阳性反应物质为大小不一的紫红色颗粒。2）红细胞系统：幼红细胞和红细胞均呈阴性反应。3）单核细胞系统：原始单核细
3、胞为阴性反应，幼单核细胞为（）阳性反应，单核细胞为（）（）阳性反应。有时在胞质的边缘处阳性反应颗粒较粗大。4）淋巴细胞：大多数淋巴细胞为阴性反应，少数淋巴细胞可呈（）阳性反应。5）巨核细胞和血小板：巨核细胞为阳性反应，阳性反应物质为红色颗粒状，有时为红色块状。血小板为阳性反应，阳性反应物质为细颗粒状，有时为红色小块状。6）其他细胞：浆细胞一般为阴性反应，少数可呈阳性反应，阳性反应物质为红色细胞颗粒状。巨噬细胞可呈阳性反应，阳性反应物质为红色细颗粒状。1）红细胞系统：红血病或红白血病时幼红细胞可呈阳性反应，有时阳性反应幼红细胞的百分比增高，阳性反应的程度也很强，有时红细胞也呈阳性反应。缺铁性贫血
4、、珠蛋白生成障碍性贫血（又称地中海贫血）以及骨髓增生异常综合征时幼红细胞可呈阳性反应，有时阳性反应幼红细胞的百分比也较高。有时红细胞也可呈阳性反应。巨幼细胞性贫血、溶血性贫血、再生障碍性贫血和白血病等疾病时，幼红细胞为阴性反应，有时仅个别幼红细胞呈阳性反应。2）白细胞系统：急性淋巴细胞白血病时白血病性原始淋巴细胞的阳性反应物质为红色粗颗粒状或红色块状，底色不红；急性粒细胞白血病时，白血病性原始粒细胞的阳性反应物质呈均匀分布的红色细颗粒状或呈均匀红色；急性单核细胞白血病时，白血病性原始单核细胞的阳性反应物质呈红色细颗粒状，弥散分布，有时在胞浆的边缘处颗粒较粗大。帮助鉴别不典型巨核细胞和霍奇金细胞
5、或Reed-Sternberg细胞，前者呈强阳性反应，后者呈弱阳性或阴性反应。帮助鉴别戈谢细胞和尼曼-匹克细胞，前者呈强阳性反应，后者是弱阳性反应，且空泡中心为阴性反应。帮助鉴别白血病细胞和腺癌骨髓转移的腺癌细胞，后者呈强阳性反应，阳性反应物质为红色细颗粒状或粗颗粒状，有时呈红色块状。要点2：碱性磷酸酶染色（NAP）（1）原理（偶氮偶联法）血细胞内的碱性磷酸酶在pH9.49.6的条件下将基质液中的-磷酸萘酚钠水解，产生-萘酚与重氮盐偶联形成不溶性灰黑色沉淀，定位于酶活性所在之处。阳性结果为胞质内出现灰褐色至深黑色颗粒状或片状沉淀（），灰褐色沉淀，为0分。（），胞质出现灰褐色沉淀，为1分。（），
6、胞质深褐色沉淀，为2分。（），胞质中已基本充满棕黑色颗粒状沉淀，但密度较低，为3分。（），胞质全被深黑色团块沉淀所充满，密度高，甚至遮盖胞核，为4分。碱性磷酸酶染色（NAP）模式图 1）碱性磷酸酶主要存在于成熟中性粒细胞，除巨噬细胞可呈阳性反应外，其他血细胞均呈阴性反应。2）成熟中性粒细胞碱性磷酸酶（NAP）积分值的计算：在油镜下，计数100个成熟中性粒细胞（包括中性分叶核粒细胞和中性杆状核粒细胞）。分别记录其分级情况，全部阳性反应的细胞之和即为阳性率，将所有阳性反应细胞均以“”级表示后，计算其总积分值。例：某患者计数100个成熟中性粒细胞，其结果如下表：反应程度个数（个）积分（分）10204
7、08060100200阳性率为90%，积分值为200（4）参考值：成熟中性粒细胞碱性磷酸酶（NAP）的积分值为30130。由于各实验室的实验条件不同，正常值也有差异，应建立本实验室的正常值。这里的正常值仅供参考。（5）临床意义1）生理变化：年龄变化：新生儿NAP活性增高，以后下降。儿童期各年龄大致相似，成年期较儿童期活性减低，老年期更低。应激状态下的变化：紧张、恐惧、激烈运动等NAP活性可增高。月经周期中的变化：经前期增高，行经后降低，经后期恢复。妊娠期的变化：妊娠23个月的NAP积分值轻度增高，以后逐月增高，分娩时达高峰，产后则恢复正常。2）病理性变化：感染：细菌性感染时NAP积分值增高。在
8、细菌性感染中球菌性感染较杆菌性感染为高；在球菌性感染中，急性较慢性为高。病毒性感染时，NAP积分值一般无明显变化。因此本染色法有时可帮助鉴别细菌性感染和病毒性感染。血液病：慢性粒细胞白血病的NAP积分值明显减低，常为“0”，缓解时NAP积分值上升到正常。类白血病反应时的NAP积分值明显增高，中性杆状核粒细胞的碱性磷酸酶活性增强，甚至中性晚幼粒细胞也呈阳性反应。因此本法常用来鉴别慢粒和类白血病反应及观察慢粒疗效的指标之一。 急性粒细胞白血病时NAP积分值减低，急性淋巴细胞白血病时NAP积分值一般增高，因此本法可作为鉴别急粒和急淋的方法之一；急性单核细胞白血病时NAP积分值一般减低，有时可正常；粒
9、细胞白血病合并细菌性感染时NAP积分值可增高，但不如单纯细菌性感染增高的明显；再生障碍性贫血的NAP积分值增高，当病情好转时，NAP积分值可下降，完全缓解时NAP活性可恢复到正常，因此本法对再障的诊断、疗效观察和估计病情均有一定意义。阵发性睡眠性血红蛋白尿的NAP积分值减低，因此本法可作为鉴别阵发性睡眠性血红蛋白尿和再生障碍性贫血的方法之一；红细胞增多症的NAP积分值升高，而继发性红细胞增多症的NAP积分值无明显变化。因此本法可用来鉴别真性红细胞增多症和继发性红细胞增多症；骨髓增生异常综合征的NAP积分值减低。其他：红白血病的NAP积分值减低，慢性淋巴细胞白血病、骨髓纤维化、原发性血小板增多症
10、和红血病等疾病的NAP积分值可增高；NAP积分值减低，也可见于镰形细胞性贫血、严重嗜酸粒细胞增多症、家族性低磷酸酶血症。3）其他：应用肾上腺皮质激素、雌激素和ACTH后NAP积分值增高。要点3：酯酶染色酯酶存在于不同的白细胞中，根据不同的底物显示酶的活性，可将酯酶分成三种，包括萘酚-AS-D氯乙酸酯酶、-乙酸萘酚酯酶和-丁酸萘酚酯酶。萘酚-AS-D氯乙酸酯酶为粒系细胞所特有，又称特异性酯酶染色。-乙酸萘酚酯酶可存在于多种细胞，故又称非特异性酯酶染色。-丁酸萘酚酯酶主要存在于单核系细胞中，又称单核细胞酯酶。三种酯酶染色对不同细胞的识别和急性白血病的诊断与鉴别有一定意义。氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色
11、（AS-D-NCE）血细胞内的氯乙酸AS-D萘酚酯酶将基质液中的氯乙酸AS-D萘酚水解，产生萘酚AS-D，进而与基质液中的坚牢蓝GBC偶联，形成不溶性红色沉淀，定位于胞质内。属于特异性酯酶染色。阳性结果为胞质内出现红色沉淀：（）胞质无色。（）胞质呈淡红色。（）鲜红色沉淀布满胞质。（）深红色沉淀充满胞质。原粒细胞为阴性反应或阳性反应，自早幼粒细胞至成熟中性粒细胞均为阳性反应，酶活性并不随细胞的成熟而增强。嗜酸性粒细胞为阴性反应或弱阳性反应，嗜碱性粒细胞为阳性反应。2）其他血细胞单核细胞为阴性反应，个别可呈弱阳性反应。淋巴细胞、浆细胞、幼红细胞和血小板均呈阴性反应。鉴别急性白血病的类型。急性粒细胞
12、白血病时，白血病性原始粒细胞可出现阳性反应；急性单核细胞白血病及急性淋巴细胞白血病时，白血病细胞均呈阴性反应；急性粒-单核细胞白血病时，部分白血病细胞可呈阳性反应（原粒和早幼粒）。有些白血病细胞呈阴性反应（原始单核和幼单核细胞）。-醋酸萘酚酯酶染色（-NAE）血细胞内的-醋酸萘酚酯酶（-NAE）将基质液中的-醋酸萘酚水解，产生-萘酚，萘酚再与坚牢蓝B偶联，形成不溶性灰黑色或棕黑色沉淀，定位于胞质内。属于非特异性醋酸染色。染色阳性结果为胞质中出现棕黑色颗粒沉淀。-醋酸萘酚酯酶染色（-NAE）模式图 1）单核细胞系统：原始单核细胞为阴性反应或弱阳性反应；幼单核细胞和单核细胞为阳性反应，这种反应可被
13、氯化钠抑制。2）粒细胞系统：各期粒细胞为阴性反应，有时少数粒细胞可呈弱阳性反应，此反应不被氟化钠抑制。3）巨核细胞和血小板为阳性反应。4）其他血细胞：幼红细胞和淋巴细胞一般为阴性反应，有时少数细胞也可是弱阳性反应，此反应不被氯化钠抑制；浆细胞为阴性反应。单核细胞白血病时，白血病原始单核细胞可呈阳性反应，幼单核细胞和单核细胞大多呈阳性反应，此反应能被氟化钠抑制，抑制率在50%以上；急性粒细胞白血病时，白血病原始粒细胞为阴性反应，有时个别白血病原始粒细胞可呈阳性反应，但此反应不被氟化钠抑制。急性淋巴细胞白血病时，白血病原始淋巴细胞为阴性反应，有时原始淋巴细胞可出现阳性反应，主要见于T细胞型急淋；急
14、性粒-单核细胞白血病时，部分原始白血病细胞呈阳性反应，并能被氟化钠抑制，这些白血病细胞可能是单核细胞系细胞，部分白血病细胞呈阴性反应，可能是粒细胞系细胞。2）红血病和红白血病：异常幼红细胞可呈阳性反应。3）巨幼细胞贫血：巨幼细胞也可呈阳性反应。醋酸AS-D萘酚酯酶染色（AS-D-NAE）和氟化钠抑制试验血细胞内的醋酸AS-D萘酚酯酶与重氮盐偶联，形成不溶性蓝色沉淀，定位于胞质内。氟化钠抑制试验是以相同方法制备2份基质液，其中一份加入适量氯化钠，另一份不加氯化钠作对照。将已固定的2张相同标本的涂片混入这2种不同基质液中，分别作醋酸AS-D萘酚酯酶染色。属于非特异性酯酶染色。用油镜观察计数100或
15、200个被检细胞，分别计算出抑制前和抑制后的阳性率和阳性积分，按下述公式计算出抑制率。抑制率（%）（抑制前阳性率抑制后阳性率或阳性积分）/抑制前阳性率或阳性积分所谓抑制是指氟化钠试验的抑制率大于50%。染色阳性结果为胞质中出现棕黑色颗粒沉淀：（），无颗粒沉淀，为0分。），颗粒少量、稀疏，为0.5分。（），胞质内1/2区域出现颗粒沉淀，为1分。（），胞质内3/4区域出现颗粒沉淀，为2分。（），胞质内布满颗粒沉淀，为3分。（），胞质内充满浓密的颗粒沉淀，为4分。（3）正常血细胞的染色原粒细胞为阴性反应或阳性反应，自早幼粒细胞至成熟中性粒细胞均为阳性反应，一般为（）（），此反应不被氟化钠抑制。原始单
16、核细胞为阴性反应或阳性反应，幼单核细胞和单核细胞均为阳性反应，一般为（）（），此反应能被氟化钠抑制。3）淋巴细胞：淋巴细胞呈弱阳性反应，此反应不被氟化钠抑制。4）红细胞系统：早期幼红细胞可呈阳性反应，随细胞的成熟阳性反应程度逐渐减弱，此反应不被氟化钠抑制。为阳性反应。帮助鉴别急性白血病的类型。急性粒细胞白血病时，白血病原始粒细胞可呈阳性反应，此反应不被氯化钠抑制。急性单核细胞白血病时，白血病原始单核细胞可呈阳性反应，幼单核细胞和单核细胞为阳性反应，此反应被氯化钠抑制。急性粒-单核细胞白血病时，部分白血病细胞的阳性反应可被氟化钠抑制，部分阳性反应不被氯化钠抑制。碱性-丁酸萘酚酯酶染色（-NBE）
17、血细胞内的-丁酸萘酚酯酶（-NBE）在pH碱性的条件下水解基质液中的-丁酸萘酚，释放出-萘酚，后者与基质液中的重氮盐偶联形成不溶性的有色沉淀，定位于细胞质内酶所在的部位。本试验常用的重氮盐为坚牢紫酱GBC，形成的有色沉淀为红色。-NBE主要存在于单核细胞中，其阳性产物能被氟化钠抑制，而其他细胞系列的阳性产物不能被氟化钠抑制。属于单核细胞酯酶染色。阳性结果为胞质中出现蓝色颗粒。各期粒细胞均呈阴性。分化差的原单细胞呈阴性，分化好的原单细胞呈阳性，幼稚及成熟的单核细胞呈阳性，阳性反应能被氟化钠抑制。3）淋巴细胞系统：外周血的T淋巴细胞、非T非B淋巴细胞可呈阳性，B淋巴细胞呈阴性。4）其他细胞：巨核细
18、胞、幼红细胞、浆细胞呈阴性或弱阳性；组织细胞也可呈阳性，但不被氟化钠抑制。与-NAE（醋酸萘酚酯酶）染色的临床意义相同，敏感性不如-NAE，而特异性较-NAE高，是急性白血病常用的细胞化学染色。1）辅助鉴别急性白血病细胞类型：急性单核细胞白血病：单核系细胞大多数呈阳性，阳性反应能被氟化钠抑制；急性粒细胞白血病：原粒细胞一般呈阴性；急性早幼粒细胞白血病：早幼粒细胞常呈阴性；急性粒单细胞白血病：部分白血病细胞阳性，部分白血病细胞阴性；急性淋巴细胞白血病：原始及幼稚淋巴细胞一般呈阴性。2）急性单核细胞白血病有时须与恶性组织细胞病相鉴别，异常组织细胞也可呈阳性，但阳性反应不能被氟化钠抑制。酸性磷酸酶染
19、色（ACP）血细胞内的酸性磷酸酶在酸性条件下，将基质中的磷酸萘酚AS-BI水解，释放萘酚AS-BI，萘酚AS-BI与六偶氮付品红偶联，形成不溶性红色沉淀，定位于胞质内，如果血细胞的胞质呈红色为阳性反应，无红色为阴性反应。抗酒石酸酸性磷酸酶染色是用相同方法制备2份基质液，一份再加入适量L-酒石酸，另一份不加L-酒石酸。取两张相同标本的涂片，分别用这2种不同基质液作酸性磷酸酶染色。如果血细胞内的酸性磷酸酶耐L-酒石酸抑制的都呈阳性反应。如果不耐L-酒石酸抑制的，不加L-酒石酸的呈阳性反应，而加L-酒石酸的呈阴性反应。阳性结果为胞质中出现鲜红色颗粒沉淀：（），胞质无色。（），胞质出现淡红色颗粒。（）
20、，胞质布满鲜红色颗粒。（），胞质充满深红色颗粒。粒细胞、单核细胞、淋巴细胞、巨核细胞、血小板、浆细胞、巨噬细胞呈阳性。1）帮助鉴别戈谢细胞和尼曼-匹克细胞，前者酸性磷酸酶染色为阳性反应，后者为阴性。2）帮助诊断多毛细胞白血病，多毛细胞白血病时多毛细胞的酸性磷酸酶染色为阳性反应，此酶耐L-酒石酸的抑制作用。淋巴肉瘤细胞和慢性淋巴细胞白血病的淋巴细胞，酸性磷酸酶染色也呈阳性反应，但此酸可被L-酒石酸抑制。3）帮助鉴别T淋巴细胞和B淋巴细胞，T淋巴细胞呈阳性反应，而B淋巴细胞为阴性反应。要点4：铁染色细胞外含铁血黄素和幼红细胞内的铁与酸性亚铁氰化钾发生普鲁士蓝反应，形成蓝色的亚铁氰化铁沉淀，定位于含
21、铁的部位。（2）正常血细胞的染色反应 1）细胞外铁：观察骨髓小粒中的铁，呈弥散蓝色、颗粒状、小珠状或块状。根据骨髓小粒中铁的存在方式及量将细胞外铁分为（）、（）、（）、（）、（）。细胞外铁染色真实图2）细胞内铁：观察100个中幼红细胞和晚幼红细胞计算出铁粒幼红细胞的百分比。铁粒幼红细胞是指胞质中出现蓝色铁颗粒的幼红细胞，根据蓝色铁颗粒多少、粗细分为型、型、型、型及环形铁粒幼红细胞。环形铁粒幼红细胞是指幼红细胞胞质内蓝色在5颗以上，围绕核周1/3以上者。成熟红细胞中出现铁颗粒称为铁粒红细胞。环形铁粒幼细胞（细胞内铁染色）（3）参考值（）（），大多为（）。2）铁粒幼细胞：12%44%由于各实验室的
22、实验条件不同，正常值也有差异，应建立本实验室的正常值。1）缺铁性贫血时，骨髓细胞外铁明显减低，甚至消失；铁粒幼细胞的百分率减低。经有效铁剂治疗后，细胞外铁增多；因此铁染色可作为诊断缺铁性贫血及指导铁剂治疗的重要方法。2）铁粒幼细胞贫血时，出现较多环铁粒幼细胞，铁粒幼细胞也增多，其所含铁颗粒的数目也较多，颗粒也粗大，有时还可见铁粒红细胞。因此本染色可作为诊断铁粒幼细胞性贫血的重要方法。3）骨髓增生异常综合征时铁粒幼细胞的百分比可增高，其所含铁颗粒的数目可增多，环铁粒幼细胞常见。在铁粒幼细胞难治性贫血，环铁粒幼细胞在15%以上。4）非缺铁性贫血如溶血性贫血、营养性巨幼细胞贫血、再生障碍性贫血和白血
23、病，细胞外铁正常或增高，铁粒幼细胞正常或增高。5）感染、肝硬化、慢性肾炎及尿毒症、血色病及多次输血后，骨髓细胞外铁增加。三种常用细胞化学染色在鉴别急性白血病类型中应用化学染色 急粒白血病 急单白血病 急淋白血病POX 分化差的原始细胞 （）（） （）（）（）分化好的原始细胞（）（）PAS （）或（） （）或（）弥漫性 （）成块或颗弥漫性淡红色 淡红色或颗粒状 粒状-NAE （）-（） （）其活性 （）氟化钠抑制不敏感 被氟化钠抑制过氧化酶染色判断为4阳性的标准是A.颗粒粗大、密集、分布较广，占胞质的1/22/3B.颗粒较粗、局灶分布C.颗粒成团块状，充满胞质，并覆盖胞核D.颗粒细小、弥散分布E
24、.无颗粒答疑编号700811040101【正确答案】C【答案解析】POX染色原理是血细胞内的过氧化酶分解H2O2，释出初生态氧，使无色联苯胺氧化成蓝色联苯胺，后者进一步变成棕黑色化合物，沉着于胞质内。结果判断：阳性结果为胞质内出现棕黑色颗粒。（一），无颗粒。过碘酸-雪夫反应化学染色中复染所用试剂是A.中性红B.甲基绿C.苏木精D.刚果红E.沙黄答疑编号700811040102【正确答案】B【答案解析】细胞化学染色过程基本上分固定、显示和复染三个步骤。复染的目的在于使各种细胞能显示出来以便观察。选择复染液的颜色应与有色沉淀的颜色有明显的对比度，既能使细胞结构显示又能清楚的看出细胞化学染色的结果。过碘酸-雪夫反应化学染色中复染所用试剂是甲基绿，铁染色复染常用中性红。NAP检测在下列疾病鉴别中应用正确的是A.类白血病反应与慢性粒细胞性白血病：前者明显下降且常为零分，后者明显增加B.原发性血小板增多症与继发性血小板增多症：前者无明显变化，后者常增加C.恶性淋巴瘤与恶性组织细胞病：前者常下降，后者常增加D.再生障碍性贫血和阵发性睡眠性血红蛋白尿：前者积分值增高，后者积分值减低E.真性红细胞增多症与继发性红细胞增多症：
