1、精品化学药物临床药代动力学研究技术指导原则化学药物临床药代动力学研究技术指导原则化学药物临床药代动力学研究技术指导原则二五年三月目 录一、概述1二、药代动力学研究生物样品分析方法的建立和确证2（一）常用分析方法2（二）方法学确证21、特异性32、标准曲线和定量范围33、定量下限44、精密度与准确度45、样品稳定性56、提取回收率57、微生物学和免疫学分析58、方法学质控6（三）分析数据的记录与保存61、方法建立与确认的数据72、样品分析的数据73、其他相关信息7三、药代动力学研究的具体内容7（一）健康志愿者药代动力学研究81、单次给药药代动力学研究82、多次给药药代动力学研究113、进食对口服
2、药物制剂药代动力学影响的研究134、药物代谢产物的药代动力学研究145、药物-药物的药代动力学相互作用研究14（二）目标适应症患者的药代动力学研究15（三）特殊人群药代动力学研究151、肝功能损害患者的药代动力学研究152、肾功能损害患者的药代动力学研究163、老年人药代动力学研究174、儿科人群药代动力学研究17四、结语18五、参考文献19六、著者20化学药物临床药代动力学研究技术指导原则一、概述新药的临床药代动力学研究旨在阐明药物在人体内的吸收、分布、代谢和排泄的动态变化规律。对药物上述处置过程的研究，是全面认识人体与药物间相互作用不可或缺的重要组成部分，也是临床制定合理用药方案的依据。在
3、药物临床试验阶段，新药的临床药代动力学研究主要涉及如下内容：1、健康志愿者药代动力学研究包括单次给药的药代动力学研究、多次给药的药代动力学研究、进食对口服药物药代动力学影响的研究、药物代谢产物的药代动力学研究以及药物药物的药代动力学相互作用研究。2、目标适应症患者的药代动力学研究3、特殊人群药代动力学研究包括肝功能损害患者的药代动力学研究、肾功能损害患者的药代动力学研究、老年患者的药代动力学研究和儿童患者的药代动力学研究。上述研究内容反映了新药临床药代动力学研究的基本要求。在新药研发实践中，可结合新药临床试验分期分阶段逐步实施，以期阐明临床实践所关注的该药药代动力学的基本特征，为临床合理用药奠
4、定基础。鉴于不同类型药物的临床药代动力学特征各不相同，故应根据所研究品种的实际情况进行综合分析，确定不同阶段所拟研究的具体内容，合理设计试验方案，采用科学可行的试验技术，实施相关研究，并作出综合性评价，为临床合理用药提供科学依据。二、药代动力学研究生物样品分析方法的建立和确证由于生物样品一般来自全血、血清、血浆、尿液或其他临床生物样品，具有取样量少、药物浓度低、干扰物质多（如激素、维生素、胆汁以及可能同服的其他药物）以及个体差异大等特点，因此必须根据待测物的结构、生物介质和预期的浓度范围，建立灵敏、专一、精确、可靠的生物样品定量分析方法，并对方法进行确证。（一）常用分析方法目前常用的分析方法有
5、：（1）色谱法：气相色谱法(GC)、高效液相色谱法(HPLC)、色谱质谱联用法（LCMS、LC-MS-MS，GC-MS，GC-MS-MS）等，可用于大多数药物的检测；（2）免疫学方法：放射免疫分析法、酶免疫分析法、荧光免疫分析法等，多用于蛋白质多肽类物质检测；（3）微生物学方法，可用于抗生素药物的测定。从目前发展看，生物样品的分析一般首选色谱法，如HPLC、GC法或LCMS、GCMS法，这类方法灵敏度、特异性、准确性一般都能适应临床药代动力学研究的需要，多数实验室也具备条件，因此应用最广，大约90%的药物浓度测定可以用色谱法来完成。具体选用何种分析方法应根据药物的化学结构、理化性质、仪器条件以
6、及借鉴文献方法多方面因素来考虑确定。（二）方法学确证建立可靠的和可重复的定量分析方法是进行临床药代动力学研究的关键之一。为了保证分析方法可靠，必须对方法进行充分确证，一般应进行以下几方面的考察：1、特异性(Specificity)特异性是指在样品中存在干扰成分的情况下，分析方法能够准确、专一地测定分析物的能力。必须证明所测定物质是受试药品的原形药物或特定活性代谢物，生物样品所含内源性物质和相应代谢物、降解产物不得干扰对样品的测定，如果有几个分析物，应保证每一个分析物都不被干扰。应确定保证分析方法的最佳检测条件。对于色谱法至少要考察6个不同个体的空白生物样品色谱图、空白生物样品外加对照物质色谱图
7、（注明浓度）及用药后的生物样品色谱图，以反映分析方法的特异性。对于以软电离质谱为基础的检测法（LC-MS、LC-MS-MS）应注意考察分析过程中的介质效应，如离子抑制等。2、标准曲线和定量范围（Calibration Curve）标准曲线反映了所测定物质浓度与仪器响应值之间的关系，一般用回归分析法（如用加权最小二乘法等）所得的回归方程来评价。应提供标准曲线的线性方程和相关系数，说明其线性相关程度。标准曲线高低浓度范围为定量范围，在定量范围内浓度测定结果应达到试验要求的精密度和准确度。配制标准样品应使用与待测样品相同生物介质，测定不同生物样品应建立各自的标准曲线，用于建立标准曲线的标准浓度个数取
8、决于分析物可能的浓度范围和分析物/响应值关系的性质。必须至少用6个浓度建立标准曲线，对于非线性相关可能需要更多浓度点。定量范围要能覆盖全部待测的生物样品浓度范围，不得用定量范围外推的方法求算未知样品的浓度。建立标准曲线时应随行空白生物样品，但计算时不包括该点，仅用于评价干扰。标准曲线各浓度点的实测值与标示值之间的偏差*在可接受的范围之内时，可判定标准曲线合格。可接受范围一般规定为最低浓度点的偏差在20%以内，其余浓度点的偏差在15%以内。只有合格的标准曲线才能对临床待测样品进行定量计算。当线性范围较宽的时候，推荐采用加权的方法对标准曲线进行计算，以使低浓度点计算得比较准确。3、定量下限（Low
9、er Limit of quantitation，LLOQ）定量下限是标准曲线上的最低浓度点，表示测定样品中符合准确度和精密度要求的最低药物浓度。LLOQ应能满足测定35个消除半衰期时样品中的药物浓度或能检测出Cmax的1/101/20的药物浓度。其准确度应在真实浓度的80%120%范围内，相对标准差(RSD)应小于20%。至少应由5个标准样品测试结果证明。4、精密度与准确度（Precision and Accuracy）精密度是指在确定的分析条件下，相同介质中相同浓度样品的一系列测量值的分散程度。通常用质控样品的批内和批间相对标准差（RSD）来考察方法的精密度。一般RSD应小于15，在LLO
10、Q附近RSD应小于20。准确度是指在确定的分析条件下，测得的生物样品浓度与真实浓度的接近程度(即质控样品的实测浓度与真实浓度的偏差)，重复测定已知浓度分析物样品可获得准确度。一般应在85115范围内(一般偏差应少于15)，在LLOQ附近应在80120范围内。* ：偏差=【（实测值标示值）/标示值】X100%一般要求选择高、中、低3个浓度的质控样品同时进行方法的精密度和准确度考察。低浓度通常选择在LLOQ的3倍以内；高浓度接近于标准曲线的上限；中间选一个浓度。在测定批内精密度时，每一浓度至少制备并测定5个样品。为获得批间精密度，应在不同天连续制备并测定，至少有连续3个分析批（不少于45个样品）的
11、结果合格。5、样品稳定性(Stability)根据具体情况，对含药生物样品在室温、冰冻和冻融条件下以及不同存放时间进行稳定性考察，以确定生物样品稳定的存放条件和时间，应在确保样品稳定的条件下进行测定。还应注意考察储备液的稳定性以及样品处理后的溶液中分析物的稳定性，以保证检测结果的准确性和重现性。6、提取回收率从生物样本基质中回收得到分析物质的响应值除以标准品产生的响应值即为分析物的提取回收率。也可以说是将供试生物样品中分析物提取出来供分析的比例。考察高、中、低3个浓度的提取回收率，其结果应精密并具有可重现性。7、微生物学和免疫学方法确证上述分析方法确证主要针对色谱法，很多参数和原则也适用于微生
12、物学或免疫学分析，但在方法确证中应考虑到它们的一些特殊之处。微生物学或免疫学分析的标准曲线本质上是非线性的，所以，应尽可能采用比化学分析更多的浓度点来建立标准曲线。结果的准确度是关键因素，如果重复测定能够改善准确度，则应在方法确证和未知样品测定中采用同样的步骤。8、方法学质控应在生物样本分析方法确证完成以后开始测定未知样品。在测定生物样品中的药物浓度时应进行质量控制，以保证所建立的方法在实际应用中的可靠性。推荐由独立的人员配制不同浓度的质控样品对分析方法进行考核。每个未知样品一般测定一次，必要时可进行复测。来自同一个体的生物样品最好在同一批中测定。每个分析批生物样品测定时应建立新的标准曲线，并
13、随行测定高、中、低三个浓度的质控样品。每个浓度至少双样本，并应均匀分布在未知样品测试顺序中。当一个分析批中未知样品数目较多时，应增加各浓度质控样品数，使质控样品数大于未知样品总数的5%。质控样品测定结果的偏差一般应小于15%，低浓度点偏差一般应小于20%。最多允许1/3的质控样品结果超限，但不能出现在同一浓度质控样品中。如质控样品测定结果不符合上述要求，则该分析批样品测试结果作废。标准曲线的范围不能外延，任何浓度高于定量上限的样品，应采用相应的空白介质稀释后重新测定。对于浓度低于定量下限的样品，在进行药代动力学分析时，在达到Cmax以前取样的样品应以零值计算，在达到Cmax以后取样的样品应以无
14、法定量（Not detectable, ND）计算，以减小零值对AUC计算的影响。整个分析过程应当遵从预先制订的实验室SOP以及GLP原则。（三）分析数据的记录与保存分析方法的有效性应通过实验证明。在临床报告中，应提供完成这些实验工作的相关详细资料。建立一般性和特殊性标准操作规程、保存完整的实验记录是分析方法有效性的基本要素。生物分析方法建立中产生的数据和QC样品测试结果应全部记录并妥善保存，并提供足够的可供评价的方法学建立和样品分析的数据。需提供的数据至少包括：1、方法建立与确认的数据分析方法的详细描述；仪器设备、分析条件，该方法所用对照品（被测药物、代谢物、内标物）的纯度和来源；描述测定特
15、异性、准确度、精密度、回收率、定量限、标准曲线的实验并给出获得的主要数据列表；列出批内批间精密度和准确度的详细结果；描述稳定性考察及相关数据；根据具体情况提供代表性的色谱图或质谱图并加以说明，并对所建立方法的优缺点进行说明。2、样品分析的数据样品处理和保存的情况；分析样品时标准曲线列表；用于计算结果的回归方程；各分析批质控样品测定结果综合列表并计算批内和批间精密度、准确度；各分析批包括的未知样品浓度计算结果。保存全部的原始数据资料。需主动提供20%受试者样品测试的色谱图复印件或基本原始数据，包括相应分析批的标准曲线和QC样品的色谱图复印件。3、其他相关信息注明缺失样品的原因，重复测试的结果。对
16、舍弃任何分析数据和选择所报告的数据说明理由。三、药代动力学研究的具体内容（一）健康志愿者药代动力学研究本研究在期临床试验中进行，目的是探讨药物在体内吸收、分布和消除（代谢和排泄）的动态变化特点。由于各种疾病的病理状态均可不同程度的对药物的药代动力学产生影响，为了客观反映药物在人体的药代动力学特征，故多选择健康受试者。但如果试验药品的安全性较小，试验过程中可能对受试者造成损害，在伦理上不允许在健康志愿者中进行试验时，可选用目标适应症的患者作为受试者。健康志愿者的药代动力学研究包括单次与多次给药的药代动力学研究、进食对口服药物制剂药代动力学影响的研究、药物代谢产物的药代动力学研究、药物药物药代动力
17、学相互作用研究。1、单次给药药代动力学研究1.1 受试者的选择标准1.1.1 健康状况 健康受试者应无心血管、肝脏、肾脏、消化道、精神神经等疾病病史，无药物过敏史。在试验前应详细询问既往病史，作全面的体格检查及实验室检查，并根据试验药物的药理作用特点相应增加某些特殊检查。AIDS和HIV病毒感染者，药物滥用者，最近三个月内献血或作为受试者被采样者，嗜烟、嗜酒者和近二周曾服过各种药物者均不宜作为受试者。1.1.2 遗传多态性： 如已知受试药物代谢的主要药物代谢酶具有遗传多态性，应查明受试者该酶的基因型或表型，使试验设计更加合理和结果分析更加准确。 81.1.3 性别 原则上应男性和女性兼有，一般
18、男、女各半，不仅可了解药物在人体的药代动力学特点，同时也能观察到该药的药代动力学是否存在性别的差异。但应注意，女性作为受试者往往要受生理周期或避孕药物的影响，因某些避孕药物具有药酶诱导作用或抑制作用，可能影响其他药物的代谢消除过程，因而改变试验药物的药代动力学特性。所以在选择女性受试者时必须对此进行询问和了解。另外，一些有性别针对性的药物，如性激素类药物，治疗前列腺肥大药物，治疗男性性功能障碍药物及妇产科专用药等则应选用相应性别的受试者。1.1.4 年龄和体重 受试者年龄应为年满18岁以上的青年人和成年人，一般在1845岁。正常受试者的体重一般不应低于50kg。按体重指数体重（kg）身高2（m
19、2）计算，一般在1924范围内。因临床上大多数药物不按体重计算给药剂量，所以同批受试者的体重应比较接近。1.1.5 伦理学要求 按照GCP原则制订试验方案并经伦理委员会讨论批准，受试者必须自愿参加试验，并签订书面知情同意书。1.2 受试者例数一般要求每个剂量组812例。1.3 对试验药物的要求1.3.1 药物质量 试验药品应当在符合药品生产质量管理规范条件的车间制备，并经检验符合质量标准。1.3.2 药品保管 试验药品有专人保管，记录药品使用情况。试验结束后剩余药品和使用药品应与记录相符。1.4 药物剂量一般选用低、中、高三种剂量。剂量的确定主要根据期临床耐受性试验的结果，并参考动物药效学、药
20、代动力学及毒理学试验的结果，以及经讨论后确定的拟在期临床试验时采用的治疗剂量推算。高剂量组剂量必须接近或等于人最大耐受的剂量。根据研究结果对药物的药代动力学特性作出判断，如呈线性或非线性药代动力学特征等，为临床合理用药及药物监测提供有价值的信息。1.5 研究步骤受试者在试验日前进入期临床试验病房，晚上进统一清淡饮食，然后禁食10小时，不禁水过夜。次日晨空腹（注射给药时不需空腹）口服药物，用200250ml水送服。如需收集尿样，则在服药前排空膀胱。按试验方案在服药前、后不同时间采取血样或尿样（如需收集尿样，应记录总尿量后，留取所需量）。原则上试验期间受试者均应在期临床试验病房内，避免剧烈运动，禁
21、服茶、咖啡及其它含咖啡和醇类饮料，并禁止吸烟。1.6 采样点的确定采样点的确定对药代动力学研究结果具有重大的影响。用药前采空白血样品，一个完整的血药浓度-时间曲线，应包括药物各时相的采样点，即采样点应包括给药后的吸收相、峰浓度附近和消除相。一般在吸收相至少需要23个采样点，峰浓度附近至少需要3个采样点，消除相至少需要35个采样点。一般不少于1112个采样点。应有35个消除半衰期的时间，或采样持续到血药浓度为Cmax的1/101/20。如果同时收集尿样时，则应收集服药前尿样及服药后不同时间段的尿样。取样点的确定可参考动物药代动力学试验中药物排泄过程的特点，应包括开始排泄时间，排泄高峰及排泄基本结束的全过程。为保证最佳的采样点，建议在正式试验前进行预试验工作，然后根据预试验的结果，审核并修正原设计的采样点。1.7 药代动力学参数的估算和评价应有效整合各项试验数据，选择科学合理的数据处理及统计方法。如用计算机处理数据，应注明所用程序的名称、版本和来源，并对其可靠性进行确认。根据试验中测得的各受试者的血药浓度-时间数据绘制各受试者的药-时曲线及平均药-时曲线，进行药代动力学参数的估算，求得药物的主要药代动力学参数，
