1、 稳定期。由于培养基中营养物质消耗、有害代谢产物积累和PH等环境变化，细菌生长速率降低，细菌死亡数增加使生长繁殖菌数和死亡菌数处于动态平衡，细菌数量达到最大，即处于稳定期。此时期细菌合成代谢产物较多，通常维持10h。向培养基系统中补充营养物质，取走代谢产物，改善培养条件，可延长稳定期。由于代谢产物较多，是细菌生化反应试验鉴定的最佳时期。 衰亡期。细菌死亡速率逐步增加，活菌数减少，死亡数大于增加数，细菌形态不典型，甚至出现自溶，该时期的细菌不能用于细菌的鉴定和研究工作。6.细菌的生化反应：由于不同细菌所具有的酶系统各不相同，对营养物质的分解能力也不一致，因而其代谢产物不同。根据此特点，利用生化试
2、验的方法来检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的反应。7. 灭菌：破坏和去除物体上所有微生物（包括病原微生物和非病原微生物）和细菌芽孢的方法。 消毒：是破坏物体上活的病原微生物的方法，但不包括细菌芽孢和非病原微生物。 防腐：直接使用防腐剂破坏或抑制活病原微生物的方法。 无菌：防止感染病原体进入灭菌组织或物品的操作技术称为无菌操作，无菌即不存在活微生物。第四章1.病毒的大小以纳米（nm）测量单位。2.病毒的结构:分为基本结构和辅助结构。 基本结构：包括核心（含一种类型核酸即DNA或RNA）和衣壳（蛋白质结构），二者构成核衣壳。 辅助结构：包膜（功能：维护病毒体结构的完整性；与宿
3、主细胞膜亲和及融合；决定病毒种、型抗原的特异性）和其他辅助结构（纤维刺突或纤突）。第七章1.细菌标本采集原则： 尽早采集。一旦怀疑细菌感染，应及时采集标本进行细菌学检验，对细菌感染的诊断和治疗具有极其重要意义。 选择不同采集时机和标本种类。根据临床症状和流行病学资料可预测感染性疾病的病原体，根据病程和感染部位的不同，选择合适时机采集不同种类标本。 在抗生素应用前采集。感染可带来生命危险，临床医生会在细菌学检验出结果之前使用抗生素治疗，抗生素的使用将影响病原菌的检出。因此应尽可能在抗生素使用前留取标本。 遵守无菌操作。在采取如脑脊液、血液或穿刺液等正常状态下的无菌部位标本，应严格注意无菌操作，不
4、得被其他部位细菌污染。在有正常菌群寄居的部位，如口咽部、鼻咽部和泌尿生殖道等部位应采取措施避免正常菌群的和其他菌群的污染。盛放标本的容器应无菌。 正确保存和运送。采集的标本均含有病原体或潜在的病原体，必须做好标本的正确保存和运送，容器应密封不易碎，标本不得污染容器的口和外壁。采集的标本应及时运送，远距离运送时，一般应冷藏（但对脑膜炎和淋病奈瑟菌，需保温3537）。2.细菌的生理生化特征检测（其中为碳水化合物的代谢试验，为蛋白质和氨基酸的代谢试验，为碳源和氮源利用试验） 氧化发酵试验（OF试验）。又称HughLeifson （HL）试验。必须在有氧环境中才能分解葡萄糖的是专性需氧菌；无论在有氧或
5、无氧的环境中都能分解葡萄糖的是兼性厌氧菌。细菌以分子氧作为电子受体分解葡萄糖的称为氧化型；细菌以无氧降解的方式分解葡萄糖的称为发酵型；不能分解葡萄糖的细菌称为产碱型。利用此试验可区分细菌的代谢类型。用于细菌种属间的鉴别。肠杆菌科细菌为发酵型，非发酵菌通常为氧化型或产碱型。微球菌属可氧化葡萄糖，葡萄球菌属能发酵葡萄糖。 甲基红（MR）试验。 原理：细菌在代谢过程中分解葡萄糖产生丙酮酸，某些细菌可进一步将丙酮酸分解为乳酸、乙酸、甲酸等，使培养基的pH下降至4.5以下，加入甲基红指示剂出现红色（阳性）。有些细菌分解葡萄糖产酸量少，或产生的酸进一步转化为其他物质，培养基的酸碱度维持在pH6.2以上，加
6、入甲基红指示剂呈黄色（阴性）。 主要用于大肠埃希菌（阳性）和产气肠杆菌（阴性）的鉴别。沙门菌属、志贺菌属、枸橼酸杆菌属、变形杆菌属等为阳性，肠杆菌属、克雷伯菌属等为阴性。 VP试验。细菌在葡萄糖的代谢过程中生成丙酮酸，有些细菌可将丙酮酸进一步脱酸产生乙酰甲基甲醇。乙酰甲基甲醇在碱性溶液中被空气中的氧氧化为二乙酰（丁二酮），进而与培养基中的精氨酸所含的胍基发生反应，生成红色化合物（VP反应阳性）。 VP试验常与与甲基红试验一起使用，两试验的结果阳性、阴性相反。即甲基红试验为阳性的细菌，在VP试验中则为阴性（如大肠埃希菌、沙门菌属、志贺菌属）；甲基红试验为阴性的细菌，在VP试验中则为阳性（沙雷菌属
7、、阴沟肠杆菌）。 吲哚试验。细菌分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚，与试剂中的对二甲氨基苯甲酸作用，形成红色的玫瑰吲哚。 主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。 枸橼酸盐利用试验。当细菌利用铵盐作为唯一氮源，利用枸橼酸盐作为唯一碳源时，可在枸橼酸盐培养基上生长分解枸橼酸钠，使培养基变碱变成蓝色（阳性），不变色为阴性。有助于肠杆菌科细菌的鉴定。 氧化酶试验。试验结果未产生颜色反应（如肠杆菌科）为阴性，10S内产生颜色反应变为深紫色（或深蓝色）（如弧菌科、奈瑟菌属）为阳性。 卵磷脂酶试验。产生卵磷脂酶的细菌，会在菌落周围形成乳白色混浊环并扩大（阳性）。用于产气荚膜梭菌的鉴定。 Optochin敏感试验。用于肺炎
8、链球菌和甲型链球菌的鉴别。肺炎链球菌为阳性，甲型链球菌为阴性。 杆菌肽敏感试验。鉴别A群链球菌和非A群链球菌的重要试验，A群链球菌为阳性，其他群链球菌为阴性。 凝固酶试验。金黄色葡萄球菌产生凝固酶，使血浆凝固、不流动（阳性）。表皮及腐生葡萄球菌的凝固酶（阴性）。用于葡萄球菌的鉴定，常作为鉴定葡萄球菌致病性的重要指标。IMViC（I指吲哚试验，M指甲基红试验，V指V-P试验，C指枸橼酸盐利用试验）试验的两种细菌的试验结果：大肠埃希菌 + + 产气肠杆菌 3.病毒大小的测定方法：电子显微镜直接测量；超过滤法；超速离心法。4.分离培养病毒的方法主要有三种：动物接种；鸡胚培养；组织培养。 组织培养为主
9、要的病毒分离培养技术，广泛使用的组织培养技术是细胞培养。 根据细胞的来源、染色体特性和传代次数的不同，分为：原代和次代细胞培养（是正常细胞）二倍体细胞培养（是正常细胞，广泛用于病毒分离和疫苗制备）传代细胞培养（类似肿瘤细胞，常用于病毒的分离和鉴定，不能用于疫苗制备）5.病毒的理化性状的检测： 有包膜病毒对乙醚、氯仿、胆盐等脂溶剂均敏感，无包膜病毒对脂溶剂有抵抗。即乙醚敏感试验中有包膜病毒为阳性，无包膜病毒为阴性。 耐酸性试验中，不同pH值下不同病毒会被很快灭活。如肠道病毒可耐pH3，鼻病毒在pH3-5环境中很快被灭活。6.试比较病毒与细菌的异同处？ 区分细菌的芽孢和真菌的孢子（补充）7.真菌的
10、培养方法：试管培养法（最常用。常用于分离培养、菌种保存）；大培养法（培养后菌落较大，用于观察菌落，但该法容易污染，常用于纯种的培养、研究）；小培养法（又称微量培养法，是观察真菌结构及生长发育的有效方法，用于菌种鉴定），其又分为：玻片法、琼脂方块培养法、小型盖片直接培养法。第八章体外抗菌药物的敏感试验纸片扩散法（又称K-B法），被WHO推荐为定性药敏试验的基本方法。 原理：将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸收琼脂中的水分溶解后不断地向纸片周围扩散，形成递减的浓度梯度。在纸片周围抑菌浓度范围内测定菌的生长被抑制，从而形成无菌生长的透明圈即抑菌圈。抑菌圈的大小反
11、映测试菌对测定药物的敏感性，并且抑菌圈与该药物对测试菌的最低抑菌浓度（MIC）呈负相关。 抗菌药物纸片。选择直径6.35mm，吸水量20l专用药敏纸片，20保存备用，每次未用完的药敏纸片放4保存。内酰胺类抗生素纸片4保存不宜超过1周，否则效价会降低。 培养基。CLSI水解酪蛋白（MH）琼脂为药敏试验的标准培养基，pH为7.27.4，琼脂厚度4mm。 细菌接种。接种物的准备可采用液体生长法或直接菌落悬液法。用0.5麦氏比浊标准管（1.5108 CFUml）校正菌液浓度，于15min内接种完毕。各纸片紧贴在琼脂表面，给纸片中心相距24mm，纸片距平板內缘15mm。 结果解释和报告：接种正确时，细菌
12、生长的平面是连续的而抑菌圈呈均匀的环状。测量抑菌圈直径，参照CLSI标准判断结果。分为三级：.敏感（表示测试菌可被测定药物常规剂量给药后所达到的血药浓度所抑制或杀灭），.中介（指测试菌对常规剂量用药后体液或组织中的药物浓度的反应性低于敏感株，但在测定药物浓集部位的体液或高于正常给药量临床上使用有效。），耐药（指测试菌不能被在体内感染部位能达到的抗菌药物浓度所抑制）。 （K-B法试验的）实验影响因素（简答题） A.培养基质量。培养基的成分、pH、深度、硬度和湿度等对结果的准确性由直接影响。 B.药敏纸片。药敏纸片的含药量是影响抑菌圈大小的重要因素，其次还有药敏纸片的保存方式。C.接种菌量。接种菌
13、量正确与否是影响结果的重要因素之一，加大菌量使抑菌圈减小，相反可使抑菌圈扩大。D.试验操作质量，接种后贴药片的时间，孵育条件和温度、时间，抑菌圈测量工具的精确度和质控菌株本身的药敏特性是否合格，有无变异等都是影响纸片法药敏结果的因素。质量控制。采用标准菌株是进行药敏试验质量控制的主要措施。常用的临床药敏质控标准菌株有：金黄色葡萄球菌ATCC25923，大肠杆菌ATCC25922，铜绿假单胞菌ATCC27853、粪肠球菌ATCC29212 或 33186等。标准菌株的抑菌圈应在CLSI允许的预期范围内，超出控制范围应检查原因并及时纠正。每次药敏试验应将标准菌株和待测菌在同一条件下做药敏试验。稀释
14、法：是定量测定抗菌药物抑制细菌生长作用的体外方法，分为琼脂稀释法和肉汤稀释法（又分为常量肉汤稀释法和微量肉汤稀释法）。 最低抑菌浓度（MIC）：稀释法所测得的某抗菌药物能抑制待测菌肉眼可见生长的最低药物浓度。 最低杀菌浓度（MBC）：指能杀灭99.9以上测试菌量的最低药物浓度。 MBC测试的方法有培养基、药物稀释、细菌悬液接种等，与MIC相同，不同之处：当MIC无肉眼可见菌生长管中的菌落数最初接种菌落数的0.1，该管的最低药物浓度即为MBC。体外联合药物敏感试验的意义：治疗混合性感染； 预防或延迟细菌抗生素耐药性的发生； 联合用药可减少剂量以避免达到毒性剂量； 联合用药比单一用药时常常效果更好
15、。抗菌药物联合用药可出现4种结果： 拮抗作用：两种药物联合作用显著低于单独抗菌活性；即A+BA或B 无关作用：两种药物联合作用的活性等于其单独活性；即A+BA或B 累加作用：两种药物联合作用的活性等于两种单独抗菌活性之和；即A+BAB 协同作用：两种药物联合作用显著大于其单独作用的总和。即A+BAB联合抑菌试验 棋盘稀释法是目前临床实验室常用的联合抑菌定量方法 棋盘稀释法部分抑菌浓度（FIC）指数的判断标准： FIC指数0.5为协同作用； FIC指数在0.51为相加作用； FIC指数在12为无关作用； FIC 指数2为拮抗作用。第九章1.干粉培养基的质控程序： 原料的挑选（挑选各成分较稳定的试
16、剂，各种化学试剂一般选用分析纯）； 配制过程（严格按照标准操作程序手册要求进行）；培养基的一般质量控制（包括：外观、无菌试验、培养基的量、培养基的pH、性能试验）。 培养基的一般质量控制：（简答题） A外观：液体培养基应澄清、无混浊，固体培养基应无菌落生长，不干裂。 B.无菌试验：培养基制作完成后，应检测每批培养基的灭菌效果。无菌生长为合格。 C.培养基的量：斜面培养基的长度为试管长度的2/3，MH平板的厚度应为4mm，其他平板厚度一般为3mm。 D.培养基pH：配制好的培养基pH应与规定的pH相差0.2以内。 E.性能试验：每一批新配制的、新购入的培养基，均应用已知性质的标准菌株进行预测。合
17、格者方可使用。2.灭菌器用温度记录装置，或者用生物指示剂嗜热脂肪芽孢杆菌ATCC7953和ATCC12980的培养液或菌片（含菌量为5106 CFU片），化学指示剂等监视灭菌效果。 环氧乙烷消毒器使用枯草芽孢杆菌ATCC9372为生物指示剂。3.生物安全水平及适用范围 实验室的生物安全水平（BLS）是根据实验室内实验对象的危险度评估，而采取的不同程度的生物安全防护措施，以保证实验室工作人员的安全和环境免受污染。 目前BLS分为4级： 一级生物安全防护实验室（BSL1）是微生物的基础实验室，进行实验用的都是最低等级的污染物或安全的微生物，完全符合标准实验室操作，如枯草芽孢杆菌； 二级生物安全防护
18、实验室（BSL2）适用于对人或环境具有中等潜在危害的微生物，属于第三类病原微生物的如：沙门菌属、乙型肝炎病毒等的实验操作。 三级生物安全防护实验室（BSL3）的操作对象一般是可以经呼吸道传播的危险微生物，如：结核分枝杆菌，伯氏柯克斯菌。 四级生物安全防护实验室（BSL4）进行试验研究的物质是一些非常高危险性并且可以致命的有毒物质，可以通过空气传播并且现今并没有有效的疫苗或者治疗方法来处理。如（出血热病毒）第十章1.医院感染（NI）：又称医院获得性感染，指在医院内获得病原体并发生的一切感染，即只要感染因子来源于医院，就可以算作医院感染。入院48h后发生的感染通常认为是医院感染。 医院感染包括：在
19、住院期间获得感染并且发病； 在住院期间获得感染而在出院后才发病的感染。 探视者和医疗结构的工作人员在医院内获得的感染。 入院48h后发生的感染通常认为是医院感染。 医院感染不包括： 入院前已存在的感染； 住院前获得的感染，入院时已处于潜伏期的感染，住院后才发病；2.医院感染病原体特点： （简答题） 大多数为条件致病微生物； 多数病原菌对抗菌药物具有耐药性或多重耐药； 免疫功能低下患者可以感染多种病原体； 以细菌及病毒最多见，真菌感染明显增多，新病原体不断出现；第十一章1.进行血液细菌培养（血培养）的指征： 当患者发热（38）或低体温（36）时； 外周血白细胞计数超过10109L（特别是存在核左
20、移时），或绝对粒细胞减少（成熟中性粒细胞计数少于1109L）； 合并有明显感染症状体征、伴有感染病灶存在时。怀疑有脓毒血症的患者应尽早进行血液细菌培养。2.血液标本的采集要求： 采血时机。理想的血液细菌培养应该是在患者接受抗生素治疗之前进行，故采集血培养应尽可能在患者寒战或发热前； 采血部位。应行经皮外周静脉穿刺采血（一般采集肘静脉血），穿刺部位的皮肤消毒，严格无菌操作； 采血份数。对每名患者应至少从不同部位采集血培养23份，这样可以提高检测的阳性率。对怀疑亚急性感染性心内膜炎的患者，应间隔1h，连续采集3份血进行培养。同时使用需氧和厌氧培养瓶，分别注入； 采血量。通常采血量应是培养基的15或
21、110.，适当的采血量能提高阳性率； 血培养瓶的使用。根据不同的血培养方法，采集到的血液标本应立即注入血培养瓶或含有SPS的无菌容器中，并尽快进行培养，其中SPS对某些细菌（如脑膜炎奈瑟菌）有抑制作用，不能用于此类细菌的培养。进行血培养时已接受抗生素治疗的患者，应使用树脂等能中和或吸附多种抗菌药物和其他能抑制细菌生长物质的培养瓶，有助于提高检出率。无论是否已注入血液标本，血液培养瓶均不能冷藏或冷冻保存。血液标本不能直接涂片观察，因为细菌数量太少，要先做细菌增加培养。（补充）第十二章中枢神经系统感染的细菌、真菌学检查1.标本采集。采用腰椎穿刺术无菌采集脑脊液标本。做脑脊液培养时应同时采集患者血液
22、标本进行血培养。标本采集后应在常温下立即送检，培养脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌等苛养菌时，应将标本置于35保温送检。用于常规细菌检测的脑脊液量应为1ml或大于1ml；用于检测抗酸菌的脑脊液量应为5ml或大于5ml。第十三章皮肤和软组织感染的细菌学检查1.脓性分泌物是皮肤和软组织感染感染最常见的标本。采集标本时，应避免皮肤表面细菌污染。2.封闭性脓肿。局部消毒后，用注射器抽取脓液和脓肿壁标本置于厌氧运送培养基内送检。按厌氧要求送检。3.放线菌感染标本。患者感染处流出的脓液中有“硫磺样颗粒”，能提示有放线菌感染。第十四章1.病毒是急性上呼吸道感染最常见的病原体，细菌是下呼吸道感染最常见病原体，下呼吸
23、道感染少见，但更易引起严重疾病及死亡。2.痰液标本的检查方法（痰标本是下呼吸道细菌学检查的主要标本） 一般细菌、真菌涂片检查目的有： 确定标本是否适合做细菌培养，采用标本直接涂片镜检，依据低倍镜下（100）白细胞和上皮细胞数目的多少来判定（在每个低倍视野中鳞状上皮细胞10个，或白细胞25个，同时几乎见不到鳞状上皮细胞为符合要求的痰标本，否则视为不合格痰标本）。 白细胞（个低倍镜视野100） 鳞状上皮细胞 （个/低倍镜视野 判断是否合格 25 10合格（可用于细菌培养） 1025尚合格（可用于细菌培养） 不合格（重新留标本） 初步判定是否有病原菌存在，选痰液中脓、血性部分涂片，干燥固定后，进行革
24、兰氏染色镜检。第十五章1.电镜检查可用于病毒性肠道感染的检测。2.与抗生素相关性腹泻（ADD）有关的病原菌主要有：艰难梭菌、金黄色葡萄球菌、产气荚膜梭菌。3.金黄色葡萄球菌感染后呈现的是黄绿色水样粪便。第十七章 泌尿系统感染1.膀胱穿刺法是目前判断膀胱内有无细菌感染的金标准，也是尿液厌氧菌培养的最佳采集方法。常采用耻骨上膀胱穿刺抽取尿液法，该方法患者较痛苦较少用，常在怀疑厌氧菌感染时、采集中段尿困难者、中段尿培养结果与病情不符时采用。2.清洁中段尿采集法 简单、易行，是最常用的尿培养标本收集方法。3.尿液检测细菌计数的影响因素： 患者应用抗菌药物，可能抑制尿液中细菌生长； 大量输液或应用利尿剂
25、，尿量较大，尿液稀释，尿中营养成分降低，细菌繁殖速度减慢，其次还会导致尿液中的细菌被稀释； 尿液的pH： pH 5.0或 8.5 ，均可能抑制细菌生长； 尿频：细菌在尿液中的停留时间缩短，数量减少； 营养要求高的细菌生长相对缓慢； 采集尿液时，外阴部的消毒剂混入尿中，抑制细菌生长。4.尿液检测结果解释及报告尿液中一般细菌及假丝酵母菌培养菌落计数（检测结果）结果解释及报告105 CFUml提示可能为泌尿系统感染10105 CFUml需要结合患者的临床症状分析是否为泌尿系统感染10 CFUml可能为采集时污染一般一份尿液中多为检出一种病原菌，少数可能会在同份尿标本中分离到2种病原菌。第十八章1.淋
26、病奈瑟菌、衣原体、生殖道支原体、杜克嗜血杆菌的分离培养是淋病、生殖道沙眼衣原体感染、生殖道支原体感染、软下疳的实验室诊断的“金标准”，阳性者可确诊。2.分离培养与鉴定是所有目前能够培养的生殖道感染病原体实验室诊断的“金标准”。第二十二章1.葡萄球菌属多数菌株具有嗜盐性，耐盐性强。2.链球菌属 A群链球菌也称化脓性链球菌，致病力强，引起急性呼吸道感染、丹毒、软组织感染、猩红热等，还可导致急性肾小球炎、风湿热等变态反应性疾病。 B群链球菌又称无乳链球菌，主要引起新生儿败血症和脑膜炎。 肺炎链球菌又称肺炎球菌，主要引起大叶性肺炎、支气管炎、中耳炎、菌血症等。 草绿色链球菌又称甲型溶血性链球菌，是人体
27、口腔、消化道、女性生殖道的正常菌群，常不致病，偶可引起亚急性细菌性心内膜炎。最常见病原菌。3.肠球菌属 肠球菌的主要特征：革兰阳性球菌、菌落灰白色，触酶阴性。 鉴定方法：PYR试验（快速筛选鉴定试验）； 胆汁七叶苷试验（本试验不能区别肠球菌与非肠球菌，需做耐盐受试验进一步鉴定。只能用于非D群肠链球菌鉴定）； 耐盐受试验（本试验结合胆汁七叶苷试验可对肠球菌作出鉴定）。第二十三章肠杆菌科1.肠杆菌科细菌的共同特征： 革兰阴性杆菌，无芽孢，有菌毛，多数有周身鞭毛； 需氧或兼性厌氧，营养要求不高，在普通培养基上生长良好，血平板生长为灰白、湿润、光滑的菌落； 在肠道选择培养基（MAC、EMB、SS等）上
28、，因乳糖分解或不分解，生长为不同特征的菌落； 生化反应活跃，发酵葡萄糖，氧化酶阴性（邻单胞菌属除外），触酶阳性（痢疾志贺菌除外），硝酸盐还原阳性。2.大肠埃希菌的主要特征：革兰阴性菌，在肠道选择培养基上形成发酵乳糖的菌落。氧化酶阴性，硝酸盐还原阳性，葡萄糖产酸产气，在克氏双糖铁琼脂（KIA）斜面与底层均产酸、产气，H2S阴性，尿酶阴性，动力阳性，IMViC + + 3.沙门菌属肥达反应用于辅助诊断伤寒和副伤寒。4.志贺菌属 志贺菌产生的强烈内毒素作用于肠黏膜，使其通透性增高，促进肠黏膜对内毒素的吸收，导致一系列中毒症状，引起细菌性痢疾，典型细菌性痢疾的临床表现为：腹痛、发热、水样便，后转为脓血黏液便，伴有里急后重。 志贺菌典型生化反应为
