1、311对检验结果为病危报警值的处理。312方法局限性（如干扰物和/或注意事项）。313参考文献。314其他必须内容。4规程式样和内容根据实验室的大小和功能，操作规程的格式也应有不同。在小型（单一）实验室中，有一本包括所有内容的操作规程即可。在大型综合的、多部门的实验室，应有不同专业和内容的操作规程，分放于各个专业室组。整套汇集的操作规程存放于科室负责人或相应场所。41操作规程手册的式样应按实验室要求和结构来确定。但都须包括质量管理内容，以及汇集有关检验项目操作规程。每个规程须包括第3章中叙述的内容。规程手册可设计成活页本形式，便于补充和修改。411每个项目规程均应从第l页起，自成一册，便于更换
2、。412尽可能使用图表或表格形式，便于查阅。413使用编号系统，便于查阅。414可做一些查阅卡、流程图、厂商产品索引等为规程附录，反映最新动态。415鼓励使用电脑编写规程，简化编辑和修订程序。42规程的使用对象4.行政和业务主管人员依据规程具体要求，进行质量管理。规程也反映实验室开展检验技术水平。422熟练检验人员应随时对照操作规程，检查实际操作状况，保证检验质量。对出现的问题及时纠正。在进行不熟悉的项目检验时，按规程进行，实现无人指导完成不熟悉的检验。423新的检验人员和进修人员可从规程中学到详细内容，并严格按规程进行实际操作。5以产品说明书直接作为规程的要求51厂商一般都提供了详细的产品使
3、用说明。但是实验室只有确实完全按照厂商要求，使用指定牌号和型号的仪器、指定的试剂、指定校准品（包括厂商和品种的一致）以及指定具体每一步操作步骤，而且定期对仪器做保养和校准，实验室才可直接采用厂商产品说明书作为自己的操作规程。52实验室对厂商规程要求有任何变动和修改的，则产品说明书不能直接作为实验室的操作规程。53直接引用的产品说明书必须是中文的使用说明，不可用外文说明。必须包括第3章中叙述的内容。6操作规程的格式要求在实验室中各种类型、各个项目、各个操作方法的规程应确定统一格式。61每个项目、每个方法的操作规程的第1页页首，要注明：6l1操作规程项目名称。6.1.操作规程的单位及部门。613文
4、件编号。614版本。615页序和总页数。616批准实施日期。617规程有效期，以及复审计划。618规程分发部门和/或个人。619规程编写者、审批者，以及保管者。10规程修订记录。62在以后各页的眉首均有操作规程字样及文件编号，并印有横线。在每页的右下脚印有页序。63在定期复审或发现问题时，需要作部分修改的或更新的，应注明新确认的年月及版本。并由主任或主管签名认可。7操作规程的修改71在使用和复审中，需要对规程作修改或更新时，应有充分的实验资料证明确有修改的必要，并明确须修改的具体内容。72编写者完成修改后，由实验室主任审核，经审核同意，修改稿以新版本形式更换原有规程，并通知各有关部门。73实验
5、室主任应将原版本和新版本规程，以及实验资料，合并为规程修改文件，另行保管备查。附录A检验操作规程示例A1例1：血清总胆固醇（TC）测定A1.1第l页页首内容血清总胆固醇（TC）测定（酶法，CHODPAP法）XX医院检验科操作规程文件号：CGXXXX第3版共XX页1999年1月20日起实施本规程每2年复审一次复审日期：XXXX年XX月XX日复审人：XXX（签名）规程编写者：XXX审批者：批准日期：1999年1月19日文件分发部门和/或个人：医务科；保管者：院长办公室；院档案室；检验科；主任：临床化学检验室：A12原理血清中的胆固醇酯（CE）被胆固醇酯水解酶（CEH）水解成游离胆固醇（Chol），
6、后者被胆固醇氧化酶（CHOD）氧化成4胆甾烯酮，并产生过氧化氢，再经过氧化物酶（POD）催化4氨基安替比林与酚（三者合称PAP），生成红色醌亚胺色素（Trinder反应）。醌亚胺的最大吸收在500nm左右，吸光度与标本中总胆固醇呈正比。反应式如下：胆固醇酯+H2OCEH胆固醇+游离脂肪酸胆固醇+02CHOD4-胆甾烯酮十H2022H202+4氨基安替比林+酚POD昆亚胺+4H2OA13标本采集与处理对于血脂分析，特别需要强调“分析前”各个环节的质量管理。A131受检者（体检对象或病人）的准备：除总胆固醇不一定用空腹血外，测定甘油三酯、脂蛋白与载脂蛋白的病人必须空腹12h，不饮酒24h后采集血样
7、。对于体检对象抽血前应有2周时间保持平时的饮食习惯，近期内体重稳定，无急性病、外伤、手术等意外情况。妊娠后期各项血脂都会增高，应在产后或终止哺乳后3个月检验才能反映其基本血脂水平。注意有无应用影响血脂的药物，如降血脂药、避孕药、噻嗪类利尿剂、受体阻滞剂、免疫抑制剂、某些降压剂、降糖药、胰岛素及其他激素制剂等，检验以前应根据所用药物的特性停止用药数天或数周，否则应记录用药情况。对体检对象及做前瞻性观察者，还应注意采血的季节，因为血脂水平有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。应嘱体检对象在抽血前24h内不作剧烈运动。A132静脉采血：除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。体位影响水分在血
8、管内外的分布，因此影响血脂水平。例如站立5min可使血脂浓度提高5，15min提高16，故在采血前至少应静坐5min。一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1min，穿刺成功后立即松开止血带。静脉阻滞5min可使甘油三酯增高1015。A1.抗凝剂：我国多用血清作血脂检验。如用血浆，多主张用EDTANa2（1mgmL）抗凝。抗凝血浆中的总胆固醇和甘油三酯水平比血清中约低3，EDTA用量越多，血浆水平偏低越明显。但肝素抗凝不影响血浆中水平。A134标本处理：血标本应尽快送实验室。室温下放置30min45min后离心分离血清或血浆，置洁净试管加盖保存。在室温中放置不超过3h，4C保存可稳定4天。置
9、-70C可长期保存，但不可反复冻融。A14试剂A14.酶试剂：本科使用XX公司XX产品号试剂盒，为干粉试剂。临用前用水复溶即可使用。每瓶干粉用水XXml复溶。复溶后试剂内各主要成分如下：磷酸盐缓冲液pH7.704mol/L假单胞菌胆固醇酯水解酶800U/L奴卡氏菌胆固醇氧化酶400U/L辣根过氧化物酶1000U/L胆酸钠3mmol/L4氨基安替比林0.5mmol/L酚3.5mmol/L聚氧乙烯表面活性剂3g/LA1.4.2总胆固醇校准血清：也由XX公司提供，产品号为XX。A1.4.3试剂与校准血清的稳定性：未开瓶的试剂于4保存，可稳定至有效期。复溶的试剂在28可稳定7天，1525可稳定3天。如
10、在稳定期内试剂出现明显的粉红色，弃去不用oA1.5仪器，XX型号光电比色计，具500nm520nm滤光片。A1.6操作标本为及时分离的空腹血清，以及肝素或EDTA抗凝血浆。本法为终点法。测定时标本管与标准管分别加入标本与标准血清各10uL，酶试剂100mL，混匀后在37放置5min，或2025放置10min后用比色计比色，以试剂空白调零，波长500nm或520nm，颜色至少稳定60min。A.17计算A测定C=C0-（A1）A标准式中：C测定血清总胆固醇浓度，mmolL；A测定标本管吸光度；A标准标准管吸光度；Co校准血清中总胆固醇浓度，mmolL；A，18操作性能A181精密度：批内CV1.
11、5，批间CV170umol/L时有明显负干扰。抗坏血酸与甲基多巴血中浓度高于治疗水平时也使结果偏低。高甘油三酯血症（血清混浊）在本法中（血清与试剂量1：100时）一般无明显影响。注本法为中华医学会检验学会推荐的总胆固醇测定常规方法（见中华医学检验杂志1995，18：185）。试剂中两种酶胆固醇酯水解酶和胆固醇氧化酶的质量十分重要。必须能有效地水解各种脂肪酸的胆固醇酯（有些微生物来源的酯酶不易水解花生四烯酸酯），对胆固醇的氧化必须完全。选择试剂盒时应测试对血清标本总胆固醇的反应速度，好的试剂一般能在5min内（有的只要1min2min）反应达到终点。反应不能在10min内完成的试剂不宜采用，其原
12、因可能是原酶质量不好或酶用量太少，后者可使高胆固醇结果偏低。本法所用试剂，要求标本与酶试剂用量的比例为l：100，使可报告范围上限达13mmo1/L，过多地提高标本比例，会使测定上限降低。如果标本中总胆固醇浓度超过13mmolL，可用生理盐水稀释后重新测定。现在临床很少要求做游离胆固醇测定，如需做游离胆固醇测定，最简便的也是酶法，即在上述总胆固醇试剂中省去酯水解酶；一般游离胆固醇约占胆固醇的30左右。总胆固醇测定要求标准化，与国际标准取得一致，必须有准确可靠的标准参考物质（SRM）。1）酶法测定总胆固醇时，血清中大部分胆固醇是酯化的，而且血清基体对酶反应有明显影响，不可使用纯胆固醇溶液为标准。
13、国际上由美国国家标准与技术研究院（NIST）提供代号为SRM909的人参考血清，作为总胆固醇测定的一级标准；我国也已建立了国家一级标准GBW09138“人血清胆固醇标准物质”。常规使用的试剂盒必须具有可追溯于以上参考血清的校准血清，方能保证检验结果准确可靠。2）不可使用总胆固醇的定值控制品作标准。3）本法使用的校准血清为液态，用前必须充分混匀。9参考值人群血脂水平主要决定于生活因素，特别是饮食营养，所以各地区调查所得参考值高低不一，应根据冠心病流行病学研究及临床经验统一制定高胆固醇划分标准。欧美国家制定的标准大致相同，40岁以上人群总胆固醇水平高低的划分大致可定为：合适水平5.17mm01/L
14、（200mg/d1）；边缘水平5.17mm01/L6.46mmol/L（201mg/dl219mg/dl）；高胆固醇血症6.47mm01/L（220mg/dl）。临床意义影响总胆固醇水平的因素有：A1101年龄与性别。总胆固醇水平往往随年龄上升，但到70岁或80岁后有所下降，中青年期女性低于男性，50岁以后女性高于男性；A1102长期高胆固醇、高饱合脂肪酸和高热量饮食可使总胆固醇增高；A1103遗传因素；A1104其他。如缺少运动、脑力劳动、精神紧张等可使总胆固醇升高。高胆固醇血症是冠心病的主要危险因素之一。病理状态下高胆固醇有原发与继发的两类。原发的如家属性高胆固醇血症（低密度脂蛋白受体缺陷
15、）、家属性apoB缺陷症、多源性（polygenic）高总胆固醇、混合性高脂蛋白血症。继发的见于肾病综合征、甲状腺机能减退、糖尿病、妊娠等。低总胆固醇血症也有原发的与继发的，前者如家属性的无或低脂蛋白血症；后者如甲亢、营养不良、慢性消耗性疾病等。低总胆固醇者容易发生脑出血，也可能易患癌症（未证实）。肝脏是胆固醇及卵磷脂胆固醇酰基转移酶（LCAT）合成的器官，严重肝病病人血清总胆固醇不一定很低，但由于血清卵磷脂胆固醇酰基转移酶活力低下，血清胆固醇酯占总胆固醇的比例可低达50以下。A111参考文献中华人民共和国卫生部医政司编全国临床检验操作规程（第二版）.南京：东南大学出版社，1997268A2例
16、2：C反应蛋白测定A21第1页页首内容C反应蛋白测定（散射比浊法）XX医院检验科CGXXXX第1版共XX页2000年9月16日起实施复审日期:复审人:XXX，XXX2000年9月10日XXX（签名）免疫检验室：A22原理用抗人C反应蛋白抗体和样品中C反应蛋白作用，形成抗原抗体复合物使光散射增加。检测散射光变化速率峰值反映样品中C反应蛋白量。本检验科使用XX公司的XX型号特定蛋白测定仪及其公司提供的配套试剂、校准品等进行C反应蛋白测定。A23标本要求A231使用新鲜血清，不使用血浆。A2.32在采集血液后的2h内分离血清口并置于具塞试管中。A2338h内不及时测定的血清可存放于28冰箱保存。3天
17、后测定的血清置-15-20，C冰冻保存。但冰冻血清只能做一次复融。反复冻融会使测定结果下降。A2.3.4严重溶血或脂血的标本不能作测定。A24A241每个试剂均购自XX公司。1）C反应蛋白抗体（公司试剂盒代号PNXX）o每个抗体试剂瓶内含已处理过的山羊抗血清50ml,叠氮钠为01（WW）。2）XX系统专用稀释液（公司试剂盒代号PNXX）3）C反应蛋白校准品（公司试剂盒代号PNXX）。4）缓冲液（代号P/NXXX）。5）至少用2个水平的控制品。A24，2试剂准备从冰箱中取出试剂，立即可用。在上机前，须将缓冲液及稀释液颠倒彻底混匀oA24.3试剂性能可接受性按测定项目资料手册中质量控制章节所规定内
18、容进行质量控制。结果必须在实验室规定的可接受范围内。A2.4.4超过失效期的试剂不可使用。A25仪器和校准A25.1使用XX公司的XX型号特定蛋白分析仪。A252将校准品在室温中平衡后，按仪器要求上机校准。A26操作步骤A261校准步骤1）在仪器的主显示菜单上按F5键做系统设置。按F1键做项目设置，在显示信息中确定抗体盘上本项目位置。按Fl）键修正盘设置，回到主显示菜单。2）按F2键进入校准状态，选择相应项目。按Fl键要仪器阅读抗体卡资料，并插入C反应蛋白抗体卡。按F2键进入校准品盘设定，确认校准品所在位置。按F2键要仪器阅读校准品卡，并插入相应校准品卡。阅读后，按F1键。3）将C反应蛋白校准
19、品200L加于样品盘的指定位置，另外将校准品5约400L也加于相应位置，按开始键，启动校准。完成校准后，按F4键确认。A262样品操作步骤1）在主显示菜单上按Fl键进入样品测定程序。2）在各种样品杯确认后，若只做C反应蛋白测定，放置测定样品或控制品200L置于样品盘内。若同时做类风湿因子，抗“O”，则需样品400L。这些样品足够做双份测定。3）若做样品预稀释，用缓冲液对样品做l:6稀释后，将稀释样品250L置于样品盘内。（注：请参见XX型仪器操作手册，了解使用原始管和微量管）A27质量控制每批测定都使用XX公司控制品做质量控制。请参见XX型系统项目手册附录本规程要求，每月天间CV不超过4。A2
20、.8计算系统会自动地计算出结果。A2.9XX公司CRP测定以IFCC推荐的欧洲共同体参考局的CRM470特定蛋白参考血清为标准。使CRP测定在国际上具良好的可比性。本法的99参考上限为9mg/L。A210A2.101本法的C反应蛋白可报告范围为4mg/L120mgL，若使用1：6稀释样品上限可达720mg/L。A210.2精密度批内n=20低浓度：x=17.8mg/Ls=0.7mg/LCV=3.68中浓度：x56.7mg/Ls1.1mg/LCV2.02高浓度：x=79.4mg/Ls0.9mg/LCV1.13天间（每天作2批，共10天），n=20x=7.4mg/L。s0.28mg/LCV=3.89x=51.4mg/Ls=1.4mg/LCV=2.72x90.8mg/Ls=2.7mg/LCV=3.03A2103准确度与胶乳散射（LNA）法及放射免疫扩散法（RID）比较，对正常和不正常CRP浓度血清作对比：与LNA法比较：n=100，y=1.08x+3.9，r=0.99与RID法比较：n=100，y=1.10x+5.2，r=0.99A211ArraySystems,ChemistryInformationManualBeckmanInstruction015249712ABJan1996.BeckmanInstruments，IncBreaCA92621
