1、微生物学实验 微生物学实验 U实验一 普通光学显微镜的构造和使用U.1 U实验二 细菌的简单染色、革兰氏染色U.6 U实验三 放线菌形态及菌落特征的观察U.8 U实验四 酵母菌形态及菌落特征的观察U.9 U实验五 霉菌形态及菌落特征的观察U.10 U实验六 微生物细胞大小的测定U.12 U实验七 微生物显微计数血球计数板法U.14 U实验八 器皿的包扎与灭菌U.16 U实验九 培养基的制备U.19 U实验十 微生物稀释平板计数、划线分离U.21 U实验十一 营养元素、温度和化学药剂对微生物生长的影响U.25 U实验十二 微生物的生理生化试验U.26 U实验十三 菌种保藏U.27 U实验十四 微
2、生物的分离和纯化U.32 实验一实验一 普通光学显微镜的构造和使用普通光学显微镜的构造和使用 一、目的要求 一、目的要求 1.掌握普通光学显微镜的基本构造、使用方法、保护要点。2.掌握普通光学显微镜油浸系的原理。3.使用油镜观察几种细菌的基本形态。二、显微镜的基本构造 二、显微镜的基本构造 显微镜由机械装置机械装置和光学系统光学系统两大部分组成（图 1-1）。光学显微镜的构造(图 1-1)1.物镜转换器 2.接物镜 3.游标卡尺 4.载物台 5.聚光器 6.彩虹光阑 7.光源 8.镜座 9.电源开关 10.光源滑动变阻器 11.粗调螺旋 12.微调螺旋 13.镜臂 14.镜筒 15.目镜 16
3、.标本移动螺旋 1机械装置 镜座（base）和镜臂（arm）1机械装置 镜座（base）和镜臂（arm）镜座位于显微镜底部，呈马蹄形，它支持全镜。镜臂有固定式和活动式两种，活动式的镜臂可改变角度。镜臂支持镜筒。1镜筒（body tube）镜筒（body tube）是由金属制成的圆筒，上接目镜，下接转换器。镜筒有单筒和双筒两种，单筒又可分为直立式和后倾式两种。而双筒则都是倾斜式的，倾斜式镜筒倾斜 45。双筒中的一个目镜有屈光度调节装置，以备在两眼视力不同的情况下调节使用。转换器（no sepiece）转换器（no sepiece）为两个金属碟所合成的一个转盘，其上装 34 个物镜，可使每个物镜通
4、过镜筒与目镜构成一个放大系统。载物台（stage）载物台（stage）又称镜台，为方形或圆形的盘，用以载放被检物体，中心有一个通光孔。在载物台上有的装有两个金属压夹称标本夹，用以固定标本；有的装有标本推动器，将标本固定后，能向前后左右推动。有的推动器上还有刻度，能确定标本的位置，便于找到变换的视野。调焦装置 调焦装置 是调节物镜和标本间距离的机件，有粗动螺旋（coarse adjustment）即粗调节器和微动螺旋（fine adjustment）即细调节器，利用它们使镜筒或镜台上下移动，当物体在物镜和目镜焦点上时，则得到清晰的图像。2光学系统 物镜2光学系统 物镜（objective）物镜安
5、装在镜筒下端的转换器上，因接近被观察的物体，故又称接物镜。其作用是将物体作第一次放大，是决定成像质量和分辨能力的重要部件。物镜上通常标有数值孔径、放大倍数、镜筒长度、焦距等主要参数。如：NA030；10；160/017；16mm。其中“NA030”表示数值孔径（numerical aperture，简写为 NA），“10”表示放大倍数，“160/017”分别表示镜筒长度和所需盖玻片厚度（mm），16mm 表示焦距。目镜目镜（ocular lens）装于镜筒上端，由两块透镜组成。镜把物镜造成的像再次放大，不增加分辨力，上面一般标有 7、10、15等放大倍数，可根据需要选用。一般可按与物镜放大倍数
6、的乘积为物镜数值孔径的 500700 倍，最大也不能超过 1000 倍的选择。目镜的放大倍数过大，反而影响观察效果。聚光器聚光器（condenser）光源射出的光线通过聚光器汇聚成光锥照射标本，增强照明度和造成适宜的光锥角度，提高物镜的分辨力。聚光器由聚光镜和虹彩光圈（iris diaphragm）组成，聚光镜由透镜组成，其数值孔径可大于 1，当使用大于 1 的聚光镜时，需在聚光镜和载玻片之间加香柏油，否则只能达到 10。虹彩光圈由簿金属片组成，中心形成圆孔，推动把手可随意调整透进光的强弱。调节聚光镜的高度和虹彩光圈的大小，可得到适当的光照和清晰的图像。光源光源（light source）较新
7、式的显微镜其光源通常是安装在显微镜的镜座内，通过按钮开关来控制；老式的显微镜大多是采用附着在镜臂上的反光镜，反光镜是一个两面镜子，一面是平面，另一面是凹面。在使用低倍和高倍镜观察时，用平面反光镜；使用油镜或光线弱时可用凹面反光镜。滤光片滤光片（filter）可见光是各种颜色的光组成的，不同颜色的光线波长不同。如只需某一波长的光线时，就要用滤光片。选用适当的滤光片，可以提高分辨力，增加影像的反差和清晰度。滤光片有紫、青、蓝、绿、黄、橙、红等各种颜色的，分别透过不同波长的可见光，可根据标本本身的颜色，在聚光器下加相应的滤光片。三、油镜物镜的基本原理 三、油镜物镜的基本原理 微生物学研究用的显微镜的
8、物镜通常有低倍物镜（16mm，10）、高倍物镜（4mm，4045）和油镜（18 mm，95100）三种。油镜通常标有黑圈或红圈，也有的以“OI（oil immer-sion）字样表示，它是三者中放大倍数最大的。2根据使用不同放大倍数的目镜，可使被检物体放大 10002 000 多倍。从图-3中可看出油镜的焦距和工作距离（标本在焦点上看得最清晰时，物镜与样品之间的距离）最短，光圈则开得最大，因此，在使用油镜观察时，镜头离标本十分近，需特别小心。使用时，油镜与其他物镜的不同是载玻片与物镜之间不是隔一层空气，而是隔一层油质，称为油浸系。这种油常选用香柏油，因香柏油的折射率 n=152，与玻璃相同。当
9、光线通过载玻片后，可直接通过香柏油进入物镜而不发生折射。如果玻片与物镜之间的介质为空气，则称为干燥系，当光线通过玻片后，受到折射发生散射现象，进入物镜的光线显然减少，这样就减低了视野的照明度（图1-2）。(图 1-1)一半正弦，乘上玻片与物镜间介质的折射率所得的乘积，可用下列公式表示：式中 NA=数值孔径；n=介质折射率；=最大入射角的半数，即镜口角的半数。也随之增大。如光线入射角为 120，其半数的正弦为 sin607 以水为利用油镜不但能增加照明度，更主要的是能增加数值孔径，因为显微镜的放大效能是由其数值孔径决定的。所谓数值孔径，即光线投射到物镜上的最大角度（称为镜口角）的NAnsin 因
10、此，光线投射到物镜的角度愈大，显微镜的效能就愈大（图-5），该角度的大小决定于物镜的直径和焦距。同时，的理论限度为 90，sin90=1，故以空气为介质时（n=1），数值孔径不能超过 1，如以香柏油为介质时，则 n增大，其数值孔径=087，则：以空气为介质时：NA=1087=08介质时：3NA=133087=115 小分辨距离混淆起来了。显微镜的分辨力是用可分辨的最小距离来表示的。以香柏油为介质时：NA=152087=132 显微镜的分辨力是指显微镜能够辨别两点之间最小距离的能力。它与物镜的数值孔径成正比，与光波长度成反比。因此，物镜的数值孔径愈大，光波波长越短，则显微镜的分辨力愈大，被检物体
11、的细微结构也愈能明晰地区别出来。因此，一个高的分辨力意味着一个小的可分辨距离，这两个因素是成反比关系的，通常有人把分辨力说成是多少微米或纳米，这实际上是把分辨力和最 ，增加其分辨力才行。例如用数值孔径为 125 的油镜时，能辨别两点之间的 式中=光波波长。我们肉眼所能感受的光波平均长度为 055m，假如数值孔径为 065 的高倍物镜，它能辨别两点之间的距离为 042m。而在 042m 以下的两点之间的距离就分辨不出，即使用倍数更大的目镜，使显微镜的总放大率增加，也仍然分辨不出。只有改用数值孔径更大的物镜 因此，我们可以看出，假如采用放大率为 40 倍的高倍物镜（NA=065），和放大率为 24
12、 倍的目镜，虽然总放大率为 960 倍，但其分辨的最小距离只有 0 42m。假如采用放大率为 90 倍的油镜（NA=125），和放大率为 9 倍的目镜，虽810 倍，但却能分辨出 022m 间的距离。四、器材四、器材 合液、擦镜纸、吸水纸等。五、操作步骤 五、操作步骤 出时，要用右手紧握镜臂，左手托住10cm 左右，右侧可然总的放大率为显微镜、香柏油、乙醇-乙醚混细菌三种形态的染色标本。1观察前的准备（1）1、显微镜从显微镜柜或镜箱内拿镜座，平稳地将显微镜搬运到实验桌上。（2）将显微镜放在自己身体的左前方，离桌子边缘约放记录本或绘图纸。（3）调节光照:不带光源的显微镜，可利用灯光或自然光通过反
13、光镜来调节光照，光线较强的天然光源宜用平面镜；光线较弱的天然光源或人工光源宜用凹面镜，但不能用直射阳光，直射阳光会影响物像的清晰并刺激眼睛。将 10物镜转入光孔，将聚光器上的虹彩光圈打开到最大位置，用左眼观察目镜中视野的亮度，转动反光镜，使视野的光照达到最明亮最均匀为止。自带光源的显微镜，可通过调节电流旋钮来调节光照强弱。凡检查染色标本时，光线应强；检查未染色标本时，4光线不宜太强。可通过扩大或缩小光圈、升降聚光器、旋转反光镜调用降载物台，直至物像出现，再用细调节旋钮使物像清晰为止。用推慢调节粗调节旋钮，慢慢下降载物台直至物像出现，调至物像清晰为止，找到需观察的部位，并移至视野中央进行观器将镜
14、筒小心地降下，使油镜浸在香柏油中，其镜现物像为止，然后用细调节器校正焦距。如油镜已离开油面而仍转出，先用擦镜纸擦去镜头上的油，再用擦镜纸蘸少许乙是成降下聚光器，反光镜与聚光器垂直，最后用本台显微镜。以免压碎玻片或损伤镜面。节光线。2.低倍镜观察 镜检任何标本都要养成必须先用低倍镜观察的习惯。因为低倍镜视野较大，易于发现目标和确定检查的位置。将标本片放置在载物台上，用标本夹夹住，移动推动器，使被观察的标本处在物镜正下方，转动粗调节旋钮，使物镜调至接近标本处，用目镜观察并同时粗调节旋钮慢慢下动器移动标本片，找到合适的目的像并将它移到视野中央进行观察。3高倍镜观察 在低倍物镜观察的基础上转换高倍物镜
15、。较好的显微镜，低倍、高倍镜头是同焦的，在转换物镜时要从侧面观察，避免镜头与玻片相撞。然后从目镜观察，调节光照，使亮度适中，缓再用细调节旋钮察,并准备用油镜观察。4油镜观察（1）用粗调节器将镜筒提起约 2cm，将油镜转至正下方。（2）在玻片标本的镜检部位滴上一滴香柏油。（3）从侧面注视，用粗调节头几乎与标本相接，应特别注意不能压在标本上，更不可用力过猛，否则不仅压碎玻片，也会损坏镜头。（4）从接目镜内观察，进一步调节光线，使光线明亮，再用粗调节器将镜筒徐徐上升，直至视野出未见物像，必须再从侧面观察，将油镜降下，重复操作至物像看清为止。5.观察完后复原 下降载物台，将油镜头醚乙醇混合液擦去镜头上
16、残留油迹，最后再用擦镜纸擦拭 23 下即可，（注意向一个方向擦拭）。将各部分还原，转动物镜转换器，使物镜头不与载物台通光孔相对，而八字形位置，再将载物台下降至最低，用柔软纱布清洁载物台等机械部分，然后将显微镜放回柜内或镜箱中。六、注意事项 六、注意事项 1.学生使用显微镜固定镜号、位置，填写使用卡，本学期一直使2.不准擅自拆卸显微镜的任何部件,以免损坏 3.镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证光洁度。4.观察标本时，必须依次用低、高倍镜，最后用油镜。当目视接目镜时，特别在使用油镜时，切不可使用粗调节器，5.观察时，两眼睁开，养成两眼能够轮换观察的习惯，以免眼睛疲劳，并且能够在左眼观察时
17、，右眼注视绘图。6.拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，不可单手拿，更不可倾斜拿。七、实验报告 七、实验报告 1.油镜与普通物镜在使用方法上有何不同？应特别注意些什么？52.使用油镜时，为什么必须用香柏油？3.镜检标本时，为什么先用低倍镜观察，而不是直接用高倍镜或油镜观察？实验二实验二 细菌的简单染色、革兰氏染色细菌的简单染色、革兰氏染色 镜下清晰地观察到微生物的形状和结构，而且还可以通过不同的染色反应来鉴别微生物的类型和区分死、活细菌等，因此，微生物染本实验通过对细菌的染色观察，使同学们在掌握细菌染色技术的基础上，了解各种其他的染色制片技术；观察微生物的各种形态结构，以巩固课堂知识，增
18、强感性认识。1学习微生物涂片、染色的基本技术，掌握细菌的单染色方法及无菌操作技术。2巩固显微镜的使用方法。是碱，和其他染料一样是一种盐，电离时染料离子带正电，易与带负电荷的细菌结合而使细菌着色。例如，美蓝（亚甲蓝）实际上是氯化亚甲蓝盐，它可被电离asicfu-chsin）、番红（又称沙黄，safranine）等。性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G）两大类，是细菌学上最常用的鉴肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易ant）；4.绘出细菌的几种基本形态。虽然各种类型的显微镜能够观察到微生物的各种形态结构，但一般实验室常用的是普通光学显微镜
19、。由于细菌体积小且透明，在活体细胞内又含有大量的水分，因此，对光线的吸收和反射与水溶液相差不大。当把细菌悬浮在水滴内，放在显微镜下观察时，由于与周围背景没有显著的明暗差，难于看清它们的形状，更谈不上识别其细微结构。而经过染色，就可借助颜色的反衬作用比较清楚地看到菌体形态，亦即菌体表面及内部结构着色与背景形成鲜明对比，这样便可在普通光学显微色技术是观察微生物形态结构的重要手段。一、目的要求 二、基本原理 一、目的要求 二、基本原理 1.简单染色法1.简单染色法：所谓单染色法是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。此法操作简便，适用于菌体一般形态的观察。在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负
20、电荷，所以常用碱性染料进行染色。碱性染料并不成正、负离子：带正电荷的染料离子可使细菌细胞染成蓝色。常用的碱性染料除美蓝外，还有结晶紫（crystal violet）、碱性复红（b细菌体积小，较透明，如未经染色常不易识别，而经着色后，与背景形成鲜明的对比，使易于在显微镜下进行观察。2.革兰氏染色法2.革兰氏染色法：是 1884 年由丹麦病理学家 C.Gram 所创立的。革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳别染色法。该染色法所以能将细菌分为 G+菌和 G菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所决定的。G菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且于渗出，结果细菌就被脱色，再经复红复染后就成
21、红色。G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染时的颜色。革兰氏染色需用四种不同的溶液：碱性染料（basic dye）初染液；媒染剂（mord脱色剂（decolorising agent）和复染液（counterstain）。碱性染料初染液的作用象在 6细菌的单染色法基本原理中所述的那样，而用于革兰氏染色的初染液一般是结晶紫（crystal violet）。媒染剂的作用是增加染料和细胞之间的亲和性或附着力，即以某种方式帮助染料固定在细胞上，使不易脱落，碘（iodine）是常用的媒染剂。脱色剂是将被染色的细胞进行脱色，
22、不同类型的细胞脱色反应不同，有的能被脱色，有的则不能，脱色剂常用 95的酒精（ethanol）。复染液也是一种碱性染料，其颜色不同于初染液，复染的目的是使被脱色的细胞染上不同于初染液的颜色，而未被脱色的细胞仍然保持初染的颜色，从而将细胞区分成 G+和 G-两大类群，常用的复染液是复红。时的大肠杆菌和葡萄球菌。馏水、乙醚-乙醇混合液、香柏油。3、器材：废液缸、洗瓶、载玻片、接种杯、酒精灯、擦镜纸、显微镜。一块，在载玻片中央加一滴蒸馏水，按无菌操作法取大肠杆菌涂片，调匀并涂成薄膜，注意滴生理盐水时不宜过多，涂片必须均匀，做成浓菌液手执玻片一端，让菌膜朝上，通过火焰 2-3 次固定（以不烫手为宜），
23、使细胞质凝固，以固定细菌的形态，并使其不易脱落。但不能在火焰上烤，否则细菌形色 1-2min 观察，再高倍观察，并找出适当的视野后，将高倍镜转出，在涂片上加香柏油一滴，将油镜头浸入油滴中仔细调焦观察细菌的形态。色：量（以盖满细菌涂面）的结晶色 2025s 至流出液无色，立即水洗。将染好的涂片用吸水纸吸干。，再用高倍，最后用油镜观察，并判断菌体的革兰氏染色液将镜头擦 2-3 次。三、器材 三、器材 1、活材料：培养 24 小2、染色液和试剂：碱性美兰、结晶紫、碘液、95%酒精、石炭酸复红、蒸四、操作步骤 四、操作步骤 1、简单染色：（1）涂片：取干净载玻片，注意取菌不要太多。（2）晾干：让涂片自
24、然晾干或者在酒精灯火焰上方文火烘干。（3）固定：态将毁坏（4）染色：将固定过的涂片放在废液缸上的搁架上，加复红染（5）水洗：用水洗去涂片上的染色液，直至冲下之水无色时为止。（6）干燥：将洗过的涂片放在空气中晾干或用吸水纸吸干。（7）镜检：先低倍2、革兰氏染（1）涂片（2）晾干（3）固定，与简单染色法相同（4）结晶紫染色：将玻片置于废液缸玻片搁架上，加适紫染色液染色 1 分钟；水洗：倾去染色液，用水小心地冲洗。（5）媒染：碘液，媒染 1min；水洗：用水洗去碘液。（6）脱色：将玻片倾斜，连续滴加 95%乙醇脱（7）复染：滴加复红复染 3-5min；水洗：用水洗去涂片上的复红染色液。（8）晾干：（
25、9）镜检：镜检时先用低倍反应性。（10)实验完毕后的处理：将浸过油的镜头按下述方法擦拭干净，a.先用擦镜纸将油镜头上的油擦去。b.用擦镜纸沾少许乙醚-乙醇混合 7c.再用干净的擦镜纸将镜头擦 2-3 次。注意擦镜头时向一个方向擦拭。将显微镜小心轻拿，按号放入显微镜柜中。片用废纸将香柏油擦干净，放入回收容器内。也可被脱色而染成阴性菌；如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳性菌。脱色时间的长量多少等因素的影响，难以严格规定。菌。G+菌培养 12h-16h，E.coli 培养 24h。若菌龄太老，由于菌体死亡或自溶常使革兰氏阳性菌转呈阴性反应。革兰氏染色的反应性。1）作革兰氏染色涂片为什么不
26、能过于浓厚？（2）其染色成败的关键一步是什么？实验三实验三 放线菌形态及菌落特征的观察放线菌形态及菌落特征的观察 下观察其形态。放线菌的孢子丝形状和孢子排列情况是放线菌分类的重要依生菌丝。有 结晶紫，美兰）；胶带纸，小刀，接种环，吸水纸，擦镜纸，酒精灯，香柏油，1印片法：放线菌自然生长状态的观察 观察后的染色玻五.注意事项 五.注意事项 1.革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。如脱色过度，革兰氏阳性菌短还受涂片厚薄及乙醇用2.染色过程中勿使染色液干涸。用水冲洗后，应吸去玻片上的残水，以免染色液被稀释而影响染色效果。3.选用幼龄的细五、实验报告 1结果 绘出葡萄球菌和大肠杆菌的形态图，并注明两菌的2
27、思考题（一、目的要求 一、目的要求 掌握观察放线菌形态的基本方法，并观察放线菌的形态特征。二、基本原理 二、基本原理 和细菌的单染色一样，放线菌也可用石炭酸复红或碱性美蓝等染料着色后，在显微镜据，为了不打乱孢子的排列情况，常用印片染色法和胶带纸粘菌染色法进行制片观察。放线菌是由不同长短的纤细的菌丝所形成的单细胞菌丝体。菌丝体分为两部分，即潜入培养基中的营养菌丝（或称基内菌丝）和生长在培养基表面的气些气生菌丝分化成各种孢子丝，呈螺旋形、波浪形或分枝状等。孢子常呈圆形、椭圆形或杆形。气生菌丝及孢子的形状和颜色常作为分类的重要依据。三、器材 三、器材 1.活材料：放线菌培养物，酵母菌斜面培养物；2.
28、染色液：复红染色液（或3.器材：载玻片，乙醚-乙醇混合液，显微镜。四、操作步骤 四、操作步骤 8印片：取干净载玻片一块，用小刀切取放线菌培养体一块，放在载玻片上，用另一块载玻片对准菌块的气生菌丝轻轻按压，然后将载玻片垂直拿起。注意不要使培养体在玻片上滑动，否则会打乱孢子丝的自然形态；微热固定：将印有放线菌的涂面朝上，通过酒精灯火焰 2-3 次加热固定；染色:石炭酸复红染色 1min；水洗：水洗后晾干；镜检：先用低倍镜后用高倍镜，最后用油镜观察孢子丝、孢子的形态及孢子排列情况。2胶带纸法 粘菌：用胶带纸在放线菌培养体上粘取菌体，注意，压取时从菌落边顺着菌体生长方向，避免从菌落上面压取，以免取得的
29、全是孢子。染色：将粘有菌体的胶带纸压在事先准备好的滴油染液的载玻片上。将多余染色液用滤纸吸掉。镜检：同上。五、实验报告五、实验报告 绘图说明你所观察到的放线菌的形态特征。实验四实验四 酵母菌形态及菌落特征的观察酵母菌形态及菌落特征的观察 一、目的要求 一、目的要求 1观察酵母菌的细胞形态及出芽生殖方式。2观察酵母菌的菌落特征。3.学习掌握区分酵母菌死、活细胞的染色方法。二、基本原理 二、基本原理 酵母菌是多形的、不运动的单细胞微生物，细胞核与细胞质已有明显的分化，菌体比细菌大。繁殖方式也较复杂，无性繁殖主要是出芽生殖，仅裂殖酵母属是以分裂方式繁殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。本实验通过用美
30、蓝染色制成水浸片，和水-碘水浸片来观察生活的酵母形态和出芽生殖方式。美蓝是一种无毒性染料，它的氧化型是蓝色的，而还原型是无色的，用它来对酵母的活细胞进行染色，由于细胞中新陈代谢的作用，使细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型，所以酵母的活细胞无色，而对于死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。因此，用美蓝水浸片不仅可观察酵母的形态，还可以区分死、活细胞。但美蓝的浓度、作用时间等均有影响，应加注意。三、器材 三、器材 1.活材料：酿酒酵母（Saccharomyces calsbergensis）2-3d 培养物；2.染液：
31、吕氏碱性美蓝染液 3.器材：显微镜，载玻片，盖玻片等。四、操作步骤 四、操作步骤 1酵母菌落形态观察并记录。2.美蓝浸片观察 9 (1)在载玻片中央加一滴碱性美蓝染液，液滴不可过多或过少，以免盖上盖玻片时，溢出或留有气泡。然后按无菌操作法取斜面上培养 2-3d 的酿酒酵母少许，放在碱性美蓝染液中，使菌体与染液均匀混合。(2)取盖玻片一块，小心地盖在液滴上。盖片时应注意，不能将盖玻片平放下去，应先将盖玻片的一边与液滴接触，然后将整个盖玻片慢慢放下，这样可以避免产生气泡。(3)将制好的水浸片放置 3 分钟后镜检。先用低倍镜观察，然后换用高倍镜观察酿酒酵母的形态和出芽情况，同时可以根据是否染上颜色来
32、区别死、活细胞。2水浸片观察 在载玻片中央滴一滴蒸馏水，取酿酒酵母少许，放在水-碘液滴中，使菌体与水混匀，盖上盖玻片后镜检。可以适当将光圈缩小观察。五、实验报告 五、实验报告 绘图说明你所观察到的酵母菌的形态特征。实验五实验五 霉菌形态及菌落特征的观察霉菌形态及菌落特征的观察 一、目的要求 一、目的要求 1.掌握观察霉菌形态的基本方法，并观察其形态特征。2.掌握常用的霉菌制片方法 二、基本原理 二、基本原理 霉菌菌丝较粗大，细胞易收缩变形，而且孢子很容易飞散，所以制标本时常用乳酸石炭酸棉蓝染色液。此染色液制成的霉菌标本片其特点是：(a)细胞不变形；(b)具有杀菌防腐作用，且不易干燥，能保持较长
33、时间；(c)溶液本身呈蓝色，有一定染色效果。霉菌自然生长状态下的形态，常用载玻片观察，此法是接种霉菌孢子于载玻片上的适宜培养基上，培养后用显微镜观察。此外，为了得到清晰、完整、保持自然状态的霉菌形态还可利用玻璃纸透析培养法进行观察。此法是利用玻璃纸的半透膜特性及透光性，将霉菌生长在覆盖于琼脂培养基表面的玻璃纸上，然后将长菌的玻璃纸剪取一小片，贴放在载玻片上用显微镜观察。三、器材 三、器材 曲霉（Aspergillussp），青霉（Penicillium sp），根霉（Rhizopus sp），毛霉（Mucor sp）；乳酸石炭酸棉蓝染色液，20甘油，查氏培养基平板，马铃薯培养基；无菌吸管，载玻片，盖玻片，U 形棒，解剖刀，玻璃纸，滤纸等。四、操作步骤 四、操作步骤 1一般观察法 10 于洁净载玻片上，滴一滴乳酸石炭酸棉蓝染色液，用解剖针从霉菌菌落的边缘处取小量带有孢子的菌丝置染色液中，再细
