1、16China Pharmaceuticals2013 年 6 月 20 日 第 22 卷第 12 期Vol 22，No 12，June 20，2013间的相互作用。在缺氧缺血状态下，外源性神经节苷脂可通过患儿血脑屏障进入大脑，嵌入神经细胞膜，发挥保护神经细胞不受损伤的作用;可防止细胞内钙积聚，提高 Na+K+ATP 酶活性，清除受损细胞释放的过量自由基，维持细胞内外离子的平衡。大量研究表明，神经节苷脂在手足口病缺氧缺血状态时，可促进神经组织的再修复，减少兴奋性氨基酸的释放，从而减轻细胞毒性和血管水肿，促进神经功能恢复10。综上所述，在常规治疗的基础上加用脑细胞保护剂神经节苷脂，可提高临床有效
2、率，改善退热时间、精神状态恢复时间和呕吐停止时间，值得临床推广。参考文献:1 黄何清，周祖模 1 119 例手足口病的临床表现与药物治疗分析J中国药业，2011，20(21):84 852 中华人民共和国卫生部 手 足 口病防治指南J 中医药临床杂志，2008，20(3):235 2363 吴梓梁 小儿内科学M 郑州:郑州大学出版社，2003:2 239 2 2404 范三丽，赵青 中西医结合治疗儿童手 足 口病合并脑炎 45 例J山西中医，2010，26(12):335 赵成松，赵顺英 手足口病的流行概况和应对策略J 中国实用儿科杂志，2009，24(6):419 4216 刘映霞，谢靖倩，
3、何颜霞，等 轻型和重型手足口病临床和实验室特征分析J 中华实验和临床病毒学杂志，2008，22(6):475 4777 Kung CM，K ing CC，Lee CN，et al Differences in replication capacity be-tween enterovirus 71 isolates obatined from patients with encephal it is andthose obtained from patients with herpangina in Taiwan J J Med Virol，2007，79(1):60 688 Sokolova
4、 TV，Zakharova IO，Furaev VV，et al GM 1 gang lioside con-tributes to retain the neuronal conduction and neuronal excitability in viscer-al and baroreceptor afferentsJ Zh Evol Biokhim Fizio，2008，44(4):373 3809 周君芬，顾红丹 神经节苷脂对新生儿缺血缺氧性脑病的疗效及作用机制J 中国药业，2011，20(23):68 6910 叶鑫 神经节苷脂治疗新生儿缺血缺氧性脑病 48 例J 中国药业，20
5、11，20(5):15 16(收稿日期:2012 11 26)高效液相色谱法测定丙戊酸钠的血药浓度胡琳(浙江省人民医院，浙江 杭州310014)摘要:摘要:目的 建立测定血清中丙戊酸(VPA)血药浓度的高效液相色谱法。方法 血清用正己烷提取，溴苯乙酮为衍生试剂，环己烷羧酸为内标，采用 Zorbbx SB C18柱(250 mm 4 6 mm，5 m)为分析柱;流动相为甲醇 水(79 21，V/V)，检测波长为 248 nm，流速为1 0 mL/min，设计个体化给药方案。结果 内标环己烷羧酸和丙戊酸的保留时间分别为 6 3 min 和 9 3 min，质量浓度线性范围为12 5 200 g/m
6、L(r=0 999 9)，平均回收率为 99 98%，日内、日间 RSD 均小于 5 66%。结论 该法快速、简单、准确性好，适用于临床进行丙戊酸的血药浓度监测。关键词:关键词:高效液相色谱法;丙戊酸;血药浓度;个体化给药中图分类号:R969 1;R969 3;R971+6文献标识码:A文章编号:1006 4931(2013)12 0016 03HPLC Method for Determination of Sodium Valproate Serum ConcentrationHu Lin(Zhejiang Provincial People s Hospital，Hangzhou，Zhe
7、jiang，China310014)AbstractAbstract:ObjectiveTo establish the HPLC method for the serum concentration determination of valproic acid(VPA)and to guide theindividualized medication regimen by analying the typical cases MethodsSerum was extracted with hexane With bromoacetophenoneas the derivative reage
8、nt and cyclohexane carboxylic acid as the internal standard，the Zorbbx SB C18column(250 mm 4 6 mm，5 m)was adopted as the analytical column;the mobile phase was methanol water(79 21，V/V)，the detection wave length was set at 248 nm，the flow rate was 1 0 mL/min The above mentioned method was used to de
9、termine the dozens of cases using sodium valproate Fromthem，3 typical cases were selected for discussing the influencing factors of the serum sodium valproate concentration and designing theindividualized drug administration regimen ResultsThe retention time of internal standard cyclohexane carboxy
10、acid and VPA was 6 3 minand 9 3 min respectively，the linear range was 12 5 200 g/mL，the ratio of the sodium valproate peak height and the internal stan-dard peak height showed good linear relation with the concentration(r=0 999 9)The average recovery rate was 99 98%，RSD of in-tra day and inter day w
11、as less than 5 66%At the same time，during the process of the practical measurement of serum drug con-centrations，it was founded that the same dosage of sodium valproate could produce a larger gap of the blood drug concentration in dif-ferent individuals ConclusionThis method is rapid，simple，accurate
12、 and suitable for serum sodium valproate concentration monitor-ing In order to adjust the individualized dosing regimen，the serum sodium valproate concentration monitoring is necessaryKey wordsKey words:HPLC;valproic acid;blood drug concentration;individualized drug administration檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨
13、檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨丙戊酸为临床抗癫痫的第一线药物，有效血药浓度为 50 100 g/mL，当血药浓度高于 100 g/mL 时，毒副作用增加而疗效无明显增加，常见不良反应有恶心、呕吐、肥胖、脱发、血小板减少和肝功能损害。其体内过程和疗效个体差异较大，导致剂量与血药浓度之间的相关性较差1。为最大限度地发挥疗效和避免不良反应，因此在长期用药或增减药物剂量时对体内血药浓度进行监测显得十分必要。近年来，有关丙戊酸血药浓度监测的文献报道较多，有气相色谱法2、荧光偏振免疫法3、散射免疫比浊抑制法4、高效液相色谱法5 7等。笔者建立了以 溴苯乙酮为柱前衍生化试剂
14、，能快速简便测定丙戊酸血药浓度的高效液相色谱药物研究Drug Identification17China Pharmaceuticals2013 年 6 月 20 日 第 22 卷第 12 期Vol 22，No 12，June 20，20131 环己烷羧酸(内标)2 丙戊酸图 1高效液相色谱图678912t/min(HPLC)法，适用于临床血药浓度监测和药动学的研究，同时为指导个体化给药方案提供了理论依据。现报道如下。1仪器与试药Agilent 1100 型高效液相色谱仪(美国安捷伦公司);小型三用水箱(北京医疗设备厂);SZ 1 型快速混匀器(江苏金坛市金城国胜实验仪器厂);TGL 18G
15、C 型高速离心机(上海安亭科学仪器厂);分析天平(江阴县天平仪器厂)。甲醇为色谱纯(Merck公司)，正己烷、硫酸、乙腈、氨水、三乙胺均为分析纯;环己烷羧酸(中国药品生物制品检定所);丙戊酸(中国药品生物制品检定所);溴苯乙酮(Fluka 公司);灭菌注射用水(莎普爱思)。2方法与结果2 1色谱条件色谱柱:ZorbbsSB C18柱(250mm4 6mm，5m);柱温:40;流动相 甲醇 水(79 21);流速:1 0 mL/min;检测波长:248 nm;内标:环己烷羧酸;定量方法:峰面积内标法。2 2溶液配制精密称取丙戊酸 100 mg，置 50 mL 容量瓶中，用 0 2 mol/L氨水
16、稀释至刻度，得质量浓度为 2 g/L 的标准溶液。精密吸取上述标准液一定量，用 0 2 mol/L 氨水配成 200，100，50，25，12 5 g/mL 的丙戊酸系列标准液。精密吸取环己烷羧酸 50 L，置 50 mL 容量瓶中，用 0 2 mol/L 氨水稀释至刻度，再精密吸取该液 7 5 mL 至 50 mL 容量瓶中，用 0 5 mol/L 氨水稀释至刻度，得质量浓度 154 5 g/mL 的环己烷羧酸内标液。精密称取 溴苯乙酮 1 0 g，置 100 mL 容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，即得衍生试剂。2 3血样处理与色谱行为精密吸取空白血清 0 05 mL 共 5 份，加入丙戊酸标准
17、液0 05 mL，分别加内标液 0 05 mL 和 1 mol/L 硫酸 0 1 mL，混匀。加正己烷 2 mL，振荡提取 5 min 后，以 10 000 r/min 的速度离心 1 min。精密吸取上清液 1 mL，加 溴苯乙酮和三乙胺各 0 05 mL，在 50 水浴中衍生 10 min，氮气流吹干，用甲醇0 1 mL 溶解残渣，取 20 L 进样。高效液相色谱图见图 1，色谱峰分离较好，完全达到基线分离。2 4样品处理将血样以 6 000 r/min 离心 4 min，取上清液 0 1 mL，加内标液 0 05 mL 和 1 mol/L 硫酸 0 1 mL，混匀，加正己烷 2 mL，振
18、荡提取 5 min 后，以 10 000 r/min 的速度离心 2 min，精密吸取上清液 1 mL，加 溴苯乙酮和三乙胺各 0 05 mL，在 50 水浴中衍生 10 min，氮气流吹干，用甲醇 0 1 mL 溶解残渣，取 10 L 进样。2 5方法学考察标准曲线绘制:精密吸取空白血清 0 05 mL，5 份，加入丙戊酸系列标准液 0 05 mL(200，100，50，25，12 5 g/mL)，分别加内标液 0 05mL 和 1mol/L 硫酸 0 1mL，混匀。然后拟订方法处理后，取 20 L 进样，分析测定，然后以标准液质量浓度(Y)为纵坐标、丙戊酸与内标峰比值(X)为横坐标，作回归
19、处理，得回归方程Y=37 362 X 0 276 6，r=0 999 9。结果表明，丙戊酸在 2 5 4 0 g/mL 范围内呈良好的线性关系。精密度试验:在加内标的空白血清中加入丙戊酸标准液适量，分别配置成 200，100，50，25，12 5 g/mL 5 个质量浓度的样品，在同 1 天内测定，计算日内精密度;每天测 1 次，连续测定5 d，计算日间精密度。结果日内、日间的 RSD 均小于 5 66%。回收率试验:在加内标的空白血清中加入丙戊酸标准液适量，配置成 200，50，12 5 g/mL 的丙戊酸血清样品，按拟订方法操作，记录峰面积，由标准曲线求出各点的浓度，与已知加入浓度相比，计
20、算回收率。结果见表 1。专一性试验:考虑到临床上合用药物有可能对本试验的结果有干扰，在拟订色谱条件下，对几种可能合用的药物卡马西平、苯妥因钠、地西泮、硝西泮、苯巴比妥进行分析。结果这几种药物均不出峰，对本法测定无干扰，不会影响丙戊酸血药浓度的测定。稳定性试验:将标准液及其他相关溶液存放于 2 10 的冰箱中，分别于第 1，3，5，7，10，14 d 时用 200，50，12 5 g/mL 标准液配置测定液，进行质量浓度测定。结果血清中标准液含量未发生明显变化，说明贮备液在 14 d 内稳定性良好。3讨论据报道，以甲醇 水(75 25)为流动相，结果显示溶剂峰太高，样品峰太小8 9;而以甲醇 水
21、(79 21)为流动相，内标环己烷羧酸和丙戊酸钠峰形较好，分离完全。丙戊酸分子结构中不含有紫外特征吸收基团，难以用高效液相色谱法直接测定。在碱性条件下，将其连接上有紫外吸收的基团是本法的关键。本法采用 溴苯乙酮为衍生化试剂，在三乙胺的催化下，反应完全彻底，基线稳定，可以用 HPLC 法测定，流动相不需要使用缓冲液等盐类物质，有利于保护色谱柱，并且衍生试剂在冰箱中冷藏保存 6 个月以上，对衍生化反应及测定结果无影响。通过丙戊酸钠血药浓度的监测同时结合特殊案例，发现小于3 岁患儿口服同样剂量丙戊酸钠，体内血药浓度差异很大，而且用药依从性差，不具有语言表达能力，机体发育又不成熟，药物对其造成的损害会
22、更大，因此更有必要加强血药浓度的监测。高于65 岁患者血清丙戊酸浓度监测数据较少，可能是因为老年人体内蛋白含量较低、蛋白结合率低，故使用同等剂量的药物在体内的游离药物量较高，药物剂量调节更易，癫痫病情控制更佳，医生或患者认为没有必要进行血清丙戊酸浓度监测。因此，选择一种不良反应少、疗效高的治疗方案对于保障生命非常重要。作者简介:胡琳(1984)，女，浙江杭州人，大学本科，初级药师，(电话)0571 87312094(电子信箱)huLinchrist1 126 com。参考文献:1 李金恒 临床治疗药物监测的方法和应用M 北京:人民卫生出版社，2003:402 马虹英，李新中 气相色谱法测定血浆
23、中丙戊酸浓度的方法改J表 1回收率试验结果(n=3)加入量(g/mL)200 050 012 5测得量(g/mL)199 7451 9912 01回收率(%)99 87103 9896 08X(%)99 98RSD(%)3 954药物研究Drug Identification18China Pharmaceuticals2013 年 6 月 20 日 第 22 卷第 12 期Vol 22，No 12，June 20，2013广州市白云区科技计划项目，项目编号:2010 KZ 34。中国临床药学杂志，2002，13(9):5443 崔一民，培红，刘玉旺，等 高效液相色谱 荧光检测法测定人血清中丙
24、戊酸钠浓度J 中国药房，2005，16(4):2874 金燕 散射免疫比浊抑制法检测卡马西平、丙戊酸浓度J 中国医院药学杂志，2001，21(9):5195 陈湛芳，胡朝欣，王志燕 反相高效液相色谱法测定血清中丙戊酸浓度J 中国医院药学杂志，2001，21(8):4586 陈坚，方维军，吴芳 高效液相色谱法测定丙戊酸血药浓度J中国临床药学杂志，2000，9(5):2967 胡永狮，吴平，黄惠丽 衍生化法测定癫痫患儿血清中丙戊酸的浓度J 华西药学杂志，2001，16(6):4348 祝文兵，阳利龙，李望云，等 我院儿科抗癫痫药物血药浓度监测结果分析J 儿科药学杂志，2004，10(5):259
25、张志国，雷力力 HPLC 法测定丙戊酸钠血药浓度的衍生化影响因素考察J 中国药房，2010，21(34):3 204(收稿日期:2012 07 03)檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨Stevens Johnson 综合征患者卡马西平的血药浓度测定蔡茁1，郭丹2(1中国人民解放军第458医院药剂科，广东 广州510602;2南方医科大学南方医院药学部，广东 广州510515)摘要:摘要:目的 采用高效液相色谱法测定 Stevens Johnson 综合征患者血清中卡马西平的质量浓度。方法 血清样品采用甲醇和二氯甲烷萃取后进样测
26、定，以 VP ODS C18柱(250 mm 4 6 mm，5 m)为色谱柱，以甲醇 水(15 85)为流动相，检测波长为 240 nm，流速为1 0 mL/min。结果 卡马西平质量浓度在 4 20 g/mL 范围内与峰面积呈良好线性关系，r=0 999 1(n=5)，低、中、高质量浓度的平均相对回收率分别为 103 12%，103 77%，101 69%(n=5)。结论 该方法简单、结果准确、灵敏度高，可为临床监测卡马西平不良反应提供科学依据。关键词:关键词:Stevens Johnson 综合征;卡马西平;高效液相色谱法中图分类号:R969 1;R969 3;R971+6文献标识码:A文
27、章编号:1006 4931(2013)12 0018 02Determination of Blood Concentration of Carbamazepine in Stevens Johnson Syndrome by HPLCCai Zhuo1，Guo Dan2(1 Department of Pharmacy，458 Hospital of PLA，Guangzhou，Guangdong，China510602;2 Department of Pharmacy，Southern Hospital，SouthernMedical University，Guangzhou，Guangd
28、ong，China510515)AbstractAbstract:ObjectiveTo adopt the HPLC method to determine the serum concentration of carbamazepine in Stevens Johnson syn-drome MethodsThe serum samples were extracted with methanol and dichloromethane for conducting the sample determination TheVP ODS C18(250 mm 4 6 mm，5 m)was
29、taken as the chromatographic column，the mobile phase was composed of methanol water(15 85)with a flow rate of 1 0 mL/min The detection wavelength was set at 240 nm ResultsThe linear range of carbamazepinewas 4 20 mg/mL(r=0 999 1，n=5)，the relative average recovery rates were 103 12%，103 77%and 101 69
30、%，respective-ly ConclusionThis method is simple with accurate result and high sensitivity，which can provide the scientific basis for mastering theadverse reactions of carbamazepine in clinicKey wordsKey words:Stevens Johnson syndrome;carbamazepine;HPLC2468t/min12468t/mint/min24681BAC1 卡马西平A 空白血清B 空白
31、血清+对照品C 血清样品图 1高效液相色谱图药物研究Drug Identification卡马西平为癫痫精神运动性发作的首选药，其引起重症药疹在临床上多有报道1。史蒂文斯 约翰逊(Stevens Johnson，SJS)综合征为一种严重的药疹，红斑性大疱广泛散布，口腔、眼部及咽部等处黏膜糜烂，唇红缘溃烂结痂，同时伴有高热、头痛、关节痛等全身症状。经常有药物致 Stevens Johnson 的报道，尤其以卡马西平致 Stevens Johnson 综合征的报道最多2，但未见此类患者卡马西平血药浓度测定的报道。笔者建立了测定 Stevens Johnson综合征患者血清中卡马西平浓度的高效液相色
32、谱(HPLC)法，为临床监测卡马西平不良反应提供了科学依据。1仪器与试药惠普 HP 1050 型高效液相色谱仪，包括四元梯度泵，DAD检测器，HP 1100 型自动进样器。卡马西平对照品(中国药品生物制品检定所);甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。2方法与结果2 1色谱条件色谱柱:Shimadzu VP ODS C18柱(250 mm 4 6 mm，5 m);流动相:甲醇 水(15 85);检测波长:240 nm;流速:1 0 mL/min;柱温:40;进样量:10 L。2 2血清样品处理精密量取患者血清样品 0 4 mL，置5 mL 的离心试管中，加入 20 L 甲醇，于旋涡仪中混合均匀。吸取 400 L 的甲醇，加入上述血清中混匀，再加入二氯甲烷2 mL，振荡 2 min，以 3 000 r/min 的速度离心 5 min，取下层有机相，氮气吹干，用流动相 100 L 复溶，以 3 000 r/min 的速度离心 10 min，取上清液进样分析。2 3方法学考察专属性考察:将空白血清、空白血清加对照品、患者血清标本按拟订方法处理后进样测定。色谱图见图 1。在该色谱条件下，卡马西平的保留时间为 5 82 min。标准曲线绘制:准确称取干燥至恒重的卡马西平对照品 20 mg，精密称定，
