1、食品检验工考证资料 -朱庆玲 2011年4月培训题目：酸乳中乳酸菌的检测（GB/T4789.3-2003） 考试时间为3小时，占分为40分考核操作过程是：一、酸奶的检测 注：实验前要注意填写好考官给的评分表，接着开始做实验前要先消毒手和桌面，用消毒棉球。1、 用25ml吸量管吸取25ml酸奶放到装有225ml的无菌水的锥瓶中混匀，制成10-1的稀释级；2、用1ml灭菌吸管吸取10-1稀释液1ml，沿管臂慢慢注入还有9ml的无菌水的试管里，振摇混匀即得10-2的稀释级，同理制成10-3 ，10-4一直到10-7 。注意每递增稀释一次，必须另换1支1mL灭菌吸管；3、选择三个稀释级来做平板，选10
2、-5 10-6 10-7 4、每个稀释级做两个平板，对应每个平板加1ml的稀释液；5、加培养基（混菌平板的制备），6套平皿都加上培养基，但要注意培养基的温度。6、同时要做一个空白实验，即是在一个平皿中加入1ml的无菌水，然后再加入培养基。注意从1到6点的操作不要超过20分钟。二、鉴定及出报告（老师准备两个已经培养好菌的平板，一个用来计数，一个用来做革兰氏染色镜检，看清标记） 1、从平板中挑取5个菌落进行镜检（做5张片）革兰氏染色法：涂片干燥固定结晶紫初染（1min）水洗卢戈碘液媒染(1min)水洗95%乙醇脱色(20-30s)水洗番红复染(1min)水洗干燥镜检(油镜观察、用香柏油) 清洁显微
3、镜（先用擦镜纸擦一遍，接着滴1到2滴二甲苯到擦镜纸上再擦镜头，最后再用干净的擦镜纸再擦一遍镜头）。在油镜头下观察到的结果要让考官看并打分。乳酸菌：革兰氏阳性、过氧化氢酶阴性、无芽孢的球菌或者杆菌。注意：本次的乳酸菌是兼性厌氧菌，可能有的会长在培养基里面，所以用接种针挑菌时一定要挑开培养基。2、 过氧化氢酶试验：就用刚挑过菌的接种针直接伸进3%过氧化氢试管中静止放置，注意观察接种针周围是否有气泡。无气泡为过氧化氢酶阴性，有气泡则为阳性。3、 结果报告：用表格来完成考生学校： 考生姓名： 考生准考证号：乳酸饮料中乳酸菌的检测结果记录及报告菌落革兰染色结果过氧化氢酶试验（阴或阳）是否乳酸菌判断形态颜
4、色是否有芽孢结果判断12345计数平皿中的菌数计数平皿的稀释级计数结果例：检验10-6的稀释级在改良MC琼脂平板上，生成的可疑菌落数为200个，选取5个菌落鉴定，证实为乳酸菌是4个，则1ml检样中乳酸菌数为2004/5106三、评分标准考核要素 评分要素 配分 评分标准 基本操作 平皿接种操作 10分 接种正确、熟练、符合要求（10-9分） 较熟练、基本符合要求 （6-9分） 不符合要求（5分以下）基本操作 革兰染色镜检操作 12分 染色操作熟练，镜检现象清晰（12-9分） 颜色操作基本正确、镜检现象尚清晰（8-6分） 过氧化氢酶试验 8分 实验操作熟练、正确（8-6分） 实验操作不熟练、理解
5、不明显（5分以下）试验结果 实验程序、现象、报告 10分 程序正确、实验现象清晰、报告正确（10-9分） 程序基本正确、不熟练、实验现象较清晰、报告基本正确（8-6分） 程序不熟练、报告不正确（5分以下）四、注意事项 大家可以看检验标准，要熟悉整个检验程序，记住操作步骤，注意无菌操作的要求，熟悉吸量管的使用，注意每递增稀释一次，必须另换1支1mL灭菌吸管。 为防止细菌增殖产生片状菌落，在检液加入平皿后，应在20min内倾入培养基，并立即使之与培养基混合均匀。 检样稀释及混合平板制备整个过程要严格遵照无菌操作要求。五、考核结束后每个同学要把用过的器具洗干净（平板培养物不能洗），同时准备好1个锥瓶的水放回原位(大锥瓶装约225ml自来水)，准备7支约9ml的自来水；桌面收拾干净。（最后一批考生不用装水），把自己实验做的平板里的培养基回收到指定位置。酸乳中乳酸菌的测定稀释图 9.0ml10-7 9.0ml10-6 9.0ml10-5 9.0ml10-3 10-2 9.0ml 9.0ml无菌水10-11ml1ml1ml。25ml供试品 无菌水 10-510-610-610-510-7 各平皿加1ml 对应的溶液 (361)改良MC培养基倒置培养72h对照10-7
