1、生 物 安 全 手 册（一） 实验室的进入1 实验室负责人应限制人员进入实验室。未经批准，任何人不得进入实验室工作区域。儿童不得进入实验室工作区域。对可能增加获得性感染的危险性或感染后可能引起严重后果的人员，不允许进入实验室。2 生物危险性实验室门上应标有国际通用的生物危害警告标志，包括通用的生物危险性标志，标明传染因子、实验室负责人或其他人姓名、电话以及进入实验室的特殊要求。3 实验室的门应保持关闭。4 与实验室工作无关的动物不得带入实验室。（二） 工作人员的防护要求1 在实验室工作时，必须穿着合适的工作服或防护服2 工作人员在进行可能接触到血液、体液以及其他具有潜在感染性的材料或感染性动物
2、的操作时，应戴上合适的手套。手套用完后，应先消毒再摘除，随后必须洗手。3 在处理完感染性实验材料和动物后，以及在离开实验室工作区域前，都必须洗手。4 为了防止眼睛或面部受到喷溅物的污染、碰撞或人工紫外线辐射的伤害，必须戴合适的安全眼镜、面罩（面具）或其他防护设备。5 严禁穿着实验室防护服离开实验室工作区域。6 不得在实验室内穿露脚趾的鞋7 禁止在实验室工作区域进食、饮水、吸烟、化妆和处理角膜接触镜。8 禁止在实验室工作区域储存食品和饮料9 在实验室内用过的防护服不得和日常服装放在同一柜子内。（三） 有关操作的指导原则1 严禁用口吸移液管，严禁将实验室材料置于口内。严禁舔标签。2 所有的实验操作
3、要按尽量减少气溶胶和微小液滴形成的方式来进行。3 应限制使用注射针头和注射器。除了进行肠道外注射或抽取实验动物体液外，注射针头不能用于移液或用作其他用途。4 实验室应制定并执行处理溢出物的标准操作程序。出现溢出、事故以及明显或可能暴露于感染性物质时，必须向实验室负责人报告。实验室应如实记录有关暴露和处理的情况，保存相关记录。5 污染的液体在排放到生活污水管道以前必须清除污染。根据所处理的微生物因子的危险度评估结果准备专门的污水处理系统。6 只有保证在实验室内没有受到污染的文件纸张才能带出实验室。（四） 实验室工作区的管理原则1 实验室应保持清洁整齐，严禁摆放和实验无关的物品。2 每天工作结束后
4、应清除工作台面的污染。若发生具有潜在危害性的材料溢出应立即清除污染。3 所有受到污染的材料、标本和培养物在废弃或清洁再利用之前，必须先清除污染。4 感染性材料的包装和运输应遵循国家和或国际的相关规定。5 如果窗户可以打开，则应安装防止节肢动物进入的纱窗。（五） 生物安全管理的指导原则1 实验室负责人负责制订和采用生物安全管理计划以及实验室安全或和操作手册。2 实验室应当能提供常规的实验室安全培训，并建立培训制度。3 实验室负责人（或生物安全负责人）要将生物安全实验室的特殊危害告知实验室人员，同时要求他们阅读生物安全或和操作手册，并遵循标准的操作程序。实验室内应备有可供取阅的安全或或操作手册。所
5、有实验室人员必须经过培训，了解所从事工作的危险、掌握有关的管理规定和操作程序，通过考核后方可从事相关实验室工作。4 应当制定节肢动物和啮齿动物的控制方案。5 如有必要，应为所有实验室人员提供适宜的医学评估、监测和治疗并建立健康档案。实验室人员应接受与所操作生物因子或实验室内潜在的生物因子相关的免疫接种或检测。附：生物安全柜的使用规范生物安全柜（BSC）是生物安全实验室中不可缺少的设备，是BSL-2及以上级实验室中操作感染性材料、保护操作者安全的中心平台，所以正确地使用生物安全柜意义重大。 应参照国家标准和相关文献向所有可能的使用人员说明生物安全柜的使用和限制性条款。应制定书面的标准操作规程或操
6、作手册并发给工作人员，使大家清楚并正确使用。生物安全柜虽然可以使操作者免受气溶胶的攻击，但并不能避免溅出、破裂的发生，后者有可能对操作者造成威胁。要注意，任何造成安全柜内气流紊乱的不良操作，都会危及操作者的安全。 生物安全柜只有再正常运转时方可使用。生物安全柜的性能应定期进行检测，其内容包括生物学（气溶胶等）和物理学指标，以保证其可靠性，要及时更换HEPA滤器。生物安全柜的检测频度应按国家有关要求进行。 一、 操作准备1 每次使用前应检查生物安全柜的正常指标，包括风速、气流量、负压等是否在正常范围。若出现异常应停止使用，进行检修。2 使用生物安全柜时，不要打开玻璃观察窗。3 开始工作之前，要准
7、备一张实验工作所需要的材料清单，先将工作所需物品放入，这样可以避免双臂在操作中频繁横向穿过气雾而破坏气流。放入生物安全柜的物品表面应用70乙醇进行消毒，以去除污染。4 打开风机5-10min，使安全柜内空气得到净化并且气流稳定。操作前，先调整好凳子或椅子的高度，以确保操作者的脸部在工作窗口之上。然后将双臂伸入安全柜静止至少1min，使安全柜内气流稳定后再开始操作。5 生物安全柜上装有窗式警报器和气流警报器两种警报器。当窗式警报器发出警报时，表明操作者将滑动窗移到了不当的位置，应将滑动窗移到适宜的位置；当气流警报器报警时，表明安全柜的正常气流模式受到了干扰，操作者或物品已处于危险状态，应立刻停止
8、工作，通知实验室主管，并采取相应的处理措施。二、物品摆放与污染预防措施1 生物安全柜内应尽量少放仪器和物品，只摆放本次工作需要的物品。2 不要阻塞后面气口处的空气流通。所有物品应尽量放在工作台后部靠近工作台后缘的位置，尤其使容易产生气溶胶的仪器，如离心机、涡旋振荡器等，应尽量往安全柜后部放置。要注意生物安全柜前面的空气栅格不要被吸管或其他材料挡住，因为这样会干扰气流的正常流动，引起潜在的材料污染。3 操作时，废物袋以及盛放废弃吸管的容器等必须放在安全柜内而不应放在安全柜之外，如其体积较大可放在一侧，但要注意体积不要太大，以免影响气流。污染的吸管、容器等应先放于安全柜中装有消毒液的容器中消毒1h
9、以上，方可转入医疗废物专用垃圾袋中进行高压灭菌等处理。4 洁净物品和使用过的污染物品要分开放在不同区域，工作台面上的操作应按照从清洁区到污染区的方向进行，以避免交叉污染。为吸收可能溅出的液滴，可在台面上铺一块用消毒剂浸湿的毛巾或纱布，但要注意不要盖住生物安全柜格栅。5 在柜内的所有工作都要在工作台中央或后部进行，并且通过观察窗能看见柜内的操作。操作者不要频繁移动及挥动手臂，以免破坏定向气流。6 工作用纸不允许放在生物安全柜内。7 尽量减少操作者背后人员的走动以及快速开关房间的门，以防止对生物安全柜的气流造成影响。三、明火的使用禁止在柜内使用本生灯，它产生的热量会改变气流方向，也可能破坏滤板。可
10、使用微型的电烧灼器进行细菌接种，但最好使用无菌的一次性接种环。一般情况下，生物安全柜内形成几乎没有微生物的环境，因此一般不需要使用酒精灯，以免对气流产生影响。四、消毒与灭菌大多数生物安全柜允许24h连续工作。实际上连续工作有助于控制实验室中灰尘和颗粒的水平。向房间中排风或通过套管接口与专门排风管连续的级A1型和级A2型生物安全柜，在不使用时可以关闭。其他通过硬管连接的生物安全柜如级B1型和级B2型生物安全柜，必须与房间通风系统连动，以维持房间空气的平衡。在工作完成后，应至少让安全柜继续工作5min来完成“净化”的过程，亦即应留出将污染的空气排出安全柜的时间。在操作结束后，应使用适宜的消毒剂（如
11、70乙醇）擦拭生物安全柜的台面和内壁（不包括送风滤器的扩撒板）。紫外灯对于生物安全柜不是必需的，实际上紫外灯的存在反而会阻挡安全柜内的气流。如果用紫外灯，必须每周清理紫外灯表面的灰尘和污垢，当安全柜重新检测时应同时检测紫外灯的强度，以确保它能正确地发挥作用。室内有人时紫外灯应关闭，以防皮肤和眼睛无意中暴露在紫外线下受到损伤。当生物安全柜内发生感染性材料溢洒时，应在生物安全柜处于工作状态下进行处理：（1） 当发生少量溢洒时，应用吸收纸巾立即处理，并立即用浸满消毒液的毛巾或纱布对生物安全柜及其内部的所有物品进行擦洗。工作面消毒后应更换手套，不论是摘下手套还是更换手套都要洗手。（2） 若发生大量溢洒，液体会通过生物安全柜前面或后面的格栅流到下面去，生物安全柜内所有的物品都应该进行表面消毒并拿出生物安全柜，在确保生物安全柜的排水阀被关闭后，可将消毒液倒在工作台面上，使液体通过格栅流到排水盘上作用1h以上，用真空装置吸出。所有接触溢出物品的材料都要进行消毒和或高压灭菌处理。
