1、重医临床检验基础血液（一）1.采血的方法及质量保证1.采血方法有哪些？如何操作？3.如何保证采血质量？4.真空采血管有哪些种类？5.多管采血时真空采血管的采血顺序？1.血液标本采集方法有哪些？各有什么利弊？操作时应注意些什么？1.皮肤采血法部位：左手中指或无名指指端内侧（WHO推荐）婴幼儿、严重烧伤者操作：穿刺深度约23mm，忌用力挤压，动作要迅速2 静脉采血法采血部位：肘静脉、颈外静脉。止血带不超过1分钟，以免瘀血和血液浓缩。1）注射器法切忌将气泡推入血管；应拔下针头，再将血液注入试管2）真空采血器法（负压采血法）试管塞勿松动；针外乳胶套勿取下；标有不同的色码，适于不同的检验项目；采血管混匀
2、：58次；采血后多管血液分配顺序：2.常用添加剂的原理及应用2.常用抗凝剂的种类、原理及适用范围？2.何谓抗凝剂？常用抗凝剂有哪些？3.EDTA、枸橼酸钠草酸钠肝素的原理及主要用途？*能阻止血液凝固的化学试剂称为抗凝剂（anticoagulant）3.血涂片的制备方法薄血膜法：血细胞形态（手工、仪器）；厚血膜法：疟原虫等6.血涂片的质量标准是什么？厚薄适宜，头、体、尾分明，分布均匀，两端和两侧留有空隙。（血膜至少长25mm，两侧空隙至少5mm）4.瑞氏染色的原理和影响因素7.瑞氏染色的原理？染色不佳的原因及处理。5.为什么瑞氏染色血片上可以*看到不同的色彩？构成这些色彩的物质是什么？细胞着色原
3、理：化学亲合、物理吸附嗜酸性物质：碱性物质与酸性伊红结合染成红色。Hb、嗜酸性颗粒嗜碱性物质：酸性物质与碱性美蓝结合染成蓝色。中性物质：与伊红美蓝均可结合，淡紫红色。细胞核：强碱性核蛋白（如组蛋白）与伊红结合，酸性DNA与碱性亚甲蓝结合，紫红色影响因素：1）瑞氏染液质量 2）pH对细胞染色的影响 3）染色时机 4）染液用量 5）染色时间 6）冲洗 7）脱色与复染：过深，可甲醇脱色、水浸泡；过浅，可复染（ 先加缓冲液后染液）4.pH对细胞染色有哪些影响？*环境pH偏酸染色偏红；pH偏碱染色偏蓝因此，选用清洁中性的玻片、优质甲醇、缓冲液（pH6.4-6.8）血液（二）1.HICN测定的原理及注意事
4、项。6.HiCN测定原理及注意事项？*7.SDS测定原理及注意事项 ？10.血红蛋白测定大致分为哪几类？ICSH推荐哪种方法？为什么要推荐此法？95.血红蛋白测定的方法有哪些？各有何优缺点？HICN波峰540nm评价：（1）ICSH和WHO推荐的参考方法。操作简便；结果稳定可靠；可测多种Hb（除SHb外）；可直接定值。（2）致命弱点：剧毒（3）不能测SHb，对HbCO转化慢。（4）脂血、高球蛋白、高白细胞、血小板增多可致Hb假性增高。SDS原理：Hb（除SHb外）+ SDS SDSHb（棕红色）SDS-Hb：波峰538nm，波谷500nm评价：突出优点：试剂无毒，常用方法（临床首选）未定需依赖
5、HiCN法间接得出结果（不能直接计算，需制备标准曲线）SDS会破坏WBC，不能用于WBC计数！2.RBC、Hb测定的临床意义。8.红细胞生理性，病理性增多的原因常见有哪些？9.红细胞病理性减少的主要原因？举例说明。RBC：（1）生理性减少6个月-2岁婴幼儿（造血原料不足）妊娠中、晚期（血液稀释）老年人（造血功能减退）（2）生理性增多新生儿、高原生活、剧烈运动（缺氧）；成年男性比女性高（男性雄性激素水平较高）（1）病理性减少：贫血（anemia）病因分类： RBC生成减少：骨髓造血功能低下（再障、白血病、恶性肿瘤骨髓转移等）；造血原料缺乏或利用障碍：如缺铁性贫血、巨幼贫。红细胞破坏增加：各种溶血
6、性贫血红细胞丢失过多：急、慢性失血（2）病理性增多相对性增多：血液浓缩所致。如剧烈呕吐、严重腹泻、大面积烧伤的患者。绝对性增多：慢性心肺疾病、真红，RBC可达（710）1012/LHb：基本同红细胞，但Hb判断贫血比RBC好。各种贫血时，红细胞和Hb减少程度可不一致。根据Hb，贫血分级：轻度12091 g/L；中度 9061 g/L；重度6031 g/L；极度 3%常伴有WBC减少，造血功能衰退表现。主要见于巨幼贫、恶性贫血。（二）中性粒细胞的毒性变化 中毒指数：含中毒颗粒的细胞在中性粒细胞中所占的比值。毒性指数愈大，中毒情况愈重。（1）大小不均(anisocytosis)（2）中毒颗粒（to
7、xic granulations）（3）空泡(vacuoles)（4）杜勒体（Dhle bodies）（5）退行性变(degeneration )（三）中性粒细胞的其他异常形态（1）棒状小体（auer bodies）：急性白血病（粒、单可见，淋巴无）（2）巨多核中性粒细胞：核超过5叶，巨幼贫（3）双核中性粒细胞：2个核，MDS、粒细胞白血病、巨幼贫（4）环形杆状核中性粒细胞：核呈环形，MDS、粒细胞白血病、巨幼贫（5）与遗传有关的中性粒细胞异常：Chediak-Higashi畸形、Alder-Reilly畸形May-Hegglin 畸形、Pelger-Huet 畸形（四）淋巴细胞的形态异常（1
8、）异型淋巴细胞：在某些病毒性感染或过敏原刺激下使淋巴细胞增生，并出现一定的形态变化称为异型淋巴细胞。Downey按形态特征将其分为以下三型：型(空泡型)、型(不规则型)、型(幼稚型)。一般病毒感染异淋10%（2）具有卫星核的淋巴细胞：淋巴细胞主核旁另有一游离小核。血液（五）1.血细胞分析仪的检测原理。2.血细胞分析仪参数的检测原理及意义。（一）细胞计数原理（RBC、WBC、PLT）1、电阻抗 2、激光散射法 3、二者联用（二）白细胞分类原理三分群（电阻抗法）；五分类（多项技术联合检测）（三）血红蛋白检测原理：溶血Hb Hb衍生物（波长530550nm）（四）网织红细胞计数原理1.VCS原理：新
9、亚甲蓝染色着色RNA，Hb溢出（影细胞）2.流式细胞技术（FCM）原理：网织红细胞RNA与吖啶橙、哌若宁-Y等染料结合，同时测前向散射光（体积）、荧光强度（RNA）得到二维散点图。血细胞分析仪的检测参数1.RDW（红细胞体积分布宽度）：反映外周血红细胞体积大小异质性的参数，用红细胞体积的变异系数来表示。RDW-CV：体积分布曲线上1SD的分布宽度与MCV的比值。RDW-SD灵敏，反映大、小、网织红细胞存在RDW-SD：红细胞分布的峰值相当于100%时的20%界限的分布宽度，以fl表示。不受MCV的影响。RDW-CV更好反映总体变化意义：用于贫血的形态学分类（RDW/MCV）诊断缺铁贫。95%以
10、上缺铁贫RDW异常。小细胞低色素贫血、RDW正常则缺铁贫可能不大。缺铁贫与轻型地贫的鉴别。均是小细胞低色素，但前者RDW升高，后者正常。3.血液分析仪性能评价。26.血细胞分析仪性能评价常选用哪些指标？如何评价？*1）空白检出限（limit of blank, LoB）：本底2）精密度：分批内、批间及总精密度。标本老化3）准确性：与真值一致性。参考方法(校准品测)4）携带污染率(carryover): (l1-l3)/(h3-l3)100%5）分析测量区间（analytical measuring interval, AMI）：稀释效果，线性范围6）可比性：与常规方法测定结果比较7）对异常标本
11、和干扰物的灵敏度8）参考区间的制定9）白细胞分类：重复性、准确性 （与人工分类比3较8 ）28.影响白细胞、血小板直方图异常的主要原因有哪些？WBC：M、E、B及幼稚细胞PLT：左移，PLT小；右移，PLT大；出现双峰：电磁波干扰或可能是小RBC或其碎片干扰。29.哪些情况下可见红细胞直方图是“双形”？为什么？*左移：小细胞；右移：大细胞；基底变宽：细胞大小不均；双峰：铁粒幼、缺铁治疗后31.哪些病理因素对血细胞分析仪测定有影响？高球蛋白血症、血栓性疾病存在冷纤维蛋白使血中非晶体物聚集，致使WBC、PLT；低色素性贫血、某些肝病等病人的RBC溶血不全而影响Hb的测定、WBC；高脂血症致Hb ；
12、有核红细胞、WBC过高的影响等血栓与出血1. BT、APTT、PT的概念。30.APTT测定有何临床意义？*32.PT测定有何临床意义？33.何为INR？测定INR有何临床意义？出血时间测定（BT）：将皮肤刺破后，血液自然流出到自然停止所需的时间。活化部分凝血活酶时间测定（APTT）：在受检血浆中加入接触因子激活剂(如白陶土)和部分凝血活酶(如脑磷脂)，在Ca2+的参与下，观察血浆所凝固的时间，是内源性凝血系统常用的筛选试验。意义：1目前推荐应用的内凝的筛选试验。2. APTT延长、和减低，能检出:C小于25的轻型血友病。、V、X严重缺乏，如肝病，维生素K缺乏。抗凝物质：口服抗凝剂、血循环中存
13、在病理性抗凝物质等。纤溶活性增强。3APTT缩短高凝状态，如DIC的高凝期 血栓性疾病，如心、脑血管病变，深静脉血栓等。4监测肝素治疗的首选指标以维持结果为基础值的1.53.0倍左右为宜。质控： 标本：抗凝剂、试管要求同前，立即送检，避免阳光直射。务必去除血小板（3000rpm，10min分离血浆,PPP） 温度：（371）C 时间：采血后2h以内测定。 试剂：白陶土质量不一，制活能力不同，血浆凝血酶原时间(PT)：在受检血浆中加入过量的组织凝血活酶和Ca2+，观测血浆的凝固时间，即为血浆凝血酶原时间。PT的长短反映了血浆中凝血酶原、纤维蛋白原和因子、的水平，是外源性凝血系统常用的筛选试验。意
14、义：1PT延长先天性凝血因子I、缺乏获得性凝血因子缺乏，如严重肝病、维生素K缺乏、纤溶亢进、DIC晚期血中抗凝物质增加，口服抗凝剂、肝素等。2PT缩短DIC早期，心肌梗死、脑血栓形成。3国际标准化比值（INR）是用于监测口服抗凝药的首选指标，预防深静脉血栓：以INR为1.52.5为宜；治疗静脉血栓、肺栓塞：2.03.0；动脉栓塞、心瓣膜置换：3.04.54凝血酶原活动度(prothrombin activity, PTA)：相当于正常人的百分率，评估肝脏受损程度PTA高低与肝损程度成反比。40%是诊断重型肝炎的重要依据，亦是判断重型肝炎预后的敏感指标。质控：基本同APTT测定。试剂：组织凝血活
15、酶试剂质量批间差异大，可比性差。4. 血小板计数的方法有哪些？手工法和仪器法检测血小板各需要注意些问题？方法：1显微镜计数法直接计数法：稀释、破坏RBC、充池、计数。根据稀释液不同分为：（1）草酸铵溶血直接计数法 优点：对RBC破坏力强，PLT形态清楚，国内推荐方法。；缺点：受操作者水平的影响。（2）复方尿素溶血直接计数法（许汝和法） 优点：血小板胀大易辩认；缺点：有时RBC破坏不完全；尿素不易保存。2血液分析仪法优点：可同时测PLT的多个指标，快速，适于临床。缺点：计数误差大3.流式细胞仪法（国际推荐参考方法）血小板膜上特有抗原：CD42a或CD61a，用荧光标记的单抗。质控：1.器材 标准
16、化、清洁干燥。2. 采血顺利3.计数时间 充池后15min再计数，采血后1h内计数完毕。4. 计数光线适中，注意与杂质鉴别。5.重复计数 同一份标本2次计数，相差10%，否则需再次计数6. 血涂片观察：PLT60109/L时，应观察血涂片意义：1. 生理变化：早晨较低，午后较高；剧烈运动后较高；月经、妊娠有改变；静脉血比毛细血管血高2病理变化：血小板减少（PLT100109/L）：血小板生成障碍：再障、放射性损伤、急性白血病血小板破坏或消耗增多：ITP、DIC血小板分布异常：如脾肿大、血液被稀释血小板增多（PLT400109/L）：原发性增多：慢粒、真红。反应性增多：急性化脓性感染、急性大出血
17、等。5. D-D测定的原理是什么？有什么临床意义？D-D是交联纤维蛋白的降解产物，继发性纤溶特有。免疫学方法检测意义：1排除血栓形成：阴性可排除2. 增高：继发性纤溶。血栓性疾病、肿瘤。原发性与继发性纤溶的鉴别3. 溶栓治疗的监测D-D显著升高。34.BT测定方法有哪些？分别加以评价。*1.出血时间测定器法(TBT)评价：伤口长度和深度固定，结果准确、敏感、重复性好，BT测定首选的方法。但病人不易接受。高度怀疑血管因素异常时才做。2.Ivy法评价：长度和深度难于控制，可靠性较差，已淘汰。尿液（一）1.尿液的生成与哪些因素有关，肾小球滤过膜屏障的组成2.尿液标本分为几种，各自优缺点46.餐后尿适
18、合作那些检查？为什么？47.晨尿有何特点？适合作什么检查？随机尿：留取任意时间的尿液优点：方便缺点：易受饮食、运动、用药等各种因素的影响使用范围：常用于门诊患者常规及急诊筛查晨尿：首次晨尿/卧位8h尿液优点：浓缩，酸化，空腹缺点：膀胱停留时间长，硝酸盐和葡萄糖易分解适用范围：可疑及已知有泌尿系统疾病患者；早期妊娠试验等第二次晨尿：收集首次晨尿排泄后2-4h内的尿液标本。患者准备：在前晚22：00点起到收集标本止，只能饮用200ml水，以提高细菌培养和有形成分计数的灵敏度。计时尿：收集一段时间内的尿液标本，如收集治疗后，进餐后，白天或卧床休息后的3h、12h或24h全部尿液。优点：可克服因不同时
19、间排出量不同的影响缺点：最常见问题是未能采集到全部尿量，需要患者密切配合。种类：3h尿（上午69点)；12h尿(晚8早8点）；24h尿（早8次日8点）；餐后尿（午餐后2-4h内）适用范围：定量测定、肌酐清除率试验和细胞学研究餐后尿：午餐后2h收集尿标本优点：增加试验敏感性，发现轻微病变适用范围：病理性糖尿、尿胆原和蛋白尿的检出。特殊体位尿：清晨起床后留第一次晨尿，取站位，保存脊柱前凸15mins，等候30-60mins后留第二次尿。适用范围：无症状的尿蛋白阳性者，考虑直立性蛋白尿。其他（微生物检验尿标本）清洁中段尿：患者洗手、清洗外阴并消毒后，用无菌容器收集中段尿立即密封送检。导尿或耻骨上膀胱穿刺尿：尽量不用3.尿液标本保存的方法及优缺点49.常用化学防腐剂有哪些？主要用途及注意事项？*冷藏：4度for 6-8h，维持略酸性优点：可防止一般细菌生长，利于有形成分保存缺点：可能有磷酸盐、尿酸盐析
