1、 江苏省第二中医院检验科 程序文件文件编号： 版本/修订号：A/0主题内容关于发布程序文件的声明生效日期：20080808 第 4 页 共144 页生化室作业指导书 文件编号：SEZYY-JYK-3-SF-04第A版编制： 钱宇清审核： 钱宇清批准： 曹勤生效日期：2008年8月8日江苏省第二中医院检验科 江苏省第二中医院检验科 生化室作业指导书文件编号： 版本/修订号：A/0主题内容 目 录生效日期：20080808 第 4 页 共128 页目 录序号主 题 内 容 代 号页 号1血清总胆红素测定SEZYY-JYK-3-SF-0162血清直接胆红素测定SEZYY-JYK-3-SF-02103
2、血清总蛋白液体双缩脲法测定SEZYY-JYK-3-SF-03134血清白蛋白溴甲酚绿法测定SEZYY-JYK-3-SF-04165血清丙氨酸氨基测定SEZYY-JYK-3-SF-05196血清天门冬氨酸氨基测定SEZYY-JYK-3-SF-06237血清碱性磷酸酶测定SEZYY-JYK-3-SF-07278血清-淀粉酶测定SEZYY-JYK-3-SF-08319血清葡萄糖己糖激酶法测定SEZYY-JYK-3-SF-093510血清尿素氮谷氨酸测定SEZYY-JYK-3-SF-103911血清肌酐苦味酸法测定SEZYY-JYK-3-SF-114312血清尿酸TBHBA法测定SEZYY-JYK-3
3、-SF-124613血清总胆固醇酶试剂法测定SEZYY-JYK-3-SF-134914血清甘油三酯酶试剂法测定SEZYY-JYK-3-SF-145315血清镁二甲苯胺蓝法测定SEZYY-JYK-3-SF-155616血清无机磷磷钼酸法测定SEZYY-JYK-3-SF-165917血清钙偶氮胂法测定SEZYY-JYK-3-SF-176218血清载脂蛋白A1测定SEZYY-JYK-3-SF-186519血清载脂蛋白B测定SEZYY-JYK-3-SF-196820血清高密度脂蛋白胆固醇测定SEZYY-JYK-3-SF-207121血清低密度脂蛋白胆固醇测定SEZYY-JYK-3-SF-217522血
4、清肌酸激酶(CK) 法测定SEZYY-JYK-3-SF-227923血清乳酸脱氢酶DGKC法测定SEZYY-JYK-3-SF-238224血清总胆汁酸循环酶法测定SEZYY-JYK-3-SF-248625血清二氧化碳酶试剂法测定SEZYY-JYK-3-SF-258926血清-谷氨酰转移酶测定SEZYY-JYK-3-SF-269227正常值、病理值复合控制品SEZYY-JYK-3-SF-279528血脂复合控制品SEZYY-JYK-3-SF-289729复合校准品SEZYY-JYK-3-SF-299930载脂蛋白A1、载脂蛋白B校准品SEZYY-JYK-3-SF-3010131高、低密度脂蛋白胆
5、固醇校准品SEZYY-JYK-3-SF-3110332722分光光度计维护规程SEZYY-JYK-3-SF-3210533纯水机操作维护规程SEZYY-JYK-3-SF-3310834AU2700生化分析仪操作维护规程SEZYY-JYK-3-SF-3411035离心机操作维护规程SEZYY-JYK-3-SF-3511436血气分析仪操作维护规程SEZYY-JYK-3-SF-3611537电解质分析仪操作规程SEZYY-JYK-3-SF-3711638生化室内质量控制操作程序SEZYY-JYK-3-SF-3812039生化室间质量控制操作程序SEZYY-JYK-3-SF-391264041424
6、34445464748495051525354555657585960 江苏省第二中医院检验科 生化室作业指导书文件编号： 版本/修订号：A/0主题内容 修 订 页生效日期：20080808 第 5 页 共128 页 修 订 页序号文件编号页码需更改的内容更改内容批准人批准日期123456789101112131415161718192021 江苏省第二中医院检验科 生化室作业指导书文件编号：SEZYY-JYK-3-SF-01版本/修订号：A/0主题内容 血清总胆红素(T-BIL)测定生效日期：20080808 第 9 页 共128 页血清总胆红素(T-BIL)测定1. 实验原理血清中的胆红素
7、分为直接（结合）胆红素和间接（未结合）胆红素。大多数方法是在1883年Ehrlich提出的重氮法胆红素测量法1，一些改良的方法已被用来增进反应。这些改良的方法是使直接胆红素直接和重氮化合物进行反应，生成一种有颜色的化合物，而间接胆红素需要一种溶剂，如表面活性剂后才能进行反应。奥林巴斯总胆红素试剂是改良的重氮法。使用一种稳定的重氮盐，2,4-二氯苯胺重氮盐（DCA），与胆红素反应，形成红色偶氮化合物，它在540nm吸光度最大。在540/600nm时的吸光度与标本中总胆红素的浓度成正比。胆红素+DCA 红色偶氮化合物 表面活性剂2. 标本：2.1 病人准备：无特殊要求。最好用禁食的标本以减少乳糜血
8、的干扰。2.2 类型：血清、肝素或EDTA血浆，应避光保存。3. 标本存放：1525保存可稳定2天；28保存可稳定7天；-20保存可稳定3个月，如冰冻保存，不可反复冻融！。4. 标本运输：常温条件下避光保存运输。5. 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染、脂血、非避光保存运输的标本。6. 实验材料6.1 试剂：奥林巴斯总胆红素试剂盒（ 试剂试剂空白对照）6.1.1 试剂准备：试剂为即用式。6.1.2试剂稳定性与贮存试剂避光保存于28，若无污染，可稳定至失效期。试剂有效期为18个月。试剂必需避光保存。试剂不可冰冻。6.1.3变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。6.1.4 注意事项
9、：此试剂为体外诊断用，不要入口，毒性还末确定；警告！腐蚀剂！不要入口；避免和眼睛，皮肤或衣服接触，如果接触到，立即用大量的水冲洗受损害的部位15分钟，接触到眼睛或吞服，立即寻找医疗保护。6.2 校准品：使用奥林巴斯校准品对自动分析仪进行校准，参见生化检验校准品和质控品.SOP文件6.3 质控品：参见生化检验校准品和质控品.SOP文件7. 仪器：奥林巴斯AU2700生化分析仪8. 操作步骤8.1 项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪项目测定参数.SOP文件。8.2仪器操作步骤：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪操作规程.SOP文件。9. 检验结果的判断与分析10. 质
10、量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。11. 计算方法：以TruCal U复合校准品校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果无需手工计算，以mol/L报告。手工测定计算方法为： Au总胆红素(mol/L) = 校准液浓度 As12. 参考值范围：婴儿： 出生24小时内 150mol/L出生第2天 22-193mol/L出生第3天 12-217mol/L出生第46天 1.7-216mol/L儿童： 一个月 3.4-17mol/L成
11、年人： 1.7-21mol/L参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。13. 临床意义：胆红素是血红蛋白的降解产物。游离胆红素非极性很强，几乎不溶解于水。在血液中与白蛋白形成复合物由脾脏向肝脏运输。在肝脏中，胆红素与葡萄糖醛酸结合,生成可溶性胆红素葡萄糖醛酸酯由胆管排入肠道。溶血（肝前黄疸）、实质的肝损伤（肝性黄疸）和胆管堵塞（肝后黄疸）都会导致血液胆红素增高，形成高胆红素血症。人群中常见先天性慢性高胆红素血症，称为Gilbert综合症。由于胆红素降解酶的功能滞后以及出生后红细胞破碎增多，使6070%的婴儿血液出现总胆红素增高。常用的胆
12、红素检测方法能检测总胆红素和直接胆红素。直接胆红素的测定主要检测水溶性的结合胆红素，因此可以根据总胆红素和直接胆红素的差来估计游离胆红素的含量。14. 操作性能14.1 线性范围：1.2513mol/L14.2 精密度：精密度的评估是根据NCCLS推荐的标准方法5，AU2700批内精密度小于3%或SD0.07，总精密度小于5%或SD0.10。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。批内精密度n=20(mol/L)s(mol/L)CV(%)批间精密度n=20(mol/L)s(mol/L)CV(%)样品115.220.4643.05样品114.880.4082.74样品217.44
13、0.4052.32样品219.660.6863.49样品382.600.7850.95样品379.522.2742.8614.3 方法学比较：本公司的试剂盒(y)与某商品化试剂盒(x)，同时对247个样品进行T-BIL检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下：y=1.00x-0.00mol/L；r=1.000。14.4 灵敏度：本试剂的检测限为1.2mol/L。14.5 病人结果可报告范围：1.2513mol/L15. 超出范围结果处理：本法线性上限为513mol/L。如样品测定值超过上限时，应将样品用0.9氯化钠溶液作1:1稀释，重新测定，结果乘以2。16. 病危报警值的处理 当新生儿血
14、清标本测定结果总胆红素340mol/L时，在经过复查等确认手段处理后应及时向临床主管医生汇报。17. 方法局限性17.1 本法线性上限为513mol/L。如样品测定值超过上限时，应将样品用0.9氯化钠溶液作1:1稀释，重新测定，结果乘以2。17.2 干扰物质：当样品中抗坏血酸浓度1704mol/L，血红蛋白浓度5.00g/L，甘油三酯浓度22.6mmol/L时没有观察到干扰。18. 补救措施：当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。19. 参考文献 1.Thomas L ed. Clinical Laboratory Diagnostics. 1st ed. Frankfurt:TH-Bo
15、oks Verlagsgesellschaft; 1998.p.192-202.2.Tolman KG, Rej R. Liver function. In: Burtis CA, Ashwood ER. editors. Tietz Textbook of Clinical Chemistry. 3rd ed. Philadelphia: W. B. Saunders Company; 1999. P.1125-77.3.Rand RN, di Pasqua A. A new diazo method for the determination of bilirubin. Clin Chem
16、 1962;6:570-8.20. 其他：仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按检验科废物处置管理规定执行。 江苏省第二中医院检验科 生化室作业指导书文件编号：SEZYY-JYK-3-SF-02版本/修订号：A/0主题内容 血清总胆红素(T-BIL)测定生效日期：20080808 第 12 页 共128 页血清直接胆红素（D-BIL）测定1. 实验原理直接胆红素与2,4-二氯苯胺重氮盐形成重氮化合物，在酸性条件下呈红色。2. 标本：2.1 病人准备：无特殊要求。最好用禁食的标本以减少乳糜血的干扰。2.2 类型：血清、肝素或EDTA血浆，应避光保存。3. 标本存放：1525保存可稳定2天；2
17、8保存可稳定7天；-20保存可稳定3个月，如冰冻保存，不可反复冻融！。4. 标本运输：常温条件下避光保存运输。5. 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染、脂血、非避光保存运输的标本。6. 实验材料6.1 试剂：奥林巴斯总胆红素试剂盒： 试剂空白对照6.1.1 试剂准备：试剂为即用式。6.1.2 试剂稳定性与贮存：试剂避光保存于28，若无污染，可稳定至失效期。试剂有效期为18个月。试剂2必需避光保存。试剂不可冰冻。6.1.3 变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。6.1.4 注意事项：此试剂为体外诊断用。警告！腐蚀剂！不要入口。避免和眼睛，皮肤或衣服接触。如果接触到，立即用大量的水
18、冲洗受损害的部位15分钟。接触到眼睛或吞服，立即寻找医疗保护。6.2 校准品：使用奥林巴斯公司提供的校准品对自动分析仪进行校准，参见生化检验校准品和质控品.SOP文件6.3 质控品：参见生化检验校准品和质控品.SOP文件7. 仪器：奥林巴斯AU2700生化分析仪8. 操作步骤8.1 项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2 仪器操作步骤：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪操作规程.SOP文件检验结果的判断与分析10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，
19、判断是否在控。质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。11. 计算方法 以TruCal U复合校准品校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果无需手工计算，以mol/L报告。手工测定计算方法为： Au直接胆红素(mol/L) =-校准液浓度 As12. 参考值范围：6.8mmol/L参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。13. 临床意义：胆红素是血红蛋白的降解产物。游离胆红素非极性很强，几乎不溶解于水。在血液中与白蛋白形成复合物由脾脏向肝脏运输。在肝脏中，胆红素与葡萄糖醛酸结合,生成可溶性胆红素葡萄糖醛酸酯
20、由胆管排入肠道。溶血（肝前黄疸）、实质的肝损伤（肝性黄疸）和胆管堵塞（肝后黄疸）都会导致血液胆红素增高，形成高胆红素血症。人群中常见先天性慢性高胆红素血症，称为Gilbert综合症。由于胆红素降解酶的功能滞后以及出生后红细胞破碎增多，使6070%的婴儿血液出现总胆红素增高。常用的胆红素检测方法能检测总胆红素和直接胆红素。直接胆红素的测定主要检测水溶性的结合胆红素，因此可以根据总胆红素和直接胆红素的差来估计游离胆红素的含量。14. 操作性能14.1 线性范围：1.7171mmol/L14.2 精密度：精密度的评估是根据NCCLS推荐的标准方法5，AU2700批内精密度小于4%或SD0.04，总精
21、密度小于5%或SD0.07。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。批内精密度n=20(mol/L)s(mol/L)CV(%)批间精密度n=20(mol/L)s(mol/L)CV(%)样品16.00.203.34样品16.20.193.12样品212.80.121.00样品213.00.191.46样品336.40.260.71样品335.40.461.3014.3 方法学比较：本公司的试剂盒(y)与某商品化试剂盒(x)，同时对85个样品进行DBIL检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下：y=0.95x+0.68mol/L；r=0.995。14.4 灵敏度：1.7mmol
22、/L。14.5 病人结果可报告范围：1.7171mol/L15 超出范围结果处理 本法线性上限为171mmol/L。样品测定值超过上限时，应将样品用0.9氯化钠溶液作1:1稀释，重新测定，结果乘以2。16. 病危报警值的处理 无。17. 方法局限性17.1 本法线性上限为171mmol/L。样品测定值超过上限时，应将样品用0.9氯化钠溶液作1:1稀释，重新测定，结果乘以2。17.2干扰物质：当样品中抗坏血酸浓度1704mol/L，甘油三酯浓度22.6mmol/L时没有观察到干扰。血红蛋白浓度0.50g/L将产生干扰。18. 补救措施：当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。19. 参考文献
23、：Tietz, N.W.(Ed), Fundamentals of Clinical Chemistry, 3rd Edition, W.B. Saunders,1987.Van den Bergh, A. and Mueller, P., Biochem Z,77:90,1916NCCLS, Interference Testing in Clinical Chemistry, EP7-P,1986.Young, D.S., Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, 4th Edition, AACC Press, 1995.NCCLS,
24、Evaluation Protocol EP5-T2,1992.Rand, R. N., DI Pasque, A., Clin Chem 1962; 8: 570 Henry, J., Cannon, D. C., Winkelmann, J. V., Clinical chemistry, principles and technics, Harper & Row Publishers Ins., Hagerstown Maryland, 1974:1042Thomas, L.: Labor and diagnose, 4th edition, Die Medizinische Verla
25、gsgesellschaft, Marburg, 1992: 23520. 其他：仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按检验科废物处置管理规定执行。 江苏省第二中医院检验科 生化室作业指导书文件编号：SEZYY-JYK-3-SF-03版本/修订号：A/0主题内容 血清总蛋白液体测定生效日期：20080808 第 15 页 共128 页血清总蛋白液体(TP)双缩脲法测定1. 实验原理双缩脲比色终点法。在碱性条件下，蛋白与铜离子生成紫蓝色复合物。显色强度和蛋白浓度成正比。OH蛋白质 + Cu2+ -紫红色复合物2. 标本采集2.1 病人准备：无特殊要求。最好用禁食的标本以减少乳糜血的干扰。2.
26、2 类型：血清或血浆。3. 标本存放 2025保存可稳定6天；48保存可稳定4周；-20保存至少可稳定1年。4. 标本运输 室温条件下运输5. 标本拒收标准：细菌污染的不能做测定。6. 实验材料:6.1 奥林巴斯总蛋白测定试剂盒 试剂1试剂26.1.1试剂准备：试剂为即用式。6.1.2 试剂稳定性与贮存：试剂避光保存于225，若无污染，可稳定至失效期。试剂有效期为24个月。试剂不可冰冻。开盖后应避免污染。6.1.3 变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。6.1.4 注意事项：试剂中含有氢氧化钠，不可入口！如与皮肤及粘膜接触，请立即用大量水冲洗。使用试剂时应采取必要的防护。6.
27、2 校准品：使用奥林巴斯公司提供的校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。7. 仪器：奥林巴斯AU2700生化分析仪8. 操作步骤8.1 项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2仪器操作步骤：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪操作规程.SOP文件9. 检验结果的判断与分析10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。11. 计算方法：以TruCal U复合校准品总蛋白校准值或标准品标准值校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以g/L报告。12. 参考值范围
