1、临床检验仪器第三章显微镜习题 第三章 显微镜1、名词解释1. 光学显微镜：光学显微镜是利用光学原理，把人眼所不能分辨的微小物体放大成像，供人们提取物质微细结构信息的光学仪器。2. 荧光显微镜：荧光显微镜是以紫外线为光源来激发生物标本中的荧光物质，产生能观察到的各色荧光的一种光学显微镜。3. 相衬显微镜：相衬显微镜是利用光的衍射和干涉现象，把相位差变为振幅差，主要用于观察活细胞和未染色的标本。4. 暗视野显微镜：暗视野显微镜是根据光学中丁铎尔现象原理设计的显微镜，可用来研究活细胞的形态和运动。5. 偏光显微镜：偏光显微镜是利用光的偏振特性，对具有双折射性（即可以使一束入射光经折射后分成两束折射光
2、）的晶态、液晶态物质进行观察和研究的重要光学仪器。6. 激光扫描共聚焦显微镜：LSCM利用单色激光扫描束经过照明针孔形成点光源对标本内焦平面的每一点进行扫描，标本上的被照射点在检测器的检测针孔处成像，由检测针孔后的光电倍增管（PMT）或电感耦合器件（CCD）逐点或逐线接收，迅速在计算机监视器屏幕上形成荧光图像。7. 倒置显微镜：在观测活体标本时，须把照明系统放在载物台及标本之上，而把物镜组放在载物台器皿下进行显微镜放大成像。这种类型的显微镜成为倒置显微镜，又称生物培养显微镜。8. 紫外光显微镜：紫外光显微镜使用紫外光源可以明显提高显微镜的分辨率，对于生物样品还具有独特的效果。9. 电子显微镜：
3、电子显微镜（EM）是根据电子光学原理，用电子束和电子透镜代替光束和光学透镜，是物质的细微结构在非常高的放大倍数下成像的仪器。10. 透射电子显微镜：透射电镜（TEM）是各类电镜中发展最早、应用最广泛的。现代TEM泛指加速电压在20200kV,分辨率在0.10.3nm，放大率在50500 000倍的普通TEM。11. 扫描电子显微镜：扫描电子显微镜（SEM）的分辨率一般为310nm，放大率为5300 000倍，加速电压为130kV，SEM的景深长、视野大、图像有立体感、样品制备简单、放大率范围广、能够观察较大样品的局部细微结构。12. 扫描隧道电子显微镜：STM是根据量子力学原理中的隧道效应和三
4、维扫描设计的。当原子尺度的针尖在不到一个纳米的高度上扫描样品时，此处电子云重叠，外加电压为2mV2V，针尖与样品间产生隧道效应而有电子逸出，形成隧道电流，通过隧道电流获取行为图像，而不需要光源和透镜（“扫描隧道显微镜”因此而得名）。13. 分辨率：分辨物体微细结构的能力，是所有光学测量仪器的最重要的性能参数之一。=0.61/nsin=0.61/NA.14. 放大率：M=maq,M是显微镜的总放大倍率，m是物镜放大倍率，a是目镜放大倍率，q是双目显微镜中所增设的棱镜所起的放大倍数。15. 数值孔径：NA是物镜前透镜与被检物体之间介质的折射率（n）和孔径角一半（）的正弦值乘积。NA=nsin.16
5、. 景深与焦长：又称焦点深度，是指当显微镜调焦于某一物平面（对准平面）时，位于对准平面前后两侧的两个仍能清楚观察的平面间的距离。17. 视野：又称视场，是指通过显微镜所能看到标本所在空间的范围。18. 齐焦：当某一物镜调焦清晰后，变换其他物镜时，也能基本保证焦距适当、成像清晰。19. 显微摄影术：是利用显微照相装置，把显微镜视野中所观察到物件的细微结构真实地记录下来，以供进一步分析研究之用的一种技术。2、选择题【A型题】在五个选项中选出一个最符合题意的答案。1. 在光学显微镜下所观察到的细胞结构称为（A）A. 显微结构B. 超微结构C. 亚显微结构D. 分子结构E. 微细结构2. 研究细胞的亚
6、显微结构一般利用（B）A. 显微镜技术B. 电子显微镜技术C. 离心技术D. 电泳技术E. 激光扫描共聚焦显微镜技术3. 研究组织或细胞显微结构的主要技术是（A）A. 显微镜技术B. 电镜技术C. 离心技术D. 电泳技术E. 放射自显影技术4. 分离细胞内不同细胞器的主要技术是（C）A.显微镜技术B.电镜技术C.离心技术D.电泳技术E.放射自显影技术5.用显微镜观察细胞时，选择下列哪种目镜与物镜的组合在视野内看到的细胞数目最多（A）A.目镜10X,物镜4XB.目镜10X，物镜10XC.目镜10X，物镜20XD.目镜10X，物镜40XE.目镜15X，物镜40X6.在物镜里增加一个相位板和在聚光镜
7、上增加一个环形光阑的显微镜是（E）A.透射电镜B.扫描电镜C.荧光显微镜D.暗视野显微镜E.相衬显微镜7.关于光学显微镜，下列说法有误的是（C）A.采用日光作光源，将微小物体形成放大影像的仪器B.细菌和线粒体是光镜能清晰可见的最小物体C.由光学系统、机械装置和照明系统三部分组成D.可用于观察细胞的显微结构E.光学显微镜最重要的是物镜8.关于光学显微镜的使用，下列有误的是（D）A.用显微镜观察标本时，应双眼同睁B.按照从低倍镜到高倍镜再到油镜的顺序进行标本的观察C.使用油镜时，需在标本上滴上镜油D.使用油镜时，需将聚光器降至最低，光圈关至最小E.使用油镜时，不可一边在目镜中观察，一边上升载物台9
8、.适于观察细胞复杂网络如内质网膜系统、细胞骨架系统的三维结构的显微镜是（D）A.普通光学显微镜B.荧光显微镜C.相衬显微镜D.激光扫描共聚焦显微镜E.暗视野显微镜10.关于激光扫描共聚焦显微镜，下列说法有误的是（E）A.以单色激光作为光源B.激光变成点光源后聚焦到标本成为点照明C.点光源激光束在标本的整个焦平面进行光点扫描后在荧光屏上成像D.图像信息要经电脑三维重建处理E.所用标本须经超薄切片11.下面对透射电镜描述不正确的是（E）A.利用泛光式电子束和透射电子成像B.观察细胞内部超微结构C.发展最早D.性能最完善E.景深长、图像立体感强12.用于观察活细胞中有规则的纤维结构如纺锤丝、染色体以
9、及纤维丝等构造的光学显微镜是（E）A.荧光显微镜B.相衬显微镜C.普通显微镜D.暗视野显微镜E.偏振光显微镜13.关于相衬显微镜，下列说法有误的是（C）A.利用了光的衍射和干涉特性B.可使相位差变成振幅差C.所观察的标本要经固定处理D.一般使用高压汞灯作光源E.装有环形光阑、相位板等部件14.光学显微镜的分辨率（最小分辨距离）是（B）A.0.1umB.0.2umC.0.3umD.0.4umE.0.5um15.关于光学显微镜的分辨率，下列有误的是（C）A. 是光学显微镜的主要性能指标B. 也可称为分辨本领C. 与照明光的波长成反比D. 指分辨出标本上两点间最小距离的能力E. 显微镜的分辨率由物镜
10、决定1. 分别使用光镜的低倍镜和高倍镜观察同一细胞标本，可发现在低倍镜下（B）A. 像较小、视野较暗B. 像较小、视野较亮C. 像较大、视野较暗D. 像较大、视野较亮E. 像及视野的亮度均不改变2. 适于观察小细胞或细胞群体复杂而精细的表面或断面的立体形态与结构的显微镜是（D）A. 普通光学显微镜B. 荧光显微镜C. 相差显微镜D. 扫描电子显微镜E. 透射电镜3. 适于观察细胞内超微结构的显微镜是（A）A. 透射电镜B. 普通光学显微镜C. 荧光显微镜D. 相差显微镜E. 暗视野显微镜4. 关于荧光显微镜，下列哪一项有误（E）A. 其光源通常为高压汞灯或氙灯B. 必须装备为激发滤片和压制滤片
11、C. 根据光化荧光的原理设计制造的D. 可用于观察固定细胞和活细胞E. 应在较明亮的环境中使用5. 关于电子显微镜，下列哪项有误（A）A. 组织或细胞观察前均需经超薄切片B. 分为透射式和扫描式两大类C. 分辨率可达0.3nmD. 利用电子束作照明源E. 在荧光屏上成像6. 下列哪种显微镜需将标本进行超薄切片并经醋酸铀等染料染色后才能观察（B）A. 扫描式电子显微镜B. 透射式电子显微镜C. 扫描隧道显微镜D. 荧光显微镜E. 相差显微镜7. 电子散射少、对样品损伤小、可用于观察活细胞的电子显微镜是（C）A. 普通透射电镜B. 普通扫描电镜C. 超高压电镜D. 扫描透射电镜E. 扫描隧道显微镜
12、23.关于透射式电镜，下列哪项叙述是错误的（E）A. 有德国科学家Ruska等发明B. 以电子束作为光源C. 电子透过标本后在荧光屏上成像D. 分辨率较高E. 适于观察细胞的外观形貌24.关于扫描式电镜，下列哪项有误（E）A.20世纪60年代才正式问世B. 景深长，成像具有强烈立体感C. 电子扫描标本使之产生二次电子，经收集放大后成像D. 标本无需经超薄切片即可观察E. 适于观察细胞的内部结构25.适于观察细胞表面及断面超微结构三维图像的仪器是（D）A.普通光镜B.荧光显微镜C.相差光镜D.扫描电镜E.透射电镜26.适于观察培养瓶中活细胞的显微镜是（D）A.透射电镜B.扫描电镜C.荧光显微镜D
13、.倒置显微镜E.相差显微镜27.要将视野内的物象从右侧移到中央，应向哪个方向移到标本（B）A.左侧B.右侧C.上方D.下方E.以上都可以28.当显微镜的目镜为10X，物镜为10X时，在视野直径范围内看到一行相连的8个细胞。若目镜不变，物镜换成40X时，则在视野可看到这行细胞的（A）A.2个B.4个C.16个D.32个E.64个1. 收集轰击样品所产生的二次电子经转换放大后在荧屏上成像的显微镜是（B）A. 透射电镜B. 扫描电镜C. 荧光显微镜D. 倒置显微镜E. 相差显微镜2. 下列哪种组成不是荧光显微镜的结构元件（E）A. 激发光源B. 二组滤光片C. 二色镜D. 聚光镜E. 环形光阑3.
14、用于透射电镜的超薄切片厚度通常为（A）A.50100nmB.0.2umC.10umD.2nmE.100um4. 人们需要观察立体感很强的细胞的三度（维）空间的微细结构，需要（D）技术。A. 光镜B. 透射电镜C. 扫描电镜D. 超高压透射电镜E. 免疫荧光镜5. 用荧光染料标记的抗体处理细胞后在荧光显微镜下对细胞的特殊分子进行定位属于（B）A. 放射自显影技术B. 免疫荧光显微镜技术C. 免疫电镜技术D. 液相杂交技术E. 原位杂交技术6. 关于超薄切片，下列哪种说法有误（E）A. 厚度在50100nm的切片成为超薄切片B. 超过超薄切片可将一个细胞切成100200片C. 制备超薄切片需使用专
15、门的器械超薄切片机D. 超薄切片常用玻璃制成的刀切成E. 组织细胞样品被切片之前常需双重固定但无需包埋7. 关于扫描隧道显微镜（STM），下列哪项叙述错误（C）A. STM是IBM苏黎世实验室的Binnig等人在1981年发明的B. 为扫描探针显微镜的一种，具有高分辨本领C. 仅可在真空条件下工作D. 依靠一极细的金属针在标本表面扫描来探测标本的形貌E. 可直接观察到DNA、RNA和蛋白等生物大分子8. 落射式荧光显微镜的吸收滤片应安装在（D）A. 激发滤片与分色镜之间B. 物镜与分色镜之间C. 光源与激发滤片之间D. 分色镜与目镜之间E. 物镜与载玻片之间9. 下面哪一种措施与提高显微镜分辨
16、能力无关（D）A. 使用波长较短的光源B. 使用折射率高的介质C. 扩大物镜直径D. 使用放大倍率较高的目镜E. 提高分辨本领10. 透射电镜的反差取决于样品对（B）的散射能力A. 二次电子B. 入射电子C. 样品质量厚度D. 样品质量E. 样品性质11. 某学生在显微镜下观察标本切片，当转动细调节螺旋时，有一部分细胞看的清晰，另一部分细胞较模糊，这是由于（A）A. 反光镜未调节好B. 标本切得厚薄不均C. 细调节螺旋未调节好D. 显微镜物镜损坏E. 聚光镜光圈大小不合适12. 仅仅反映固体样品表面形貌信息的物理信号是（B）A. 背散射电子B. 二次电子C. 吸收电子D. 透射电子E. 俄歇电
17、子13. 如图所示，1、2为物镜长度，3、4为目镜长度，5、6为观察时物镜与标本切片间距离，哪种组合情况下，显微镜的放大倍数最大（C）A.1、3、5B.2、4、6C.2、3、5D.2、4、5E.2、3、414. 在光学显微镜下，观察透明的、染色较浅的细胞时，必须注意做到（A）A. 把光圈缩小一些，使视野暗一些B. 把光圈开大一些，使视野暗一些C. 把光圈缩小一些，使视野亮一些D. 把光圈开大一些，使视野亮一些E. 以上全不是15. 在普通光学显微镜下，一个细小物体被显微镜放大50倍，这里“被放大50倍”是指该细小物体的（D）A. 体积B. 表面积C. 像的面积D. 长度或宽度E. 像的长度或宽
18、度16. 电子枪产生的电子是（A）A. 入射电子B. 透射电子C. 弹性散射电子D. 二次电子E. 俄歇电子17. 用来显示组织和细胞的内部超微结构的电子为（B）A. 入射电子B. 透射电子C. 弹性散射电子D. 二次电子E. 吸收电子18. 下面哪种电镜可以在观察结构的同时，对组织细胞内的元素成分进行分析（C）A. 透射电镜B. 扫描电镜C. 扫描隧道显微镜D. 超高压透射电镜E. 原子力显微镜19. 二次电子检测系统不包括（A）A. 收集体B. 显像管C. 闪烁体D. 光电倍增管E. 视频放大器20. 扫描电镜的反差是由（A）决定的A. 二次电子产率B. 反射电子产率C. 吸收电子产率D.
19、 俄歇电子产率E. 特征X射线产率【X型题】每题的备选答案中有两个或者两个以上的正确答案。1. 物象在低倍镜（10X）下清晰可见，换高倍镜（40X）后看不见了，这是因为（ABD）A. 玻片放反了B. 高倍物镜故障C. 物象不在视野正中央D. 焦距没调好E. 低倍物镜故障2. 在普通光镜上可用于调节视野内光线强弱的装置有（BCD）A. 通光孔B. 反光镜C. 光阑D. 聚光镜E. 目镜3. 常用于观察细胞超微结构的仪器是（CD）A. 荧光显微镜B. 相衬显微镜C. 扫描电镜D. 透射电镜E. 暗视野显微镜4. 普通光镜上决定放大倍数的部件有（AB）A. 目镜B. 物镜C. 反光镜D. 聚光镜E.
20、 光阑5. 普通光学显微镜物镜中哪些不能浸在香柏油中使用（ABCD）A.4X物镜B.10X物镜C.40X物镜D.45X物镜E.100X物镜6. 透射电镜所具有的特征有（ABD）A. 分辨率高B. 放大倍数高C. 成像立体感强D. 标本须超薄E. 标本表面喷镀金属膜7. 扫描电镜的基本特征是（ABD）A. 可见细胞表面的三维形态B. 成像立体感强C. 标本须超薄D. 标本表面喷镀金属膜E. 放大倍数高8. 在电镜下观察到的细胞结构称为（BC）A. 显微结构B. 超微结构C. 亚显微结构D. 微细结构E. 电镜结构9. 荧光显微镜以紫外线为光源，通常采用落射式照明，是因为（BE）A. 如采用柯拉式
21、照明，紫外线会伤害人的眼睛B. 紫外线穿透能力较弱C. 紫外线可通过镜筒中安装的双向反光镜D. 视野背景很暗E. 整个视场均匀照明10. 适于观察无色透明活细胞微细结构的光学显微镜是（AD）A. 相衬显微镜B. 暗视野显微镜C. 荧光显微镜D. 偏振光显微镜E. 普通显微镜3、简答题1. 试述光学显微镜的工作原理。显微镜是由两组会聚透镜组成的光学折射成像系统，是利用光学原理，把人眼所不能分辨的微小物体放大成像，供人们提取物质微细结构信息的光学仪器。把焦距较短、靠近观察物、成实像的透镜组称为物镜，而焦距较长，靠近眼睛、成虚像的透镜组称为目镜。被观察物体位于物镜的前方，被物镜 作第一级放大后成一倒
22、立的实像，然后此实像再被目镜作第二级放大， 得到最大放大效果的倒立的虚 像，位于人眼的明视距离处。2. 试述光学显微镜的结构组成。基本结构包括光学系统和机械系统两大部分。光学系统是显微镜的主体部分，包括物镜、目镜、聚光镜及反光镜等组成的照明装置。机械系统是为了保证光学系统的成像而配置的，包括调焦系统、载 物台和物镜转换器等运动夹持部件以及底座、镜臂、镜筒等支持部件。照明设置的主要部件有光源、滤 光器、聚光镜和玻片等。3. 物镜和目镜在工作条件和技术要求上有哪些不同？显微镜的物镜、目镜各由数只组成一套，物镜和目镜间的不同组合构成不同的放大倍率。物镜 采用转换器调换，显微镜的物镜应满足齐焦要求，即
23、调换物镜后，不需要重新调焦就能看到物体的像。 为此，不同倍率物镜的共轭距应为常数。目镜采用插入式调换，目镜的相对孔径很小，一般为 1/201/40。 显微镜的目镜是在窄光束、大视场的条件下工作的。4. 光学显微镜的性能参数有哪些？这些参数间的影响和制约关系如何？显微镜的性能参数主要有放大率、数值孔径、分辨率、视场、景深、镜像高度、镜像清晰度、工作距离和机械筒长。显微镜的数值孔径与其放大率成正比u,与分辨率、景深成反比，它的平方与图像亮度成正比。因此，使用较大数值孔径的物镜，其放大率和分辨本领较高，但视场、景深、工作距离较小。5. 试述医学检验中常用的荧光显微镜的原理、结构、用途及使用注意事项。
24、荧光显微镜是以紫外线为光源来激发生物标本中的荧光物质，产生能观察到的各种颜色荧光的一种光学显微镜。荧光显微镜是由光源、滤色系统和光学系统等主要部件组成。荧光显微镜与普通光学显微镜主要区 别在于光源和滤光片不同。通常用高压汞灯作为光源，可发出紫外线和短波长的可见光；滤光片有二组， 第一组称激发滤片，位于光源和标本之间，仅允许能激发标本产生荧光的光通过(如紫外线)；第二组是 阻断滤片，位于标本与目镜之间，可把剩余的紫外线吸收掉，只让激发出的荧光通过，这样既有利于增 强反差，又可保护眼睛免受紫外线的损伤。光学系统主要有反光镜、聚光镜、目镜、物镜、照明系统等 组成。荧光显微镜可用于观察检测细胞中能与荧
25、光染料特异结合的特殊蛋白、核酸等，其标本染色简便、荧光图像色彩鲜亮，而且敏感度较高。使用荧光显微镜时应注意以下事项：观察对象必须是可自发荧光或已被荧光染料染色的标本；载玻片、盖玻片及镜油应不含自发荧光杂质；选用最好的滤片组；荧光标本一般不能长久保存，若持续长霎时间照射(尤其是紫外线)易很快褪色。因此，如有条件则应先照相存档，再仔细观察标本；启动高压汞灯后，不得在 15 分钟内将其关闭，一经关闭，必须待汞灯冷却后方可再开启。严禁频繁 开闭，否则，会大大降低汞灯的寿命；若暂不观察标本时，可拉过阻光光帘阻挡光线。这样，即可避 免对标本不必要的长时间照射，又减少了开闭汞灯的频率和次数；较长时间观察荧光
26、标本时，最好戴 能阻挡紫外光的护目镜，加强对眼睛的保护。6. 试述相衬显微镜的工作原理、结构特点及其主要用途。相衬显微镜的基本原理是把透过标本的可见光的光程差变成振幅差，从而提高了各种结构间的对比度，使各种结构变得清晰可见。光线透过标本后发生折射，偏离了原来的光路，同时被延迟了 1/4（波长），如果再增加或减少 1/4，则光程差变为 1/2，两束光合轴后干涉加强，振幅增大或减小， 提高反差。相衬显微镜的结构特点：环形光阑（annular diaphragm） 位于光源与聚光镜之间，作用是使 透过聚光镜的光线形成空心光锥，聚焦到标本上；相位板（annular phaseplate） 在物镜中加了
27、涂 有氟化镁的相位板，可将直射光或衍射光的相位推迟 1/4，并能吸收直射光(背景光)的光强，使直射 光与衍射光的光强趋于一致，能更好地突出干涉的效果。相衬显微镜主要用于观察活细胞和未染色的标本。7. 试述偏光显微镜的结构特点、工作原理及其主要用途。是利用光的偏掁特性，对具有双折射性(即可以使一束入射光经折射后分成两束折射光)的晶态、液晶态物质进行观察和研究的重要光学仪器。 偏光显微镜是在一般显微镜的基础上增添了使普通光线转变成偏振光和检测偏振光的装置或观察干涉图样的特殊透镜，即光源前有偏振片（起偏器），使进入显微镜的光线为偏振光，镜筒中有检偏器（一 个偏振方向与起偏器垂直的起偏器），这种显微镜
28、的载物台是可以旋转的。当载物台无样品时，无论如 何旋转载物台，由于两个偏振片是垂直的，显微镜里看不到光线。而放入旋光性物质后，由于光线通过 这类物质时发生偏转，因此旋转载物台便能检测到这种物体。移相装置是偏光显微镜在使用过程中不可 缺少的附件。全波片、半波片及 1/4 波片可以使通过波片的偏振光分别延迟 2、 和 /2 的相位。 而补偿器则可连续调节使通过的偏振光相位发生连续改变。移相装置对观察光的偏振性质是十分必要的。利用偏光显微镜可以清楚地观察到纤维丝、纺锤体、胶原、染色体、卵巢、骨骼、毛发、活细胞的结晶或液晶态的内含物、神经纤维、肌肉纤维等的细微结构等。8. 试述激光扫描共聚焦显微镜的工
29、作原理。激光扫描共聚焦显微镜利用单色激光扫描束经过照明针孔形成点光源，对标本内焦平面上的每一点进行扫描，标本上的被照射点，在检测器的检测针孔处成像，由检测针孔后的光电倍增管逐点或逐 线接收，迅速在计算机监视器屏幕上形成荧光图像，照明针孔与检测针孔相对于物镜焦平面是共轭的。 焦平面的点同时聚焦于照明针孔和检测针孔，焦平面以外的点不会在检测针孔处成像，这样得到的共聚 焦图像是标本的光学横断面，克服了普通荧光显微镜图像模糊的缺点。另外在显微镜的载物台上加一个 微量步进马达，可使载物台沿着 Z 轴上下移动，将样品各个层面移到照明针孔和检测针孔的共焦面上， 样品的不同层面的图像都能清楚地显示，成为连续的
30、光切图像。9. 试述激光扫描共聚焦显微镜的结构特点及其在医学领域的主要用途。激光共聚焦显微镜是在荧光显微镜成像基础上加装了激光扫描装置，利用计算机进行图像处理， 使用紫外或可见光激发荧光探针，从而得到细胞或组织内部微细结构的荧光图像。另外在其载物台上加 一个微量步进马达，可使载物台沿着 Z 轴上下移动，将样品各个层面移到照明针孔和检测针孔的共焦面 上，样品的不同层面的图像都能清楚地显示，成为连续的光切图像。激光扫描共聚焦显微镜(Laser Scanning Confocal Microscope，LSCM)具有高灵敏度、高分辨率、高放大率等特点。在医学领域主要用于细胞三维重建、细胞定量荧光测定、细胞内钙离子、pH 值和其它 离子的动态分析、细胞间通讯和膜的流动性等过程的研究。10. 电镜的基本类型有哪些？各有什么特点？电镜的基本类型有透射电子显微镜与扫描电子显微镜。射电子显微镜与扫描电子显微镜都用于放大与分辨微小结构，这两种技术通过标本对电子束的影响来探测标本结构。透射电子显微镜的电子束穿过标本，聚焦成像于屏幕或显像屏上，扫描电子
