1、培养基模拟灌装方案培养基模拟灌装方案* 药业有限公司验证方案* 生产线培养基灌装版本颁布日期版本描述00*原始版本小组主要成员及职责*培根据确认与验证管理规程规定，组织成立 养基灌装验证小组，验证小组成员及职责如下表：组长姓名岗位部门职责验证QA质量保 证部总体负责本次验证；协调安 排验证小组成员工作。组织 起草验证方案；组织验证实 施；组织分析验证结果；汇 总起草验证报告；对验证结 果负责；负责组织沉降菌、 浮游菌.、表面微生物取样； 督促验证过程偏差及漏项的 处理；负责验证资料归档。验证QA质量保 证部负责复核试验方案版 本、格式正确性及报告内容 是否完整、正确、符合逻辑；负责协调试验实施
2、过程中各 部门间工作、组织调查处理 试验中的偏差事件。技术主管制造二部负责协助起草验证方案及报 告，负责验证生产中的过程 监控安排，安排验证时间， 安排操作人员，督促验证方 案及报告的起草、审核、归 档。参与验证过程偏差及漏 项的处理。质量监督 室主管质量保 证部负责协助起草验证方案及报 告，负责安排QA人员进行现 场监控及相关检测，参与验 证过程偏差及漏项的处理。生测室主管质量检 验部负责协助起草验证方案及报 告，负责相关的检测工作安理化室主排，参与验证过程偏差及漏管项的处理。方案会签及审批起草人日期年 月 日小组会签组长： 验证QA:组员：项目审批职位签名日期一级审核质量保证部负责人年 月
3、 日二级审核制造部 负责人年 月 日批准质量管理 负责人年 月 日一、概述 9验证原因 92.验证原理 10二、验证目的 11三、参考文件 111.参考标准 122.公司规程 12四、风险评估 14五、验证范围 27六、验证计划 27七、方案培训 28八、验证可接受标准 28九、验证内容 291.配制 292.冷藏、除菌过滤 313.洗瓶 324.灌封 345.环境及人员卫生监测（动态） 376.培养 397.培养基灌装后清洁确认 41十、漏项与偏差处理 44十一、再验证周期 44十二、确立文件 45十三、附件 45附件1: 46一、概述1.验证原因公司*按照2010版GMP付录1无菌药品的要
4、 求进行设计，洁净区级别分为 A级、B级、C、级、D级, 该线用于小容量注射剂非最终灭菌产品（* ）生产使 用。现按2010版GMP寸录1要求对*生产线进行产品培 养基灌装验证，以考察该线的无菌保证水平。本次为第 四次培养基模拟灌装（上次验证报告编号 R.4-001/2015 ）,故只进行一个批次的验证活动。验证关键生产工艺流程图如下： - （ 1 r安甑 称量JT 配料1 I工器具清J DS Aa b级背景A级/ (殳区Q2.验证原理将培养基暴露于设备、容器密封系统的表面和关键环 境条件中，并模拟实际生产完成工艺操作。对装有培养 基的密闭容器进行培养以检查微生物的生长并评价结 果，确定实际生
5、产中产品污染的可能性。对于失败的验 证进行菌种分析并调查，确认并解决可能造成失败的原 因后，重新进行验证。3.验证的先决条件参与培养基验证的人员经过培训。涉及培养基灌装试验使用的配液系统、冷藏系统、 除菌过滤系统、灌封系统、洗瓶机、杀菌干燥机、空调系统、水系统、压缩空气系统、纯蒸汽系统、脉动真空灭菌器均确认合格。用于培养基灌装试验使用培养基具备合格报告。涉及培养基灌装试验使用的配液系统、冷藏系统、除菌过滤系统、灌封系统、洗瓶机、容器具清洁验证均合格。用于培养基灌装试验使用设备、系统清洁检查项目的检验方法验证合格，取样方法验证合格。各关键设备、系统及方法验证报告见附件 1.二、验证目的1.通过该
6、工艺验证活动证明小容量注射剂生产线（三） 采用既定的无菌生产工艺能保证产品的无菌要求；2.通过该工艺验证活动证明无菌操作相关人员资格，降低人员带入无菌的风险；3.通过该工艺验证活动确保生产符合现行 GM联规要求。三、参考文件1.参考标准标准/资料名称编制单位发布时间中华人民共和国药典国家药典委员会2010 年药品生产验证指南国家食品药品监督管理 局药品安全监管司国家食品药品监督管理 局药品认证管理中心2003 年药品生产质量管理 规范（2010年修订国家食品药品监督管理局2011 年药品GMpf南国家食品药品监督管理 局药品认证管理中心2011 年2.公司规程文件名称原件存放处执行时间RRU2
7、05超声波立式洗瓶机安全操作规程设备保障部2015 年HQL364掇道式灭菌干燥机安全操作规程设备保障音2015 年ALF4080拉丝灌封机安全操作规程设备保障音2015 年5000L稀配罐安全操作规程设备保障音2015 年XG1.0D脉动真空灭菌器安全操作规程设备保障音2015 年*生产线洗瓶岗位SOP产品制造部2015 年*生产线配制岗位SOP产品制造部2015 年*生产线灌封准备岗位SOP产品制造部2015 年*生产线灌封岗位SOP产品制造部2015 年*生产线无菌工衣清洗SOP产品制造部2015 年洁净室（区）监测管理规程质量保证部2015 年四、风险评估运用失效模式风险管理工具，对培
8、养基模拟灌装进行 风险评估，确认本次验证活动主要项目及验证重点。1.风险评估标准风险系数分数水平定义严重程度S(severity)4极高直接影响检验过程要素或与检 验数据的可靠性、完整性或可跟 踪性。此风险可导致检验结论不 能使用，直接影响GMP原则， 危害检验的活动3高直接影响检验过程要素或与检 验数据的可靠性、完整性或可跟 踪性。此风险可导致检验无效， 未能符合一些GMP原则，可能 引起检查或审计中产生偏差2中尽管不存在对产品或数据的相 关影响，但仍间接影响检验过程 要素或与检验数据的可靠性、完 整性或可跟踪性。此风险可能造 成资源的极度浪费或对企业形 象产生较坏影响1低尽管不存在对产品或
9、数据产生 最终影响，但对检验过程要素或 与检验数据的可靠性、完整性或 可跟踪性仍产生较小影响发生率P(probability)4极高必然的问题，每次都发生。3高反复出现的问题，通常会发生。2中偶尔出现的问题，有时发生。1低不太可能出现的问题，或很少发生。可预知性D(detection)4极高问题总是检测不到，没有可行的 检测手段，可认为是无法检测到的。3高问题有时能被检测到，但是更倾 向于检测不到。2中出了问题有方向能检测到，发生 的时候很有可能检测到。1低只要出了问题就能被检测到。总风险评估系数(RPN=S PXD)RPN风险水平评估RPN V8低可接受8 16高不可接受，或需要 整改RPN
10、32极高不可接受，必须整改2.风险点及评估风险描述严重程度(S)发生 率 (P)可预知性(D)总风险评估系数(RPN风险(风险控制措施验证项目)水斗生产环境达不到相关要求42324高建立厂房清洁消毒规程，定期环境监测并趋势分析培养基灌装全程对环境进行动态监测人员造成污染42324高人员培训并更衣考核上岗，每批对进入无菌区人员取样监控所有相关人员，模拟生 产实际活动后取样，对 最多允许人数进行挑 战灭菌后的衣服，器具等发生二次污染42324高验证灭菌后储存方式和有效期，操作人员培训考核上岗， 生产过程中进行严格监控，生 产结束后与产品接触表面取样相关验证操作与止常 生产一致，生产结束后 对关键表
11、面取样，储存 方式和有效期在相关 清洁验证完成灭菌效果未达到42216高所有灭菌装载和参数须经过验 证，按经验证的操作方式灭菌在设备验证中完成配液/灌封超过规定时限要求4218中工艺规程中明确规定时限按照工艺规定工序最大时间挑战进行验证灌封设备故障并维修4218中人员培训，使用前通过试机， 并定期设备维护保养模拟维修操作进行挑战验证过滤系统有效性和污 染4218中使用前进行清洁和灭菌处理， 过滤前后对除菌过滤器进行完 整性测试在无菌过滤系统工艺 验证中完成，取样工具、记录等传入 污染32318高所有相关工具，记录等进入无 菌区需消毒或灭菌按物料净化SORB定进 行清洁工具和清洁消毒 剂使用带来
12、的污染32318高清洁工具需灭菌，清洁消毒剂 需除菌过滤后进入无菌区在清洁消毒效果和设 备验证中完成灌封所用安甑造成污 染42324高按经验证确认的清洗和灭菌参 数运行设备进行安甑清洗在洗烘线验证中完成 灭菌效果和单向流保 护，动态监测灌封前区 域压缩空气带来的污染42216高压缩空气加终端过滤器，并定 期确认过滤器的完整性，周期 性进行压缩空气系统验证和监 测压缩空气系统验证中 完成生产过程中，异常操作 造成的风险32212中严格异常操作的要求，对于可 能污染的药品报废处理模拟中控、倒破瓶停机 维修等情况进行挑战 验证产品暴露过长带来的 风险2136低严格控制允许的灌封速度挑战工艺规程中允许
13、 的最长灌封时限进行 灌封培养基灌装后残留污 染4114低灌装结束后按 SOP规定清洁方 法处理设备及系统检查设备及系统清洁 处理效果，进行残留检 测抑菌因素造成假阴性 结果42324高1、设定合理灌装量确保培养 基和安甑充分接触；2、消毒剂不能超出正常生产 时使用频率；3、班次轮换时不进行消毒清 场。模拟试验按控制措施 对抑菌因素进行控制3.风险评估经风险评估，共计风险项15项，低风险项2项，中 风险项4项，高风险项9项，极高风险项0项。按风险 评估结果进行本次培养基灌装验证活动，并确认所采取 的风险控制措施有效。根据风险评估确认的验证项目涉及的验证条件如下：3.1培养基选择首先培养基支持微
14、生物生长的菌谱范围应宽，能促 进革兰氏阳性、革兰氏阴性、酵母菌和霉菌的生长；其 次培养基应澄明，便于观察由于污染导致的混浊和沉淀 现象。我公司已确定该生产线只用于参附注射液、生脉注射液的生产，该两个品种均不充氮，故培养基选取需氧培养基（大豆胰蛋白胨肉汤培养基） 。在培养结束后进行微生物促生长挑战试验。根据我公司历年对环境监控和无菌检查中发现的菌均为普通菌， 因此培养微生物促生长挑战试验选取药典规定菌种。促菌生长试验的接种量应不超过 100CFU。如促生长试验失败，应进行调查并重复培养基灌装试验。3.2运行试验次数及频率根据药品GMP指南（无菌药品）要求，生产线初始验证时，培养基灌装应进行至少
15、3 批次，以确保结果的一致性和有效性。初次验证后，为了评估无菌工艺的受控情况，每条生产线的培养基灌装每半年应进行一次，因本次为再验证故只进行一批次验证。3.3规格选择* 生产线可进行 10ml、 20ml 规格的生产，初次验证时进行两次最大规格容器（20ml）和一次最小规格容 器（10ml）的灌装挑战。在以后的周期性半年度灌装可 以轮换，每次挑战一种规格，本次验证 10ml 规格。3.4运行持续时间根据药品GM田旨南（无菌药品）要求，培养基灌 装操作的持续时间是方案设计时必须考虑的重要问题。 尽管最准确方法是模拟全批量及全批量的操作时间，因 为它最能反映实际生产运行，但也可有其它合理并适当 的
16、模式。持续时间并不一定与一个完整批的实际生产操 作时间相同。根据我公司情况一批次灌封生产的最长时间为不超 过*小时，综合考虑生产操作、各种干扰模式、实际 无菌操作情况，决定本次培养基灌装操作的持续时间为 *小时/批。3.5干扰设计/最差条件设计培养基灌装必须模拟所有正常生产中的活动，体现最差条件的原则，如下表:容器具、配制设备按相关SOP 要求讲行清洁消毒及储存，储 容器具、除菌过滤系统按相关 SOP要求进行清洁灭菌及储存，储存时间*小时U 3洗瓶岗 位设备运行速度设定为接近经确 认的最高速度，包括洗瓶及干4灌封岗 位灌注系统按相关SOP要求进 行清洁灭菌及储存，储存时间*小时。根据生产的实际
17、情况我公司灌 封间人员数量通常为1人，本 次验证时增加至4人。参照卜年度故障统计.增加储存有效为*小时，通常 清洁灭菌后 至使用前时 间小于*小时。. I ，rjo I 十 v/1 I r I_， - ri /r表01 干预事件设计装机出现报警提不确表02 干预时间设计及计算自动 停机 （倒 瓶）人工灌装机故障类型停机（更 换配 件）熄火 重点更换 平皿需开 启隔 离器 门不需 开启 隔离 器门空机 运行次数10次 /批3次/ 批2次/ 批5次/ 批2次/ 批2次/ 批4次/ 批时间13分 钟/次36分 钟/次36分 钟/ 次16分 钟/次70分 钟/次40分 钟/次50分 钟/次样品 处理处
18、理 后灌 封的 前约 200 支培 养基 单独 取走， 单独 WFo处理 后灌 封的 前约 200 支培 养基 单独 取走， 单独 WFo处理 后灌 封的 前约 200 支培 养基 单独 取单独 培:tF。处理 后灌 封的 前约 200支 培养 基单 独取 走，单 独培 养。处理 后灌 封的 前约 200 支培 养基 单独 取走， 单独 WFo耗时 （两130分钟108分钟72分 钟80分 钟140分钟80分 钟200分钟班）总耗 时(130+180+65+140+80+200 /60 13 小时3.6灌装体积根据经验每只容器的灌装体积不少于总容积的1/3 ,同样，灌装体积也不宜过大既要考虑到
19、瓶倒转或 旋转时，培养基能充分接触到容器和密封件的内表面， 又要保证容器内有足够的氧气支持微生物生长。本次培 养基每支灌装体积按10.5ml灌装。3.7运行速度小容量生产线（三）可进行 10mk 20ml规格的生 产，各规格灌封速度为20ml规格v 10ml规格。各规格 灌封速度均固定，故本次培养基灌装速度，按规格对应 速度执行。规格10ml灌封速度250支/分钟3.8批量3.8.1我公司参附注射液批量品名*注射液规格10ml批量* 万 ml折合为灌装支数*支3.8.2本次培养基灌装批量选择模拟的批次量应足够大，以模拟正常生产的条件并 正确评估常规生产的污染风险。模拟灌装的瓶数基于具 体工艺的
20、污染风险，并应足以模拟正常生产那些有代表 性的操作。我公司小容量（三）采用进口洗、烘、灌设 备（博世）自动化程度较高，灌封区与操作区隔离，没 有人员直接干扰，其工艺设计所致的污染概率比较低， 我公司注射剂为双班生产，为更好的反应两个班次灌封 过程污染状况，结合人为干扰时间、灌封速度计算批量 如下：规格10ml批量计算(16-13) *10*2*250*60=900000ml公式：批量=（总时间-干扰时间）*每支装量*灌封机 数量*灌封速度*60分钟根据上述计算，本次培养基批量定为 90万ml/批、10ml规格为约90000支/批3.9环境条件及监测培养基灌装试验的环境条件应充分体现生产操作的实
21、际情况，对于环境最差条件的挑战需在工艺允许的苛刻条件范围内对环境受干扰程度， 如生产现场人员最多、生产活动频率（人员走动）最高的挑战。在培养基灌装过程中也应进行环境监测，灌封 A级区、 B 级区采取在线监测包括尘埃粒子、沉降菌、浮游菌、 表面微生物 （在进行干预时监测结果应做明确说明，以区别于正常生产情况。 ） ，同时对人员卫生进行监测，包括手指、袖口微生物监测（采用接触碟取样） 。3.10参与人员根据药品GMP指南（无菌药品）要求，所有被授权在生产时进入无菌灌装间的人员，包括观察人员和维修人员，每年至少应参加一次培养基灌装试验。所有实际生产中将在关键区域进行操作的人员都应参加每次的培养基灌装
22、。参与人员应按常规生产的职责模拟与其相关的活动。参与培养基灌装试验人员包括操作人员、 QA人员、计量人员、维修人员，所有参与培养基灌装的人员应当经过适当培训以保证他们对方案和实际实施有足够的了解，生产操作人员及现场 QA人员每次培养灌装均需参加， 验证 QA、 计量人员及设备维修人员每年至少参加一次。3.11容器的完整性测试我公司安瓿采用高温熔封， 采取灭菌后抽真空检漏，公司正调研高压放电检漏设备，本次不进行容器的完整性测试，如果培养后出现长菌，经外观检查无法判定为破损原因引起时需采用抽真空检漏的方式予以排除。3.12培养基灌封后系统、容器具的处理在完成 1 批次培养基灌封后， 接触过培养基的
23、系统、容器均应经过清洁， 并经确认合格后方可用于生产产品。3.13培养与检查培养温度先在 20-25 最少培养 7 天， 然后在 30-35 的范围继续培养 7 天。 每天观察温度，并且第 3 天时人工翻动培养基以保证培养基液体与整个安瓿内壁充分接触，更充分的反应污染状况。每个培养周期到期后由灯检人员对样品进行逐个目视检查。检查过程由 QA人员负责观察、监督。在检查 中，所有被怀疑受到污染的样品，应立即交给微生物专业人员进行鉴定处理。在培养过程中，任何发现损坏的样品也应列入培养 基灌装的批记录数据中。如果要将这类已培养的样品从 最后的结果判定计算中剔除，则必需充分说明理由，并 在培养基灌装报告
24、中对偏差做出解释。假如难以判断微 生物污染是由损坏引起还是本身就存在，则应进行调查 以确定原因。3.14培养周期结束后培养基处理培养周期结束后培养基应按培养基管理规程(P.ZL.103-010 )进行销毁。五、验证范围本验证方案适用于小容量注射剂生产线(三)注射 剂无菌生产工艺培养基模拟灌装验证活动。验证涉及设备、仪器、培养基统计见附件 1;验证取样计划见附件2。六、验证计划项 目实施日期方案培训*年*月培养基配制*年*月培养基灌装*年*月培养基灌装后培养*年*月培养基促生产试验*年*月验证报告*年*月七、方案培训实施本方案的所有人员均应接受本文件的培训，培 训采取分级培训，由确认组负责培训至
25、小组成员级，各 小组成员负责培训至相应班组级（操作人员、 QA人员、QC人员、设备人员）培训记录见附件 3。八、验证可接受标准按照药品生产质量管理规范 2010版附录无菌药 品第47条相关规定：培养基灌装容器的数量应当足以 保证评价的有效性。培养基灌装容器的数量应当足以保 证评价的有效性。批量较小的产品，培养基灌装的数量 应当至少等于产品的批量。培养基模拟灌装试验的目标 是零污染，应当遵循以下要求：（一）灌装数量少于5000支时，不得检出污染品。（二）灌装数量在5000至10000支时：有1支污染，需调查，可考虑重复试验；有2支污染，需调查后，进行再验证。（三）灌装数量超过10000支时：有1
26、支污染，需调查；有2支污染，需调查后，进行再验证。（四）发生任何微生物污染时，均应当进行调查。综合上述标准，本次验证数量定为每批约 90000支（10ml规格），其污染数不得超过1支。九、验证内容本次验证模拟*生产线在工艺允许最差条件下进行1批10ml规格培养基的灌装（90万ml/批）。1.配制工艺条件接受标准记录及 结果培养基有检测报告、合 格证号，数量。有检测报告、合格证 号，数量符合要求。附件4记录01配制处方：配制过程符合要求。胰蛋白月东大豆肉 汤 27000g注 射 用 水 适量配 制 成 90 万 ml工艺过程：1、向配料罐内加入 80万ml的注射用水（根 据产品要求，35 c以
27、下。），称取27000g的培 养基加入配料罐内，搅 拌加热煮沸使之完全溶 解，冷至室温补至体积， 用0.45 m聚丙烯滤芯、 0.2从m聚碉滤芯串联过 滤，冷藏于冷藏罐，备 用。培养基称取数量符合要求。配制产量符合要求。促生长试验（按药典附录xin B无菌检查法），接种菌的样品中明显生长，空白样应不得有菌生长。最差条件模拟：容器具、配制设备按 相关SOP要求进行清洁 消毒及储存，储存时限 接近后效期。容器具、配制设备清洁 消毒后至使用前储存 时限接近*小时。评价与小结:评价人： 日期:复核人： 日期:2.冷藏、除菌过滤工艺条件接受标准记录及 结果工艺过程：将胰蛋白月东大豆肉汤 液体培养基用0.45 |1 m聚 丙烯、0.2 11 m聚碉、0.2滤芯完整性检测合格。附件4记录02精滤过程符合要求。m聚碉先后串联除菌过 滤，待灌封。最
