1、长期毒性试验,药物毒性是否产生，取决于：药物本身的理化特性（毒性类型、毒性作用剂量）给药情况（剂量和给药途径）如何被机体代谢（间接毒性）对一特定药物而言，最重要的影响毒性的因素：给药途径体内停留时间给药频率（影响靶组织的药物浓度）,半数有效量（median effective dose,ED50）：能引起50%的动物或实验标本产生反应的浓度或剂量。半数致死量（median effective dose,LD50）：能引起50%的动物死亡的浓度或剂量。,治疗指数：TI=LD50/ED50ED50（median effective dose）:LD50（median lethal dose）:药物
2、实验动物的LD50和 ED50的比值称为治疗指数（therapeutic index,TI），用以表示药物的安全性。,有效量曲线和致死量曲线的斜率不一样时，以TI评价药物的安全性并不可靠。（原因？）安全范围（margin of safety）：ED99LD1（或ED95LD5）之间的距离。值越大越安全。,安全范围,六、药物毒性作用类别,药物不良反应（adverse reaction)：凡是不符合用药目的并为病人带来不适或痛苦的有害反应统称为药物不良反应。包括：副反应、后遗效应、停药反应、毒性反应、变态反应、特异质反应、致癌性、致畸性、致突变性；,急性毒性损害：循环、呼吸及神经 慢性毒性损害：肝
3、、肾、骨髓、内分泌,新药临床前评价的作用：急性毒性试验：治疗指数、对机体的可能损害；慢性毒性试验：慢性毒性的靶器官、损害可逆性。,（三)药物毒性临床前评价程序（三水平）,第一水平，急性毒性试验：（1）致死的量效曲线和可能的器官损伤；（2）眼睛和皮肤刺激性试验；（3）致突变活性初筛。,第二水平，长期毒性试验（第一阶段）（1）两种品系、35天染毒、毒性量效曲线，推荐临床使用 途径；（2）器官毒性试验、死亡情况、体重变化、血液学、临床 生化学、组织学检查；（3）致突变活性第二阶段筛选；（4）生殖毒性试验；（5）受试动物的药代动力学研究；（6）行为试验；（7）协同、增效、拮抗作用。,第三水平，长期毒性
4、试验（第二阶段）,（1）动物长期毒性试验（半年以上）；（2）哺乳类动物致突变试验；（3）啮齿类动物2年致癌试验；（4）人类药代动力学试验；（5）人类临床试验；（6）短期和长期用药的流行病学资料。,（四）药物毒理学研究在新药临床试验各阶段的任务,第一期临床研究,第二期临床研究,第三期临床研究,不良反应监测,探索安全的人用剂量,安全性,大范围的社会考察,提高疗效，降低不良反应,疗效（有效性）不良反应（安全性）,多数毒物发挥其毒性作用至少经历四个过程：,毒物吸收后经过多种屏障转运到一个或多个靶部位；进入靶部位的终毒物与内源靶分子发生交互作用；毒物引起机体分子、细胞和组织水平功能和结构紊乱；机体启动不
5、同水平的修复机制。当此机制低下或功能和结构紊乱超过机体修复能力时，机体即出现组织坏死、癌症、纤维化等毒性损害。,药物毒性作用发展的潜在阶段,到达,与靶分子相互作用,细胞功能紊乱，损伤,修复紊乱,毒物,1,2,3,4,毒性作用,步骤,途径,指对动物反复多次连续用药的毒性试验目的：观察反复给药情况下，实验动物出现的毒性反应、量效关系、主要的靶器官、损害程度及其可逆性等；能耐受的剂量范围、完全无毒性反应的安全剂量,长期毒性试验的意义,判断受试药物能否进行临床试验；预测人类临床用药时可能毒性和安全范围；制定临床试验中的防治措施；确定应该着重评价的生理生化指标；选择I期临床试验时的初试剂量，等。,一、一
6、般原则,动物选择：敏感动物，年轻动物，雌雄各半2种（啮齿大鼠6w、非啮齿比格犬4-6m）体重差异不大于平均体重的20%单笼饲养、定量喂食,分组：一般四组：3个试验组、1个溶剂对照组试验90天，20只。若用大型动物，每组雌雄各3-4只,实验室条件：GLP 温湿度、采光、通风等；饲料、水，记录摄入量；观察记录，每周称体重,剂量设计：高剂量：能足以使新药的毒性作用充分表现出来，产生一定的毒性，如体重下降10%，器官毒性，个别动物死亡但20%;中剂量：引起轻微的毒性反应，为高剂量的几何平均值低剂量：应为无毒剂量组，一般为动物有效剂量或人临床治疗剂量的2-3倍。,限度试验：口服5g/kg、注射2g/kg
7、未出现毒性反应或死亡时，做限度试验大鼠只做一个高于拟用于临床剂量50倍的剂量组；犬只做一个高于拟用临床剂量30倍的剂量组,给药途径：应与拟推荐的临床用药途径一致口服：最好灌胃法，或混在饲料中；犬在给食前给药临床为静脉给药的，动物实验最好用其它适宜的注射途径代替连续给药，每天固定时间试验期3个月或以上的，每周6天给药，间隔一天,给药容量：大鼠：一般1-2 mL/100g体重；按等量不等浓度配药,试验周期：一般必须为临床给药周期的3-4倍；3月的，啮齿类给药6个月，非啮齿给药9个月 试验周期在6月以上的，可在长期毒性试验进行3个月以后，未发现明显毒性反应的情况下，申请I期临床试验。,二、检测项目,一般观察血液学指标血液生化指标特殊检查系统尸体解剖,三、检测时间,检查间隔恢复性观察,资料收集整理结果评价,
