1、实验报告不同因素对酶的影响docx 实验报告课程名称： 指导老师： 成绩： 实验名称： 实验类型： 分离鉴定实验 同组学生姓名： 一、实验目的和要求（必填）二、实验内容和原理（必填）三、主要仪器设备（必填）四、操作方法和实验步骤五、实验数据记录和处理六、实验结果与分析（必填）七、讨论、心得.酶的基本性质底物专一性一、实验目的和要求1. 了解酶的专一性。2. 掌握验证酶的专一性的基本原理及方法。3. 学会排除干扰因素，设计酶学实验。二、实验基本原理 酶是一种具有催化功能的蛋白质。酶蛋白结构决定了酶的功能酶的高效性，酶催化的反应（酶促反应）要比相应的没有催化剂的反应快103-1017 倍。 酶催化
2、作用的一个重要特点是具有高度的底物专一性，即一种酶只能对某一种底物或一类底物起催化作用，对其他底物无催化反应。根据各种酶对底物的选择程度不同，它们的专一性可以分为下列几种：1.相对专一性 一种酶能够催化一类具有相同化学键或基团的物质进行某种类型的反应。2.绝对专一性： 有些酶对底物的要求非常严格只作用于一种底物，而不作用于任何其他物质。如脲酶只能催化尿素进行水解而生成二氧化碳和氨。如麦芽糖酶只作用于麦芽糖而不作用其它双糖，淀粉酶只作用于淀粉，而不作用于纤维素。3.立体异构专一性 有些酶只有作用于底物的立体异构物中的一种，而对另一种则全无作用。如酵母中的糖酶类只作用于D-型糖而不能作用于L-型的
3、糖。 本实验以唾液淀粉酶、蔗糖酶对淀粉、蔗糖水解反应的催化作用来观察酶的专一性。采用Benedict试剂检测反应产物。Benedict试剂是碱性硫酸铜溶液，具有一定的氧化能力，能与还原性糖的半缩醛羟基发生氧化还原反应，生成砖红色氧化亚铜沉淀。 Na2CO3+ 2H2O 2NaOH + H2CO3 CuSO4+ 2NaOH Cu(OH)2+ Na2SO4 还原糖(CHO or C=O)+ 2Cu(OH)2 Cu2O (砖红色或黄色) + 2H2O + 糖的氧化产物在分子结构上，淀粉几乎没有，而蔗糖、棉子糖全无半缩醛基，它们均无还原性，因此它们与Benedict试剂无呈色反应。 淀粉被淀粉酶水解，
4、产物为葡萄糖；蔗糖和棉子糖被蔗糖酶水解，其产物为果糖和葡萄糖，它们都为具有自由半缩醛羟基的还原糖，与Benedict试剂共热，即产生红棕色Cu2O沉淀。本实验以此颜色反应观察淀粉酶、蔗糖酶对淀粉和蔗糖的水解作用。三、实验材料与试剂1、实验材料 蔗糖酶(样品）； 新鲜唾液（含唾液淀粉酶）；2、实验试剂 蔗糖酶液 蔗糖酶液(样品）加蒸馏水适当稀释，备用； 唾液淀粉酶液（学生自制） 取0.5mL唾液至25ml量筒中，用蒸馏水（稀释）到25ml，用棉花过滤备用。唾液稀倍数因人而异，可稀释50400倍，甚至更高； 5%蔗糖（A.R.）溶液； 0.5%淀粉溶液（含0.3%NaCl）； Benedict试剂
5、 ；四、实验器材与仪器1.漏斗， 2.脱脂棉花； 3.恒温水浴（37，100）； 4.量筒；5.试管；6.烧杯；7.吸量管。 五、实验操作方法和步骤 检查试剂 取3支试管，按下表操作：注：1、检查目的：试剂是否有干扰因素存在。2、也可对蔗糖酶液、唾液淀粉酶液进行检查是否也有干扰因素存在，请自己设计。淀粉酶的专一性取三支试管，按下表操作：注：可增加一组唾液淀粉酶液 经100加热3min处理后的样品对照组。蔗糖酶的专一性取三支试管，按下表操作：注：可增加一组蔗糖酶液 经100加热3min处理后的样品对照组。六、结果分析讨论 各试管观察结果依次是：（一）：1号蓝绿色，2号蓝色， 3号蓝色 Bened
6、ict试剂是碱性硫酸铜溶液，具有一定的氧化能力，能与还原性糖的半缩醛羟基发生氧化还原反应，生成砖红色氧化亚铜沉淀。3只试管都为蓝色说明几只试管中都没有果糖和葡萄糖，说明在不加酶时，淀粉和蔗糖不易水解。试剂无干扰因素的存在。（1号试管是蓝绿色可能是因为有少部分的淀粉水解）（二）：1号土黄色，2号黄绿色，3号蓝色 加入唾液淀粉酶，1号试管底物是淀粉，所以很容易水解成葡萄糖，与Benedict试剂共热，即产生红棕色Cu2O沉淀。所以1号颜色变化比较大。（2号可能是因为蔗糖在37恒温水浴中也有少部分水解，所以颜色变化，但变化不明显。）总的来看可以看出唾液淀粉酶只对淀粉有催化活性，不能催化蔗糖水解，具有
7、对淀粉的底物专一性。3号是对照。（三）：1号蓝色， 2号红棕色，3号蓝色 加入蔗糖酶，2号试管底物是蔗糖，所以很容易水解成果糖和葡萄糖，与Benedict试剂共热，即产生红棕色Cu2O沉淀。所以2号颜色变化比较大。（1号可能是因为淀粉在37恒温水浴中也有部分水解，所以有颜色变化，但变化不明显。）从这三支试管看出蔗糖酶只对蔗糖的水解 有催化作用，对淀粉无催化作用，具有对蔗糖的底物专一性。3号是对照。七、思考题1观察酶专一性实验为什么要设计这3组实验？每组各有何意义？蒸馏水有何用？第一组作为整个实验的空白对照组，检测 Benedict 试剂对实验结果的颜色有何影响，排除干扰因素的存在。第二组作为检
8、测淀粉酶的专一性实验组，第三组作为检测蔗糖酶的专一性的实验组。蒸 馏水作为每一个组中的空白对照，与组内其余两组进行对照。2将酶液煮沸10min后，重做二、三的操作，观察有何结果？各试管都为蓝色，因为酶在煮沸过程中 已经变性，失去催化活性，故不能催化各自对应底物的水解反应。3在此实验中，为什么要用0.5%淀粉(0.3%NaCl)溶液？0.3%NaCl的作用是什么？0.3%NaCl 中的Cl- 是作为激活剂激活唾液淀粉酶的活性，使实验结果不至于因为唾液淀 粉酶的活性不足而导致不同。八、注意事项1.试管要干净，所有试剂加量准确，加好试剂后要摇匀。2.使用试剂时不要人为造成试剂间的互相污染；试剂用好瓶
9、盖要立即盖好，防止试剂间的互相污染。以免实验结果的错误。. 影响酶活性的因素激活剂和抑制剂一、实验目的和要求1. 了解激活剂和抑制剂对酶促反应速度的影响。2. 学习检定激活剂和抑制剂影响酶促反应速度的原理和方法。二、实验基本原理 在酶促反应过程中，酶的活性常受某些物质的影响，有些物质能使酶的活性增加，称为激活剂；某些物质它们并不引起酶蛋白变性，但能使酶分子上的某些必需基团（主要是指酶活性中心上的一些基团）发生变化，因而引起酶活力下降，甚至丧失，致使酶反应速度降低，称为酶的抑制剂。酶的激活剂种类： 1、一些简单的无机离子，如Mg2+、Cl-等； 2、一些中等大小的有机分子，如抗坏血酸等也是激活剂
10、，它们对某些含巯基的酶具有激活作用； 3、有些酶的催化作用易受某些抑制剂的影响，因而能除去抑制剂的物质也可称为激活剂，如EDTA能除去重金属，因而能解除重金属对酶的抑制作用。4、具有蛋白质性质的大分子物质，这些激活剂是指可对某些无活性的酶原起作用的酶。 酶的抑制剂有许多种： 如重金属离子（Ag+、Hg2+、Pb2、Cu2等）、CO、氯化物、H2S、砷化物、氟化物、生物碱、有机磷农药等都是抑制剂。 少量的激活剂或抑制剂就能影响酶的活性，而且常具有特异性。值得注意的是激活剂和抑制剂不是绝对的，各种激活剂对酶的作用是不同的。 本实验利用淀粉被水解的不同阶段产物与碘有不同颜色反应，定性观察唾液淀粉酶在
11、酶促反应中激活或抑制现象。淀粉经酶促水解为葡萄糖的不同阶段的产物与碘作用的颜色反应如下：本实验中，Cl-为唾液淀粉酶的激活剂； Cu2+为唾液淀粉酶的抑制剂。利用淀粉被水解的不同阶段产物与碘有不同的呈色反应，定性观察唾液淀粉酶在酶促反应中激活和抑制现象。淀粉 + 碘 蓝色淀粉 + 淀粉酶 水解产物 + 碘 颜色变化水解的程度是通过水解混合物遇碘溶液所呈现的颜色之变化来判断的。三、实验材料与试剂1、实验材料 新鲜唾液2、实验试剂 唾液淀粉酶（学生自制） 取唾液1ml至25ml量筒中，用蒸馏水稀释至25ml，用棉花过滤备用。唾液稀释倍数因人而异，可稀释50400倍，甚至更高。 0.1% 淀粉溶液
12、1.0% 氯化钠溶液 1.0% 硫酸铜溶液 1.0% 硫酸钠溶液 碘化钾-碘液四、实验器材与仪器1.试管及试管架2.量筒3.漏斗4.脱脂棉花5.点滴板6.吸量管7.恒温水浴（37） 五、实验操作方法和步骤取试管4支，按下表操作：注意： 找出准确的保温时间，是本实验是实验能否成功的关键步骤之一，唾液淀粉酶液浓度可根据个人情况而定，通过37水浴溶保温计时，反应时间最好在815min以内，只有确定准确的保温时间才能进行实验。 （2） 加入酶液后，务必充分摇匀，保证酶与全部淀粉液接触的反应才能得到理想的颜色梯度变化结果。（3）碘化钾碘液不要过早地加到点滴板上，以免碘液挥发，影响显色效果。六、结果分析讨
13、论1号试管为蓝紫色，2号为浅黄色，3号为褐色，4号为浅褐色。试管 1 中颜色最深，说明 CuSO 4 可以抑制淀粉酶的活性；试管 2 中颜色最浅，基 本呈碘色，故淀粉酶活性最高，说明 NaCl 可以激活淀粉酶的活性；试管 3、4 中颜色基本 一致，且深浅居于试管1、2 之间，淀粉酶活性一般，说明Na+、SO 4 2- 对淀粉酶活性都没有 影响。故总体上看，可以得出Cl - 是唾液淀粉酶的激活剂，Cu 2+ 是唾液淀粉酶的抑制剂。七、思考题1. 激活剂可分哪几类？本实验中NaCl、硫酸铜是属于哪种类型？激活剂可分为：简单无机离子、中等大小有机分子、能除去抑制剂的物质、具有蛋白质性质的大分子物质等
14、。NaCl 属于简单无机离子；CuSO4 属于重金属抑制剂。2. 本实验中，1，2，3，4管各有何用意？为什么要设计第3管和第4管？1 管可观察抑制剂对反应影响的现象，2管可观察激活剂对反应影响的现象，第3管可以将1管中的Na+ 和2 管中的SO42- 对反应的影响去除，4管作为空白对照。3. 抑制剂与变性剂有何不同？试举例说明。抑制剂只改变酶的催化活性，并不使蛋白质变性，其影响是可逆的；变性剂破坏了蛋白质的高级结构，使蛋白质变性，并且多数变性剂的影响是不可逆的。如：Cu2+ 是唾液淀粉酶的抑制剂，但如果将Cu2+ 去除淀粉酶的活性又可以变为正常水平。八、注意事项1.试管要干净，所有试剂加量准
15、确，加好试剂后要摇匀。2.使用试剂时不要人为造成试剂间的互相污染，以免实验结果的错误。3.试剂用好瓶盖要立即盖好，防止试剂间的互相污染。4.两种淀粉不要弄错。5.激活剂抑制剂实验中，注意运用点滴板（显色板）来控制保温时间； 如1，2，3，4管颜色反应无明显差别，可能是唾流淀粉酶活力太高或太低，若酶活性太高可将酶稀释后重做；若酶活性太低，可延长保温时间或增加酶的浓度。. 影响酶活性的因素温度，最适温度测定一、实验目的和要求1. 了解温度对酶活力的影响；2. 学习测定最适温度的原理和方法；二、实验基本原理 酶的催化反应受温度影响很大，每一种酶所催化的反应，在一定条件下，仅在某一温度范围内表现出最大
16、的活力，即反应速度最大时的温度，这个温度称为该酶促反应的最适温度，高于或低于最适温度时，反应速度逐渐下降。因此，酶促反应与温度的关系，用酶活力对温度作图，通常具有钟罩形曲线特征。 温度与酶活力的关系测定是选择一定的条件，把底物浓度、酶浓度、反应时间、pH等固定在最适状态下，然后在一系列不同温度条件下，进行反应初速度测定，以酶反应初速度对温度作图，可以得一个钟罩形的曲线，即为温度酶活性曲线，在某温度有一酶活力最大值，这个温度即为最适温度。实验利用唾液淀粉酶为试验对象，在065之间选择不同的温度，进行酶活力测定。根据淀粉被唾液淀粉酶水解的程度的不同，遇碘呈现颜色的变化来判断酶活力的大小及最适温度。
17、 实验采用蔗糖酶为试验对象，在室温至75之间选择不同温度进行酶活力测定。蔗糖酶的活力常以其反应产物还原糖（葡萄糖）的生成量来表示。测定还原糖的方法很多，本实验选择3,5二硝基水扬酸法测定还原糖量。在碱性条件下，3,5二硝水杨酸与还原糖溶液共热后被还原成红色氨基化合物，并在一定浓度范围内，还原糖的量与反应溶液所呈棕红色物质颜色的深浅程度成正比。因此，可以用分光光度法测定酶促反应后生成的还原糖量，从而测定蔗糖水解的速度和酶活力。三、实验材料与试剂1、实验材料 蔗糖酶液(样品）加蒸馏水适当稀释，备用； 新鲜唾液。2、实验试剂 0.2mol/L醋酸缓冲液（pH4.6） 5%蔗糖（A.R.）溶液（W/V
18、） 3,5二硝基水扬酸（简称DNS）试剂 0.5%淀粉溶液（含0.3%NaCl） KI-I2溶液 四、实验器材与仪器1.试管及试管架， 2恒温水浴， 3吸量管, 4滴管, 5点滴板，6分光光度计， 7制冰机。五、实验操作方法和步骤一、温度对唾液淀粉酶活力的影响1观察温度对酶活动的影响： 取5支试管，按下表操作。注意： 找出准确的保温时间，是本实验是实验能否成功的关键步骤之一，唾液淀粉酶液浓度可根据个人情况而定，通过37水浴溶保温计时，反应时间最好在815min以内，只有确定准确的保温时间才能进行实验。（2）加入酶液后，务必充分摇匀，保证酶与全部淀粉液接触的反应才能得到理想的颜色梯度变化结果。（
19、3）碘化钾碘液不要过早地加到点滴板上，以免碘液挥发，影响显色效果。各管保温时间要相同。2、绘制温度-酶活力曲线图，以反应温度为横坐标，反应液颜色的深浅程度（代表酶活力的大小）为纵坐标。绘制温度酶活力曲线（钟罩形），确定唾液淀粉酶的最适温度。二、温度对蔗糖酶活力的影响1、蔗糖酶最适温度的测定 取试管7支进行编号，0号管为空白对照，以蒸馏水代替酶液，17号顺序为测定管，向各管加入0.2mol/L醋酸缓冲液（pH4.6）1ml， 2%蔗糖溶液0.5ml，然后将各编号管依次放入相应温度（见下表）的恒温水浴或恒温箱中，预热2min，再逐管准确计时加入0.5ml经适当稀释的蔗糖酶液，迅速混匀；精确反应10
20、min后，加入1ml 3,5二硝基水杨酸（DNS）试剂，立即混匀，放入沸水浴中加热5min。取出用流水冷却至室温后，向各管加入5ml蒸馏水，充分混匀。以0号管作空白对照A520值为零，在分光光度计上于520nm波长处测定各管的A520值，并作好记录。2、绘制温度酶的活力曲线图 以反应温度为横坐标，相应的A520（表示反应初速度）为纵坐标，绘制出温度酶活力（A520值）曲线图，从而可以测出蔗糖酶在本实验条件下的最适温度。六、结果分析讨论（一）温度对唾液淀粉酶活力的影响1至5号试管颜色依次为蓝紫色、浅黄色、黄色、浅黄色、红棕色当温度为 37时淀粉水解最完全，唾液淀粉酶的活性最高；在 37两边唾液淀
21、粉酶的活性都随着温度的改变而降低， 故本组实验的唾液淀粉酶的最适温度在37左右。 唾液淀粉酶的活性应该是在正常的人体体温 37时最适。（二）温度对蔗糖酶活力的影响0至5号试管分光度依次为0， 0.726， 1.155， 1.388， 0.501， 0.218最佳温度在48左右。由试剂在520nm波长的吸光度对温度作图得到如上图的A 520 -T 曲线。由图线看出蔗糖酶在48时活性最高，故蔗糖酶的最适温度为48。同时由曲线看出温度高于65后酶活性显著下降，这是因为此时酶已经因为高温发生了变性，失去了大部分的催化活性，故催化能力大大减弱。七、思考题1什么是酶的最适温度？有何用途？答：酶的最适温度是
22、酶促反应在速率最大时的温度。在最适温度下，酶的催化活性最高，此时酶促反应的效率最高，可由此最快的获得产物。2酶反应的最适温度是酶特性的物理常数吗？它与哪些因素有关？ 答：不是特征常数。它和pH、抑制剂和激活剂存在与否、底物浓度等因素都有关。 3通过以上几个酶学实验，总结酶有哪些特性？影响酶活性的因素有哪些？在实际应用中应注意哪些问题？答：酶有底物专一性、高效性、有最适温度等特性。影响酶活性的因素有 pH、温度、底物浓度、激活剂和抑制剂。在实际应用中应该注意多种不同的因素对酶活性的总体影响，而不能只看一种或某几种因素的单独影响。XXXX项目可行性研究报告报告日期 XXXX年XXXX月XXXX日
23、第一节 项目概况 一、项目背景 二、投资方简介三、目标公司简介第二节 拟投资行业及市场概况第三节 项目实施的必要性与可行性 一、项目实施的必要性 二、目标公司市场分析 三、项目实施的可行性 第四节 项目内容及实施方案第五节 项目效益分析 一、经营收入估算 二、经营总成本估算 三、经营利润与财务评价 第六节 项目风险分析及对策 一、市场风险及对策 二、技术风险及对策 三、财务风险及对策 第七节 投资方案 一、收购定价 二、预计投资总额 三、资金来源与支付四、 后续发展方案 第六节 报告结论 第一节 项目概况一、项目背景 说明项目提出的背景、投资理由、拟投资国家的投资环境、在可行性研究前已经进行的
24、工作情况及其成果、重要问题的决策和决策过程等情况。二、投资方简介1、投资方基本情况及经营情况 包括目标公司基本工商注册信息、产业布局、主要产品及用途、员工情况、股权结构及控股方信息、行业地位、历史沿革等。2、投资方实力和优势分析三、目标公司简介1、基本信息 包括目标公司基本工商注册信息、产业布局、主要产品及用途、员工情况、股权结构及控股方信息、行业地位、历史沿革等。2、经营情况 （1）经营情况 公司的产品在市场上进行销售、服务的发展现状，包括历年产量、销售收入等。（2）资产负债情况 公司主要财务指标，要求能够反映公司盈利能力、经营能力、偿债能力等。第二节 拟投资行业及市场概况1、国内相关行业及
25、市场概况2、国际相关行业及市场概况第三节 项目实施的必要性与可行性 一、项目实施的必要性 主要围绕公司战略目标，根据公司产业资源协同发展的需要以及产品规划，结合产业政策等有关因素的支持与制约，论证项目投资的必要性。 二、目标公司市场分析 运用统计分析原理，分析目标公司产品销售变化及市场发展趋势。1、市场规模 研究目标公司产品及行业的整体规模，具体包括目标公司产品及行业在指定时间的产量、销售收入等。 2、行业分析 主要包括行业内主要品牌市场占有率、行业总销售量年增长率、行业发展方向、市场发展方向等。3、竞争格局 包括主要竞争企业基本资料、主要品牌经营策略、竞争品牌近三年发展情况、行业竞争态势未来
26、发展预测等。三、项目实施的可行性 主要表现在以下方面： 技术可行性。主要分析目标企业产品技术现状与规划是否符合公司战略，技术部门对目标公司实施的技术在行业内进行比选和评价，合理评估其技术先进性。经济可行性。主要从企业理财的角度进行资本预算，评价项目的财务盈利能力，预测项目投资回收期、净现值等财务指标。 社会影响。主要从资源配置的角度衡量项目的价值，评价项目在符合区域经济发展目标、有效配置经济资源、增加供应、创造就业、改善环境等方面的效益。风险因素及对策。主要对项目的市场风险、技术风险、财务风险、法律风险及社会风险等风险因素进行评价，制定规避风险的对策，为项目全过程的风险管理提供依据。第四节 项
27、目效益分析 一、经营收入估算 根据行业及公司历史数据对目标公司未来五年经营收入进行合理预测。二、经营总成本估算 合理估算目标公司未来五年主营业务成本、期间费用和税金支出等。三、经营利润与财务评价 合理估算目标公司未来五年的盈利水平，并估算项目投资回收期、内部收益率、净现值等财务指标。第五节 项目风险分析及对策 本项目实施过程中，可能会面临来自各方面的风险，须对项目的政策风险、国别风险、市场风险、技术风险、管理风险、财务及税务风险、法律风险、经济及社会风险、后续整合风险等风险因素进行评价，制定规避风险的对策，为项目全过程的风险管理提供依据。第六节 投资方案一、项目实施方案二、收购定价 根据审计报告和资产评估报告等资料，综合利用多种估值方法，如净现值法、成本法、收益法、市场可比交易等，对目标公司进行合理估值。三、预计投资总额 根据目标公司估值结果，合理计算收购一定比例股份的对价，并预测未来五年需对目标公司追加的投资额。四、资金来源与支付根据项目的预计投资总额及收购主体单位的资金运行情况，分析收购资金的来源及可行性与资金支付方式。五、后续发展方案 从发展战略出发，对目标公司未来发展方向进行合理规划。第八节 报告结论对项目是否可行出具结论性意见。
