1、新药研发中药理毒理研究内容与要求,西安万隆制药股份有限公司王震2012-3-26,第一章 新药评价内容,(一)药学研究与评价(二)临床前药理研究(三)临床前毒理学研究(四）临床研究与评价,(一)药学研究与评价,名称 结构或组份 理化性质 原料药生产工艺 制剂处方及工艺 定性鉴别 含量测定杂质检查 原料药和制剂的稳定性 质量标准草案和起草说明包装材料和容器的选择依据及质量标准,(二)药理研究,主要药效学二种模型 量效关系 指标客观阳性对照 空白对照 时效关系 临床给药途径 二种动物 体外试验至少重复3次作用机理(全新药),(三)毒理学研究,一般药理三个剂量 临床途径 时效变化 神经系统 心血管系
2、统 呼吸系统药代动力学三个剂量 二种动物 临床途径 812个采样点药动学基本参数 方法学考证分布排泄急性毒性 毒性症状 LD50，二种动物 二种途径 长期毒性 三个剂量 临床途径 空白对照，动态观察 中毒症状 中毒剂量 动物选择指标测定二种动物 靶 器 官 安全剂量毒性性质 病理描述 病理照片 统计处理毒代动力学 三个剂量 6-8点 主要毒代参数 AUC Cmax Tmax特殊毒性 遗传 生殖 致癌性局部毒性 过敏 刺激 光毒 溶血免疫毒性(生物制品)依 赖 性 作用于CNS药物,第二章、毒理学研究,一、毒理学研究的意义 二、毒理学研究的内容及方法 三、急性毒性研究 四、长期毒性研究 五、其他
3、毒性研究 六、特殊毒性研究 七、毒代动力学研究,一、毒理学研究的意义,1、毒理学研究简介2、创新药物的基本要求3、20世纪重大药害事件4、已审批药物的副作用与从市场撤出举例5、安全性因素对药物研发的影响,-致癌性 遗传毒性 生殖毒性 局部耐受性、过敏、依赖性、免疫毒性 光敏和其它试验等 了解毒性反应剂量、时间、强度、症状、靶器官及可逆性等，为临床方案提供参考、预测出现的毒性反应，制订临床防护 措施、保证受试者用药安全,毒理学研究,局部用药毒性,全身用药毒性,发现毒理学,一般毒性,特殊毒性,目的,2.创新药物的基本要求,质控,安全,有效,药物的基本属性（安全性、有效性、稳定性、可控性），在一定意
4、义上，由药物的化学结构所决定 药物分子设计是实现新药创制的主要途径和手段,稳定,3、20世纪重大药害事件,甘 汞：汞中毒 死亡585人醋 酸 铊：铊中毒 死亡1万人氨基比林：粒细胞缺乏症 死亡2082人磺 胺 酏：肝肾损害 死亡107人非那西丁：肾损害、溶血 死亡500人碘二乙基锡：神经毒性、脑炎、失明 死亡110人反 应 停：海豹样畸形儿10000多 死亡5000人异丙肾气雾剂：严重心律失常、心衰，死亡3500人氯碘喹啉：骨髓变性、失明、受害7856人，死亡5%心 得 宁：眼-皮肤-粘膜综合征，受害2257人,4、已审批药物的副作用与从市场撤出举例（1990-）,5、安全性因素对药物研发的影
5、响,二、毒理学研究的内容及方法,1、GLP国际上安全性研究实验室共同遵循的规范2、临床前药物安全性评价的主要内容3、新药临床前安全性评价的利弊权衡4、新药临床安全性再评价的目的5、新药临床试验安全性评价的局限性 6、2007年10大药物不良反应事件回顾7、药物临床安全性再评价主要内容8、新药临床阶段安全性评价利弊权衡9、药物上市后再评价的目的10、药物上市后风险的主要来源11、药物的毒副作用与从市场撤出举例,1、GLP国际上安全性研究实验室共同遵循的规范,提高药品非临床研究的质量；确保实验资料的真实性、完整性和可靠性；提高科学数据的质量和有效性，促进实验数据的国家间相互认可；保证人民用药安全，
6、为人类健康服务。,2、临床前药物安全性评价的主要内容,单次给药毒性试验（急性毒性试验）重复给药毒性试验（长期毒性试验）遗传毒性试验生殖毒性试验安全性药理学试验（一般药理学）致癌性试验药物依赖性试验特殊毒性试验（过敏性、局部刺激性、溶血性）等免疫原性试验毒代动力学实验,临床前研究结果评估：利是指药效或疗效，弊是指毒性或毒副作用毒性特点：（主要症状、毒性大小、靶器官、可逆性）安全范围：（LD50/ED50、LOAEL、NOAEL）LOAEL(lowest-observed-adverse-effect-level)出现副反应的最小剂量NOAEL（No Observed Adverse Effect
7、 Level）无可见有害作用水平同类药比较：了解程度及优势（有效性和安全性）适应症背景：治疗谱、毒性大小（安全范围）、性质和早期可预测性人体相关性：注意量化（毒代暴露量）利弊权衡是一个综合性的评价过程（系统工程）,3、新药临床前安全性评价的利弊权衡,4、新药临床安全性再评价的目的,临床前研究结果并不能完全推测临床研究结果，动物模型也不能完全复制出人体发生的疾病。临床中存在联合用药产生药物相互作用问题。药物在临床使用中发现毒副作用，需进行毒性机制研究寻找解毒药物。部分试验可以在药物进行临床研究中才开始进行。临床研究中有时会出现药物引起的特异质毒性反应。特需药品免做临床前安全性评价研究的药物。,药
8、品上市前动物毒性研究的局限性药品上市前人体临床试验伦理范围的局限性药品上市前人体临床试验科学性研究的局限性 统计发现，在所有的药物临床试验与应用中，不良反应种类出现的概率是：在一般动物毒性试验中只占左右；在期人体耐受试验中只有；在、期临床试验的出现率是；在期临床试验时出现；到市场销售时全部副作用才陆续出现。,5、新药临床试验安全性评价的局限性,6、2007年10大药物不良反应事件回顾,头孢曲松钠的安全使用问题（与钙使用，婴儿死亡）静脉输注人免疫球蛋白引起丙肝抗体阳性率增加甲磺酸培高利特撤市（心脏瓣膜病）马来酸替加色罗撤市(心肌梗死、脑卒中）含钆造影剂的安全问题（肾源性纤维化病）罗格列酮的安全性
9、受质疑（心梗和心源性死亡）注射用甲氨蝶呤、阿糖胞苷中混入长春新碱（N受损）感冒药禁用于2岁或以下儿童（死亡）哺乳妇女服用可待因可能导致婴儿发生严重不良反应硫酸普罗宁与胸腺肽注射剂可引起严重不良反应,7、药物临床安全性再评价主要内容,药物毒性作用靶器官、药物毒性作用模型的研究 解决由于模型不合适而发生的不良反应，重新设计动 物模型评价药物的毒性作用药物毒性作用机制 解决小概率毒性作用药物的不良反应，评价没有动物 模型不良反应药物的毒性作用联合用药的作用机制筛选研究 解决临床上由于联合用药而发生的不良反应根据新药特点，可在临床阶段提供新药安全性资料 致突变试验、致癌性试验和III段生殖试验，一般可
10、 以在申报NDA时提供其研究资料,8、新药临床阶段安全性评价利弊权衡,评估临床已出现的毒性，和毒性特点以及监测、防治措施。确定进一步临床和剂量选择方案提供重要信息。综合相关信息进行利弊权衡，判断能否向临床推进。根据毒理结果调整临床适应症范围、适应人群或给药方案综合比较新药与已上市药物之间毒副作用与安全性之间的关系，分析与判断该新药上市的可能性。,9、药物上市后再评价的目的,新药上市前安全性评价的局限性 病例太少、研究时间太短、试验对象年龄范围太窄、用药对象条件控制太严药物副反应与安全性的关系 副作用、变态反应、特异质反应、药物依赖性、致癌、致突变、致畸作用老药的毒、副作用研发成新药的可能性 反
11、应停、长春新碱、阿托品、阿斯匹林、雌激素药物再评价与药物命运的关系 限制与撤出使用、医疗事故判断的依据,10.药物上市后风险的主要来源,11.药物的毒副作用与从市场撤出举例（1990-）,12.非临床安全性评价基本原则,把握药理毒理评价的系统性 充分暴露毒性 具体问题具体分析 执行GLP（药物非临床研究质量管理规范）,13.非临床安全性评价全过程质量管理,GRP-Good Reviewing PracticeGSP-Good Supply Practice GUP-Good Using PracticeGSSP-Good Storage And Shipping Practice,GMP-Go
12、od Manufacturing PracticeGLP-Good Laboratary PracticeGCP-Good Clinical Practice,药物相关的GXP管理,药物储存,GSSP,14、药物安全性评价最终目的为临床服务,初步目的 毒理试验本身（试验评价）1.毒性反应（定性和定量）剂量、时间、程度、症状、性质、靶器官以及损伤的可逆性2.安全剂量及安全范围 最终目的向临床过渡（综合评价）申报临床：1.预测人临床用药时的可能毒性，以制定监测、防治措施 2.推算临床研究的安全参考剂量和安全范围，进行利弊权衡申报生产：3.为说明书提供信息-尤其是那些无法在人体试验的动物结果，限制用
13、药人群，帮助利弊权衡。,21/24/26号:过敏性（局部、全身和光敏毒性）、溶血 性和局部（血管、皮肤、粘膜、肌肉等）刺激 性等主要与局部、全身给药有关的特殊安全性 试验研究和文献资料22/27号:复方制剂中多种成/组份药效、毒性、药代动 力学相互影响的试验资料及文献资料23/25/22号:致突变试验资料及文献资料24/26/23号:生殖毒性试验资料及文献资料25/27/24号:致癌试验资料及文献资料26/28号:依赖性试验资料及文献资料27/28/21号:动物药代动力学试验资料及文献资料,15、各类新药申报资料的一般要求,16、药品注册管理办法药品注册药理毒理申报资料,药理毒理研究资料综述主
14、要药效学试验资料及文献资料一般药理学的试验资料及文献资料（）急性毒性试验资料及文献资料（）长期毒性试验资料及文献资料（）过敏性（局部、全身、和光敏毒性）、溶血性和局部（血管、皮肤、粘膜、肌肉等）刺激性等特殊安全性试验资料和文献资料（）复方制剂中多种成分药效、毒性、药代动力学相互影响的试验资料和文献资料致突变试验资料及文献资料（）生殖毒性试验资料及文献资料（）致癌试验资料及文献资料（）依赖性试验资料及文献资料（）非临床药代动力学试验资料及文献资料（）,17.临床前安全性评价 与临床的差别,18、长期毒性试验的给药期限,19.安评资料审评中的主要问题,（一）受试物（二）试验动物（三）给药途径（四）
15、给药频率（五）给药期限（六）给药剂量（七）观察指标（八）观察指标的时间和次数（九）结果及分析（十）综合评价,急性（单次给药）毒性 长期（重复给药）毒性 致突变（遗传毒性）生殖毒性 致癌性 免疫原性 依赖性 毒代动力学 其它毒性（过敏性、溶血性、光毒性、免疫毒性、药物依赖性等试验）,20、药物安全性评价研究的范围,受试药物化学药品：原料、制剂生物制品：制剂中药：原料、制剂、浸膏试验动物 动物同药效试验 啮齿类和非啮齿类两种，如大鼠、犬或猴等。理由充分，一种相关动物,21.药物非临床研究-共性问题,22.临床前毒理学评价总的要求,找出毒性剂量 Toxic dosage确定安全剂量范围 Safety
16、 margin 毒性反应 Toxic reaction:性质、程度、量毒关系、产生时间，达峰时间,持续时间及反复产生毒性反应时间、迟发性、蓄积性、耐受性 寻找毒性反应靶器官 Target Organ 毒性反应是否可逆 Reversibility确保临床用药安全,（一）试验要求（二）目的意义（三）基本内容和要求（四）急性毒性LD50常用计算方法（五）有关问题,三、急性毒性试验,（一）试验要求,试验动物啮齿类-小鼠或大鼠 非啮齿类-犬或其它一类药至少必须用二种动物(啮齿类及非啮齿类各一种,其中非啮齿类宜用Beagle犬);其它类酌情用二种动物小鼠18-22g,同次体重相差不超过4g;大鼠120-1
17、50g,同次体重不超过20g;犬用成年犬各半,（二）急性毒性试验目的意义,1、了解新药急性毒性强度 2、计算新药相对毒性参数 3、为临床毒副反应监护提供参考依据 4、为长期毒性、蓄积性毒性提供依据 5、为特殊毒性试验选择剂量提供依据6、其它方面,1、新药急性毒性的强度,表.化学物质的急性毒性分级标准(WHO,1977)毒性分级 ig大、小鼠LD50 吸入大、小鼠LC50 涂皮兔LD50 人口服可能的(mg/kg)(ppm)(mg/kg)致死量(g)极 毒 5000 10000 2180 1200*吸入毒性LC50指中毒栏中的浓度,一次中毒2-4小时,观察24天,新药急性毒性的强度,表.欧共体对
18、化学物的毒性分级动物及给药途径 剧 毒 毒 有 害大鼠 LD50 ig(mg/kg)25 25-200 200-2000大鼠或兔经皮LD50(mg/kg)50 50-400 400-2000大鼠 LC50(mg/L/4h 0.5 0.2-2 2-20,2、相对毒性参数,治疗指数TI=LD50/ED50安全系数SF=LD5/ED95可靠或确实安全系数CSF=LD1/ED99安全范围SM=(LD1/ED99-1)X 100%SED50/ED50,越大越安全LD5基本无害量 ED95基本有效量LD1肯定无害量 ED99肯定有效量,3.为临床毒副反应监护提供参考,中毒症状起始时间持续时间恢复时间对抗试
19、验为临床急救提供依据,急性毒性试验观察动物反应指标,中 毒 部 位 毒 性 症 状 表 现中枢神经系统 呆滞:对刺激反应迟缓、减弱、消失；不安：对刺激反应 过敏、兴奋；强直：行动姿势改变、叫声异常、震颤、共济失调 植物神经系统 瞳孔缩小、放大;分泌增多，如流涎、流泪 呼 吸 系 统 鼻孔流鼻涕、呼吸缓慢、困难、潮式呼吸、速率加快等心血管 系统 心动过速、缓慢、心律不齐、心跳过强、微弱胃 肠 系 统 胀、腹泻、便秘、粪便不成形、粪便黑色生 殖 系 统 乳腺膨胀、会阴部污浊、阴囊下垂等皮肤、毛皮肤发红、松弛、皮疹、毛竖起粘 膜口腔流粘液、充血、溃疡、出血性紫绀眼 睛上睑下垂、眼球突出混浊其 他直肠
20、温度升高、降低；消瘦；拒食等,4、为长毒、蓄毒试验 选择剂量提供依据,长期毒性剂量设计LD50法(1/10,1/50,1/100)MTD法(1,1/3,1/10)蓄积性毒性剂量设计1/10LD50,然后按等比级数1.5倍逐渐递增,5、为特殊毒性试验选择剂量提供依据,生殖毒性试验高剂量为母鼠MTD致突变试验啮齿类动物微核试验高剂量为1/2 LD50果蝇伴性隐性致死试验的高、低剂量分别为1/2 LD50和1/4 LD50精原细胞染色体畸变试验高剂量应为1/2 LD50 动物短期致癌试验高剂量应是MTD主要药效学剂量限度、一般药理学和药动学剂量设计也要参考急性毒性的LD50,6、其它方面,系列化合物
21、的合格率分析(除理化性质为主外)也参考LD50复方中药物的相互作用,有时也通过拆方及合用的LD50来判别相互作用的性质,四、长期毒性试验,（一）目的意义（二）基本内容和要求 1、LD50试验 2、最大耐受量试验 3、最大给药量试验 4、限量试验（三）长期毒性研究目的（四）试验方案设计 1-基本原则 2-试验动物 3-给药方案,（一）目的意义,毒性剂量 Toxic dosage安全范围 Safety margin 毒性反应 Toxic reaction:性质、程度、量毒关系、产生时间，达峰时间,持续时间及反复产生毒性反应时间、迟发性、蓄积性、耐受性 毒性反应靶器官 Target organ 毒性
22、反应是否可逆 Reversibility,1-LD50试验指动物单次给药后引起50动物死亡的剂量。LD50值的意义是：LD50越小表示药物的急性毒性越大。动物：小鼠、大鼠等 动物与分组：一般5组；每组10只 雌、雄各半。试验前禁食 给药途径：临床给药途径 观察14天，进行大体解剖观察，如有改变-病理检查,（二）基本内容和要求,2-最大耐受量试验（MTD-Maximum-Tolerated Dose）指动物单次大剂量给药或在24小时内接受多次大剂量受试药物后，动物在短期内出现的与药物相关的毒性反应，但是又不引起动物死亡的最大剂量 动物：小鼠、大鼠、犬等 动物数：小动物20只；大动物4只 雌、雄各
23、半。试验前动物应注意禁食 给药途径：临床给药途径 观察14天，进行大体解剖观察，如有改变-病理检查,（二）基本内容和要求,该试验多用于中药和毒性较小的其它药物研究 指药物以最高浓度和最大容积的给药，剂量可能并未达到最大耐受的剂量，所以该剂量被称为最大给药量。具体要求可参照最大耐受量试验。低毒药物，口服给药：5g（或ml）/kg 动物数一般 5只，大鼠禁食一夜，小鼠禁食46小时，观察14天，如无死亡，则无必要进行更高剂量 如动物在5g/kg出现死亡，可选择较低剂量,3、最大给药量试验,4、限量试验,（二）基本内容和要求,观察动物在给予超过临床剂量（数倍或数十倍）和用药周期（3-4倍以上）的情况下
24、所出现的毒性反应 设法发现引起毒性反应的剂量、剂量与毒性之间的关系、中毒表现和程度、主要毒性靶器官或组织及可逆程度等预测临床研究阶段可能的安全范围和毒性，预先制定防治措施或避免某些有特殊疾病患者的使用，减少临床可能的风险为临床试验初始剂量和指标的选择等提供重要参数,（三）长期毒性研究目的,通常长毒始于主要药效、安全药理、单次给药毒性、初步药代动力学（如果已经可获得）等试验之后有些药物侧重比较毒理学的研究，如新的剂型、改变酸根或碱基、改变给药途径等。,（四）试验方案设计-基本原则,l动物的种类 常用大鼠和犬或敏感动物。创新药一般2种以上，雌雄各半。生物制品多用大鼠和猴（种属特异性可特殊）动物的年
25、龄与数量 大鼠试验3月内：6-8周龄；3月：5-6周龄 犬：一般选用性成熟的，6-10月；猴：3.5-4.5年 根据试验周期长短确定每组动物数。原则：试验结束时小动物每组动物数应满足统计学要求；大动物的数应满足毒理学评价要求；一般大鼠为10-30只，雌雄各半；犬、猴至少雌、雄各3只；毒性大、周期长数量应增加，考虑恢复期数量。,（四）试验方案设计实验动物,给药时间临床给药周期的3-4倍。反复、长期或植入的药，按最长给药时间，即啮齿-6月；非啮齿-9月 周期短-每天给药；1个月-6天/周-每天给药时间应一致-保证动物摄入量的准确性 中药如给药体积大，可将药物分成 2次/日-不提倡采用掺食给药，除非
26、有稳定性、均一性,（四）试验方案设计给药方案,给药剂量 一般3个给药剂量组 高剂量-动物应出现毒性和个别死亡（20%）低剂量-等于或略高于有效剂量，无毒性 中剂量-介于以上两者之间，轻微毒性 或者按急毒结果：LD50法(1/10,1/50,1/100)MTD法(1,1/3,1/10),（四）试验方案设计给药方案,对照组的设置-通常给药组和对照组的动物数应基本相等-对照组可根据试验方案的具体要求和研究目的设立 阴性对照组、溶媒对照组观察指标 全面、针对特点 一般体征、饮食、体重变化；血尿常规、血液及血液生化指标、心电图，脏器/体重系数、重要组织器官的肉眼和病理组织学观察、死亡情况。应记录毒性症状
27、出现、减轻或消失的时间。体重和进食量每周测1-2次。周期3月的，1/3动物检查中期主要指标；如发现异常可适当增加检查次数。,（四）试验方案设计给药方案,五、其他毒性研究,1、致突变性试验2、生殖毒性试验3、致癌性试验4、皮肤给药急性毒性试验 5、皮肤给药的长期毒性试验6、皮肤刺激试验7、皮肤过敏试验8、光敏试验9、眼刺激试验10、滴鼻剂和吸入剂急性毒性试验11、直肠、阴道用药急毒试验12、直肠、阴道用药刺激试验13、身体依赖性试验-自然戒断试验14、身体依赖性试验-替代试验15、身体依赖性试验-催促试验16、身体依赖性试验-诱导试验17、精神依赖性试验,目前建立的遗传毒性试验是研究机体遗传物质
28、受外源性化学物质或其它环境因素作用时对有机体产生的遗传毒性作用。遗传毒性试验包括体外和体内检测系统。两者应结合进行研究。体外检测系统包括细菌回复突变、微核试验、哺乳动物细胞染色体畸变等；体内试验包括骨髓微核试验、显性致死试验等。一类药需要提供实验资料,1、致突变性试验（遗传毒性）,概念 评价药物对哺乳动物生殖的影响，推测对人可能的生殖毒性研究分为三段 I段（一般生殖毒性）：是评价对成年动物生育力和早期胚胎发育影响，评价药物对配子成熟，交配行为、受孕、胚胎着床前和着床的影响 II段（致畸敏感期毒性）：即妊娠动物在胚胎器官形成期给药，评价药物对亲体、胚胎、胎仔发育影响 III段（围产期毒性）：在妊
29、娠动物分娩前后给药，评价胎仔出生前后的发育和孕鼠从妊娠后期至断奶期间给药对妊娠、分娩、哺乳、胚胎、胎仔发育的影响。根据临床用药次数、适应证和拟用人群决定是否进行该试验创新药，一般可在申报临床研究前先提供II段试验对于可能只给一次或终身一次（如诊断或外科手术）的药，重复给药研究也许是不必要的。在较高剂量下，缩短处理期似乎更合适。,2、生殖毒性试验,致癌试验检测受试药物对动物的潜在致瘤性药物是否进行该试验应在获得一定的相关信息后才能确定 人群最长用药的时间及遗传毒理学、重复给药毒性等相关结果 重复给药毒性试验可能显示受试药物具有免疫抑制特性、激素活性或 考虑对人类是一种危险因子时，都应慎重考虑进行
30、有关的致癌试验。如：-药物拟用于非肿瘤病人的辅助治疗或非癌症疾病的重复给药使用-临床连续给药时间大于6个月应进行该试验-治疗慢性和复发性疾病而经常间断使用药物-有明确遗传毒性的化合物；-其构效关系提示有潜在的致癌性的药物-在连续重复给药的毒性试验中有癌前期病变的证据-重复给药滞留的母体化合物或其代谢产物导致局部组织或病生理改变-较长时间接触的药物，如缓慢释放药物也应考虑进行该试验-内源性肽类、蛋白质是否需要进行该研究需作特殊考虑-超生理水平,3-1、致癌性试验,以下情况进行致癌试验尤为重要：1）产生的生物学作用与天然产物明显不同；2）由于修饰导致产品结构与天然产物相比有明显不同；3）在人体局部
31、或全身的浓度（即药理学水平）明显增加。对于抗肿瘤药物是否进行该试验，可考虑以下因素：-如果用药人群的生存期较短（23年），则不要求-如用于晚期全身治疗的抗肿瘤药物一般不需要进行，但当该药物疗效较好，能明显延长生命时，应考 虑有关继发性肿瘤的问题，应进行致癌性研究,3-2、致癌性试验,目的:观察短期接触受试物后皮肤的毒性反应动物:家兔、豚鼠或大鼠，各半，家兔体重kg,豚鼠300g,大鼠200g左右,给药前24h将动物背部脊柱两侧毛脱掉,去毛范围约相当于体表面积的10%左右,(家兔约150cm2左右,豚鼠、大鼠约40cm2左右）药物：膏剂、液体或粉末。粉末需用赋形剂（如羊毛脂、凡士林等）混匀，以保
32、证受试物与皮肤有良好的接触剂量：3个，组距0.650.85。家兔每组只，豚鼠或大鼠每组10只并设赋形剂或空白对照组方法：将受试物均匀涂敷于脱毛区，破损皮肤则在脱毛区划破皮肤后再涂敷受试物。24h后去除，每日观察，连续7-14天。观察动物体重、皮肤、毛发、眼睛和粘膜的变化，呼吸、循环、中枢神经系统、四肢活动等变化。若有死亡则进行尸检，当有肉眼可见病变，则需进行病检判断：试验结果与对照组比较判断,4、皮肤给药急性毒性试验,5.皮肤给药的长期毒性试验,目的：观察经皮渗透产生的异常反应和可逆程度，找到靶器官动物：家兔(2kg,6只/组)，豚鼠(300g，10只/组)或大鼠(200g，10只/组)，各半
33、。给药前24h动物背部脊柱两侧脱毛，面积同急毒受试物：同急性毒性试验剂量：个，要求同大鼠口服长毒试验，并设赋形剂或空白对照组，若用受试物剂量超过有效浓度20倍以上，仍未见动物有不良反应或死亡时，则只须设一个高剂量组方法：受试物均匀涂敷,每次至少接触h，临床用药疗程的倍以上时间连续给药。部分动物应于停药后继续观察-周，检测指标：除每日观察皮肤、临床变化及皮肤病理学检查外，其血液学、血液生化指标和病理学检查项目同大鼠长期毒性试验要求判断：实验结果应写明安全剂量、中毒剂量、中毒表现、中毒靶器官及中毒的可逆程度等,6、皮肤刺激试验,目的：观察刺激反应情况动物：首选家兔(2kg左右)，其次为豚鼠(300g左右)。药前24h脱毛，家兔每侧脱约50cm2，豚鼠每侧脱约20cm2受试物：同急性毒性试验方法：只家兔或只豚鼠，在受试物区、对照区和破损皮肤区（脱毛后），一次或多次将受试物ml或1 g涂于受试物区
