1、国家十一五科技支撑计划,细菌性阴道病联合检测技术的推广应用,细菌性阴道病及其实验室检测,湖南省人民医院 曹友德,内容提纲,细菌性阴道病的概念 细菌性阴道病与微生态平衡 细菌性阴道病的影响 细菌性阴道病实验室检查 细菌性阴道病联合检测技术 细菌性阴道病的治疗,细菌性阴道病的概念,细菌性阴道病（bacterial vaginosis BV）是妇科常见病、多发病。细菌性阴道病以往曾有过许多名称，如嗜血杆菌性阴道炎、棒状杆菌性阴道炎、加德纳菌性阴道炎及非特异性阴道炎等。直到1984年在瑞典的专题国际会议上才正式命名为细菌性阴道病。,细菌性阴道病名称的界定细菌性：阴道内存在大量细菌生长繁殖，但 无法确定
2、引起BV的特异性细菌。阴道病：阴道粘膜无炎症性表现，故称“阴 道病”，而不称“阴道炎”。,BV的发病率高，在阴道感染性疾病中，细菌性阴道病约占50%60%，念珠药阴道炎占20%30%，滴虫性阴道炎占5%10%，因此，细菌性阴道病是妇科临床最常见的阴道感染。,细菌性阴道病与微生态平衡,微生态学的基本概念,微生态学与微生物学均研究微生物 前者研究非致病的微生物，而后者研究致病的微生物微生态学是研究人体正常微生物（MMT）群，或称生理性微生物的结构功能及其与宿主相互关系,健康妇女阴道微生物群中常住菌除乳酸杆菌外，还有葡萄球菌、大肠杆菌、棒状杆菌、B族链球菌、粪链球菌、支原体、消化球菌及类杆菌等。正常
3、菌群中厌氧菌与需氧菌之比为5：1。,正常的阴道菌群及微生态平衡,正常阴道内的微生物群主要有细菌、真菌、原虫及病毒等。菌群的组成菌中兼性厌氧乳杆菌是正常阴道的优势菌。,阴道正常菌群在阴道壁的粘附,阴道粘膜上皮细胞,乳杆菌,过路菌,条件致病菌,妇女阴道主要正常菌群,乳杆菌,类杆菌,表皮葡球菌,粪链球菌,大肠杆菌,梭状杆菌,白色念珠菌,棒状杆菌,原籍菌,其它菌群：共生、拮抗,消化球菌,妇女阴道常见过路微生物,金葡菌,肠杆菌,丙酸杆菌,消化链球菌,韦荣球菌,加德纳菌,滴虫,乳酸杆菌是阴道的原籍菌在阴道的正常菌群中其数量可达8107个/ml，从正常妇女阴道内可分离出16种左右乳杆菌，其中有几种能产生H2
4、O2的乳杆菌（如卷曲乳杆菌、詹森乳杆菌以及发酵乳杆菌等），在乳杆菌中占绝对优势，而其他不产H2O2的乳杆菌只占10%左右。,乳杆菌阴道原籍菌在正常菌群中数量最多,可达8x107/ml,功能最重要,阴道内各种微生物群之间,相互作用、相互制约、相互依赖，保持微生态平衡。一旦打破这种平衡，就会导致疾病的发生。,BV时的阴道微生态改变 乳杆菌不仅数量上减少，特别是产H2O2的乳杆菌减少加德纳菌及厌氧菌增加厌氧菌可增加上千倍，厌氧菌与需氧菌之比由原来的51，增加到1001至10001。,阴道微生态失调,致病菌,条件致病菌,阴道乳杆菌在数量上处于绝对优势地位，是维持阴道微生态平衡的前提和基础,乳杆菌,乳杆
5、菌,微生态平衡,微生态失调,内源性感染,外源性感染,产H2O2乳杆菌的生理作用产生乳酸，降低阴道PH值，抑制致病菌的生长繁殖产生H2O2调节阴道微生态平衡，防治外籍菌侵入引起的感染粘附抑制,影响阴道微生态环境的因素影响因素很多；包括内分泌变化（月经、妊娠、绝经）、性伴侣、滥用抗生素、宫内节育器、阴道冲洗以及不洁的性生活等。,细菌性阴道病（BV）发病机理,致病因素,乳杆菌,数量减少,功能减退,产H2O2,产乳酸,加德纳菌/类杆菌等数量,阴道内源性感染,BV,阴道菌群失调,细菌性阴道病的临床特征,阴道黏膜充血不明显，病理特征无炎症病变。临床表现为牛奶样白带，检查无滴虫，真菌或淋菌。,细菌性阴道病的
6、影响,BV对妊娠妇女的影响妊娠期BV可导致绒毛膜羊膜炎、胎膜早破及早产，产褥感染也比正常人群高。BV时，一些厌氧药可产生脂酶及蛋白酶，消 化胎膜上的脂质及蛋白质，使胎膜强度减弱而 易发生胎膜早破。BV时某些厌氧菌，可产生 大量磷脂酶A2，诱导子宫局部组织细胞膜磷脂 分解，使花生四烯酸增加，从而使前列腺素合 成增加，刺激子宫收缩而诱发早产。,BV对非孕妇女的影响 发生宫颈上非典型增生的危险性增加 宫内膜炎、附件炎的发生增加 全子宫切除，术后阴道残端感染增加,细菌性阴道病实验室检查,阴道分泌物检查,阴道分泌物是女性生殖系统分泌的液体,主要由阴道粘膜、宫颈腺体、前庭大腺及子宫内膜的分泌物混合而成，俗
7、称“白带”。检查目的：用于检查生殖系统病变、感染、滴虫、念珠菌，同时还可确定阴道清洁度。,白带常规检查,一般性状检查 pH值 阴道分泌物清洁度 霉菌与滴虫,一般性状检查,正常白带:白带异常可表现为色、质、量的改变：1.大量无色透明粘稠白带常见于应用雌激素药物后及卵巢颗粒细胞瘤时。2.脓性白带 3.豆腐渣样白带4.血性白带 5.黄色水样白带,pH值检查,正常pH值为4.5左右。阴道内呈弱酸性，这是阴道的自净作用，可以防止致病菌繁殖。如果患有滴虫性或细菌性阴道炎时，pH值上升，可大于56。,白带清洁度检查,白带涂片镜检，根据所见上皮细胞、白细胞（或脓细胞）阴道杆菌与杂菌的数量进行判断，并划分清洁度
8、：、度为正常，、度为不清洁。判断标准清洁度 杆菌 上皮细胞 白细胞 杂菌 意义+05-正常+515-正常-1530+提示炎症-30+严重阴道炎,霉菌和滴虫检查,白带经过处理后在显微镜下可以发现有无滴虫或霉菌，如存在滴虫或霉菌均用“”来表示。这一符号只说明你已经感染了滴虫或霉菌，并不说明感染的严重程度。,其他实验室检查,淋病奈瑟菌 其他细菌检查支原体和衣原体检查病毒检查：（单纯疱疹病毒、人巨细胞病毒、人乳头状病毒）病理检查,细菌性阴道病的诊断标准,具备下列4条中3条者即可诊断为细菌性阴道病。1.阴道分泌物为均质稀薄的白带。2.阴道分泌物pH4.5。3.氨臭味实验阳性。4.线索细胞阳性。,细菌性阴
9、道病的实验室检查,阴道分泌物pH检查 阴道分泌物胺试验 阴道分泌物找线索细胞 阴道分泌物唾液酸酶试验 阴道分泌物脯氨酸氨肽酶试验,胺试验,检查细菌性阴道病的方法:白带加一滴10%氢氧化钾，如发出鱼腥味,即胺试验阳性,线索细胞,线索细胞：线索细胞是指细菌性阴道炎患者有许多杆菌凝聚在阴道上皮细胞边缘，在悬滴涂片中见到阴道上皮细胞边缘呈颗粒状或点画状致使模糊不清者即为线索细胞，它是细菌性阴道病的最敏感最特异的体征。,不同染色条件下线索细胞形态,唾液酸酶试验,唾液酸酶是引起BV加德纳菌分泌的一种特异性胞外酶，正常妇女阴道中一般无此酶，细菌性阴道病时此酶可排泌至阴道分泌物中。BV患者唾液酸酶检测阳性。,
10、脯氨酸氨肽酶试验,应用ELISA方法检测BV妇女分泌物中高于正常妇女的脯氨酸氨肽酶活性，检测产物为-naphthylamin,传统诊断BV的Amsels金标准易受到显微镜质量、样本采集情况以及操作者经验等诸多因素影响。,细菌性阴道病的联合检测术,BV联合检测技术,该项目技术包括过氧化（H2O2)（阴道乳酸杆菌的标志物）、唾液酸苷酶（加德纳菌、游动弯曲杆菌等BV致病菌的标志物）和白细胞酯酶LE（炎性细胞的标志物）三项指标。不仅能诊断BV感染，而且能反应正常阴道菌群指标。,实验原理（1）,过氧化氢浓度测定：阴道液中过氧化氢经过氧化物酶作用，释放出新生态氧，后者在4氨基安替吡啉存在下，使3,5-二氯
11、-二羟基苯磺酸氧化呈红色，在反应系统中加入3,5-二氯-二羟基苯磺酸的拮抗物，当标本中H2O2浓度2mol/L，反应结果呈红色，呈色深度与H2O2浓度成正比。,实验原理（2）,唾液酸苷酶活性测定：唾液酸苷酶水解5-溴-4-氯-3-吲哚神经氨酸，释放出溴吲哚基，后者遇重氮盐起反应呈现红色或紫色，呈色深度与唾液酸苷酶活性成正比。,实验原理（3）,白细胞酯酶测定：白细胞酯酶水解5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸盐，释放出溴吲哚基，后者在氧存在的条件下呈蓝色，呈色深度与白细胞酯酶活性成正比。,实验操作,将阴道分泌物中加入400l稀释液,反复挤压棉拭子,使样本溢出。在反应装置中的三个孔中各加1滴阴道分泌物,之
12、后在中间唾液酸酶反应孔中再加1滴显色液,置37恒温反应。15min后观察反应孔内的结果。,结果观察,过氧化氢浓度(过氧化物酶法):显红色或紫色为H2O2浓度2mol/L(正常),显蓝色为H2O2浓度2mol/L(异常)。唾液酸苷酶(5溴-4氯-3吲哚唾液酸苷盐法):不显色为正常,显红色或紫色为阳性。白细胞酯酶(5溴-4氯-3吲哚乙酸盐法):不显色为正常,显蓝色或绿色为阳性。,性能指标,重复性：批内重复性：90%、批间重复性：90%。低检出量(灵敏度):过氧化氢2mol/L、唾液酸苷酶7单位/ml、白细胞酯酶9单位/ml，检出符合率90%。准确性：阴性参考品符合率90%、阳性参考品符合率90%。
13、试剂保存：28密封避光保存有效期在一年以上。,项目推广需要条件,一名或数名具有临床检验或医学背景的初级以上技术人员。有一间相对固定的实验场地。无需特殊的仪器设备条件,细菌性阴道病（）的联合检测技术与传统的常规检测等多种方法相结，极大地提高了细菌性阴道病的检出率和准确性。可对女性生殖道微生态环境、分泌物清洁度和细菌性阴道病致病菌状况、早期宫颈炎进行全面诊断。,具体操作：临床实践操作实习,BV的治疗常选用抗厌氧菌的药物，如甲硝唑类药物及克林霉素等 近来由于BV的发生与阴道微生态失衡有关，而提出采用微生态制剂来进行治疗，如乳杆菌活菌制剂,全身用药以下药物可供选用 克林霉素300mg，每日两次，共7天；甲硝唑400mg每日两次，共7日 替硝唑500mg每日两次，共6日 奥硝唑500mg每日两次，共6日（替硝唑为甲硝唑的第二代产品，臭硝唑为甲硝唑的第三代产品）,局部用药 1%乳酸液冲洗阴道或冲洗后上入甲硝唑类药物 阴道用药，可采用甲硝唑一类药物，如甲硝唑泡 腾片，或替硝唑、臭硝唑等。可在用药前采用1%乳酸液冲洗或不冲洗而直接上药。目前，可采用微生态制剂乳酸杆菌活菌胶囊,微生态制剂乳杆菌活菌胶囊 根据北京协和医院等的II期临床试验乳杆菌活 菌胶囊的效果与甲硝唑相比无差异，无不良 反应。每晚1粒，放入阴道，共10天。恢复阴道正常菌群，有望从根本上克服BV的 复发。,谢 谢,
