1、微生物实验作业指导书微生物基本操作作业指导书 文件编号： 文件类别： 品质系统作业指导书 撰写单位： 品控部 版 本：第版 发行日期：机密等级： 机密 一般 合计页数：共3页核准审核制定名称微生物基本操作制作业指导书文件编号：1 目的：规范微生物基本操作。2 范围：适用于微生物检测。3 名词解释：无4 职责： 微生物基本操作由检验组负责。5 作业内容：51 器皿的清洗：凡被污染的器皿，应先经过121，30min高压蒸汽灭菌后再进行清洗。 52 玻璃容器的包扎：灭菌前器皿应包扎紧密完整后才进行灭菌，以防止灭菌后器皿受到污染。521 平皿、吸管应用金属筒包装，或以牛皮纸包扎；522 试管应冠以金属
2、帽；523 三角瓶及其它玻璃容器应在瓶口以牛皮纸内衬硫酸纸包扎。53 培养基及器皿的灭菌：531 器皿的灭菌：干燥加热空气灭菌法（在干燥箱中利用热空气灭菌）。适用于玻璃器皿、 金属及其它干燥耐热物品，通常在160，2hr（温度不超过180，以免将棉塞或包装纸张烤焦着火）。另外，灭菌物品不宜摆放太紧密，应留有空隙；且不要直接接触干燥箱底和箱壁。在降温时要缓慢进行，以免玻璃破裂。532 高压蒸汽灭菌：适用于金属器具、玻璃器皿、基础培养基及其它耐热物品。A 含糖类不耐热培养基：115（0.0727MPa），1520min。培养基的配制数量应以适量为宜，避免剩余部分多次灭菌后，使用时其性质已受到影响B
3、 染菌培养物：121(0.1034MPa),30min; C 器械灭菌：121，30min； D 灭菌锅的使用： a 使用前请参照说明书加水至刻度，重复使用时应将水量补足，水边浑浊需更换； b 接通电源，打开排气阀排气，水沸腾后排气1015min； c 排气后，关闭排气阀，使蒸汽压上升到规定要求并维持规定时间（按灭菌物品性质，参照5.3.2ABC）； d 达到规定时间后，对需干燥的物品，立即打开排气阀排出蒸汽，待压力恢复到零时，自然冷却至60后开盖取物。如为液体物品不要打开排气阀，而应立即切断电源，待自然冷却，压力恢复至0以下再开盖取物，以防止突然减压液体剧烈沸腾或容器爆裂。 e 灭菌锅的温度
4、、压力应定期测试。测试方法：去灭菌指示带置于灭菌锅的上、中、底部（灭菌物品间隙），在按照规定要求灭菌后，观察指示带的颜色变化是否达到标准，以判别灭菌锅之灭菌效果。生效日期页次1/2版序A 名称微生物基本操作制作业指导书文件编号：533 灭菌后处理：灭菌后物品，注意放置场所，以免再度污染。A 高压蒸汽灭菌后的物品除培养基及稀释液外的其他物品，如玻璃平皿金属器具或棉花等均应先置于105烘箱内，根据包装大小应保持1h以上，至干燥后使用。B 包装损坏或塞子脱落者，不可作为无菌品使用。C 如包装有明显浸水者,不可作为无菌品使用。D 合格的灭菌物品应存放于贮藏室或防尘柜内,严禁与未灭菌物品混放,玻璃器皿应
5、坚持随用随灭的原则,灭菌后若保存最长不得超过24h。 E 灭菌合格的培养基不应贮存过久，一般不得超过24h，必要时可置于4冰箱存放。54 无菌间的使用：541 缓冲间的使用：实验室中需穿着之实验衣帽、鞋等物品需放置在缓冲间。并于实验前后打开紫外灯，照射时间不少于30min；542 超净台的使用： A 使用前应先用75%酒精棉擦拭台面，再打开超净配备的紫外灯，照射时间不少于30min； B 使用时,应关闭紫外灯,打开日光灯,同时打开无菌风直至实验结束； C 超净台灭菌效果应以落菌实验加以验证；555555 543 无菌间使用前后应将门关紧，打开紫外灯，悬吊式紫外灯消毒，应选用30W,距离在 10
6、m处，照射时间不少于30min。 544 紫外灯管应常清洁，以防上面的灰尘污垢影响紫外线的穿透。紫外灯管应定期更换。 55 无菌操作要求： 551 接种样品时，必须穿专用的工作服、帽、口罩及鞋，且应放在无菌缓冲间，工作前 经过紫外线消毒后使用；552 接种样品时，应用75%的酒精棉球消毒双手；553 打开包装未使用完的器皿，放置后再使用应新灭菌；554 从包装中取出吸管时，尖端不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖端不得触及试管或平皿；555 接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作时，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰灭菌。接种环和接种针在接种细菌前后应经火焰灼烧全部金属丝
7、，必要时要烧到环和针的连接处。火焰灭菌的有效范围以火焰为中心半径9cm内。6 注意事项： 无7 附件： 无8 相关文件： 无生效日期页次2/2版序A微生物涂抹实验作业指导书 文件编号：文件类别： 品质系统作业指导书 撰写单位： 品控部 版 本：第版 发行日期：机密等级： 机密 一般 合计页数：共3页核准审核制定名称微生物涂抹实验作业指导书文件编号：1 目的：规范微生物涂抹实验样品采集方法。2 范围：适用于生产车间设备、厨具及成品包装容器的微生物检测。3 作业内容：31 实验试剂：85%灭菌生理盐水；32 实验仪器：321 三角瓶：容量为250ml322 灭菌镊子323 灭菌棉球：体积为333c
8、m3324 酒精灯33 准备工作：配制85%生理盐水分装在一定数量的250ml三角瓶中，每瓶99ml，灭菌后 待用；34 样品采集：341 设备取样： 在酒精灯火焰下，以无菌镊子镊取无菌棉球沾润灭菌生理盐水，反复擦拭 需采集样品物体表面，接触面积视卫生状况，约100-200cm2，然后将该棉球迅速装入盛有99ml的灭菌生理盐水瓶中，摇匀待用；342 成品包装容器取样： 在酒精灯火焰下，以无菌镊子镊取无菌棉球沾润灭菌生理盐水，以无菌操作方式于无菌操作台内反复擦拭包装容器表面，再将擦拭后的棉球装入盛有99ml的灭菌生理盐水瓶中，摇匀待用；343 案板、刀具、餐盘、碗筷取样： 在酒精灯火焰下，以无菌
9、镊子镊取无菌棉球沾润灭菌生理盐水，用此棉球反复擦拭待测案板、刀具、餐盘、碗筷，接触面积约为100-200cm2，然后将棉球迅速装入盛有99ml的灭菌生理盐水瓶中，摇匀待用；344 操作人员手菌取样： 在酒精灯火焰下，以无菌镊子镊取无菌棉球沾润灭菌生理盐水，用此棉球反复擦拭待测人员左手（或右手），接触面积约为100-200cm2，然后棉球迅速装入盛有99ml的灭菌生理盐水瓶中，摇匀待用；35 样品检测： 将带有检测棉球的生理盐水在微生物检验室按微生物检测的操作标准执行。36 检测结果：361 设备、案板、刀具： 菌落总数=培养平皿增菌数（cfu/接触面积约为100-200cm2） 要求：菌落总数
10、50cfu/（100-200 cm2） 大肠菌群：不得检出生效日期页次2/2版序A 名称微生物涂抹实验作业指导书文件编号：362 餐盘、碗筷、成品包装容器： 菌落总数=培养平皿增菌（cfu/接触面积约为100-200cm2） 要求：菌落总数10cfu/（100-200 cm2） 大肠杆菌：不得检出363 人员手菌：菌落总数300cfu/只手大肠菌群：不得检出生效日期页次2/2版序A 落菌实验作业指导书 文件编号： 文件类别： 品质系统作业指导书 撰写单位： 品控部 版 本：第版 发行日期：机密等级： 机密 一般 合计页数：共3页核准审核制定名称落菌实验作业指导书文件编号：1 目的： 用于检测生
11、产车间、微生物无菌室和无菌操作台的卫生状况。2 范围： 适用于生产车间、微生物检验室。3 作业内容：31 实验试剂：营养琼脂；32 实验仪器：321 试管322 高压蒸汽灭菌锅323 恒温培养箱33 实验步骤：331 在微生物检验室内将灭菌好的凉至45左右的营养琼脂倒入灭菌平皿内，每皿约15ml，待琼脂凝固后，将平皿翻转，待用；332 生产车间环境落菌检测的操作方法： 生产车间灭菌后或生产进行中进行测试。将6个装有营养琼脂培养基的培养皿,放置于所测车间的四个角落以及中间离四边各1/3处,测试时间为15min,然后将平皿盖好取回,放入培养箱内培养,同时做空白实验; A 先将其在352的环境下培养
12、3648h,所得为细菌数； B 再将其在252的环境下培养6072h,所得为霉酵菌数； 细菌、霉菌、酵母菌三类菌量之和即为空气中总菌量。 以直径为9cm的平皿，检验时间为5min计算： 总菌数=N N：每平皿平均菌落数，单位，个/5min、1平皿（9cm） 空气清洁度与单皿(9cm)、5min的菌落数空气清洁度菌落数5min、1平皿（9cm）最清洁空气12清洁空气30普通空气（3070）150清度污染空气 300严重污染空气300333 微生物检验室检测的操作方法：3331 无菌操作台卫生检测的操作方法：无菌操作台开启后30min进行测试。将6个装有营养琼脂培养基的培养皿，放置于操作台的四个角
13、落以及中间离四边各1/3处，测试时间为30min，然后将平皿盖好取回，放入培养箱内培养，同时做空白实验；生效日期页次2/2版序A 名称落菌实验作业指导书文件编号： A 先将其在352的环境下培养3648h,所得为细菌数； B 再将其在252的环境下培养6072h,所得为霉酵菌数；3332 无菌室卫生检测的操作方法： 紫外线杀菌灯灭菌后30min进行测试。将6个装有营养琼脂培养基的培养皿，放置于操作台的四个角落以及中间离四边各1/3处，测试时间为30min，然后将平皿盖好取回，放入培养箱内培养，同时做空白实验； A 先将其在352的环境下培养3648h,所得为细菌数； B 再将其在252的环境下
14、培养6072h,所得为霉酵菌数；3333 结果分析： 352的环境下培养3648h,所得为细菌数；252的环境下培养6072h,所得为霉酵菌数；可分别以不同颜色的笔进行标示。所有培养基应全不长菌，若有任何一个长菌，则应将实验重复两次，而且测试前应进行消毒，若两次皆不长菌，则为合格，若有一次长菌，则无菌操作台应找厂家进行维修；对无菌室应检查其紫外灯的灭菌效果，同时应加大消毒力度及频率。生效日期页次2/2版序A 出师表两汉：诸葛亮先帝创业未半而中道崩殂，今天下三分，益州疲弊，此诚危急存亡之秋也。然侍卫之臣不懈于内，忠志之士忘身于外者，盖追先帝之殊遇，欲报之于陛下也。诚宜开张圣听，以光先帝遗德，恢弘
15、志士之气，不宜妄自菲薄，引喻失义，以塞忠谏之路也。宫中府中，俱为一体；陟罚臧否，不宜异同。若有作奸犯科及为忠善者，宜付有司论其刑赏，以昭陛下平明之理；不宜偏私，使内外异法也。侍中、侍郎郭攸之、费祎、董允等，此皆良实，志虑忠纯，是以先帝简拔以遗陛下：愚以为宫中之事，事无大小，悉以咨之，然后施行，必能裨补阙漏，有所广益。将军向宠，性行淑均，晓畅军事，试用于昔日，先帝称之曰“能”，是以众议举宠为督：愚以为营中之事，悉以咨之，必能使行阵和睦，优劣得所。 亲贤臣，远小人，此先汉所以兴隆也；亲小人，远贤臣，此后汉所以倾颓也。先帝在时，每与臣论此事，未尝不叹息痛恨于桓、灵也。侍中、尚书、长史、参军，此悉贞良
16、死节之臣，愿陛下亲之、信之，则汉室之隆，可计日而待也。臣本布衣，躬耕于南阳，苟全性命于乱世，不求闻达于诸侯。先帝不以臣卑鄙，猥自枉屈，三顾臣于草庐之中，咨臣以当世之事，由是感激，遂许先帝以驱驰。后值倾覆，受任于败军之际，奉命于危难之间，尔来二十有一年矣。先帝知臣谨慎，故临崩寄臣以大事也。受命以来，夙夜忧叹，恐托付不效，以伤先帝之明；故五月渡泸，深入不毛。今南方已定，兵甲已足，当奖率三军，北定中原，庶竭驽钝，攘除奸凶，兴复汉室，还于旧都。此臣所以报先帝而忠陛下之职分也。至于斟酌损益，进尽忠言，则攸之、祎、允之任也。愿陛下托臣以讨贼兴复之效，不效，则治臣之罪，以告先帝之灵。若无兴德之言，则责攸之、祎、允等之慢，以彰其咎；陛下亦宜自谋，以咨诹善道，察纳雅言，深追先帝遗诏。臣不胜受恩感激。今当远离，临表涕零，不知所言。
