1、食品毒理学实验讲义实验一 毒物损害的形态表现一、实验目的1. 通过本实验，掌握毒物的形态损害作用；2. 学会毒物形态损害的表现及如何记录相关实验现象。二、实验原理有关重金属铜、锌、铬、镉对鱼类的急性毒性研究国内已有许多报道，鱼类早期发育是整个生活史中对各种污染物最为敏感的阶段， 用以作为急性毒性试验具有快速、敏感、经济有效等特点，是生物测试保护天然水体的重要方法。 鲫鱼是我国重要的经济鱼类, 其分布面广而数量大, 个体生长快, 性成熟时间短, 繁殖季节长, 在人工控制饲养条件下可常年繁殖, 选择鲫鱼进行重金属离子毒性实验, 具有一定代表性。本实验以鲫鱼为研究对象，向其生长环境中加入重金属硫酸铜
2、，观察其形态损伤，希望在形态方面，有利于水体污染的观察。三、实验试剂、仪器及动物1. 实验动物鲫鱼幼鱼, 购自鱼市场。 实验鱼在水族箱中驯养7 d 以上， 暂养期间活动正常， 无病， 死亡率低于5%； 实验前1 d 停止投饵， 选择身体健康，反应灵敏，大小基本一致的幼鱼随机分组。2. 实验试剂CuSO4, 先配制成质量浓度为3000 mg/ L 的母液, 再根据需要稀释成各质量浓度。3. 实验仪器聚乙烯塑料水族箱，小型鱼类充氧机。四、实验方法与步骤1. 实验动物的驯养实验鱼在水族箱中驯养7 d 以上， 暂养期间活动正常， 无病， 死亡率低于5%； 实验前1 d 停止投饵。2. 实验动物的分组采
3、用随机实验进行分组，将21只鲫鱼随机分成7组，其中一组为空白对照组，另外六组为实验组。3. 实验动物的染毒采用静水法生物测试，实验期间不更换实验液， 全天充气。为防止饵料影响， 实验期间不喂食。 为确定质量浓度的大致范围, 先作预实验, 估计CuSO4的7个质量浓度值, 在每一个质量浓度的水族箱内放入3 尾鲫鱼, 分别观察24 h、48h、96h, 找出各金属的100% 致死质量浓度和最大耐受质量浓度。 再根据预实验结果设6个质量浓度组及1个对照组, 每一质量浓度放鱼5尾, 在曝露的过程中观察它们的形态损伤。五、中毒症状观察染毒后认真观察中毒发生、发展过程，中毒特点和毒作用靶器官，记录各组幼鱼
4、24、48、96 h 的形态损伤。中毒症状的观察现象填入附录中的表格中。六、注意事项1. 防止操作者中毒。2. 剩余受试化学物应在教师指导下销毁实验一 附录：预实验实验结果：（在实验报告上所有的图表自己手写）CuSO4浓度（mg/L）24 h形态损伤48 h形态损伤96 h形态损伤游动是否活跃皮肤是否出现溃烂是否死亡及死亡个数游动是否活跃皮肤是否出现溃烂是否死亡及死亡个数游动是否活跃皮肤是否出现溃烂是否死亡及死亡个数6.3是（0）是（1）是（1）14.4是（0）是（1）是（1）23.4是（1）是（1）是（2）32.4是（1）是（1）是（2）43.2是（2）是（2）是（3）54.0是（2）是（3
5、）是（3）0（对照）无（0）无（0）无（0）正式实验实验结果：CuSO4浓度（mg/L）24 h形态损伤48 h形态损伤96 h形态损伤游动是否活跃皮肤是否出现溃烂是否死亡及死亡个数游动是否活跃皮肤是否出现溃烂是否死亡及死亡个数游动是否活跃皮肤是否出现溃烂是否死亡及死亡个数浓度1浓度2浓度3浓度4浓度5浓度60（对照）经上述实验可得，重金属铜对鲫鱼的形态损伤表现为：实验二 毒物的急性毒性试验一、实验目的1. 掌握急性毒性试验的基本步骤及如何设计染毒的剂量与分组；2. 掌握LD50的测定方法及计算方法。二、实验原理急性毒性是机体一次接触或24h内多次接触大剂量外源化学物后所引起的快速剧烈的中毒效
6、应。硫酸铜是常见的一种化学毒物，鱼类早期发育是整个生活史中对各种污染物最为敏感的阶段，用以作为急性毒性试验具有快速、敏感、经济有效等特点，是生物测试保护天然水体的重要方法。本实验以鲫鱼为研究对象，向其生长环境中加入重金属硫酸铜，观察硫酸铜急性毒性反应的特征。三、实验试剂、仪器及动物1. 实验试剂硫酸铜，先配制成质量浓度为3 000 mg/ L 的母液, 再根据需要稀释成各质量浓度。2. 实验仪器聚乙烯塑料水族箱，小型鱼类充氧机。3. 实验动物鲫鱼幼鱼, 购自鱼市场。 四、实验方法及步骤1. 实验动物驯养及分组实验动物驯养及分组见实验一。2. 预试验采用静水法生物测试，实验期间不更换实验液， 全
7、天充气。为防止饵料影响， 实验期间不喂食， 估计硫酸铜的7个质量浓度值，求出受试化学物的大致致死范围（0-100%）。3. 正式试验根据预备实验结果设6个质量浓度组及一个对照组, 每一质量浓度放鱼5尾, 在曝露的过程中观察它们死亡效应。中毒后, 多次刺激无反应判断为死亡个体, 从水中随时捞出。 五、LD50的计算记录各组幼鱼24、48、96 h 死亡数, 计算死亡率, 画出硫酸铜浓度与死亡率的曲线. 找出各重金属的半数致死质量浓度( LD50)。实验数据填写在附录中的表格中。六、注意事项1. 不要一味将注意力集中在高剂量组的动物，因为这些动物往往死亡很快，反而不容易观察到中毒的发展过程。2.观
8、察记录应尽量完整、具体。实验二 附录：CuSO4浓度（mg/L）24 h死亡率48 h死亡率96 h死亡率死亡个数死亡率死亡个数死亡率死亡个数死亡率浓度1浓度2 浓度3浓度4浓度5浓度6对照实验数据：依据上述实验数据分别画出染毒24h、48h、72h及96h后的剂量-反应曲线，得染毒24h、48h、72h及96h后的LD50，各曲线如下所示：（ 此区域画曲线）由上述曲线可得，染毒24h、48h及96h后的LD50分别为：实验三 毒物的安全浓度实验一、实验目的1. 掌握安全浓度的概念；2. 掌握安全浓度测定的基本步骤及计算方法。二、实验原理安全质量浓度即为某一毒物对动物体不造成损伤的质量浓度范围
9、，通常由LC50 0.1计算出。硫酸铜是常见的一种化学毒物，鱼类早期发育是整个生活史中对各种污染物最为敏感的阶段，用以作为急性毒性试验具有快速、敏感、经济有效等特点，是生物测试保护天然水体的重要方法。本实验以鲫鱼为研究对象，向其生长环境中加入重金属硫酸铜，计算硫酸铜对鲫鱼的安全质量浓度。三、实验动物、试剂及仪器1. 实验动物鲫鱼幼鱼, 购自鱼市场。 实验鱼在水族箱中驯养7 d 以上， 暂养期间活动正常， 无病， 死亡率低于5%； 实验前1 d 停止投饵， 选择身体健康，反应灵敏，大小基本一致的幼鱼随机分组。2. 实验试剂CuSO4,先配制成质量浓度为3000 mg/ L 的母液, 再根据需要稀
10、释成各质量浓度。3. 实验仪器聚乙烯塑料水族箱、小型鱼类充氧机。四、实验步骤1. 实验动物驯养及分组实验动物驯养及分组见实验一。2. 染毒步骤与方法采用静水法生物测试，实验期间不更换实验液， 全天充气。为防止饵料影响， 实验期间不喂食。 为确定质量浓度的大致范围, 先作预备实验, 估计CuSO4的7个质量浓度值, 在每一个质量浓度的水族箱内放入3 尾鲫鱼, 分别观察24 h、48h、96h，找出各金属的100% 致死质量浓度和最大耐受质量浓度。 再根据预实验结果设6个质量浓度组及一个对照组, 每一质量浓度放鱼5尾, 在曝露的过程中观察它们的行为、中毒症状、死亡等效应。中毒后， 多次刺激无反应判断为死亡个体, 从水中随时捞出。 五、安全质量浓度的计算记录各组幼鱼24、48、96 h 死亡数, 计算死亡率, 画图 求出各重金属的半数致死质量浓度( LC50) ，由公式LC50 0.1计算出安全质量浓度。六、注意事项1. 防止操作者中毒。2. 观察记录应尽量完整、具体。3. 剩余受试化学物应在教师指导下销毁。结果计算填以下内容：由实验二得染毒24h、48h、及96h后的LD50，分别为 ， ， ，由下列公式：安全质量浓度= LC50 0.1得染毒24h、48h及96h的安全质量浓度分别为 ， ， 。
