1、重组抗体药物的质量控制解析 ， （ ） 存活 细 胞 的量 效 关 系 进 行 参 数 拟 合 后 ， 算 其 计 并与标 准 品 比较 后 即可评 价抗 体 的相 对 活性 。 而 表皮 生 长因子 受体 （ ） 抗 的生 物 学活 性 测 单 定则 是 采用 细胞 增 殖 抑 制方 式 ， 即通 过 特 异 结 合 并 封 闭表 皮生 长 因子受 体 ， 有效抑 制 肿瘤 细胞 生长 ， 并 通 过供 试 品与标 准 品的梯 度稀 释获 得增 殖抑 制 的量 效 曲线 ， 计算 重组抗 体 的生 物学 活性 。 并 报 告基 因法 报 告 基 因法 也 是 通 过 重 组 片可 固化 可溶
2、性 的抗 原和 细胞 ， 待测抗体 通过微 液流 系统流经芯片时 ， 一旦与 固化抗原结合 ， 片表面 的蛋 芯 白浓度就会 增加 ， 进而 引起芯 片表面液 体折射 率 的变 化 而 被 检 测 到 。技 术 的 优 势 还 在 于 能 实 时 动 态 监 测抗原抗体 的结合反应 ， 并测定亲和常数等反应参数 。 残 留 杂 质 重 组 抗 体一 般 由哺乳 动 物 细胞 表 达 生 产 ， 因此 需 要对 制 品 中来 自表 达体 系及 纯化 过程 中可 能存在 的外源 组分 进行 限量 控 制 。根 据 其 生 产 工艺 ， 相关 抗 体与 相应 靶点 结 合后 ， 定 信 号通 路 变
3、 化 效 应 的 测 活性评 价 方式 。一 般 在 细胞 株难 于获 得 ， 以及 杀 伤 杂质 的 限量控制 主要 包 括 残余 、 残余 宿主 细 胞 蛋 白、 留蛋 白 等 。 其 中针 对 宿 主 细 胞 蛋 白 、 残 蛋 白 亲 和纯 化 柱 的配 基 ） （ 的残 留 限量 检 测 主要 采 用 夹 心 的 方 法 。 中和或 增 殖 抑 制 法 产 生 量 效 曲 线 的 信 噪 比不 理 想 时 ， 基 于对该 通路 的现 有 了解 ， 携带 抗体 作用 靶 可 将 点 反应 元件 与报 告 基 因 的质 粒 稳 定 转 染 细 胞 后 ， 通 过 重组 抗体 与相 应 靶
4、 点 的作 用 ， 动报 告 基 因 的表 启 达 来检 测 重组抗 体 的生物 学 活性 。如在 单 抗 的活性 测定 中 ， 携 带 将 受 体 和 萤 光 素 酶 报 告 基 因 的 质粒 共 转 染 细胞 ， 筛选 后 得 到 稳定 携 带 上 述质 粒 的细胞 。当 与该 重 组细胞 膜 上 的受 传 代 细胞 系 的 理 论 上 具 有 致 瘤 性 的潜 在 风 险 ， 将 生 物 制 品可 以允 许 的 残 余 限度 规 定为 每剂 量不 超过 ， 国也规 定 须 用敏 我 感 的方 法测 定来 源 于宿 主细 胞 （ 括转 化 的哺 乳动 包 物传代 细胞 ） 的残余 含量 ，
5、 限量 规定 为 每 其 剂 量小 于 。 目前 残 余 的 检 测 方 法 主要 包 括杂 交 、 光 染色 、 量 等方 法 荧 定 。杂 交 法 主要采用地 高辛 等非放射 性材料标 记核 酸探针 ， 无 需特 殊仪器设备 ， 在实际工作 中通 常需要对 供试 品 但 及 标准进行 蛋 白酶 消 化等 同步处 理 ， 会造 成 检 体 结合 后 ， 可通 过胞 内结 构 域 的变构 与相 应 信 号 通 路 的作 用 ， 活化 萤 光 素 酶报 告 基 因 的表 达 。将 系 列 梯 度稀 释 的供试 品与标准 品与一定 浓度 的 孵 育后 ， 与该 重组 细 胞 共 培 养 即 可获
6、得 单 抗 的 活 性量 效 曲线 。一单 抗 也 采用 了携 带 类 似 报 告 基 因 的细胞 株进 行活 性测 定 。 测灵 敏度 的降低 。荧 光染料 法采用 等可 特 异 与双链 形 成复合 物 的荧光 染料 ， 以荧光 酶 标仪 检测 ， 根据 标 准 曲线与 供试 品的荧 光 强度 ， 算 计 残 留量 。该 方 法 简便 快 捷 ， 由 于抗 体 药 物 残 但 余 质控标 准较 高 和检 测 限 的原 因 ， 光染 色 法 荧 通 常不适用于抗 体药物 的 残量控制 。 重 组抗体 药 物 的成 品质控 重 组抗 体 药 物 的成 品除 含 量 、 生物 学 活 性及 必 重
7、组 抗体 的结 合活 性测 定 法 竞 争 是 最 常 用 的重 组 抗 体结 合 活性测 定方 法 。首先 将制 备 的可溶 性抗 原 包 被后 ， 系列梯 度稀 释 的供试 品 、 将 标准 品与 一定 浓 度 的酶 标抗 体竞 争 结合 包 被 抗 原 ， 抗 体 浓 度 与 吸 将 光值 的 量效关 系进 行 参数 拟合 后 ， 算供 试 品 、 计 标 准品的 值评 价 重组抗 体 的结合 活 性 。 流 式 细 胞 仪 法 该 方 法 原 理 与 竞 争 相 同 ， 只是 以带 有 特 异 结 合 位 点 或 膜 表 面 标 记分 子 的细胞 替 代 了包 被 的可 溶 性 抗 原
8、 或受 体 ， 通 过 流式 细胞仪 测定 阳性 细胞 率来 检测 竞争 结 合 的效 要 的理 化特性 检测 外 ， 还应 该按 照注射 剂 的要求 ， 进 行其 他 常规项 目的检 测 ， 括 鉴别 试 验 、 观 、 见 包 外 可 异 物 、 量 、 分 、 值 、 菌 检 查 、 菌 内毒 素 检 装 水 无 细 查 、 常毒性 检查 等 ， 体 测定 方 法参 见 现 行 异 具 中华 人 民共 和 国药典 及其 他相 关技术 文件 。 重 组 抗 体 药 物 未 来 需 要 开 展 的 工 作 果 。该 方法避 免 了相 应 抗 原 的制 备 过程 ， 难 于 获 对 得可 溶性
9、 抗原 的重 组抗 体 可采用 该方 法进 行结 合 活 性测 定 ， 同时 细胞 表 面抗 原 的空 间结 构 近 乎 于 天然 存 在 形式 ， 其测 定结 果应 更加 客观 。 法 基 于 的 法 测 定 周 我 国重组 抗体 药物 的质 量控 制技术 随 着抗体 药 物研 发 的深入 也在 不断 的发 展和 完善 。未来 抗体 药 物质 控仍 需进 一步 关注 以下 几个 主要方 面 。 生 产 细 胞 的 质 量 控 制 目前 现 行 版 药 典 关 于 细 胞 库 管 理 和 检 定 要 求 ， 期短 、 测样 品消耗 量少 ， 待 该方 法 在 测定 抗 原抗 体 结 合活性 时
10、无需 标记 ， 免 了标 记 对 分子 结 构 的影 响 ， 避 可更加 真实地反 映抗 原 抗 体 的结 合 情 况 。其 检 测芯 经 多年 的实 践证 明可 以保 障重组 抗体 等生 物技 术药 中 国新 药 杂 志 年 第 卷 第 期 ） ，（ 物 生产 细胞 株 的总 体 质 量 ， 作 为 逆 转 录 病毒 检 测 但 常 用方 法 的逆转 录 酶 活 性测 仍 有 待 进 一 步 完 善 ， 即 法 。如 采用 商 用 试 剂盒 ， 专 属 性 、 测 限 、 收率 其 检 回 等参 数需 经验 证通 过后 方可 使用 。 由于重组 抗体 药物 剂量 大 ， 杂交法 、 光染 色
11、法 荧 虽然 可 以通过 增加 标 准 品 回收 率 、 检样 品 中核 酸 待 需 建立均 一 、 稳定 的 模 板 和逆转 录 酶活性 标 准 品， 并采 用诸 如定 量 等方 法进 行 酶活性 定 量 。 重 组抗 体 结构分 析 富集 等前 处理 步骤 ， 对制 品 中的核 酸残 量进 行控 制 ， 但 由 于 方 法 的 局 限 性 仍 需 进 一 步 完 善 。 而 定 量 方 法在 特 异 性 、 敏 度 、 确 性 方 面具 有 独 特 灵 准 的优 势 ， 比较 客观 地 对残 余 定 量 ， 且 反 映 可 并 片段 的相 对分 子质量 分 布 。但 该 方法仍 需要 对
12、引物 设 计 、 准 品等 做 进 一 步 的优 化 与 规 范 。 同时 残 余 标 的检 测也 需要 结合 工艺 验证来 综 合控 制 。 结 语 质谱 仪 、 细管 电泳 仪 、 型 高效液 相 系统 等新 毛 新 型仪 器 的应 用 ， 可有 效 提 升 抗 体 质控 中结 构 分 析 的 水平 。例如 国外 研发 单位 在重 组抗 体理 化对 照 品充 分研 究 、 定 的 基 础 上 ， 鉴 已在 重 组 抗 体 肽 图 的 质 控 中 ， 质 控标 准从 对 翻 译 后 修 肽段 的定 性 分 析 提 高 将 为定 量检 测 ， 由于各 种条 件 的制 约 ， 而 目前我 国重
13、组 抗 体 药物 质 控理 化对 照 品 的研 究 还 不 够 详 尽 ， 且 并 质控 标 准 中肽 图分析 结果 仅要 求 与对照 品一 致 。 同 时重 组抗 体 翻译 后 修饰 的糖 链 十分 复 杂 、 且 其 结 并 如何更 加科 学有 效地 对 重组抗 体药 物 的质量 进 行 控 制 ， 需要 结合 临床 评 价 及 上 市后 的安 全 性 监 还 测 ， 一步 对质 控方 法学 、 进 相关 标 准物质 开 展深入 研 究 。本文对 国 内外有 关 重组抗 体 药物 的质 量控 制研 究 进展 和 亟待 解决 的问题 进 行综述 ， 旨在抛 砖 引玉 ， 引发 大家对 相关
14、问题 的关 注 和讨论 。 志 谢 ： 谢 中 国食 品药 品检 定 研 究 院 重组 技 术 产 品 室 饶 感 春 明研 究 员 对 于 本 文 提 供 的相 关 资 料 及 修 改 意 见 。 参 考 文 献 ， 构 与生 物学 功能 相关 ， 因此 糖 基化 分 析 十分 具 有 挑 战性 ， 因此也 是 抗 体质 量 控 制 的重 点 和 难 点 。 目前 虽 然 可 以采用 质 谱 等 分 析 手段 对 唾 液 酸 、 糖 图 谱 寡 和糖 基化 位 点进行 分 析 ， 反 映一定 的糖 基 化信 息 ， 并 但 目前没 有 一种 简便 易行 的方 法 ， 快 速 地 对 糖 链
15、能 的结 构进 行 全面 的分 析 和鉴定 。 重 组 抗 体 生 物 学 活 性 检 测 抗 体 活 性 检 测 方 法 因其 功 能 各 异 而 具 有 多 样 性 ， 常于体 外 采用 细 胞 评 价 模 型模 拟其 作 用 机 制 通 产 生量 效反 应进 行 ， 在 实 际工作 中 ， 些 活性 检测 但 有 周期 较 长 ， 骤繁 琐 、 响因 素多 ， 步 影 重复性 不 理想 ， 并 且有 些重 组抗 体 药物 无法 找 到合适 的细 胞株 进行 活 性测 定 ， 进而 采用 抗 体 结 合 活 性 作 为 其 功能 性 评 价 指标 。针对 上述 有 待进 一 步 完善 的环
16、 节 ， 基 于 对 可 胞 内信 号传 导通 路 的 了解 ， 建相 应 的转基 因细 胞 ， 构 以期建 立更 加 准 确 、 用 和 便 捷 的 活 性 测 定 方 法 。 耐 另 一方 面 ， 目前 抗体 生 物 学 活 性 测 定 标 准 主要 是 以 ， ， ： 国家 食 品药 品监督 管理 局 药 品 审评 中心重组 制 品 生 产 用哺 乳 动物 细胞 质 量控 制 技 术 评 价 一 般 原 则 一 ： ？ 一 ： ： 相 对 于标准 品 活性 的百 分 含 量 体 现 的 ， 是 一个 相 即 对 生物 学活 性结 果 ， 能 够 借 鉴 其他 生 物学 技 术 药 如 物
17、 质控 经验 ， 重组 抗 体 药 物 的生 物 学 活性 单 位 进 对 行 科学 的赋 值 和定 义 ， 加 强 标 准 物 质 稳定 性 的研 并 ， ： 国家 药 典 委 员 会 中华 人 民共 和 国药 典 （ 部 ） 三 年 版 北 京 ： 国 医药 科 技 出版 社 ， ： 中 国家 药 典 委 员 会 ，中华 人 民共 和 国药 典 （ 部 ） 三 年 版 北 京 ： 国 医药 科 技 出 版社 ， 中 ： 张岩锐 ， 丽娟， 段 苟凝 虹 ， 重组 等 细 胞 染 色 体 鉴 定 方 法 的研 究 微 生物 学 免 疫学 进 展 ， （ ） ， ： 国家 食 品药 品监 督
18、管 理 局 药 品审 评 中心 生 物 组织 提 取制 品 和 真 核 细 胞 表 达 制 品 的病 毒 安 全 性 评 价 技 术 审 评 一 般 原 则 ： ？ 究 ， 可 以更 加 客 观有 效 地 评 价 重 组 抗 体 产 品 的有 将 效性 ， 同时 也便 于类 似抗 体产 品之间 的 比对研究 。 重 组 抗 体 残 留 杂 质 分 析 在 重组 抗体 质控 中 ， 要 对 宿主 细胞 蛋 白 、 白 需 蛋 残 留进 行 限 量 控 制 。虽 然 抗 体 生 产 中 主 要 采 用 细胞 和 蛋 白 ， 各 单 位 细胞 株 、 产 工 艺 均 但 生 非 一致 ， 因此 研发
19、 单 位 应 根 据 各 自的 生 产 工艺 制 备 相应 的残 量 控 制 对 照 品 、 体 ， 建 立 相 应 检 测 方 抗 并 国家 药 典 委 员 会 中华 人 民共 和 国 药典 （ 部 ） 三 年 版 北 京 ： 国 医 药科 技 出 版社 ， 中 ： 周 海 钧 药 品 生 物 检 定 北 京 ： 民 卫 生 出 版 社 ， 人 ： 中 国 新 药杂 志 年 第 卷 第 期 ，（ ） 王 军 志 生 物 技 术 药 物 研 究 开 发 和 质 量 控 制 第 版 北 京 ： 学 出版 社 ，： 科 ： 。 ： （ ）： ， ， ， ， （ ） ， ： 陶 磊 ， 春 明 ， 凯 ， 重 组 嵌 合 抗 型 单 克 隆 抗 饶 高 等 体 的 结 构验 证 ，药 学 学 报 ， （ ） ， ： ， ， ， 王 军志 生 物 技 术 药 物 研 究 开 发 和 质 量 控 制 第 版 北 京 ： 学 出版 社 ， 科 ： ： （ ） ， ， ： ， ， ， 。 ：
