1、细胞工程 期末考试复习题目细胞工程 期末考试复习题目细胞工程 填空：20个 分=10分 选择：10个 2分=20分 名词：10个 6分=30分 简答：5个 6分=30分 论述: 1个 10分=10分 第一章 绪论 1、细胞工程的定义及特点？ 细胞工程：是指主要以细胞为对象，应用生命科学的理论，借助工程学原理与技术，有目的地利用或改造生物遗传性状，以获得特定的细胞，组织产品或新型物种的一门综合性科学技术。 细胞工程的特点：前沿性：现代生物技术的热点 争议性：新技术给伦理道德带来的冲击综合性：多学科交叉 应用性：工程类课程，重在产品与技术 第二章 细胞培养的设施与基本条件： 1、什么是细胞及组织培
2、养？ 组织工程：习惯上繁殖所有的体外培养，即器官培养，组织培养和细胞培养的总称。其本意是指从活的机体中去取出器官、组织或细胞，模拟机体内生理条件，在体外建立无菌、室温和一定营养条件等，使之生长和生存，并维持其结构和功能能的技术称为组织培养。 细胞培养：将组织块用机械方法或酶解法分离成单个细胞，做成细胞悬液，再培养于固体基质上，成单层细胞生长，活在培养液中呈悬浮转肽培养的技术称为细胞培养。 2、了解细胞培养实验室的基本规划及相关注意事项？ 实验室规划： 准备室：培养用具清洗、消毒和做实验准备的场所，一般建在通风和光线充足的地方。 缓冲间：保护操作室的无菌环境，避免空气对流。 操作间：要求无菌。最
3、好设在阴面，防止室温过高；天花板高度不超过2米，保证紫外线有效杀菌效应；门用拉门，避免空气流动。室内天花板、地板和四周墙壁要光滑无死角，要镶瓷砖或涂油漆，便于清洗与消毒，不易在墙角推挤灰尘。 3、细胞培养的设备有哪些？有何基本作用 超净工作台 最好安装在无尘室内，最好在无菌间，避免过多灰尘使滤器阻塞，降低净化效果，缩短使用寿命。新安装的或长期未使用的工作台，工作前必须对工作台和其周围环境用真空吸尘器或不产生纤维的工具进行清洁工作，在采用药物灭菌法或紫外线灭菌法进行灭菌处理。 每次使用时，应先用75%酒精擦洗台面，并进行3050min紫外线灭菌灯处理净化工作区内累积的微生物，在关闭紫外灯后，应启
4、动送风机使之转运2min后在进行培养操作。 净化工作区内不应存放不必要的物品，以保持洁净气流不受干扰 高效过滤器3年更换一次。请专业人员操作，以保持密封良好。定期将粗过滤器中的过布拆下清洗。 每次使用净化台要即使清楚工作台面上的物品，并用酒精擦洗台面使之始终保持洁净。 CO2培养箱： 一定浓度的CO2生长，尤其是原代培养和单细胞培养有促进作用。 一定浓度的CO2可维持培养液恒定的pH 箱体内装有水域，可以保证培养箱内的湿度。 培养箱内装有紫外灯。 通过气体流量计可以调节CO2还让空气的比例。 在水中可加入防腐剂。可防止因CO2培养箱中湿度较高，易长霉菌。 电热干燥箱：用于烘干和干热消毒玻璃器皿
5、。消毒时，于温度高达160，因此一般不要随意打开箱门，以免玻璃器皿突然遇到冷空气而破裂。要等到温度降低到50以下时，才能打开门。 其他：蒸汽消毒器、冰箱、离心机、真空泵、纯水设备、滤器、液氮容器、显微镜、天平、移液器等。 1 第三章 植物组织培养 1、细胞全能性：是指分化细胞保留着全部的核基因组，具有生物个体生长、发育所需要的全部遗传信息，具有发育成完整个体的潜能。 2、细胞分化：是指细胞在形态、结构和功能上发生差异的过程，包括时间上和空间上的分化。 3、脱分化：又称去分化，是指分化细胞失去特有的结构和功能能变为未分化细胞特性的过程，即分化的细胞在适当条件下转变为胚性状态而重新获得分裂能力的过
6、程。 4、愈伤组织(Callus)：脱分化的植物细胞经过细胞分裂，产生无组织结构，无明显极性的松散的细胞团。 5、再分化：是指在立体条件下，无序生长的脱分化的细胞在适当条件下重新进入有序生长和分化状态的过程。植物再生的理论基础是细胞的全能性。 6、外植体：特殊形态结构和生理功能的已分化细胞组成的。从活植物体上切下进行培养的那部分组织或器官。 7、植物组织培养：无菌条件下，在含有营养物质及植物生长物质的培养基中，对立体植物组织进行培养、并诱导使其长成完整止住的技术。 8植物细胞培养：是在离体条件下，将分离的植物细胞通过继代培养增值，获得大量细胞群体的一种技术。 9、继代培养：将愈伤组织重新转移到
7、成分相同的新鲜培养基上的过程称为继代，愈伤组织将在不同的培养基上分化形成小芽或根，进而形成小苗。 11、植物再生的理论基础：细胞全能性。 12、植物组织培养的再生途径有哪两种？ 器官发生途径：成熟细胞-愈伤组织-出根出芽-完整植株。 体细胞胚发生途径：成熟细胞-分生细胞-胚状体-完整植株。 13、激素在细胞分化中是如何调节器官分化的？植物激素控制器官形成。 生长素/细胞分裂素：高 ：有利于根和愈伤组织形成 ；适中：有利于根芽的分化；低 ：有利于芽的形成 14、总结植物组织培养的主要操作步骤(4步) 植物组织的实验条件 实验材料的清洗和消毒 培养基 灭菌 原代培养 继代培养 15、生长素：色氨酸
8、通过一系列中间产物形成的。 作用：主要用来刺激细胞分裂和诱导根的分化 常用生长素：吲哚乙酸、2、4二氯苯氧乙酸，萘乙酸、吲哚丁酸等。 16、细胞分裂素：大多是嘌呤族衍生物 作用：主要用于诱导芽的分化促进侧芽萌发生长、促进细胞分裂与扩大 主要细胞分裂素：激动素、6-苄基腺嘌呤和玉米素等。其中最常用的是6-苄基腺嘌呤。其中ZT活性最强，但昂贵，常用的是6-BA。 17、植物细胞几种大规模培养系统各有什么特点？ 悬浮细胞培养：在愈伤组织体液培养的基础上发展起来，是指将单个有力细胞或小细胞团在液体培养基中进行培养增值的技术。 特点：细胞可以不断增值，形成高密度的细胞群体，斌且适于大规模培养，可大量提供
9、较均匀的细胞，为深入细致地研究细胞的生长、分化创造了一个很好的实验方法和条件。 植物细胞固定化培养：把细胞固定在一种惰性基质上，如琼脂、藻酸盐、聚丙烯酰胺和纤维膜等，细胞不能运动，而营养液可以在细胞间流动，供应细胞营养的培养方法。 优点 细胞经过包埋后所到的剪切力损伤减小，维持了细胞的稳定性，适合脆弱的植物细胞的培养，同时也利于采用传统生物反应器大规模培养。 悬浮细胞培养体系中细胞密度比较高时会因粘度增加儿引起传质困难，固定化细胞培养系统中细胞密度远高于悬浮培养，但并不会改变培养液流体性质，利于传代。 大多数植物次级代谢产物合成在生长停止后才大量合成。采用固定化培养可以将细胞生长与产物合成分成
10、两个阶段 细胞生长较为缓慢，利于次级代谢产物的积累； 2 固定化增加了细胞与细胞间的接触，促进了细胞间信息传递，利于代谢产物的合成；固定化细胞可以反复使用，可以方便的进行产物的连续性收获，降低了成本。 缺点：固定化细胞培养要求代谢产物必须是分泌到细胞外。但次级代谢产物多是存在于细胞内的，为促进次级代谢产物的合成和分泌，需要借助表面活性剂或对细胞进行透性改造。 植物细胞次级代谢产物的积累不是连续的，这也是限制了固定化细胞方法的应用。 植物器官培养：包括毛状根培养、芽培养、体细胞胚培养。 根据不同的培养体系，不同的培养目的，确定不同类型的生物反应器，是植物大规模培养技术应用的关键。 18、种质资源
11、的三种保存方法： 常温限制生长保存：是指在常温培养条件下，通过在培养基中加入化学物质或采用一些物理方法，限制或延缓培养物生长，以达到保存种质的目的。如 添加生长抑制剂；提高培养基渗透压；降低培养瓶内氧分压；培养物干燥保存。 中低温调控生长保存：应用中低温调控外植体生长量，在离体培养中是较为常用的保存方法。一般采用19低温保存外植体，这种方法适于包寻中短期的种质材料。 超低温长期保存：在液氮，几乎所有的细胞代谢活动、生长过程都停止了，仅保存细胞的活力和形态发生的潜能。 第四章 植物的快速繁殖 1、什么是植物快繁技术？总结其主要步骤。 植物快速繁殖：是指利用组织培养技术，将优良植株的茎尖、腋芽、叶
12、片、鳞片等器官、组织和细胞进行离体培养，在短期内获得大量遗传性状一致的植株的技术。 主要步骤：无菌母体植株的植被 不定芽的增值 完整植株的形成 再生植株的驯化 再生植株的鉴定 移栽 2、利用微茎尖培养进行植物脱毒的原理是什么？ 带有病毒和其他病原微生物的植物，其病原体在植物体内的分布是不均匀的，越靠近生长点，病毒浓度越低。 3、哪些因素会影响微茎尖培养的脱毒效果？ 起始培养茎尖体的大小；外植体的生理状态；母体材料病毒侵染的程度。 4、微繁殖中芽的增值方式有哪些？ 侧芽途径：有的植物具有大量腋芽，于顶端优势效应，这些腋芽的生长在整体植株上被顶芽抑制。若将腋芽分离下来，给以适当的培养条件，即可形成
13、大量的不定芽，进而再生为植株。 器官发生途径：从器官外植体诱导不定芽。不定芽是指现存芽以外的任何器官、组织上通过器官发生重新形成的芽。 特点：繁殖系数高；遗传稳定性好；继代次数有限。 胚状体增值：增长率高，双极性免去生根环节，但胚状体休眠的诱导和解除还难以把握，其成苗率还不高。目前除一些特殊用途，这一途径还没有用于快繁技术。 5、不定芽：是指现存芽以外的任何器官、组织上通过器官发生重新形成的芽。不定芽可以外植体或经过从继代的愈伤组织、不定根、外植体、或愈伤组织产生的休眠器官。 6、植物常用的脱毒方法：微茎尖培养法、株心组织培养法、热处理法。 第五章 植物原生质体融合技术 1、为什么说原生质体培
14、养是现代生物技术的载体？ 去除细胞壁后裸露的细胞称之为原生质体。特点为：无细胞壁，可以方便的进行遗传操作、人工诱变、细胞器转移、细胞融合等操作。具有全能性，能再生细胞壁。是最简单的细胞形态，有许多优良的性质，在细胞工程方面有很多应用，可以说它是现在生物技术的载体。 2、细胞融合的原理、方法与关键环节？ 原理：细胞膜是磷脂双分子层和镶嵌、贯穿在其中及吸附在其表面的蛋白质组成的，磷脂双分子层疏水的尾部在3 内，亲水头部在外，具有一定流动性，蛋白质也是如此，即利用细胞膜具有流动性的原理。 方法：可以采用化学诱导剂，包括NaNO3、高pH的高浓度Ca2离子、聚乙二醇、溶菌酶、明胶、抗体等 物理法：电融
15、合诱导法、BLS流式细胞融合仪、电击法。 主要环节：亲本选择 两原生质体或细胞互相靠近，粘附 质膜融合形成细胞桥 胞质渗透 细胞核融合 融合细胞筛选 关键环节：细胞核的融合。(若没有发生细胞核的融合，仅发生了细胞质的融合，则可能嵌合细胞。含有多个核的异核细胞合并后形成的单核细胞称为合核细胞。细胞核的发生在有丝分裂过程中。但这种有丝分裂只有当两个核的DNA合成才能发生：两个核同时进行有丝分裂，形成一个纺锤体，全部染色体都排列在一个赤道板上，结果伴随着细胞分裂就形成了单核的子细胞，其细胞核中含有双亲细胞的染色体。) 3、细胞融合：是指使用人工方法使两个或两个以上的细胞合并形成一个细胞的技术。对于植
16、物体也叫“原生质体融合”。亲本细胞是体细胞，也叫“体细胞杂交”。于它不仅能产生同种细胞融合，也能产生种间细胞的融合，因此细胞融合技术在创造新细胞，培育新品种方面意义重大。 4、原生质体：去除细胞壁后裸露的细胞称之为原生质体。特点为：无细胞壁，可以方便的进行遗传操作、人工诱变、细胞器转移、细胞融合等操作。具有全能性，能再生细胞壁。 第六章 植物转基因技术 1、常见的基因转化技术有哪些？ 非生物学转化法：将裸露的DNA直接导入植物细胞的转化方法。这种裸露的DNA可以是全部或部分染色体，分离的DNA也可以是基因工程的质粒；直接转化的成功率以来于人们所采取的离体培养方法，包括受体细胞的制备，以及后续的
17、离体培养和筛选过程直至获得转基因植物 生物学的转化方法 基因枪法：微弹为2微米的钨粉或者金粉，用超声波使外源DNA液均匀的包裹钨粉微粒，手枪原理射击。 电穿孔转化法：用短时高脉冲电处理可导致细胞膜出现可恢复性孔隙，产生34纳米的渗透点，为外源DNA进入细胞提供通路。 PEG转化法：PEG转化法和PEG诱导原生质体融合方法相似，同样需要高钙、高pH条件从而将外源DNA插入原生质体并整合。 2、简述根瘤农杆菌进行基因转化的步骤及其原理。 原理：农杆菌是普遍存在于土壤中的革兰氏阴性菌，能在自然条件下趋化性的感染大多数的双子叶植物的受伤部位，并诱导产生冠瘿瘤。根瘤农杆菌中的细胞含有Ti质粒，其上有一段
18、T-DNA。农杆菌通过侵染植物的伤口进入细胞后，可将T-DNA插入到植物基因组中；T-DNA上的基因利用植物的酶系统进行那个转录和翻译，其表达产物可诱导肿瘤形成。人们将目的基因插入到经过人工改造的T-DNA区，借助农杆菌的感染实现外源基因向植物细胞的转移和整合，然后通过细胞和组织培养技术，再生出转基因植株。 根瘤农杆菌Ti质粒的基因结构主要分为T-DNA区、Vir区、Con区和Ori区4个区段。T-DNA区称为转移DNA区。能够转移整合入植物受体基因组，并不能在植物细胞中表达，从而导致冠瘿瘤发生。Vir区与T-DNA区相邻，多个毒性基因组成，其编码蛋白对T-DNA的转移和整合必不可少。该基因可
19、激活T-DNA的专一，使植物致瘤，故称毒性区。Con区段上存在与细菌结合转移有关的基因，调控Ti质粒在根癌农杆菌中的转移，故称为结合转移编码区。Ori区主要调控Ti质粒的自我复制，故称之为复制起始区。 步骤：对植物表面部位的识别和附着：植物伤口分泌的酚类小分子物质可以诱导Vir基因活化并表达 T-DNA进行复制和转移：Vir产物能诱导Ti质粒复制产生一新的单链T-DNA分子，并使其转移到植物细胞中。 T-DNA的整合：在Vir产物作用下，T-DNA转入细胞核，并整合到植物染色体上。 第七章 动物细胞培养 1、动物细胞体外生长有什么特点？ 体外生长的动物细胞一般具有细胞接触性抑制、密度抑制的特点
20、、贴附。 接触性抑制：是某些动物细胞体外培养的生长特性之一。是指于细胞相互接触而抑制细胞运动性的现象。于这个特性。正常细胞不会相互重叠，而呈单细胞生长。 4 密度抑制：细胞接触汇合成片后，只有营养充分，细胞仍能进行增值分裂。但是当细胞密度达到一定程度后，营养相对缺乏，代谢产物增多，发生密度抑制现象。 贴附：贴附并伸展是贴壁型细胞体外培养时基本生长特点。 2、动物细胞培养基的主要分类？ 天然培养基：来自动物细胞体液或利用组织分离提取的一类培养基，如血浆、血清、淋巴液、鸡胚浸出液等。优点：含有丰富的营养物质及各种细胞生长因子，激素类物质，渗透压、pH等也与体内环境相似。缺点：成分复杂、来源受限、制
21、作过程复杂、批次间生产差异大。 血清：纤维蛋白已被去除的的血浆。 合成培养基：优点：成分已知，便于对实验条件进行操作。缺点：无法取代一些未知成分。解决途径：合成培养基中添加小牛血清，彼此互补。常用合成培养基有：MEM DMEM F12 M199 RPM1640 无血清培养基：是不含血清的动物细胞培养基，基础培养基和添加组分组成，试图全部替代血清成分。基础培养基较为常用：DMEM、F12培养基。添加组分主要包括：细胞外基质、生长因子结合蛋白和转运蛋白、酶抑制剂等。 其他平衡溶液：平衡盐溶液、细胞消化液等 3、动物细胞原代培养：也称初代培养，即从体内取出组织接种培养到第一次传代阶段，一般持续14周
22、。特点：细胞呈活跃移动，可见细胞分裂，但不旺盛。组织和细胞刚刚离体，生物现状尚未发生很大变化，在一定程度上能反应体内的形态学特征。与体内原生组织在形态结构和功能上相似性大。 4、动物细胞传代培养：是指将原代培养的细胞继续转接培养的过程。细胞的体外大量增值以及细胞系的建立是通过传代培养实现的。 5、动物细胞培养的影响因素： 有毒物质或抑制因子产生：氨：来自培养基+代谢，积累影响细胞生长。乳酸：来自细胞内的糖酵解，抑制乳酸脱氢酶，一直糖酵解，能量产生减少，抑制细胞生长。甲基乙二醛：脂类，氨基酸的代谢产物，对细胞有潜在的损伤作用。CO2：毒性 营养成分的耗尽：如谷氨酰胺的耗竭是最常见的凋亡原因，而且
23、凋亡一旦发生，补加谷氨酰胺已不能逆转凋亡。另外，动物细胞在无血清、无蛋白培养基中进行培养时，细胞变得更为脆弱，更容易发生凋亡。 其他物理因素：渗透压、pH、温度、载体、搅拌等。 第八章 细胞融合与单克隆抗体 1、杂交瘤生产单克隆抗体的制备原理与技术流程？ 原理：将杂交瘤细胞与免疫的动物脾细胞融合得到既能够分泌抗体又能在体外长期繁殖的杂交瘤细胞，经克隆化培养得到可以分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞。这种技术称为杂交瘤技术。 技术流程： 动物免疫与免疫脾细胞悬液的制备：一般要经过初次免疫、第二次免疫、加强免疫三个过程，如果需要免疫脾细胞，一般取最后一次加强免疫3天以后的脾脏，制备成细胞悬液 骨髓瘤细胞的
24、获得与培养：骨髓细胞系应和免疫动物属于同一品系，这样杂交融合率高。通常采用鸟嘌呤磷酸核糖转移酶和胸腺嘧啶核苷酸激酶缺陷型的骨髓瘤细胞系。一般在准备融合细胞钱的两周就应开始附属骨髓瘤细胞。保证骨髓瘤细胞处于对数生长期。 细胞融合：取对数生长期的骨髓瘤细胞，离心，弃上清。用PEG作用下，融合杂交瘤细胞。 融合细胞的筛选：融合后的细胞类型：融合的脾细胞和瘤细胞、融合的脾细胞和脾细胞、融合的瘤细胞和瘤细胞、未融合的脾细胞、未融合的瘤细胞以及细胞的多聚体等。正常的脾细胞在培养基中存活57天，无需特别筛选，细胞的多聚体形式也容易死去。剩余：脾细胞+瘤细胞的融合细胞+未融合的瘤细胞+融合的瘤细胞，其中后两种
25、需要进行特别的筛选去除。 克隆化培养：将融合的细胞进行充分稀释，使分配到培养板的每一个孔中的细胞数在0至数个细胞之间。培养一段时间后去上清以ELISA法选出抗体高分泌性的抗体。找到针对目标抗原的抗体，增殖后冻存、体外培养或动物腹腔5 接种培养生产抗体。 分泌抗体的融合细胞的筛选：酶联免疫吸附法：主要是基于抗原或抗体能够吸附至固定相载体的表面并保持其免疫活性和酶催化活性的基本原理。 单克隆抗体的大来那个生产：实体瘤法、腹水制备法、生物反应器培养杂交瘤细胞大规模生产单抗。 2、HAT培养基的选择原理： 原理：HAT培养原理是根据细胞次黄嘌呤核苷酸和嘧啶核苷酸合成DNA途径而设计的。正常细胞合成DN
26、A途径有主要途径和补救途径。主要途径中，叶酸及其衍生物是必不可少的媒介，参与嘌呤环的和嘧啶甲基的合成。氨基蝶呤抑制二氢叶酸还原酶活性，从而阻断正常细胞中DNA合成主要途径中二氢叶酸到四氢叶酸合成。因此，只有利用次黄嘌呤和胸腺嘧啶脱氧核苷酸等前提的野生型细胞才能从补救途径合成DNA而不会死亡。这些野生型细胞内具有次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶和胸腺嘧啶核苷酸激酶，如果缺乏其中一种，补救途径就不能发挥作用。 主要途径：糖、氨基酸-核苷酸-DNA 可以被氨基蝶呤阻断补救途径：核苷酸前体-核苷酸-DNA 氨基蝶呤可阻断细胞正常途径合成DNA，因此HAT培养基上的细胞不能采用此合成途径。 融合所以的瘤细
27、胞一般是鸟嘌呤磷酸核糖转移酶和胸腺嘧啶核苷酸激酶缺陷型，因此也不能采用补救途径合成DNA。 瘤细胞的命运命运，因不能正常合成DNA而死亡。 融合细胞：具有亲代双方的遗传性能，具有来自于淋巴细胞内的鸟嘌呤磷酸核糖转移酶和胸腺嘧啶核苷酸激酶 因此可利用培养基中的嘌呤和嘧啶采用补救途径合成DNA,因此可在HAT培养基中存活和繁殖。 3、单克隆抗体：动物脾脏上有上百万个淋巴细胞，一个细胞就是一个克隆，它针对抗原上的一个抗原决定簇产生的抗体是单克隆抗体。 4、多克隆抗体：一种抗原通常具有多个不同的抗原决定簇，因此能刺激多个淋巴细胞产生相应的单克隆抗体，因此血清中的抗体是针对不同抗原决定簇的单克隆抗体混合
28、物，称为单克隆抗体。 第九章 核移植技术与克隆动物 1、细胞核移植技术：是一种利用显微注射操作技术将一种动物的细胞核移植入同种或异种动物的去核成熟卵细胞内，或者将两个细胞的细胞核进行交换，从而可能创造出无性杂交生物新品种的一项技术。 2、动物克隆：不经过有性生殖，而是通过核移植生产遗传结构与细胞核供体相同动物个体的技术。 3、核移植技术的主要技术流程： 供体细胞的准备；受体细胞的去核；细胞核移植、激活；重组胚的培养与移植；核移植后代的鉴定。 第十章 干细胞 1、干细胞：一类具有自我更新和分化潜能的细胞。 2、干细胞的分类：干细胞可以分为单能干细胞、多能干细胞与全能干细胞。全能干细胞从理论上讲可
29、以分化生所以组织与器官。 单能干细胞：是只能分化为单一类型细胞的干细胞，例如表皮的基质细胞，只能分化产生角化表皮细胞。多能干细胞：是能够形成来哪中或两种以上类型的干细胞。例如：骨髓造血干细胞全能干细胞：是具有无限分化潜能的干细胞。如哦诶太干细胞。 第十一章 组织工程 1、组织工程：利用生命科学理论、医学、工程学原理与技术，单独或组合地利用细胞、生物材料、细胞因子实现组织修复或再生的一门技术。20世纪80年代提出概念。 2、组织工程三要素：种子细胞、支架材料、生长因子。 6 接种培养生产抗体。 分泌抗体的融合细胞的筛选：酶联免疫吸附法：主要是基于抗原或抗体能够吸附至固定相载体的表面并保持其免疫活
30、性和酶催化活性的基本原理。 单克隆抗体的大来那个生产：实体瘤法、腹水制备法、生物反应器培养杂交瘤细胞大规模生产单抗。 2、HAT培养基的选择原理： 原理：HAT培养原理是根据细胞次黄嘌呤核苷酸和嘧啶核苷酸合成DNA途径而设计的。正常细胞合成DNA途径有主要途径和补救途径。主要途径中，叶酸及其衍生物是必不可少的媒介，参与嘌呤环的和嘧啶甲基的合成。氨基蝶呤抑制二氢叶酸还原酶活性，从而阻断正常细胞中DNA合成主要途径中二氢叶酸到四氢叶酸合成。因此，只有利用次黄嘌呤和胸腺嘧啶脱氧核苷酸等前提的野生型细胞才能从补救途径合成DNA而不会死亡。这些野生型细胞内具有次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶和胸腺嘧啶核苷
31、酸激酶，如果缺乏其中一种，补救途径就不能发挥作用。 主要途径：糖、氨基酸-核苷酸-DNA 可以被氨基蝶呤阻断补救途径：核苷酸前体-核苷酸-DNA 氨基蝶呤可阻断细胞正常途径合成DNA，因此HAT培养基上的细胞不能采用此合成途径。 融合所以的瘤细胞一般是鸟嘌呤磷酸核糖转移酶和胸腺嘧啶核苷酸激酶缺陷型，因此也不能采用补救途径合成DNA。 瘤细胞的命运命运，因不能正常合成DNA而死亡。 融合细胞：具有亲代双方的遗传性能，具有来自于淋巴细胞内的鸟嘌呤磷酸核糖转移酶和胸腺嘧啶核苷酸激酶 因此可利用培养基中的嘌呤和嘧啶采用补救途径合成DNA,因此可在HAT培养基中存活和繁殖。 3、单克隆抗体：动物脾脏上有上百万个淋巴细胞，一个细胞就是一个克隆，它针对抗原上的一个抗原决定簇产生的抗体是单克隆抗体。 4、多克隆抗体
