1、BOD5实验作业指导书作业指导书页码：第 1页，共16页文件编号：*-03-022版次：2016版，第0次修订文件名称：水质 五日生化需氧量（BOD5）的测定发布日期：2016 年1 月1 日水质五日生化需氧量（BOD5）的测定 1、方法依据 水质五日生化需氧量（BOD5）的测定稀释与接种法，HJ505-20092、适用范围本标准规定了测定水中五日生化需氧量（BOD5）的稀释与接种的方法。本标准适用于地表水、工业废水和生活污水中五日生化需氧量（BOD5）的测定。方法的检出限为0.5 mg/L，方法的测定下限为2 mg/L，非稀释法和非稀释接种法的测定上限为6 mg/L，稀释与稀释接种法的测定上
2、限为6 000 mg/L。3、测定原理生化需氧量是指在规定的条件下，微生物分解水中的某些可氧化的物质，特别是分解有机物的生物化学过程消耗的溶解氧。通常情况下是指水样充满完全密闭的溶解氧瓶中，在（201）的暗处培养5d4 h或（2+5）d4 h先在04的暗处培养2 d，接着在（201）的暗处培养5 d，即培养（2+5）d，分别测定培养前后水样中溶解氧的质量浓度，由培养前后溶解氧的质量浓度之差，计算每升样品消耗的溶解氧量，以BOD5形式作业指导书页码：第 2页，共16页文件编号：*-03-022版次：2016版，第0次修订文件名称：水质 五日生化需氧量（BOD5）的测定发布日期：2016 年1 月
3、1 日表示。若样品中的有机物含量较多，BOD5的质量浓度大于6 mg/L，样品需适当稀释后测定；对不含或含微生物少的工业废水，如酸性废水、碱性废水、高温废水、冷冻保存的废水或经过氯化处理等的废水，在测定BOD5时应进行接种，以引进能分解废水中有机物的微生物。当废水中存在难以被一般生活污水中的微生物以正常的速度降解的有机物或含有剧毒物质时，应将驯化后的微生物引入水样中进行接种。4、试剂本标准所用试剂除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯化学试剂。 4.1 水：实验用水为符合GB/T 6682规定的3级蒸馏水，且水中铜离子的质量浓度不大于0.01 mg/L，不含有氯或氯胺等物质。4.2 接
4、种液：可购买接种微生物用的接种物质，接种液的配制和使用按说明书的要求操作。也可按以下方法获得接种液。4.2.1 未受工业废水污染的生活污水：化学需氧量不大于300 mg/L，总有机碳不大于100 mg/L。4.2.2 含有城镇污水的河水或湖水。4.2.3 污水处理厂的出水。 作业指导书页码：第3页，共16页文件编号：*-03-022版次：2016版，第0次修订文件名称：水质 五日生化需氧量（BOD5）的测定发布日期：2016 年1 月1 日 4.2.4 分析含有难降解物质的工业废水时，在其排污口下游适当处取水样作为废水的驯化接种液。也可取中和或经适当稀释后的废水进行连续曝气，每天加入少量该种废
5、水，同时加入少量生活污水，使适 应该种废水的微生物大量繁殖。当水中出现大量的絮状物时，表明微生物已繁殖，可用作接种液。一般驯化过程需38 d。4.3 盐溶液4.3.1 磷酸盐缓冲溶液：将8.5 g磷酸二氢钾（KH2PO4）、21.8 g磷酸氢二钾（K2HPO4）、33.4 g七水合磷酸氢二钠（Na2HPO47H2O）和1.7 g氯化铵（NH4Cl）溶于水中，稀释至1 000 ml，此溶液在04可稳定保存6个月。此溶液的pH值为7.2。4.3.2 硫酸镁溶液， (MgSO4)= 11.0 g/L：将22.5 g七水合硫酸镁（MgSO47H2O）溶于水中，稀释至1 000 ml，此溶液在04可稳定
6、保存6个月，若发现任何沉淀或微生物生长应弃去。4.3.3 氯化钙溶液， (CaCl2)= 27.6 g/L：将27.6 g无水氯化钙（CaCl2）溶于水中，稀释至1 000 ml，此溶液在04可稳定保存6个月，若发现任何沉淀或微生物生长应弃去。4.3.4 氯化铁溶液， (FeCl3)= 0.15 g/L：将0.25 g六水合氯化铁作业指导书页码：第 4页，共16页文件编号：*-03-022版次：2016版，第0次修订文件名称：水质 五日生化需氧量（BOD5）的测定发布日期：2016 年1 月1 日（FeCl36H2O）溶于水中，稀释至1 000 ml，此溶液在04可稳定保存6个月，若发现任何沉
7、淀或微生物生长应弃去。4.4 稀释水：在520 L的玻璃瓶中加入一定量的水，控制水温在（201），用曝气装置（5.9）至少曝气1 h，使稀释水中的溶解氧达到8 mg/L以上。使用前每升水中加入上述四种盐溶液（4.3）各1.0 ml，混匀，20保存。在曝气的过程中防止污染，特别是防止带入有机物、金属、氧化物或还原物。 稀释水中氧的质量浓度不能过饱和，使用前需开口放置1 h，且应在24 h内使用。剩余的稀释水应弃去。4.5 接种稀释水：根据接种液的来源不同，每升稀释水（4.4）中加入适量接种液（4.2）：城市生活污水和污水处理厂出水加110 ml，河水或湖水加10100 ml，将接种稀释水存放在（
8、201）的环境中，当天配制当天使用。接种的稀释水pH值为7.2，BOD5应小于1.5 mg/L。4.6 盐酸溶液，c(HCl)=0.5 mol/L：将40 ml浓盐酸（HCl）溶于水中，稀释至1 000 ml。4.7 氢氧化钠溶液，c(NaOH)=0.5 mol/L：将20 g氢氧化钠溶于水中，稀释至1 000 ml。4.8 亚硫酸钠溶液，c(Na2SO3)=0.025 mol/L：将1.575 g亚硫酸钠作业指导书页码：第 5页，共16页文件编号：*-03-022版次：2016版，第0次修订文件名称：水质 五日生化需氧量（BOD5）的测定发布日期：2016 年1 月1 日（Na2SO3）溶于
9、水中，稀释至1 000 ml。此溶液不稳定，需现用现配。 4.9 葡萄糖-谷氨酸标准溶液：将葡萄糖（C6H12O6，优级纯）和谷氨酸（HOOC-CH2-CH2-CHNH2-COOH，优级纯）在130干燥1 h，各称取150 mg溶于水中，在1 000 ml容量瓶中稀释至标线。此溶液的BOD5为（21020）mg/L，现用现配。该溶液也可少量冷冻保存，融化后立刻使用。4.10 丙烯基硫脲硝化抑制剂， (C4H8N2S)=1.0 g/L：溶解0.20 g丙烯基硫脲（C4H8N2S）于200 ml水中混合，4保存，此溶液可稳定保存14 d。4.11 乙酸溶液，1+1。4.12 碘化钾溶液， (KI)
10、=100 g/L：将10 g碘化钾（KI）溶于水中，稀释至100 ml。 4.13 淀粉溶液， =5 g/L：将0.50 g淀粉溶于水中，稀释至100 ml。5、仪器和设备 本标准除非另有说明，分析时均使用符合国家A级标准的玻璃量器。本标准使用的玻璃仪器须清洁、无毒性和可生化降解的物质。5.1 滤膜：孔径为1.6 m。5.2 溶解氧瓶：带水封装置，容积250300 ml。5.3 稀释容器：1 0002 000 ml的量筒或容量瓶。5.4 虹吸管：供分取水样或添加稀释水。作业指导书页码：第6页，共16页文件编号：*-03-022版次：2016版，第0次修订文件名称：水质 五日生化需氧量（BOD5
11、）的测定发布日期：2016 年1 月1 日5.5 溶解氧测定仪。5.6 冷藏箱：04。 5.7 冰箱：有冷冻和冷藏功能5.8 带风扇的恒温培养箱：（201）。 5.9 曝气装置：多通道空气泵或其他曝气装置；曝气可能带来有机物、氧化剂和金属，导致空气污染，如有污染，空气应过滤清洗。6、样品 6.1 采集与保存样品采集按照HJ/T 91的相关规定执行。采集的样品应充满并密封于棕色玻璃瓶中，样品量不小于1 000 ml，在04的暗处运输和保存，并于24 h内尽快分析。24 h内不能分析，可冷冻保存（冷冻保存时避免样品瓶破裂），冷冻样品分析前需解冻、均质化和接种。 6.2 样品的前处理6.2.1 pH
12、值调节若样品或稀释后样品pH值不在68范围内，应用盐酸溶液或氢氧化钠溶液调节其pH值至68。6.2.2 余氯和结合氯的去除作业指导书页码：第 7页，共16页文件编号：*-03-022版次：2016版，第0次修订文件名称：水质 五日生化需氧量（BOD5）的测定发布日期：2016 年1 月1 日若样品中含有少量余氯，一般在采样后放置12 h，游离氯即可消失。对在短时间内不能消失的余氯，可加入适量亚硫酸钠溶液去除样品中存在的余氯和结合氯，加入的亚硫酸钠溶液的量由下述方法确定。取已中和好的水样100 ml，加入乙酸溶液10 ml、碘化钾溶液1 ml，混匀，暗处静置5 min。用亚硫酸钠溶液滴定析出的碘
13、至淡黄色，加入1 ml淀粉溶液呈蓝色。再继续滴定至蓝色刚刚褪去，即为终点，记录所用亚硫酸钠溶液体积，由亚硫酸钠溶液消耗的体积，计算出水样中应加亚硫酸钠溶液的体积。6.2.3 样品均质化含有大量颗粒物、需要较大稀释倍数的样品或经冷冻保存的样品，测定前均需将样品搅拌均匀。 6.2.4 样品中有藻类若样品中有大量藻类存在，BOD5的测定结果会偏高。当分析结果精度要求较高时，测定前应用滤孔为1.6 m的滤膜过滤，检测报告中注明滤膜滤孔的大小。6.2.5 含盐量低的样品若样品含盐量低，非稀释样品的电导率小于125 S/cm时，需加入适量相同体积的四种盐溶液，使样品的电导率大于125 S/cm。每升样品中
14、至少作业指导书页码：第 8页，共16页文件编号：*-03-022版次：2016版，第0次修订文件名称：水质 五日生化需氧量（BOD5）的测定发布日期：2016 年1 月1 日需加入各种盐的体积V按式（1）计算： (1)式中：V需加入各种盐的体积，ml； K样品需要提高的电导率值，S/cm。7、分析步骤 7.1 非稀释法非稀释法分为两种情况：非稀释法和非稀释接种法。 如样品中的有机物含量较少，BOD5的质量浓度不大于6 mg/L，且样品中有足够的微生物，用非稀释法测定。若样品中的有机物含量较少，BOD5的质量浓度不大于6 mg/L，但样品中无足够的微生物，如酸性废水、碱性废水、高温废水、冷冻保存
15、的废水或经过氯化处理等的废水，采用非稀释接种法测定。 7.1.1 试样的准备 7.1.1.1 待测试样测定前待测试样的温度达到（202），若样品中溶解氧浓度低，需要用曝气装置曝气15 min，充分振摇赶走样品中残留的空气泡；若样品中氧过饱和，将容器2/3体积充满样品，用力振荡赶出过饱和氧，然后根据试样中微生物含量情况确定测定方法。非稀释法可直接取样测定；非稀释接种作业指导书页码：第 9页，共16页文件编号：*-03-022版次：2016版，第0次修订文件名称：水质 五日生化需氧量（BOD5）的测定发布日期：2016 年1 月1 日法，每升试样中加入适量的接种液，待测定。若试样中含有硝化细菌，有
16、可能发生硝化反应，需在每升试样中加入2 ml丙烯基硫脲硝化抑制剂。 7.1.1.2 空白试样非稀释接种法，每升稀释水中加入与试样中相同量的接种液（4.2）作为空白试样，需要时每升试样中加入2 ml丙烯基硫脲硝化抑制剂（4.10） 7.1.2 试样的测定 7.1.2.1 碘量法测定试样中的溶解氧将试样充满两个溶解氧瓶中，使试样少量溢出，防止试样中的溶解氧质量浓度改变，使瓶中存在的气泡靠瓶壁排出。将一瓶盖上瓶盖，加上水封，在瓶盖外罩上一个密封罩，防止培养期间水封水蒸发干，在恒温培养箱中培养5d4 h或（2+5）d4 h后测定试样中溶解氧的质量浓度。另一瓶15 min后测定试样在培养前溶解氧的质量浓
17、度。溶解氧的测定按GB/T 7489进行操作。 7.1.2.2 电化学探头法测定试样中的溶解氧将试样充满一个溶解氧瓶中，使试样少量溢出，防止试样中的溶解氧质量浓度改变，使瓶中存在的气泡靠瓶壁排出。测定培养前试样中的溶解氧的质量浓度。盖上瓶盖，防止样品中残留气泡，加上水封，在瓶盖外罩上一个密封罩，作业指导书页码：第 10页，共16页文件编号：*-03-022版次：2016版，第0次修订文件名称：水质 五日生化需氧量（BOD5）的测定发布日期：2016 年1 月1 日防止培养期间水封水蒸发干。将试样瓶放入恒温培养箱中培养5 d4 h或（2+5）d4 h。测定培养后试样中溶解氧的质量浓度。溶解氧的测
18、定按GB/T 11913进行操作。空白试样的测定方法同7.1.2.1或7.1.2.2。 7.2 稀释与接种法稀释与接种法分为两种情况：稀释法和稀释接种法。 若试样中的有机物含量较多，BOD5的质量浓度大于6 mg/L，且样品中有足够的微生物，采用稀释法测定；若试样中的有机物含量较多，BOD5的质量浓度大于6 mg/L，但试样中无足够的微生物，采用稀释接种法测定。 7.2.1 试样的准备 7.2.1.1 待测试样待测试样的温度达到（202），若试样中溶解氧浓度低，需要用曝气装置曝气15 min，充分振摇赶走样品中残留的气泡；若样品中氧过饱和，将容器的2/3体积充满样品，用力振荡赶出过饱和氧，然后
19、根据试样中微生物含量情况确定测定方法。稀释法测定，稀释倍数按表1和表2方法确定，然后用稀释水稀释。稀释接种法测定，用接种稀释水稀释样品。若样品中含有硝化细菌，有可能发生硝化反应，需在每升试样培养液中加入2 ml 丙烯基硫脲硝化抑制剂。作业指导书页码：第 11页，共16页文件编号：*-03-022版次：2016版，第0次修订文件名称：水质 五日生化需氧量（BOD5）的测定发布日期：2016 年1 月1 日稀释倍数的确定：样品稀释的程度应使消耗的溶解氧质量浓度不小于2 mg/L，培养后样品中剩余溶解氧质量浓度不小于2 mg/L，且试样中剩余的溶解氧的质量浓度为开始浓度的1/32/3为最佳。稀释倍数
20、可根据样品的总有机碳（TOC）、高锰酸盐指数（IMn）或化学需氧量（CODCr）的测定值，按照表1列出的BOD5与总有机碳（TOC）、高锰酸盐指数（IMn）或化学需氧量（CODCr）的比值R估计BOD5的期望值（R与样品的类型有关），再根据表2确定稀释因子。当不能准确地选择稀释倍数时，一个样品做23个不同的稀释倍数。表1 典型的比值R 水样的类型总有机碳R（BOD5/TOC）高锰酸盐指数R（BOD5/IMn）化学需氧量R（BOD5/CODCr）未处理的废水1.22.81.21.50.350.65生化处理的废水0.31.00.51.20.200.35由表1中选择适当的R值，按式（2）计算BOD5
21、的期望值： (2)式中： 五日生化需氧量浓度的期望值，mg/L； 作业指导书页码：第 12页，共16页文件编号：*-03-022版次：2016版，第0次修订文件名称：水质 五日生化需氧量（BOD5）的测定发布日期：2016 年1 月1 日 Y总有机碳（TOC）、高锰酸盐指数（IMn）或化学需氧量（CODCr）的值，mg/L。由估算出的BOD5的期望值，按表2确定样品的稀释倍数。表2 BOD5测定的稀释倍数BOD5的期望值/（mg/L）稀释倍数水样类型6122河水，生物净化的城市污水10305河水，生物净化的城市污水206010生物净化的城市污水4012020澄清的城市污水或轻度污染的工业废水1
22、0030050轻度污染的工业废水或原城市污水200600100轻度污染的工业废水或原城市污水4001 200200重度污染的工业废水或原城市污水1 0003 000500重度污染的工业废水2 0006 0001 000重度污染的工业废水按照确定的稀释倍数，将一定体积的试样或处理后的试样用虹吸管加入已加部分稀释水或接种稀释水的稀释容器中，加稀释水或接种稀释水至刻作业指导书页码：第 13页，共16页文件编号：*-03-022版次：2016版，第0次修订文件名称：水质 五日生化需氧量（BOD5）的测定发布日期：2016 年1 月1 日度，轻轻混合避免残留气泡，待测定。若稀释倍数超过100倍，可进行两
23、步或多步稀释。若试样中有微生物毒性物质，应配制几个不同稀释倍数的试样，选择与稀释倍数无关的结果，并取其平均值。试样测定结果与稀释倍数的关系确定如下： 当分析结果精度要求较高或存在微生物毒性物质时，一个试样要做两个以上不同的稀释倍数，每个试样每个稀释倍数做平行双样同时进行培养。测定培养过程中每瓶试样氧的消耗量，并画出氧消耗量对每一稀释倍数试样中原样品的体积曲线。若此曲线呈线性，则此试样中不含有任何抑制微生物的物质，即样品的测定结果与稀释倍数无关；若曲线仅在低浓度范围内呈线性，取线性范围内稀释比的试样测定结果计算平均BOD5值。 7.2.1.2 空白试样稀释法测定，空白试样为稀释水，需要时每升稀释
24、水中加入2 ml丙烯基硫脲硝化抑制剂。稀释接种法测定，空白试样为接种稀释水，必要时每升接种稀释水中加入2 ml丙烯基硫脲硝化抑制剂。 7.2.2 试样的测定作业指导书页码：第 14页，共16页文件编号：*-03-022版次：2016版，第0次修订文件名称：水质 五日生化需氧量（BOD5）的测定发布日期：2016 年1 月1 日试样和空白试样的测定方法同7.1.2.1或7.1.2.2。 8、结果计算 8.1 非稀释法非稀释法按式（3）计算样品BOD5的测定结果： （3）式中： 五日生化需氧量质量浓度，mg/L； 1水样在培养前的溶解氧质量浓度，mg/L； 2水样在培养后的溶解氧质量浓度，mg/L
25、。 8.2 非稀释接种法 非稀释接种法按式（4）计算样品BOD5的测定结果： （4）式中： 五日生化需氧量质量浓度，mg/L； 1接种稀释水样在培养前的溶解氧质量浓度，mg/L； 2接种稀释水样在培养后的溶解氧质量浓度，mg/L； 3空白样在培养前的溶解氧质量浓度，mg/L； 4空白样在培养后的溶解氧质量浓度，mg/L； f1接种稀释水或稀释水在培养液中所占的比例； 作业指导书页码：第 15页，共16页文件编号：*-03-022版次：2016版，第0次修订文件名称：水质 五日生化需氧量（BOD5）的测定发布日期：2016 年1 月1 日 f2原样品在培养液中所占的比例。BOD5测定结果以氧的质
26、量浓度（mg/L）报出。对稀释与接种法，如果有几个稀释倍数的结果满足要求，结果取这些稀释倍数结果的平均值。结果小于100 mg/L，保留一位小数；1001 000 mg/L，取整数位；大于1 000 mg/L以科学计数法报出。结果报告中应注明：样品是否经过过滤、冷冻或均质化处理。9 、质量保证和质量控制 9.1 空白试样每一批样品做两个分析空白试样，稀释法空白试样的测定结果不能超过0.5 mg/L，非稀释接种法和稀释接种法空白试样的测定结果不能超过1.5 mg/L，否则应检查可能的污染来源。 9.2 接种液、稀释水质量的检查每一批样品要求做一个标准样品，样品的配制方法如下：取20 ml葡萄糖-
27、谷氨酸标准溶液于稀释容器中，用接种稀释水稀释至1 000 ml，测定BOD5，结果应在180230 mg/L范围内，否则应检查接种液、稀释水的质量。 9.3 平行样品每一批样品至少做一组平行样，计算相对百分偏差RP。当BOD5小于3 mg/L作业指导书页码：第 16页，共16页文件编号：*-03-022版次：2016版，第0次修订文件名称：水质 五日生化需氧量（BOD5）的测定发布日期：2016 年1 月1 日时，RP值应15%；当BOD5为3100 mg/L时，RP值应20%；当BOD5大于100 mg/L时，RP值应25%。计算公式如下： （6）式中：RP相对百分偏差，%； 1第一个样品BOD5 的质量浓度，mg/L； 2第二个样品BOD5 的质量浓度，mg/L。
