1、冠亚水分检测仪 http:/国标国标 GB4789.2GB4789.220162016 食品微生物菌落总数的测定食品微生物菌落总数的测定中华人民共和国国家标准 GB4789.22016，食品安全国家标准、食品微生物学检验菌落总数测定，2016-12-23 发布 2017-06-23 实施。中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会、国家食品药品监督管理总局发布前言本标准代替 GB4789.22010食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定。1 1 范围范围本标准规定了食品中菌落总数(Aerobicplatecount)的测定方法。本标准适用于食品中菌落总数的测定。2 2 术语和定义术语和定义菌
2、落总数 aerobicplatecount食品检样经过处理,在一定条件下(如培养基、培养温度和培养时间等)培养后,所得每g(mL)检样中形成的微生物菌落总数。3 3 设备和材料设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下:3.1 恒温培养箱:361,301。3.2 冰箱:25。3.3 恒温水浴箱:461。3.4 天平:感量为 0.1g。3.5 均质器。3.6 振荡器。3.7 无菌吸管:1mL(具 0.01mL 刻度)、10mL(具 0.1mL 刻度)或微量移液器及吸头。冠亚水分检测仪 http:/3.8 无菌锥形瓶:容量 250mL、500mL。3.9 无菌培养皿:直径 9
3、0mm。3.10pH 计或 pH 比色管或精密 pH 试纸。3.11 放大镜或/和菌落计数器。4 4 培养基和试剂培养基和试剂4.1 平板计数琼脂培养基:见 A.1。4.2 磷酸盐缓冲液:见 A.2。4.3 无菌生理盐水:见 A.3。5 检验程序菌落总数的检验程序见图 1。冠亚水分检测仪 http:/6 6 操作步骤操作步骤6.16.1 样品的稀释样品的稀释6.1.1 固体和半固体样品:称取 25g 样品置盛有 225mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内,8000r/min10000r/min 均质 1min2min,或放入盛有 225mL 稀释液的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打 1m
4、in2min,制成 110 的样品匀液。6.1.2 液体样品:以无菌吸管吸取 25mL 样品置盛有 225mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中,充分混匀,制成 110 的样品匀液。6.1.3 用 1mL 无菌吸管或微量移液器吸取 1 10 样品匀液 1mL,沿管壁缓慢注于盛有 9mL 稀释液的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面),振摇试管或换用 1 支无菌吸管反复吹打使其混合均匀,制成 1100 的样品匀液。6.1.4 按 6.1.3 操作,制备 10 倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次,换用 1 次 1mL 无菌吸管或吸头。6.1.5根据对样
5、品污染状况的估计,选择2个3个适宜稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液),在进行 10 倍递增稀释时,吸取 1mL 样品匀液于无菌平皿内,每个稀释度做两个平皿。同时,分别吸取 1mL 空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。6.1.6 及时将 15mL20mL 冷却至 46的平板计数琼脂培养基(可放置于 461恒温水浴箱中保温)倾注平皿,并转动平皿使其混合均匀。6.26.2 培养培养6.2.1 待琼脂凝固后,将平板翻转,361 培养 48h2h。水产品 301培养 72h3h。6.2.2 如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时,可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基(约 4mL)
6、,凝固后翻转平板,按 6.2.1 条件进行培养。6.36.3 菌落计数菌落计数6.3.1 可用肉眼观察,必要时用放大镜或菌落计数器,记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位(colony-formingunits,CFU)表示。6.3.2 选取菌落数在 30CFU300CFU 之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于 30CFU的平板记录具体菌落数,大于 300CFU 的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。6.3.3 其中一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数;若片状菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分
7、布又很均匀,即可计算半个平板后乘以 2,代表一个平板菌落数。6.3.4 当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时,则将每条单链作为一个菌落计数。7 7 结果与报告结果与报告7.1 菌落总数的计算方法7.1.1 若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内,计算两个平板菌落数的平均值,再将平均值乘以相应稀释倍数,作为每 g(mL)样品中菌落总数结果。7.1.2 若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时,按式(1)计算:冠亚水分检测仪 http:/上述数据按 7.2.2 数字修约后,表示为 25000 或 2.5104。7.1.3 若所有稀释度的平板上菌落数均大于 300CFU,则对稀释
8、度最高的平板进行计数,其他平板可记录为多不可计,结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。7.1.4 若所有稀释度的平板菌落数均小于 30CFU,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。7.1.5 若所有稀释度(包括液体样品原液)平板均无菌落生长,则以小于 1 乘以最低稀释倍数计算。7.1.6 若所有稀释度的平板菌落数均不在 30CFU300CFU 之间,其中一部分小于 30CFU 或大于300CFU 时,则以最接近 30CFU 或 300CFU 的平均菌落数乘以稀释倍数计算。7.27.2 菌落总数的报告菌落总数的报告7.2.1 菌落数小于 100CFU 时,按“四舍五入”原则修约,以整数报
9、告。7.2.2 菌落数大于或等于 100CFU 时,第 3 位数字采用“四舍五入”原则修约后,取前 2 位数字,后面用 0 代替位数;也可用 10 的指数形式来表示,按“四舍五入”原则修约后,采用两位有效数字。7.2.3 若所有平板上为蔓延菌落而无法计数,则报告菌落蔓延。7.2.4 若空白对照上有菌落生长,则此次检测结果无效。7.2.5 称重取样以 CFU/g 为单位报告,体积取样以 CFU/mL 为单位报告。附录附录 A A培养基和试剂A.1 平板计数琼脂(platecountagar,PCA)培养基A.1.1 成分胰蛋白胨 5.0g酵母浸膏 2.5g葡萄糖 1.0g琼脂 15.0g蒸馏水
10、1000mLA.1.2 制法将上述成分加于蒸馏水中,煮沸溶解,调节 pH 至 7.00.2。分装试管或锥形瓶,121高压灭冠亚水分检测仪 http:/菌15min。A.2 磷酸盐缓冲液A.2.1 成分磷酸二氢钾(KH2PO4)34.0g蒸馏水 500mLA.2.2 制法贮存液:称取 34.0g 的磷酸二氢钾溶于 500mL 蒸馏水中,用大约 175mL 的 1mol/L 氢氧化钠溶液调节 pH 至 7.2,用蒸馏水稀释至 1000mL 后贮存于冰箱。稀释液:取贮存液 1.25mL,用蒸馏水稀释至 1000mL,分装于适宜容器中,121高压灭菌15min。A.3 无菌生理盐水A.3.1 成分氯化钠 8.5g蒸馏水 1000mLA.3.2 制法称取 8.5g 氯化钠溶于 1000mL 蒸馏水中,121高压灭菌 15min。附录附录 B B食品水分测定仪厂商：深圳冠亚水分仪科技有限公司地址：深圳市南山区科技园科技中一路创业印章大厦电话：0755-26544100/200/300
