1、复 苏州大学生化问答题题库生物化学1 简述酶的“诱导契合假说”。酶在发挥其催化作用之前，必须先与底物密切结合。这种结合不是锁与钥匙式的机械关系，而是在酶与底物相互接近时，其结构相互诱导、相互变形和相互适应，这一过程称为没底物结合的诱导契合假说。酶的构象改变有利于与底物结合；底物也在酶的诱导下发生变形，处于不稳定状态，易受酶的催化攻击。这种不稳定状态称为过渡态。过渡态的底物与酶的活性中心在结构上最相吻合，从而降低反应的活化能。2 受试大鼠注射DNP（二硝基苯酚）可能引起什么现象？其机理何在？解偶联剂大部分是脂溶性物质，最早被发现的是2，4-二硝基苯酚（DNP）。给受试动物注射DNP后，产生的主要
2、现象是体温升高、氧耗增加、P/O比值下降、ATP的合成减少。其机理在于，DNP虽对呼吸链电子传递无抑制作用，但可使线粒体内膜对H+的通透性升高，影响了ADP+PiATP的进行，使产能过程与储能过程脱离，线粒体对氧的需求增加，呼吸链的氧化作用加强，但不能偶联ATP的生成，能量以热能形式释放。3 复制中为什么会出现领头链和随从链？DNA复制是半不连续的，顺着解链方向生成的子链，复制是连续进行的，这股链称为领头链。另一股链因为复制的方向与解链方向相反，不能顺着解链方向连续延长，这股不连续复制的链称为随从链。原因有.链延长特点只能从 5 .同一复制叉只有一个解链方向。DNA单链走向是相反的。因此在沿
3、5方向上解开的母链上，子链就沿 5 方向延长，另一股母链 5 解开，子链不可能沿 5 。复制的方向与解链方向相反而出现随从链。4 简述乳糖操纵子的结构及其调节机制。乳糖操纵子含Z、Y、及A三个结构基因，编码降解乳糖的酶，此外还有一个操纵序列O、一个启动序列P和一个调节基因I，在P序列上游还有一个CAP结合位点。由P序列、O序列和CAP结合位点共同构成lac操纵子的调控区，三个编码基因由同一个调控区调节。乳糖操纵子的调节机制可分为三个方面：(1)阻遏蛋白的负性调节 没有乳糖时, 阻遏蛋白与O序列结合,阻碍RNA聚合酶与P序列结合,抑制转录起动；有乳糖时,少量半乳糖作为诱导剂结合阻遏蛋白，改变了它
4、的构象，使它与O序列解离,RNA聚合酶与P序列结合,转录起动。(2) CAP的正性调节 没有葡萄糖时，cAMP浓度高，结合cAMP的CAP与lac操纵子启动序列附近的CAP结合位点结合，激活RNA转录活性；有葡萄糖时，cAMP浓度低，cAMP与CAP结合受阻，CAP不能与CAP结合位点结合，RNA转录活性降低。(3)协调调节 当阻遏蛋白封闭转录时，CAP对该系统不能发挥作用；如无CAP存在，即使没有阻遏蛋白与操纵序列结合，操纵子仍无转录活性。5 何谓限制性核酸内切酶？写出大多数限制性核酸内切酶识别DNA序列的结构特点。解释限制性内切核酸酶；酶识别DNA位点的核苷酸序列呈回文结构。1酮体是如何产
5、生和利用的？ 酮体是脂肪酸在肝脏经有限氧化分解后转化形成的中间产物，包括乙酰乙酸、-羟丁酸和丙酮。肝细胞以-氧化所产生的乙酰辅酶A为原料，先将其缩合成羟甲戊二酸单酰CoA（HMG-CoA），接着HMG-CoA被HMG-CoA裂解酶裂解产生乙酰乙酸。乙酰乙酸被还原产生-羟丁酸，乙酰乙酸脱羧生成丙酮。HMG-CoA合成酶是酮体生成的关键酶。肝脏没有利用酮体的酶类，酮体不能在肝内被氧化。酮体在肝内生成后，通过血液运往肝外组织，作为能源物质被氧化利用。丙酮量很少，又具有挥发性，主要通过肺呼出和肾排出。乙酰乙酸和-羟丁酸都先被转化成乙酰辅酶A，最终通过三羧酸循环彻底氧化。2为什么测定血清中转氨酶活性可以
6、作为肝、心组织损伤的参考指标？正常时体内多种转氨酶主要存在于相应组织细胞中，血清含量极低，如谷丙转氨酶（GPT）在肝细胞中活性最高，而谷草转氨酶（GOT）在心机细胞中活性最高，当肝细胞或心机细胞损伤时上述转氨酶分别释放入血。3讨论复制保真性的机制。. 遵守严格的碱基配对规律；. 聚合酶在复制延长时对碱基的选择功能；DNA-pol依据碱基表现的亲和力，实现正确的碱基选择。. 复制出错时DNA-pol I的及时校读功能。4试述乳酸异生为葡萄糖的主要反应过程及其酶。（1）乳酸经LDH催化生成丙酮酸。（2）丙酮酸在线粒体内经丙酮酸羧化酶催化生成草酰乙酸，后者经GOT催化生成天冬氨酸出线粒体，在胞液中经
7、GOT催化生成草酰乙酸，后者在磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶作用下生成磷酸烯醇式丙酮酸。（3）磷酸烯醇式丙酮酸循酵解途径至1，6二磷酸果糖。（4）1，6二磷酸果糖经果糖二磷酸酶1催化生成6磷酸果糖，再异构为6磷酸葡萄糖。（5）6磷酸葡萄糖在葡萄糖6磷酸酶作用下生成葡萄糖。5举例说明蛋白质一级结构、空间构象与功能之间的关系。蛋白质一级结构是高级结构的基础。有相似一级结构的蛋白质，其空间构象和功能也有相似之处。如垂体前叶分泌的肾上腺皮质激素的第4至第10个氨基酸残基与促黑激素（-MSH，-MSH）有相同序列，因此ACTH有较弱的促黑激素作用。又如广泛存在与生物学的细胞色素C，在相近的物种间，其一级结构越相
8、似，空间构象和功能也越相似。在物种上，猕猴和人类很接近，二者的细胞色素C只相差1个氨基酸残基，所以空间构象和功能也极相似。1胞浆中的NADH如何参加氧化磷酸化过程？试述其具体机制。线粒体内生成的NADPH可直接参加氧化磷酸化过程，但在胞浆中生成的NADPH不能自由透过线粒体内膜，故线粒体外NADPH所带的氢必须通过某种转运机制才能进入线粒体，然后再经呼吸链进行氧化磷酸化过程。这种转运机制主要有-磷酸甘油穿梭和苹果酸-天冬氨酸穿梭两种机制。（1）-磷酸甘油穿梭：这种穿梭途径主要存在于脑和骨骼肌中，胞浆中的NADH在磷酸甘油脱氢酶催化下，使磷酸二羟丙酮还原成-磷酸甘油，后者通过线粒体外膜，再经位于
9、线粒体内膜近胞浆侧的磷酸甘油脱氢酶催化下氧化生成磷酸二羟丙酮和FADH2，磷酸二羟丙酮可穿出线粒体外膜至胞浆，参与下一轮穿梭，而FADH2则进入琥珀酸氧化呼吸链，生成2分子ATP（2）苹果酸-天冬氨酸穿梭：这种穿梭途径主要存在于肝和心肌中，胞浆中的NADH在苹果酸脱氢酶催化下，使草酰乙酸还原为苹果酸，后者通过线粒体外膜上的-酮戊二酸转运蛋白进入线粒体，又在线粒体内苹果酸脱氢酶的作用下重新生成草酰乙酸和NADH。NADH进入NADH氧化呼吸链，生成3分子ATP。可见，在不同组织，通过不同穿梭机制，胞浆中的NADH进入线粒体的过程不一样，参与氧化呼吸链的途径不一样，生成的ATP数目不一样。2举例说
10、明蛋白质的变构效应。当配体与蛋白质亚基结合引起亚基构象变化，从而改变蛋白质的生物活性，此种现象称为变构效应。变构效应也可发生与亚基之间，即当一个亚基构象的改变引起相邻的另一个亚基的构象和功能的变化。例如一个氧分子与Hb分子中一个亚基结合，导致其构象变化，进一步影响第二个亚基的构象变化，使之更易与氧分子结合，依次使四个亚基均发生构象改变而与氧分子结合，起到运输氧的作用。4试述复制和转录的异同点。复制和转录都以DNA为模板，都需依赖DNA的聚合酶，聚合过程都是在核苷酸之间生成磷酸二酯键，合成的核酸链都从5向3方向延长，都需遵从碱基配对规律。复制和转录最根本的不同是：通过复制使子代保留杂代全部遗传信
11、息，而转录只需按生存需要部分信息表达。因此可以从模板和产物的不同来理解这一重大区别。此外，聚合酶分别是DNA pol和RNA pol，底物分别是dNTP和NTP，还有碱基配对的差别，都可从二者产物结构性质不同上理解。5 试述人体胆固醇的来源与去路。人体胆固醇的来源有：从食物中摄取。机体细胞自身合成。去路有：用于构成细胞膜。在肝脏可转化成胆汁酸。在性腺、肾上腺皮质可转化成性激素、肾上腺皮质激素。在皮肤可转化成维生素D3。还可酯化成胆固醇酯，储存在胞液及血浆脂蛋白中。1人体生成ATP的方法有哪几种？请详述具体生成过程。 ATP是生物体能量的储存和利用中心，其生成或来源主要有两种，一种是底物水平磷酸
12、化，另一种是氧化磷酸化。具体过程如下：（1） 底物水平磷酸化：利用代谢分子中的能量使ADP磷酸化生成ATP的过程，称为底物水平磷酸化，在物质分解利用过程中，有三个典型的底物水平磷酸化反应，糖酵解过程中，磷酸甘油酸激酶催化1，3二磷酸甘油酸生成3磷酸甘油酸以及丙酮酸羧激酶催化磷酸烯醇式丙酮酸生成烯醇式丙酮酸这两步反应均伴有ADP磷酸化生成ATP，三羧酸循环中琥珀酰CoA合成酶催化琥珀酰CoA生成琥珀酸，同时催化Pi和GDP生成GTP，而GTP又可在酶促作用下能量转移生成ATP;（2） 氧化磷酸化：即在呼吸链电子传递过程中偶联ADP磷酸化，生成ATP。如物质脱下的2H经NADH氧化呼吸链可偶联生成
13、3个ATP；经琥珀酸氧化呼吸链则偶联生成2个ATP。这是机体内ATP生成的主要方式。2. 何谓基因克隆？简述基因克隆的基本过程。基因克隆的概念；以质粒为载体进行DNA克隆的过程（为例）。包括：目的基因的获取，基因载体的选择与构建，目的基因与载体的拼接，重组DNA分子导入受体细胞，筛选并无性繁殖含重组分子的受体细胞。4. 原核生物复制中的引发体是如何形成的？复制的起始需要解生成引发体和合成引物。原核生物在复制起始点DNA上结合Dna A Dna B、 Dna C蛋白。含有解螺旋酶、DnaC蛋白、引物酶和DNA复制起始区域的复合结构称为引发体。在引发体上DnaG催化NTP聚合生成引物。1什么是血浆
14、脂蛋白，它们的来源及主要功能是什么？血浆脂蛋白主要包括CM、VLDL、LDL和HDL四类。CM的功能是运输外源性甘油三酯和胆固醇；VLDL运输内源性甘油三酯和胆固醇；LDL转运内源性胆固醇；HDL逆向转运胆固醇。2简述谷氨酸在体内转变成尿素、CO2与水的主要代谢过程。谷氨酸在L-谷氨酸脱氢酶的作用下生成酮戊二酸、NADH+H+和NH3；酮戊二酸经三羧酸循环产生草酰乙酸、CO2、FADH2、NADH+H+；草酰乙酸在磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶作用下生成磷酸烯醇式丙酮酸和CO2；磷酸烯醇式丙酮酸在丙酮酸激酶的作用下生成丙酮酸，在丙酮酸脱氢酶的作用下生成乙酰辅酶A；乙酰辅酶A经三羧酸循环生成2CO2、1
15、FADH2、3 NADH+H+和ATP；经氧化呼吸链生成ATP和H2ONH3+CO2+ATP生成氨基甲酰磷酸，经鸟氨酸循环生成尿素。3试述复制和转录的异同点。复制和转录都以DNA为模板，都需依赖DNA的聚合酶，聚合过程都是在核苷酸之间生成磷酸二酯键，合成的核酸链都从5向3方向延长，都需遵从碱基配对规律。复制和转录最根本的不同是：通过复制使子代保留杂代全部遗传信息，而转录只需按生存需要部分信息表达。因此可以从模板和产物的不同来理解这一重大区别。此外，聚合酶分别是DNA pol和RNA pol，底物分别是dNTP和NTP，还有碱基配对的差别，都可从二者产物结构性质不同上理解。4已知人类细胞基因组的
16、大小约30亿bp，试计算一个二倍体细胞中DNA的总长度，这么长的DNA分子是如何装配到直径只有几微米的细胞核内的？约2米（10bp的长度为3.4nm，二倍体）。在真核细胞内，DNA以非常致密的形式存在于细胞核内，在细胞生活周期的大部分时间里以染色质的形式出现，在细胞分裂期形成染色体。染色体是由DNA和蛋白质构成的，是DNA的超级结构形式。染色体的基本单位是核小体。核小体由DNA和组蛋白共同构成。组蛋白分子构成核小体的核心，DNA双螺旋分子缠绕在这一核心上构成了核小体的核心颗粒。核小体的核心颗粒之间再由DNA（约60bp）和组蛋白H1构成的连接区连接起来形成串珠样结构。在此基础上，核小体又可进一
17、步旋转折叠，经过形成30nm纤维状结构、300nm襻状结构、最后形成棒状的染色体。5. 原核生物和真核生物翻译起始复合物的生成有何异同？原核生物mRNA先与小亚基结合，通过mRNA起始密码上游S-D序列与小亚基16S-rRNA3端短序列互补。S-D序列后小核苷酸序列，被核蛋白体rps-1结合。核蛋白体小亚基和mRNA、起始氨基酰-tRNA、大亚基依次结合，形成翻译起始复合物。真核生物起始与原核生物相似但更复杂，mRNA没有S-D序列，帽子结合蛋白复合物结合mRNA5帽子和3polyA尾，消耗ATP从mRNA5端起扫描，最终使mRNA在小亚基正确定位。核蛋白体小亚基和起始氨基酰-tRNA、mRN
18、A、大亚基依次结合，形成翻译起始复合物。1试讨论各类核苷酸抗代谢物的作用原理。5-氟尿嘧啶、6-巯基嘌呤、氨基蝶呤和氨甲蝶呤、氮杂丝氨酸等核苷酸抗代谢物均可作为临床抗肿瘤药物，其各自的机理如下表所示：抗肿瘤药物5-氟尿嘧啶6-巯基嘌呤氨基蝶呤和氨甲蝶呤氨杂丝氨酸核苷酸代谢中类似物胸腺嘧啶次黄嘌呤叶酸谷氨酰胺作用机理抑制胸腺嘧核苷酸合成酶；影响RNA的正常结构和功能抑制IMP转变为AMP和GMP的反应；抑制IMP和GMP的补救合成和从头合成抑制二氢叶酸还原酶干扰嘌呤、嘧啶核苷酸的合成2为什么说真核生物基因是断裂基因？请讨论hnRNA的剪接过程。基因是指为生物大分子编码的核酸片段。在真核生物中，编
19、码序列只占少数，可称为外显子。非编码序列可称为内含子，它是阻断基因线性表达的DNA片段。这种在同一基因外显子被内含子分隔的现象就是断裂基因。此外，基因与基因之间还有间隔序列，也是基因断裂性的表现。mRNA剪接实际上是切除内含子，把外显子互相连接起来，剪接体由snRNP与hnRNA结合组成。snRNA的U1U2结合一个内含子的两端，使内含子弯曲及两个相邻外显子互相靠近。U2U6形成催化中心，发生转酯反应。由含鸟苷的辅酶亲电子攻击使第一外显子切出，再由第一外显子3-OH亲电子攻击内含子与第二外显子的磷酸二酯键，使内含子去除而两外显子相接。3什么是蛋白质的二级结构？它主要有哪几种？各有何结构特征？蛋
20、白质二级结构是指多肽链主链原子的局部空间排布，不包括侧链的构象。它主要有螺旋、折叠、转角和无规卷曲四种。在螺旋结构中，多肽链主链围绕中心轴以右手螺旋方式旋转上升，每隔3.6个氨基酸残基上升一圈。氨基酸残基的侧链伸向螺旋外侧。每个氨基酸残基的亚氨基上的氢与第四个氨基酸残基上的氧形成氢键，以维持螺旋稳定。在折叠结构中，多肽链的肽键平面折叠成锯齿状结构，侧链交错位于锯齿状结构的上下方。两条以上肽链或一条肽链内的若干肽段平行排列，通过链间羰基氧和亚氨基氢形成氢键，维持折叠构象稳定。在球状蛋白质分子中，肽链主链常出现180度回折，回折部分称为转角。转角通常有4个氨基残基组成，第二个残基常为脯氨酸。无规卷
21、曲是指肽链中没有确定规律的结构。4简述肝糖原合成代谢的直接途径与间接途径。肝糖原合成时由葡萄糖经UDPG合成糖原的过程称为直接途径由葡萄糖先分解成三碳化合物如乳酸、丙酮酸，再运至肝脏异生成糖原的过程称为三碳途径或间接途径。5何谓目的基因？写出其主要来源或途径。目的基因：应用重组DNA技术有时是为分离、获得某一感兴趣的基因或DNA 序列，或是为获得感兴趣基因的表达产物蛋白质。这些感兴趣的基因或DNA序列就是目的基因，又称目的DNA。目的DNA有两种类型，即cDNA和基因组DNA.2试述原核生物的转录终止。RNA-pol在DNA模板上停顿下来不再前进，转录产物RNA链从转录复合物上脱落下来，就是转
22、录终止。依据是否需要蛋白质因子的参与，原核生物转录终止分为依赖因子与非依赖因子两大类。依赖因子的转录终止中，因子与转录产物结合，因子和RNA-pol都发生构象改变，从而使RNA聚合酶停顿，解螺旋酶活性使DNA/RNA杂化双链拆离，利于产物从转录复合物中释放。非依赖因子的转录终止中，DNA模板上靠近终止处有些特殊碱基序列，转录出RNA后，产物形成特殊的结构来终止转录。 3概述肾上腺素对血糖水平调节的分子机制。肾上腺素通过促进肝脏和肌肉组织中的糖原分解而抑制糖原合成，使血糖水平升高。其分子机制如下：肾上腺素作用于肝及肌细胞膜上的受体后，促使G蛋白与GDP解离而与GTP结合，从而激活G蛋白。活化的G
23、蛋白能激活腺苷酸环化酶，使cAMP生成增加，cAMP激活蛋白激酶A；后者催化细胞中许多酶类和功能蛋白质的磷酸化，从而引起肾上腺素的生理效应。 （1）使无活性的磷酸化酶b激酶磷酸化为有活性的磷酸化酶b激酶。后者催化无活性的磷酸化酶b磷酸化为磷酸化酶a；则可促进糖原分解，升高血糖。 （2）使有活性的糖原合酶a磷酸化成无活性的糖原合酶b。从而抑制糖原合成，致使血糖浓度升高。 （3）cAMP蛋白激酶系统还通过磷酸化改变某些酶的活性调节血糖水平。如抑制肝丙酮酸激酶减少糖的分解代谢，激活果糖双磷酸酶1促进糖异生，升高血糖。 4物质在体内氧化和体外氧化有哪些异同点？请加以说明。物质在生物体内氧化的过程被称为
24、生物氧化，主要指糖、脂肪、蛋白质等通过氧化作用逐步释放能量，最终生成CO2和H2O这一过程。与物质的体外氧化相比主要有以下异同点：相同点：（1） 两种氧化方式都遵循氧化还原反应的一般规律，有加氧、脱氢、失电子过程；（2） 两种氧化方式所消耗的氧量、综产物（CO2，H2O）和释放的能量均相同。 不同点：（1） 反应的环境与条件不同，生物氧化是在生物细胞内进行的，恒温，PH接近中性，可有水参与，而体外氧化则需高温和干燥的环境；（2） 反应的方式不同，生物氧化在一系列酶的催化下逐步进行，O2接受电子后与H+生成水，CO2由脱羧基产生，而体外氧化无需酶催化，反应剧烈，H和C直接与O2 化合成H2O 及
25、CO2；（3） 释放能量过程不同，生物氧化能量逐步释放，能量部分以化学能方式储存，部分以热能释放，而体外氧化全部以热和光的形式骤然释放。51mol软脂酸彻底氧化分解净生成多少ATP？1291为什么说逆转录现象的发现在生命科学研究中有重大的研究价值？是RNA病毒以其RNA为模板合成DNA的过程，意义有： 1.补充完善了中心法则 2.逆转录病毒中有致癌病毒，其研究关系到严重危害人类健康的某些疾病发病机理、诊断和治疗；3. 是分子生物学研究中的重大工具酶，应用于cDNA制备，RT-PCR制备上。2简述糖异生的生理意义。 1）空腹或饥饿时利用非糖化合物异生成葡萄糖，以维持血糖水平恒定。 （2）糖异生是
26、肝脏补充或恢复糖原储备的重要途径。 （3）饥饿时，糖异生增强有利于维持酸碱平衡。 5简述DNA双螺旋结构模式的要点及其与DNA生物学功能的关系。DNA双螺旋结构模型的要点：（1）DNA是以反向平行的双链结构，脱氧核糖基和磷酸基骨架位于双链的外侧，碱基位于内侧，两条链的碱基之间以氢键相接触。腺嘌呤始终与胸腺嘧啶配对存在，形成两个氢键（A=T），鸟嘌呤始终与胞嘧啶配对存在，形成三个氢键（GC）。碱基平面与线性分子结构的长轴相垂直。一条链的走向是53，另一条链的走向就一定是35；（2）DNA是一右手螺旋结构。螺旋每旋转一周包含了10对碱基，每个碱基的旋转角度为36。螺距为3.4nm，每个碱基平面之间
27、的距离为0.34nm。DNA双螺旋分子存在一个大沟和一个小沟；（3）DNA双螺旋结构稳定的维系横向靠两条链间互补碱基的氢键维系，纵向则靠碱基平面间的疏水性堆积力维持。1、试述复制和转录的异同点。复制和转录都以DNA为模板，都需依赖DNA的聚合酶，聚合过程都是在核苷酸之间生成磷酸二酯键，合成的核酸链都从5向3方向延长，都需遵从碱基配对规律。复制和转录最根本的不同是：通过复制使子代保留杂代全部遗传信息，而转录只需按生存需要部分信息表达。因此可以从模板和产物的不同来理解这一重大区别。此外，聚合酶分别是DNA pol和RNA pol，底物分别是dNTP和NTP，还有碱基配对的差别，都可从二者产物结构性
28、质不同上理解。3、蛋白质的基本组成单位是什么？其结构特征是什么？蛋白质的基本组成单位是氨基酸，均为L氨基酸，即在碳原子上连有一个氨基、一个羧基、一个氢原子和一个侧链。每个氨基酸的侧链各不相同，是其表现不同性质的结构特征。5简述天冬氨酸在体内转变成葡萄糖的主要代谢途径。天冬氨酸+酮戊二酸在谷草转氨酶作用下生成草酰乙酸和谷氨酸，草酰乙酸在磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶的作用下生成磷酸烯醇式丙酮酸，磷酸烯醇式丙酮酸经糖异生生成1，6-二磷酸果糖，最后生成葡萄糖。1. 原核生物和真核生物翻译起始复合物的生成有何异同？原核生物mRNA先与小亚基结合，通过mRNA起始密码上游S-D序列与小亚基16S-rRNA3端
29、短序列互补。S-D序列后小核苷酸序列，被核蛋白体rps-1结合。核蛋白体小亚基和mRNA、起始氨基酰-tRNA、大亚基依次结合，形成翻译起始复合物。真核生物起始与原核生物相似但更复杂，mRNA没有S-D序列，帽子结合蛋白复合物结合mRNA5帽子和3polyA尾，消耗ATP从mRNA5端起扫描，最终使mRNA在小亚基正确定位。核蛋白体小亚基和起始氨基酰-tRNA、mRNA、大亚基依次结合，形成翻译起始复合物。2. 说明高氨血症导致昏迷的生化基础。高氨血症时，脑中的反应为 氨+-酮戊二酸 生成谷氨酸，氨+谷氨酸 生成谷氨酰胺， 脑内-酮戊二酸减少导致了三羧酸循环减慢，从而使ATP生成减少，脑组织供
30、能缺乏表现为昏迷。3. 有哪些方法可获得目的基因？包括：限制性内切酶； cDNA合成法；基因人工合成法；PCR法以特异性引物扩增目的基因。1. 何谓基因克隆？简述基因克隆的基本过程。基因克隆的概念；以质粒为载体进行DNA克隆的过程（为例）。包括：目的基因的获取，基因载体的选择与构建，目的基因与载体的拼接，重组DNA分子导入受体细胞，筛选并无性繁殖含重组分子的受体细胞。1. 为何蛋白质的含氮量能表示蛋白质相对量？实验中又是如何依此原理计算蛋白质含量的？蛋白质的基本组成单位是氨基酸，均为L氨基酸，即在碳原子上连有一个氨基、一个羧基、一个氢原子和一个侧链。每个氨基酸的侧链各不相同，是其表现不同性质的
31、结构特征。4.简述各种RNA在肽链合成过程中的作用。mRNA携带遗传信息作为指导和合成多肽链的模板；tRNA以氨基酰-tRNA方式结合并运载各种氨基酸，使氨基酸进入核蛋白体对号入座合成肽链；rRNA和多种蛋白质构成核蛋白体作为合成多肽链的场所。5. 说明酶原与酶原激活的意义。有些酶在细胞内合成或初分泌时只是酶的无活性前体，必须在一定的条件下，这些酶的前体水解开一个或几个特定的肽键，致使其构象发生改变，表现出酶的活性。这种无活性的酶的前体称为酶原。酶原向酶的转化过程称为酶原的激活。酶原的激活实质上是酶的活性中心形成或暴露的过程。酶原的激活具有重要的生理意义。消化管内蛋白酶以酶原形式分泌出来，不仅保护消化器官本身不遭酶的水解破坏，而且保证酶在其特定的部位和环境发挥其催化作用。此外，酶原还可视为酶的贮存形式。如凝血和纤维蛋白溶解酶类以酶原的形式在血液循环中运行，一旦需要便不失时机地转化为有活性的酶，发挥其对机体的保护作用。1讨论复制保真性的机制。. 遵守严格的碱基配对规律；. 聚合酶在复制延长时对碱基的选择功能；DNA-pol依据碱基表现的亲和力，实现正确的碱基选择。. 复制出错时DNA-pol I的及时校读功能。2什么是蛋白质的二级结构？它主要有哪几种？各有何结构特征？ 蛋白质二级结构是指多肽链主链
