1、第十一章流式细胞技术与流式细胞仪 第十一章 流式细胞技术与流式细胞仪首 页习 题习题参考答案习 题 名词解释 选择题 简答题 一、名词解释1流式细胞仪2流式细胞术3狭缝扫描流式细胞仪4测量区5. 样品流6鞘液流7侧向角散射8延迟时间9荧光灵敏度10分选收获率11分选速度12分选纯度13长通滤光片14短通滤光片15带通滤光片16. 细胞自发荧光17零分辨率的流式系统二、选择题 【A型题】 在五个选项中选出一个最符合题意的答案（最佳答案）。1流式细胞仪中的鞘液和样品流在喷嘴附近组成一个圆形流束，自喷嘴的圆形孔喷出，与水平方向的激光束垂直相交，相交点称为（ ）A敏感区B测量区C激光区D计算区E观察区
2、2 流式细胞仪使用的染色细胞受激光照射后发出荧光，同时产生（ ）A电离辐射B光散射C电磁辐射D光反射E光电子3 流式细胞仪中的光电倍增管接收（ ）A散射光B荧光C激光D射线E反光4流式细胞仪中的光电二级管接收（ ）A散射光B荧光C激光D射线E反光5通过测量区的液柱断裂成一连串均匀液滴的原因是在（ ）A在流动室上加上了频率为30kHz的信号B在测量区上加上了频率为30kHz的信号C在压电晶体上加上了频率为30kHz的信号D在光电倍增管上加上了频率为30kHz的信号E在光电二级管上加上了频率为30kHz的信号6将悬浮分散的单细胞悬液，经特异荧光染料染色后，放人样品管，悬浮在样品管中的单细胞悬液形成
3、样品流垂直进入流式细胞仪的流动室，动力来自于（ ）A激光B压电晶体C气体压力D荧光E散射光7流动室轴心至外壁的鞘液向下流动，形成包绕细胞悬液的是（ ）A鞘液流B细胞流C散射光D荧光E测量区8各类细胞的特性信息在测量区被测定的时间为（ ）A在细胞形成液滴以前B在细胞形成液滴以后C在细胞形成液滴过程中D在细胞形成液滴前后E在细胞形成液滴一小时9样品流在鞘流的环包下形成流体动力学聚焦，使样品流不会脱离液流的轴线方向，并且保证每个细胞通过（ ）A荧光照射区B散射光照射区C激光照射区DX光照射区E太阳光照射区10前向角散射可以检测（ ）A细胞膜厚薄B被测细胞的大小C细胞质多少D核膜的折射率EDNA含量1
4、1在对细胞膜表面抗原的荧光检测时通常使用（ ）A线性放大器B指数放大器C对数放大器D整数放大器E函数放大器12一般对DNA倍体测量时采用（ ）A荧光信号的面积B散射光信号的面积C前向角散射信号面积和宽度D散射光信号的宽度E荧光信号的宽度13荧光信号的宽度常用来区分（ ）A淋巴细胞B红细胞C白细胞D双联体细胞E单倍体细胞14光谱重叠校正的最有效方法是使用（ ）A放大电路B荧光电路C散射光电路D衰减电路E双激光立体光路15若每秒钟产生4万个水滴,每秒钟流出的细胞是1000个，则平均每40个水滴中有（ ）A三个水滴是有细胞的B二个水滴是有细胞的C四个水滴是有细胞的D.一个水滴是有细胞的E五个水滴是有
5、细胞的16流式细胞术对HIV感染者或AIDS发病者进行区别是通过（ ）A测DNA凋亡峰B胞质抗原含量测定C动态监测T细胞亚群D测凋亡调节蛋白EDNA倍体含量测定17下落的水滴通过一对平行板电极形成的静电场时，带正电荷的水滴向（ ）A带负电的电极板偏转B带正电的电极板偏转C不偏转D前向角偏转E侧向角偏转18什么是鉴别良、恶性肿瘤的特异指标为（ ）A非特异性酯酶含量测定B胞质抗原含量测定CDNA含量测定D过氧化物酶含量测定EDNA倍体含量测定19衡量流式细胞仪检测微弱荧光信号的重要指标是（ ）A灵敏度的高低B荧光强度C散射光大小D精密度大小E准确度的高低20分辨率是衡量仪器测量精度的指标，通常用（
6、 ）A误差值表示B标准差值表示C灵敏度值表示D变异系数值表示E精密度值表示21与前向角散射密切相关的是（ ）A细胞直径B细胞直径的平方C细胞核的形状D血小板数量E病毒性质22流式细胞仪测定的标本，不论是外周血细胞,还是培养细胞，首先要保证是（ ）A单倍体细胞悬液B双倍体细胞悬液C红细胞悬液D白细胞悬液E单细胞悬液23.光路与流路校正的主要目是确保（ ）A激光光路稳定B样品流稳定C激光光路与样品流处于正交状态D荧光光光路与样品流处于正交状态E散射光光路与样品流处于正交状态24为保证样品检测时仪器处于最佳工作状态，PMT校准采用（ ）A样品B质控品C鞘液D生理盐水E缓冲液25为保证仪器在计数时的准
7、确性，流式细胞仪应建立绝对计数（ ）A样品B细胞C鞘液D细菌E标准品26样品和鞘液管道应用漂白粉液清洗的间隔时间为（ ）A每月B每天C每季度D每周E每年27FCM显示激光器开启错误,引起故障的可能原因是（ ）A激光器关闭B激光器门打开C流式细胞仪连接错误D清洗液少了E数据太大，难以处理28FCM显示清洗液高度警示,引起故障的可能原因是（ ）A激光器关闭B激光器门打开C流式细胞仪连接错误D清洗液少了E清洗液传感器失灵29FCM显示数据处理速率错误,引起故障的可能原因是（ ）A数据太大，难以处理B激光器门打开C流式细胞仪连接错误D清洗液少了E清洗液传感器失灵【X型题】 每题的备选答案中有两个或者两
8、个以上正确答案。1流式细胞仪综合了（ ）A激光技术B电子技术C流体力学D生物化学E计算机技术2流式细胞仪广泛应用于 （ ）A细胞生物学B物理学C免疫学D电子学E血液学3FCM在细胞生物学研究中，应用频繁的领域是（ ）A细胞周期BDNA倍体C细胞表面受体D细胞表面抗原E病毒表面抗体4生物学颗粒的内容包括（ ）ADNABRNAC蛋白质D染色体E细菌5染色的细胞受激光照射后发出荧光，同时产生光散射。这些信号分别被（ ）A光电倍增管荧光检测器接收B细胞检测器接收C激光检测器接收D光电二极管散射光检测器接收EDNA检测器接收6.计算机通过储存、计算、分析流式细胞检测到的数字化信息，就可得到（ ）A离子多
9、少B细胞的大小C核酸含量D酶的性质E抗原的性质7流式细胞仪根据其结构不同又可分（ ）A一般流式细胞仪B高级流式细胞仪C特殊流式细胞仪D狭缝扫描流式细胞仪E零点流式细胞仪8流式细胞仪根据功能不同可分为（ ）A临床型B普通型C科研型D特殊性E灵敏型9流式细胞仪的结构可分为（ ）A流动室及液流驱动系统B激光光源及光束成形系统C光学系统D信号检测与存贮、显示、分析系统E细胞分选系统10流动室的类型有（ ）A在室内检测的流动室B激发型流动室C在空气中检测的流动室D荧光流动室E显微检测流动室11属于FCM光学系统的是（ ）A透镜B滤光片C小孔D流动室E分选系统12FCM光学系统主要分为（ ）A长通滤片B短
10、通滤片C高通滤片D低通滤片E带通滤片13当细胞携带荧光素标记物，通过激光照射区时，细胞内不同物质分别产生（ ）A激光信号B散射光信号C荧光信号D离子信号E反射信号14散射光分为（ ）A后向角散射B前向角散射C反向角散射D侧向角散射E正向角散射15目前采用前向角散射和侧向角散射这两个参数组合，可区分经裂解红细胞处理后外周血中的（ ）A淋巴细胞群体B单核细胞群体C血小板群体D粒细胞群体E红细胞群体16目前采用前向角散射和侧向角散射这两个参数组合，可区分未进行裂解红细胞处理的全血样品中的（ ）A淋巴细胞群体B单核细胞群体C血小板群体D粒细胞群体E红细胞群体17线性放大测量适合于检测（ ）A细胞膜表面
11、抗原的分布B单核细胞含量C总蛋白质含量DRNA含量EDNA含量18属于细胞分选器组成内容的是（ ）A细胞分布B水滴形成C分选逻辑电路D水滴充电E水滴偏转19影响延迟时间的因素为（ ）A平均延迟时间的不准确性B喷射液流的变化C水滴分离点的变化D细胞本身对水滴形成条件的影响E水滴的性质20流式细胞仪在免疫学中的应用包括（ ）A淋巴细胞功能分析B淋巴细胞及其亚群分析C化疗药物对肿瘤细胞的凋亡机制D肿瘤细胞的免疫检测E免疫分型21分选指标主要包括（ ）A分选速度B分选灵敏度C分选纯度D分选精密度E分选收获率22保证荧光信号产生的非常关键技术是（ ）A荧光染料的选择B标记染色方法C鞘液的选择D细胞的选择
12、E细胞的分离23FCM室内应注意（ ）A配空调B避光C防尘D除湿E不用除湿三、简答题1简述流式细胞仪生物学颗粒分析原理。2简述流式细胞仪细胞分选原理。3流式细胞仪依据什么进行分类? 各类型有什么特点?4流式细胞仪主要应用在哪些领域？5流式细胞仪的基本结构由哪几部分组成？6流式细胞仪的液流系统的功能？7流式细胞仪的流动室的作用是什么？8流式细胞仪的光源有什么特点？9流式细胞仪的光学系统组成和各种滤光片的作用是什么?10流式细胞仪所检测的信号有哪些？这些信号所代表的意义和作用是什么？11流式细胞仪信号的测量方式和校正方法是什么？12流式细胞仪分选器的组成和细胞分选原理是什么？13流式细胞仪的主要性
13、能指标有哪些?14流式细胞仪操作技术的质量控制主要涉及哪几个方面？15.流式细胞仪通常出现的故障及排除方法是什么? 习题参考答案 一、名词解释1流式细胞仪：是以激光为光源，集流体力学、电子物理技术、光电测量技术、计算机技术、细胞荧光化学和单克隆抗体等技术为一体的新型高科技仪器。2流式细胞术：应用流式细胞仪对于处在快速直线流动状态中的生物颗粒进行快速的、多参数的定量分析和分选的技术称为流式细胞术。3狭缝扫描流式细胞仪：被检细胞直径大于激光光斑直径，当细胞通过光束时，细胞各部分被依次先后扫描，得到一维的细胞轮廓组方图，可计算出细胞直径大小、核直径大小、核浆比例等一系列的形态学信息的流式细胞仪。4测
14、量区：鞘液流和样品流在喷嘴附近组成一个圆柱流束，自喷嘴的圆形孔喷出，与水平方向的激光束垂直相交，相交点称为测量区。5. 样品流：将特异荧光染料染色的单细胞悬液放人样品管，在气体压力作用下，悬浮在样品管中的单细胞经管道进入流式细胞仪的流动室，沿流动室的轴心向下流动所形成的流束称为样品流。6鞘液流：流动室轴心至外壁的鞘液也向下流动，形成包绕样品流的流束称为鞘液流。7侧向角散射： 侧向角散射是指与激光束正交900方向的散射光信号。8延迟时间：由细胞通过测量区到小水滴分离的时间大约为几十毫秒，这个时间称为延迟时间。9荧光灵敏度：以能检测到最少的异硫氰酸荧光素分子来表示，即微球上最少标有多少个FITC分
15、子时刚好能被检测到，即为荧光灵敏度。10分选收获率：指被分出的细胞占原来溶液中该细胞的百分比。11分选速度：分选速度指每秒可提取所要细胞的个数。12分选纯度：分选纯度指要分选的目的细胞占分选出细胞的百分比。13长通滤光片：能使特定波长以上的光通过，特定波长以下的光不能通过的滤光片称为长通滤光片。14短通滤光片：与长通滤光片相反，特定波长以下的光通过，特定波长以上的光被吸收或返回。15带通滤光片：带通滤光片允许一定波长范围内的光通过，一般滤光片上有两个数值，一个为允许通过波长的中心值，另一个为允许通过光波段的范围。如BP500/50表示其允许475nm525nm波长的光通过。16细胞自发荧光：细
16、胞自身在激光照射下发出微弱的荧光信号，称为细胞自发荧光。17零分辨率的流式系统：一般流式细胞仪的激光光斑为椭圆形，光斑直径大于被检细胞体积，只能提供细胞内某种生物化学成分的参数，不能对细胞形态以亚细胞形态进行分辨，所以称之为零分辨率的流式系统。二、选择题【A型题】1B 2B 3B 4A 5C 6C 7A 8A 9C 10B 11C 12A 13D 14E 15D 16C 17A 18E 19A 20D 21B 22E 23C 24B 25E 26D 27B 28E 29A 【X型题】1ABCE 2ACE 3ABCD 4ABCDE 5AD 6BCDE 7AD 8AC 9ABCDE 10ACE11
17、ABC 12ABE 13B C 14BD 15ABD 16CE 17CDE 18BCDE 19ABCD 20ABCD21ABCE 22ABDE 23ABCD三、简答题1简述流式细胞仪生物学颗粒分析原理。答：经特异荧光染料染色后的样品沿流动室的轴心向下流动，流动室轴心至外壁的鞘液也向下流动，形成包绕细胞悬液的鞘液流，鞘液和样品流在喷嘴附近组成一个圆柱流束，与水平方向的激光束垂直相交。染色的细胞受激光照射后发出荧光，这些信号分别被光电倍增管接收，经过计算机储存、计算、分析这些数字化信息，就可得到细胞的大小、活性、核酸含量、酶和抗原的性质等物理和生化指标。2简述流式细胞仪细胞分选原理。答：当某类细胞
18、的特性与要分选的细胞相同时，流式细胞仪就会在这类细胞形成液滴时给含有这类细胞的液滴充以特定的电荷，带有电荷的液滴向下落入偏转板间的静电场时，依所带电荷的不同分别向左偏转或向右偏转，落入指定的收集器内，不带电的液滴不发生偏转，垂直落入废液槽中被排出，从而达到细胞分类收集的目的。3流式细胞仪依据什么进行分类? 各类型有什么特点?答：流式细胞仪根据功能不同可分为临床型和科研型。临床型只有分析功能，没有分选功能，仪器的光路调节系统固定，自动化程度高，操作简便，易学易掌握。科研型既有分析功能又有分选功能，可快速将所感兴趣的细胞分选出来，并可将单个或指定个数的细胞分选到特定的容器里，同时可选配多种波长和类
19、型的激光器，适用于更广泛更灵活的科学研究。流式细胞仪根据其结构不同又可分为一般流式细胞仪和狭缝扫描流式细胞仪。前者的激光光斑为椭圆形，光斑直径大于被检细胞体积，只能提供细胞内某种生物化学成分的参数，不能对细胞形态和亚细胞形态进行分辨。狭缝扫描流式细胞仪是一种高分辨率的检测仪器，被检细胞直径大于激光光斑直径，细胞通过光束时各部分被依次扫描，根据荧光信号的先后，就可得到一维的细胞轮廓组方图，可计算出细胞直径大小、核直径大小、核浆比例等一系列的形态学信息。4流式细胞仪主要应用在哪些领域？答：流式细胞仪主要有下面的应用领域：免疫学、血液学、细胞生物学、肿瘤学、AIDS病检测、自身免疫性疾病相关HLA抗
20、原的分析和药物学。5流式细胞仪的基本结构由哪几部分组成？答：流式细胞仪的结构可分为流动室及液流驱动系统，激光光源及光束成形系统，光学系统，信号检测与存贮、显示、分析系统，细胞分选系统等五个部分。6流式细胞仪的液流系统的功能？答：流动室内充满了鞘液,鞘液的作用是将样品流环包。鞘液流是一种稳定流动的液体，操作人员无法随意改变其流动的速度，样品流在鞘流的环包下形成流体动力学聚焦，使样品流不会脱离液流的轴线方向，并且保证每个细胞通过激光照射区的时间相等，从而得到准确的细胞荧光信息。7流式细胞仪的流动室的作用是什么？答：流动室由石英玻璃制成，并在石英玻璃中央开一个孔径为430m180m的长方形孔，供细胞
21、单个流过，检测区在该孔的中心，这种流动室的光学特性良好，流速较慢，因而细胞受照时间长，可收集的细胞信号光通量大，配上广角收集透镜，可获得很高的检测灵敏度和测量精度。8流式细胞仪的光源有什么特点？答：激光是一种相干光源，它能提供单波长、高强度及稳定性高的光照，所以激光是细胞微弱荧光快速分析的理想光源。由于细胞的快速流动，每个细胞经过光照区的时间仅为1s左右，且细胞所携带荧光物质被激发出的荧光信号强弱，与被照射的时间和激发光的强度有关，因此细胞必须达到足够的光照强度。9流式细胞仪的光学系统组成和各种滤光片的作用是什么?答：流式细胞仪的光学系统是由若干组透镜、滤光片和小孔组成，它们分别将不同波长的荧
22、光信号送入不同的电子探测器。滤光片分三类，主要作用是：长通滤光片使特定波长以上的光通过，特定波长以下的光不能通过；短通滤光片使特定波长以下的光通过，特定波长以上的光被吸收或返回；带通滤光片允许一定波长范围内的光通过。10流式细胞仪所检测的信号有哪些？这些信号所代表的意义和作用是什么？答：流式细胞仪所检测的信号有散射光和荧光信号。 散射光信号：散射光分为前向角散射和侧向角散射，两个参数组合，可区分经裂解红细胞处理后外周血白细胞中淋巴细胞、单核细胞和粒细胞三个细胞群体，或在未进行裂解红细胞处理的全血样品中找出血小板和红细胞等细胞群体。 荧光信号：一种是细胞自身在激光照射下发出微弱的荧光信号，另一种
23、是经过特异荧光素标记细胞后，受激发照射得到的荧光信号，通过对这类荧光信号的检测和定量分析能了解所研究细胞的存在和定量。11流式细胞仪信号的测量方式和校正方法是什么？答：流式细胞仪信号的测量方式和校正方法分三类：（1）荧光信号线性测量和对数测量主要由电子线路完成；（2）荧光信号的面积的面积是采用对荧光光通量进行积分测量，一般对DNA倍体测量时采用面积，荧光信号的宽度常用来区分双连体细胞；（3）光谱重叠的校正采用双激光立体光路技术的四色FCM系统。12流式细胞仪分选器的组成和细胞分选原理是什么？答：细胞分选器由水滴形成、分选逻辑电路、水滴充电及偏转三部分组成。通过压电晶体的振动使自喷孔喷出的流束形
24、成水滴，分选逻辑电路根据分选细胞的参数，给含有此参数的细胞液滴充电，充电的液滴经过电极偏转板时，依所带电荷不同而偏向不同的电极板，在电极的下方放置收集容器，便可得到要分选的细胞。13流式细胞仪的主要性能指标有哪些?答：流式细胞仪的主要性能指标有：（1）荧光测量灵敏度；（2）仪器的分辨率；（3）前向角散射光检测灵敏度；（4）分析速度；（5）分选指标。14流式细胞仪操作技术的质量控制主要涉及哪几个方面？答：流式细胞仪操作技术的质量控制主要涉及三个方面：（1）光路与流路校正 主要目的在于确保激光光路与样品流处于正交状态，使仪器检测时的变异减少到最小，从而控制仪器的CV值；（2）PMT校准 采用质控品进行PMT校准，必要时进行电压补偿，以便仪器检测灵敏度不会因PMT的放大功率降低而改变；（3）绝对计数的校准 采用绝对计数标准品建立绝对计数标准。15.流式细胞仪通常出现的故障及排除方法是什么?答：流式细胞仪通常出现的故障及排除方法见下表：故障信息解决方法清洗液高度错误加清洗液数据处理速率错误稀释样品存取数据时发生错误关开计算机重试程序错误选择主菜单上的重建项没有激光束检查电源，开激光器激光器开启错误关激光器门样品压力错误换一个样品管建立样品压力错误检查连接，开关机重试
