1、市售红花药材质量评价研究 市售红花药材质量评价研究 学 生 姓 名 指 导 教 师 专 业 学 院 成绩： 年 月 日摘 要目的：评价市售红花的质量并且测定市售红花中总黄酮的含量。方法：通过性状鉴别和显微鉴别的方法来评价红花的质量。紫外-可见分光光度法测定红花的总黄酮含量。结果：在显微鉴别时看到黑圈，这黑圈既是杂质，实验结果测得：海晖医药连锁新疆红花总黄酮含量为1.76%，红旗大药房新疆红花总黄酮含量为1.22%。人民同泰新疆红花总黄酮含量为1.08%。结论：在显微鉴别是发现红花有不同程度的掺假，海晖的黄酮含量最高。 关键词：红花 评价 质量 黄酮1 绪 论1.1 论文主要内容 本论文先介绍红
2、花，了解红花的化学成分及药理作用，进一步研究红花的临床应用。 通过性状鉴别和显微鉴别来评价市售红花的质量，运用紫外分光光度法对新疆红花中的总黄酮含量进行测定。1.2 论文研究目的和意义 一方面为丰富红花的质量标准提供实依据，另一方面阐明市售红花质量情况，为红花的研究、开发及临床应用提供理论依据及检测手段。1.3 红花概述 红花，又称草红花。双子叶植物，菊科，干燥的管状花，菊科植物红花Carthamus tinctorius L.的干燥花。（不带子房的管状花）长约1.5厘米，橙红色，花管狭细，先端5裂，裂片狭线形，长57毫米，雄蕊5枚，花药黄色，联合成管，高出裂片之外，其中央有柱头露出。具特异香
3、气，味微苦。以花片长、色鲜红、质柔软者为佳。主产河南、浙江、四川等地。活血通经，去瘀止痛。1.3.1 红花的化学成分主要含有黄酮类和脂肪酸类化合物。1.3.1.1 查尔酮类 主要为红花黄色素，它是含有多种成分的水溶性混合物。1.3.1.2其他黄酮类 主要含有6羟基山奈酚3O葡萄糖苷、6羟基山奈酚7O葡萄糖苷，山奈酚、槲皮素、6羟基山奈酚、黄芩苷、槲皮素苷、山奈酚3芸香糖苷和芦丁；槲皮树3葡萄糖苷、槲皮树6葡萄糖苷、杨梅素及芹黄素,木樨草素,木樨草素7OD葡萄糖苷 。1.3.1.3 脂肪酸 红花含棕榈酸、肉豆蔻酸、月桂酸、二棕榈酸、油酸和亚油酸，其中亚油酸含量高达80% 。 1.3.2 红花的药
4、理作用1.3.2.1 抗凝血、抑制血栓 红花能阻止血栓进一步发展且可逐步缓解血栓、降低胆固醇，能较好地改善心肌及脑组织的微循环障碍，起到治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病及脑血栓的作用。红花水煎剂能抑制血小板聚集，有效成分SY亦能抑制血小板聚集，对已聚集的血小板有非常明显的解聚作用，且随剂量的增加而逐渐增强；还能提高大鼠纤维蛋白的溶解活性，显著降低血栓的长度和质量，防止血栓的形成和发展。SY还能延长家兔血浆的复钙时间、凝血酶原时间和凝血酶时间。SY能显著提高血浆纤溶酶原激活剂的活性，使局部血栓溶解，从而起到治疗心脑血管疾病的作用。1.3.2.2 对心血管系统的作用 兴奋心脏：小剂量红花煎剂对蟾蜍心脏
5、有轻微兴奋作用，能使心跳有力、振幅加大，对心肌缺血有益；大剂量对蟾蜍反而有抑制作用。增加冠状动脉血流量和降低冠状动脉阻力，增加心肌营养性血流量：用犬冠脉窦插管法，静脉注射红花注射液(10 mgkg)能使犬在位心脏冠脉流量增加604。扩张血管、改善微循环：用含微量去甲肾上腺素或肾上腺素的乐氏液灌流离体兔耳，红花注射液有明显的扩张血管作用。红花亦可改善哮喘大鼠的器官微循环，使微循环增粗、流速加快、流态恢复正常。1.3.2.3抗肿瘤作用 现代研究表明,肿瘤的生长需要血管为之提供营养和排除代谢产物。因此,如何阻断肿瘤血管生成已成为当今世界治疗肿瘤的新热点。在血管生成过程中,血管内皮细胞增殖是血管发生的
6、最基本和最重要的环节。陆梁等曾报道红花黄色素对血管平滑肌细胞的增殖具有抑制作用。张前等通过鸡胚尿囊膜血管实验及RTPCR实验,得出HYSA能显著抑制鸡胚尿囊膜新生血管的生成，其作用机理之一是通过抑制bGF、VEGF及VEGFR(flt 1)的RNA表达来实现。1.3.2.4耐缺氧 红花能解除血管平滑肌的痉挛并增强耐缺氧能力。红花醇提液对结扎大鼠总动脉所致的急性缺血所致缺氧脑病有保护作用。sY具有缓解异丙肾上腺素所致心肌缺血大鼠心功能下降的作用，并有显著的耐缺氧、抗疲劳作用，能明显延长动物的存活时间，并增加离体家兔心脏和心肌缺氧的冠脉流量，改善心脏的缺氧、缺血病理状态。1.3.3 红花的临床应用
7、1.3.3.1红花制剂治疗心血管疾病 红花注射液能改善血液黏度、血 小板黏附率聚集率降低，抗凝、纤溶水平提高。临床上红花注射 液可以明显改善冠心病心绞痛的症状和缺血性心电图改变。柳德 学等用红花注射液治疗急性心肌梗死患者158例，其中对照 组76例，应用一般扩血管抗心绞痛常规治疗，治疗组82例，在常 规治疗的基础上加用红花注射液。结果显示两组心电图恢复率分 别为62.9和85.7；心绞痛缓解时间分别为(3.22.2)h和 (2.01.1)h；并发症发生率分别为31.6%和14.6%，差异均有 显著性（P0.05）。王瑷芬等观察红花注射液临床疗效，对 126例冠心病心绞痛心肌缺血患者分红花组和丹
8、参组治疗，疗程 2周。结果显示红花、丹参均可明显改善冠心病心绞痛心肌缺血 相应的临床症状和心电图改变，以红花疗效显著。红花还有降血 糖、血脂的作用，显著改善血液流变学指标。1.3.3.2红花制剂治疗糖尿病的并发症 糖尿病是由于胰岛内分泌 功能不足所致，其基础病变是周围小血管的病变。鉴于红花制剂 对血管内皮细胞增殖的抑制作用，毛林华报道用红花注射液 加用爱维治注射液治疗30例糖尿病并发周围动脉粥样硬化闭塞 症并用爱维治注射液治疗30例作对照。20d疗程后治疗组显效 率为73.3，对照组为53.3(P0.05)。观察到全血高切黏度、 全血低切黏度、血浆比黏度、纤维蛋白原和血液流变学指标改善 均优于
9、对照组。 糖尿病肾病就其发病机制而言属糖尿病合并小血管病变，赵 弋于、王洪坤等应用红花注射液治疗糖尿病肾病，观察到肾 病改善外还分别观察到高黏血症改善和尿液中微量白蛋白排泄 减少。 应用红花注射液治疗糖尿病周围神经病变， 并观察红花注射液对患者肌电图、空腹血糖、糖化血红蛋白、6- 酮前列环素Fla、内皮素、血栓素等指标的影响。结果显示对糖尿 病周围神经病变的显效率明显高于用山莨菪碱治疗的对照组，治 疗组在治疗后周围神经传导速度明显改善，空腹血糖、糖化血红 蛋白有所下降、内皮素和血栓素B2显著下降。并推测其机制与 改善患者血管内皮细胞功能有关。2 仪器与药品2.1 实验仪器CP224S型分析天平
10、 北京赛多利斯仪器系统有限公司高速万能粉碎机 天津泰斯特仪器有限公司T6新世纪紫外可见分光光度计 北京普析通用仪器有限责任公司电热恒温水浴锅 上海跃进医药器械厂电热恒温鼓风干燥箱 上海申贤恒温设备厂循环水真空泵 郑州杜甫仪器厂2.2 实验试剂与药品芦丁对照品（中国生物制品鉴定所）新疆红花（1号）购自宝丰药店；新疆红花（2号）购自海晖医药连锁；新疆红花（3号）购自红旗大药房。无水乙醇、石油醚、氢氧化钠、亚硝酸钠、硝酸铝均为分析纯。水为蒸馏水。3 方法与结果3.1 性状3.1.1 正品红花性状特征3.1.1鉴定评价市售红花的质量 不带子房的管状花，黄红色或红色，花冠筒细长，先端5列花药聚合成筒状，
11、黄白色；柱头长圆柱形，露出于花药筒外，顶端微分叉。质轻，柔软。气微香，味微苦。将花浸入水中，水染成金黄色。3.1.2 伪品红花性状特征 表面橙黄色、深红色或鲜红色，黄色不显明，大部分表面沾附有细小红色颗粒状物质，多数粘结成团，疏松性差手握无弹性，质较重，湿润感明显，有异样气味，用开水一冲即浑浊，放置后有白色沉淀析出。3.1.3 鉴别方法 气味法:红花微有清香气味，无其它特殊怪味。掺假红花清香气味被掩盖或减弱，伴随有油臭腐败味。如掺油量大，密封时间长，则腐味更浓。手摸：手握红花较柔软，手不染色，不粘附泥沙杂质。掺假红花手握较油润，手染有红色斑点，并粘有较多的泥沙颗粒(重金属粉)。取掺假红花少许用
12、放大镜观察，其间夹附很多灰白色或黑色颗粒(重金属粉)。 水试法: 取红花及其伪品粉末各0. 5g,分别加水15 ml, 浸渍数分钟,滤过。滤液置比色管中,日光下检视, 红花滤液显黄色,伪品红花滤液显橘红色。3.2 显微鉴别评价市售红花的质量3.2.1 正品红花显微特征 分泌细胞：呈长管道状，胞腔内充满黄棕色至红棕色分泌物。 花冠裂片表皮细胞：表面观呈长方形或长条形，顶端表皮细胞呈短绒毛状。花柱碎片：表皮细胞分化成单细胞毛，呈圆锥形，先端尖。花粉粒：类球形或长球形，具3个萌发孔，外壁有刺齿及疣状雕纹。3.2.2 伪品红花显微特征 红花有其独特的花粉粒及表皮外壁突出呈乳头状或绒毛状，这些都是伪品没
13、有的。3.2.3 鉴别方法 表皮细胞表面观长条形，壁薄，微弯曲，有的外壁突出成乳头状或绒毛状，表面隐约可见纤细纹理。柱头顶端表皮细胞绒毛状，表面有稀疏纹理。草酸钙结晶聚集于壁薄细胞中，呈颗粒状圆柱状梭形或类方形，直径214。花粉粒少见，成圆球形。 3.3紫外-可见分光光度法测定市售红花中总黄酮的含量3.3.1 对照品和供试品溶液制备3.3.1.1对照品溶液制备精密称取芦丁对照品5.00 mg，置50ml容量瓶中，用60乙醇溶液溶解定容 ，配成浓度为 01mgm的对照品溶液。3.3.1.2供试品溶液制备 从 3个红花样品中各取 1 g，粉碎(40目)，得红花粗粉。在250 ml圆底烧瓶中加入经称
14、量的 100 g的红花粉末 ，并标号 1，2，3。加入 60的乙醇溶液加至瓶颈处，超声分离三十分钟，冷却至室温，用60的乙醇定容至 100 ml容量瓶备用。3.3.2 线性关系考察 精密移取芦丁对照品溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0mL分别置于10mL比色管中，加60%乙醇稀释至5.0ml。以60%乙醇溶液5ml为空白，分别加入5%的亚硝酸钠0.3 ml，摇匀，静置6 min，加入10%硝酸铝溶液0.3 ml，摇匀，静置6 min后再加入4%的氢氧化钠溶液4 ml，再加60%的乙醇0.4ml，摇匀，静置12 min后，在510 nm下测定。以吸光度值A为纵坐标，芦丁浓度C（mg/mL
15、）为横坐标，进行线性回归，得回归方程y = 12.16x - 0.0138, R2 = 0.9977。结果表明芦丁在0.010.05mg/ml范围内线性关系良好。芦丁标准曲线数据12345吸光度A0.110.2350.3350.4790.596浓度C（mg/ml）0.010.020.030.040.053.3.3 方法学考察3.3.3.1 精密度试验 取芦丁对照品实验，加60%乙醇稀释至5 .0ml，加入5%NaNO2 0.3 ml，摇匀，静置6 min，再加10%AlNO 30.3 ml，摇匀，静置6 min，再加4%NaOH 4.0 ml，再加0.4 ml60% 乙醇，摇匀，静置12 mi
16、n。于510 nm波长下测定吸光度值，重复测定6次，计算其相对标准偏差。结果为RSD为0.2.00%，本实验精密度良好。精密度试验数据（选取红旗红花样品，2ml）123456RSD（%）吸光度A0.2740.2730.2730.2740.2740.2730.200%3.3.3.2 稳定性试验 以海晖药店红花所制溶液做稳定性测试, 用3.3.2方法进行测定, 在60min内,每隔10min 测定一次其吸光度。由其数据可以看出在510nm 波长测定黄酮总含量时, 吸光度稳定, 说明实验的稳定性良好。 稳定性实验结果（以人民晖辉为标准）稳定性试验数据（选取海晖红花样品，2ml）,每隔10min测一次
17、0102030405060RSD（%）吸光度A0.4370.4130.4070.4600.4090.4040.4003.06%3.3.3.3 重复性试验以人民同泰药店红花所制溶液做重复性测试, 用3.3.2方法进行测定,在其最大吸收波长处测定吸光度值，由其数据可以看出在510nm波长测定黄酮总含量时, 吸光度稳定, 说明实验的重复性良好。 稳定性实验结果（以人民同泰为标准）序号123456RSD(%)A0. 2610.2480.2390.2360.250 0.237 3.96%3.3.3.4 回收率试验 以红花总黄酮提取物制备的样品溶液为供样液, 精密量取已知总黄酮含量的样品溶液110ml 、
18、115ml 、2ml 、215ml 、3ml , 分置10ml 比色管中, 加入芦丁对照品溶液110ml 。混匀后, 按3.3.2方法测定.序号123456RSD（%）称取样品量（g）0.10.120.110.120.10.11.11%供试品中含有量（mg）2.63.122.863.122.62.6对照品加入量（mg）2.532.83.12.62.5测定总黄酮的量（mg）5.0786.00695.61946.14845.13455.073回收率（%）99.12%96.23%98.55%97.69%97.48%98.92%3.3.4 市售红花含量测定 取已制备好的3份样品溶液测定，以60%乙醇为
19、空白溶液，在510nm处测定。每个样品重复测定3次。总黄酮含量以芦丁计，根据标准曲线计算总黄酮含量。结果为人民同泰新疆红花总黄酮含量为1.48%,海晖医药连锁新疆红花总黄酮含量为1.85%,红旗大药房新疆红花总黄酮含量为1.28%。三家药店中海晖的红花总黄酮含量较高。表2；红花总黄酮含量测定结果样品吸光度A1吸光度A2吸光度A3平均值A总黄酮含量(%)海 晖0.4370.4380.4400.4381.76%人民同泰0.2610.2480.2500.2531.08%红 旗0.2730.2950.2900.2861.22% 4 讨 论 红花是临床中常用的一种中药材，由于其价格较高，市场上不法分子不
20、顾药材的质量，不择手段，造假作假。黄酮类化合物是红花中最主要的化学成分之一。本文建立采用分光光度法测定红花中总黄酮的含量，精密度、稳定性良好，结果可信，为新疆红花中总黄酮的含量测定提供了一种简便可行的方法，为新疆红花的质量控制提供了评价手段。三家药店中海晖的红花总黄酮含量较高。海晖医药连锁新疆红花总黄酮含量为1.76%，红旗大药房新疆红花总黄酮含量为1.22%，人民同泰新疆红花总黄酮含量为1.08%。参考文献1金 鸣，王玉芹，李家实，等.红花中黄酮醇类成分的分离和鉴定J.中草药，2003,34(4):306.2张 戈，郭美丽，李 颖，等. 红花化学成分研究() J.第二军医大学学报，2005,
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