1、实验诊断学实验报告实验诊断学试验操作报告一、二、红细胞计数试验血红蛋白测定三、白细胞计数四、白细胞分类计数五、尿比重六、尿沉渣定性检查七、尿蛋白检查磺基水杨酸法八、尿干化学分析九、尿葡萄糖定性检查（班氏法）十、ABO血型测定红细胞计数试验实验目的： 通过红细胞计数实验1、掌握红细胞计数方原理、方法及注意事项。2、掌握血细胞计数板的结构试验器材： 血细胞计数板、显微镜、盖玻片、试管、血红蛋白吸管、 生理盐水实验原理： 一定量的血液经一定量等渗性稀释液稀释后，充入血细胞计数池中显微镜下 计数一定容积内的细胞，再换算成每升标本的细胞数报告。操作步骤： 1、取红细胞稀释液 2.0ml 毫升，放入一小试
2、管内。2、用血红蛋白吸管吸血至 l0ul 处。3、擦去管尖外部余血将血液迅速轻轻吹入盛有红细胞稀释液的试管内， 上清液嗽洗吸管 2-3 次，立即摇匀。4、将计数池与盖玻片用软布料擦净，将盖玻片覆盖于计数池上。5、用吸管吸取混匀的红细胞悬液，充入计数池中。6、待 23 分钟，让红细胞完全下沉后，将计数板平放在显微镜台上，用低 倍镜观察，如红细胞分布均匀即可换高倍镜进行计数。红细胞计数的区域： 中心大方格中的 5 个中方格 （正中一个和四角各一个 ）。计数原则： 数上不数下， 数左不数右的计数原则即凡压在中方格边线 （双线 ）上的红细胞，只计上侧与左侧线上的细胞，而压在下侧与右侧线上者不计入。计算
3、： 答案不唯一，言之有理即可红细胞数 /L=5 个中方格内红细胞数 5 10201106或红细胞数 /L=5 个中方格内红细胞数 100 1012式中 5 10 201 1065 个中方格换算成 1 个大方格1 个大方格容积为 0.1ul ，换算成 1.0 uL。 血液的稀释倍数由 u1 换算成 L数据处理：参考值12RBC: l0 12/L12 男 :（4 5.5） 10 12/L 女：（3.5 5）10 12/L 新生儿：（ 6 7） 10 12/L注意事项： 1、吸管、试管要注意清洁、干燥以防溶血，操作迅速避免血液凝固，如有血 凝块应重新采血。2 充液前，红细胞复液要充分摇匀，红细胞悬液
4、注入计数池内要求分布均匀， 不可有气泡，亦不可有多余液体外溢。3、中方格内红细胞分布应均匀， 健康成人每中方格红细胞数约为 80100 个，各中方格内之红细胞相近，如悬殊过大 （超过 10 个细胞以上的 ）应重混匀再充填。血红蛋白测定实验目的：通过血红蛋白测定1、氰化高铁血红蛋白比色法原理及技术。2、掌握红血红蛋白测定的原理、方法及注意事项。试验仪器：试管、微量吸管、分光光度计实验原理： 血红蛋白中的亚铁离子（ Fe2+）被高铁氰化钾氧化成高离子（ Fe3+），血红蛋 白转化成高铁血红蛋白，高铁血红蛋白与氰离子（ CN-）结合，生成稳定的氰化高铁血红蛋白。用光电比色计在 540nm 波长比色。
5、从 HicN参考液制作的标准曲线上读取血红 蛋白克数。操作步骤： 1、取试剂 5 毫升加入血液 20ul 混匀置 5 分钟2、用 721 光电比色仪， 540nm 波长，试剂为空白调 0 点比色，读取 光密度，查标准曲线得结果。计算：血红蛋白（ g/L ）=测定管吸光度 367.7数据处理：答案不唯一，言之有理即可Hb ：gL参考值 男 0.40 0.54L/L女: 0.37 0.48L/L儿童： 0.35 0.49L/L新生儿： 0.50 0.60L/L注意事项：1、做血红蛋白测定，白细胞计数和分类计数，在采血时应先做血膜再做红细胞，然后做白细胞，血红蛋白检验，避免红细胞破坏。白细胞计数实验
6、目的：掌握白细胞计数显微镜计数法原理及技术。实验器材：显微镜、微量吸管、计数板、盖玻片、白细胞稀释液。实验原理：数一用稀醋酸液将血液稀释并破坏红细胞，混匀后充入计数池中，于显微镜下计定体积内的白细胞数，经过换算求得每升血液内的白细胞数。操作步骤：1、取试管 1 支，加白细胞稀释液 0.38ml 。2、用清洁干燥的微量吸管准确吸取末梢血 20 微升或抗凝血 20 微升。3、擦去管尖外部余血、 轻轻注入稀释液底部， 再吸取上清液清洗 3 次，摇匀。4、将计数板与盖玻片用软布擦净，将盖玻片覆盖于计数池上，再用微量吸管吸取悬液， 充入计数池与盖玻片间的细缝隙中， 静止 2-3 分钟， 待白细胞 下沉。
7、5、用低倍镜计数四角的四个大方格内的白细胞数。计算：（四个大方格内 WBC 数/4）1020 106 =WBC数/20109/升数据处理：答案不唯一，言之有理即可 正常参考值：成 人：（4-10） 109/升 新生儿：（ 15-20） 109/升 6 月-2 岁：（ 11-12 ） 109/升白细胞分类计数实验器材： 显微镜、染色缸和架，载玻片、瑞氏染液、香柏油、二甲苯。实验原理： 把血液制成细胞分布均匀的薄膜涂片，经 wright 染色后，显微镜下观察，根 据白细胞形态特点逐个分类计数。得出各种白细胞的相对比值，并注意观察其形态 和质量的变化。操作步骤： 1、取末梢血 1 滴。置于载玻片的一
8、端，以边缘平滑的推片制成血涂片，空 气干燥。2、用蜡笔在血膜两端划线，以防染液溢出，然后将血片放于染色架上。3、先加瑞氏染液数滴，使其覆盖整个血膜，固定染色细胞 0.5-1 分钟。4、按 1：1或 1：2加缓冲液与染料混匀，染色 10分钟左右。5、在血膜染 10 分钟后，用缓冲液或接近中性的水冲去洗液，待自然 干燥或滤纸吸干后，用镜油观察。计算： 1、先用低倍镜观察血片染色情况，白细胞多少和细胞分布情况。 2、选择血涂片的体尾交界处，染色良好的区域，在油镜下计数100-200 个白细胞， 按其形态特征进行分类计数， 求出各自白细胞所占数值 （百分率） 。 3、白细胞分类计数方法很多，常用的有，
9、完全记录法、半记录法、 分类计数器计数法。4、每个病人应分类白细胞数，视白细胞总数多少而定。5、各类细胞所占的百分率乘以白细胞总数 / 升，既得每升血液中各类白细胞的度。数据处理：答案不唯一，言之有理即可操作步骤：尿比重实验器材：比密计、比密桶实验原理： 尿液比密与所含溶质成正比，溶质越多，尿比密越高，对浮标的浮力越大，侵入尿液的比重计部分则越小，读数越大；反之，读数越小。1、充分混匀尿液后，沿管壁缓慢倒入小量杯中2、比重计放入杯中使悬浮于中央，勿触及杯壁或杯底3、比重计停稳后读取尿液凹面相切的刻度，即为被测尿液的比重注意事项：1、尿比密计必须经过校正，应用纯水在规定温度下观察比重是否标准将结
10、果增加 0.001 ，每低 3则减去 0.0013、尿内含 Pr 和 Glu 时的修正：每 10g/L 蛋白质将比密减 0.003， 10g/L 葡萄糖将 比密减 0.0044、盐类沉淀的处理，将尿标本加温使盐类溶解，测定数据处理： 答案不唯一，言之有理即可尿沉渣定性检查实验操作：1、取新鲜尿液 10ml 于试管内 1500r/min5 分钟。0.2ml ，轻轻离心使尿沉渣有形成2、待离心机停后，取出离心管，弃去上清液。留下 分混匀。3、取沉淀于玻片上镜检。结果判断：用 1010 倍，观察其中有形成分管型， 1040 倍观察细胞成分和计数，观察 10个视野管型计数 20 个视野。参考值：1、细
11、胞成分：最低 -最高值 /HPRBC 0-3/HP WBC 0-5 个/HP2、管型（透明） ：平均值 /LP3、尿结晶和盐类数量以每一高倍镜视野（） （ 2 ）（ 3 ）报告三、注意事项：1、清晨空腹第一次尿应在 1h 内送检2、准备干净，干燥尿杯，留取中段尿，尿液细胞及管型的计数。 Addis 1h 尿沉渣计数 四、标本收集： 患者先排尿弃去准确收集 3h 尿液于清洁干燥器内 （标本留取 5：30-8： 30）五、实验操作：准备侧量 3h 尿量，充分混匀取尿液 10ml，1500r/min 5 分钟，用吸管吸取上层 尿液 9ml 留取 1ml，吸取混匀尿液 1 滴注入计数盘中， cal 计
12、数 10 大方格，管型 20 个大方 格。六、计算：1 小时细胞 =10 个大方格细胞总数（ 1000/10 ）（ 3h 尿量 /3 ） 1小时 Cost计数=（20个大方格管型数 /2） （1000/10） （ 3h 尿量/3） 式中 1000 为微升换算成毫升数， 10 为尿液浓缩倍数答案不唯一，言之有理即可七、实验注意事项：1、尿液新鲜 PH值应在 6 以下。2、被检尿 SG在 1.026 以下如 1.016 的为低渗尿易破坏 cell 。3、尿中有磷酸盐时应加少量冰乙酸，但勿加过多，使 cell 管型溶解。尿蛋白检查磺基水杨酸法实验原理：磺基水杨酸为生物碱试剂，在酸性磺酸根阴离子上蛋白
13、质氨基的阳离子结合成不溶性蛋白盐沉淀。实验试剂：磺基水杨酸溶液三、实验方法：取试管 1 只加入澄清尿液 2-3ml 滴加磺基水杨酸试剂 0.1ml 立即轻轻摇匀 1分钟 内观察结果。实验结果判断：阴性（） ：清晰透明 微量（） ： 黑色背景下仅见轻度浑浊弱阳性（） ： 明显白雾状浑浊，无颗粒阳性（ ）： 明显浑浊并出现颗粒强阳性（ ）： 白雾性不明显浑浊并有小块状物 最强阳性（ ）：严重浑浊并大量凝块。尿干化学分析测试项目：尿胆原、胆红素、酮体、隐血、蛋白质、葡萄糖、 酸碱度、亚硝酸盐。实验原理：1、空白（校正块） ：尿在试纸块上分布的状态及尿本身的颜色，一般都会给测定结果带来 误差，设空白块
14、就是为了排除这些产生误差的因素，各项目都使用同一空白块。2、酸碱度：通过 pH 指示剂测定 4.5-9 的范围内的 pH 值，正常人的新鲜尿液 pH 值在 5-7 之间。3、亚硝酸盐：反应依赖于尿中革兰氏阴性细菌把硝酸盐还原成亚硝酸盐，亚硝酸盐与对氨 基苯砷酸反应生成重氮化合物，重氮化合物再与萘基乙二胺二盐酸结合呈现出桃红色。4、葡萄糖：根据葡萄糖氧化酶法反应原理，葡糖糖氧化酶特异性氧化 -D-葡糖糖，生成葡糖糖醛酸和过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶的作用下，使指示剂氧化而呈现出蓝色。5、蛋白质：根据指示剂蛋白误差法原理，蛋白质与染料结合形成复合物产生变色，特别是 对白蛋白的反应比对球蛋白、血红
15、蛋白、本 - 周氏蛋白和粘蛋白更为灵敏。6、隐血：根据血红蛋白接触活性法原理，通过血红蛋白的类过氧化物酶样作用催化分解过 氧化物，使邻联甲苯胺氧化呈色。7、胆红素：根据偶氮偶合法的原理， 2，4-二氯苯氨重氮盐与胆红素进行特异性反应，并与 胆红素的浓度相对应产生不同的颜色。8、尿胆原：根据偶氮结合法的原理，尿胆原在强酸条件下和重氮盐偶联形成胭脂红色素。9、酮体：根据硝普酸钠法原理，硝普酸钠和酮体在碱性条件下相互作用而呈现紫色，特别 是乙酰乙酸对此特别灵敏。实验操作：1、测试条件：环境温度（ 255），相对湿度 80 ，推荐最佳测试温度 23-27 .2、取一试纸条，拿住试纸条印有厂标的一端，把
16、试纸条完全侵入尿样中， 2 秒钟后取出。3、在卫生纸上蘸掉试纸条边缘多余的尿液后再放入仪器中进行测定。项目参考范围酸碱度5.5-7.0亚硝酸盐0umol/L葡萄糖2.8mmol/L蛋白质0.15g/L隐血10cells/uL胆红素0umol/L尿胆原3.2-16umol/L酮体0mmol/L尿葡萄糖定性检查（班氏法）实验目的： 掌握尿葡萄糖定性的班氏法。实验原理：葡萄糖或其他还原性糖的醛基在热碱性溶液中，能将班氏试剂的蓝色硫酸铜还原 为黄色的氢氧化铜，进而形成红色氧化亚铜沉淀。实验器材：试管架、中试管、滴管、试管夹、酒精灯、班氏试剂实验操作：1、鉴定班氏试剂质量：取试管一支，加入班氏试剂 2.
17、0ml ，摇动试管徐徐加热至沸腾，观察试剂有无颜色及性状变化，若试剂仍为透明蓝色，可进行以下实验。2、加尿液：向班氏试剂中加离心后的尿液 0.2ml （约 4 滴），混匀。3、加热沸腾：继续煮沸 1-2min ，或置沸水浴 5min ，自然冷却。4、判断结果：见下表 Benidict 糖定性实验结果判定答案不唯一，言之有理即可ABO 血型测定一、实验目的：掌握 ABO 血型测定原理及技术。、实验原理： 红细胞血型抗原与相应抗体特异性结合，可发生凝集反应，通过正反定 型试验来确定 ABO 血型。三、实验器材：载玻片、微量吸管、抗 A 抗 B 试剂四、实验操作：玻片法；抗 A 试剂、抗 B 试剂分别与受检者全血结合，按照有无凝集判定结果。五、试验结果：答案不唯一，言之有理即可仪之飞儿
