1、中图版 微生物培养技术 单元测试5微生物培养技术学校:_姓名：_班级：_考号：_一、选择题（每题3分，共60分）1下列有关菌落的表述，不正确的是A每个菌落可由一种或多种细菌大量繁殖而成B各种霉菌在面包上生长形成不同颜色的斑块也是菌落C噬菌体能使固体培养基上的细菌裂解，菌落变得透明D细菌和真菌在培养基上形成的菌落形态不同【答案】A【解析】试题分析：菌落（colony）是由单个细菌（或其他微生物）细胞或一堆同种细胞在适宜固体培养基表面或内部生长繁殖到一定程度，形成肉眼可见的子细胞群落，故A错误。考点：本题考查菌落的相关知识，意在考查考生的理解应用能力。2利用稀释涂布平板法纯化大肠杆菌，经培养后发现
2、培养基上出现多种菌落，不可能的原因是A. 培养基制备过程中被杂菌污染B. 使用涂布器时未将菌液涂布均匀C. 接种过程中，无菌操作不符合要求D. 系列稀释时，未在酒精灯火焰附近操作【答案】B【解析】出现杂交污染的可能原因有：培养基制备过程中被杂菌污染；接种过程中，无菌操作不符合要求；系列稀释时，无菌操作不符合要求等，ACD正确；使用涂布器时涂布不均匀会导致菌落分布比较集中，不会导致杂菌污染，B错误。【点睛】微生物接种时应该在酒精灯火焰附近进行，因为酒精灯火焰附近温度较高而不含有微生物。3有关微生物营养物质叙述正确的是A. 无机氮源不可能提供能量B. 无机碳源不可能提供能量C. 除水以外的无机物只
3、提供无机盐D. 是氮源的物质不可能同时是碳源【答案】B【解析】无机氮提供能量的情况还是存在的，如NH3可为硝化细菌提供能量和氮源，A错误；有机碳源才能提供能量，B正确；除水以外的无机物种类繁多、功能也多样如CO2，可作自养型微生物的碳源；NH4HCO3可作自养型生物的碳源和无机盐；而NaCl则只能提供无机盐，C错误；有的氮源可同时是碳源，如NH4HCO3，D错误。4下列实验中，最合适用标志重捕法的是A. 调查农田中田鼠的种群密度B. 调查农田中田螺的种群密度C. 调查土壤中蚯蚓的种群密度D. 调查自来水中大肠杆菌的种群密度【答案】A【解析】标志重捕法适用于调查活动范围较大的动物，可用于调查农田
4、中田鼠的种群密度；田螺、蚯蚓活动范围不大，调查可用样方法；调查自来水中大肠杆菌的种群密度可用微生物培养、计数的方法。5（2009汕头二模）如图表示某种细菌（野生型）细胞内发生的从XY的物质转化反应，此过程的代谢产物均是细菌生活所必需的，E1E4分别表示四种酶野生菌的物质X来自于环境该种细菌的突变型IIV分别缺乏酶E1E4，分别配制的培养这些细菌的培养基不合理的是（ ）A.野生型细菌的培养基需含有物质XB.突变型I需要添加物质A，培养基无需含有XC.突变型II需要添加物质B，培养基需含有XD.突变型III仅需添加物质C，突变型IV仅需添加物质Y【答案】D【解析】试题分析：分析题意可知野生型细菌必
5、须从外界获取物质X并转化成Y才能存活，故用培养基培养时需加入物质X，细菌的突变型IIV分别缺乏酶E1E4，说明单独在培养基中培养时，分别加入物质才能存活解：A、野生型细菌必须从外界获取物质X并转化成Y才能存活，故用培养基培养时需加入物质X，A正确；B、突变型I缺少酶E1不能合成A，故培养时需添加物质A，B正确；C、突变型II缺少酶E2不能合成B，培养时需添加B，又因从XY的物质转化反应，此过程的代谢产物均是细菌生活所必需的，故还需要在培养基中添加X，C正确；D、突变型III缺少酶E3不能合成物质C，需要从外界添加，并且还需要添加X，D错误故选：D点评：通过酶的调节来考查微生物的代谢，考查考生读
6、图的能力，考生需仔细审题，认真分析，特别是从XY的物质转化反应，这过程的代谢产物均是细菌生活所必需的，这点考生容易忽略6某同学在稀释倍数为106的培养基中，测得3个平板上平均菌落数为234，那么2升样品中的菌株数是(涂布平板时所用稀释液的体积为0.1 毫升)A. 1.17109 B. 2.34109C. 4.681012 D. 46.8【答案】C【解析】已知平板上菌落数的平均值=234，稀释倍数=106，所以每毫升样品中的菌落数=平板上菌落数的平均值体积稀释倍数=2340.1106=2.34109，因此2升中的菌株数为=2.341092103= 4.681012 ，故C正确。【点睛】牢记活菌计
7、数法的计算公式：每克样品中的菌株数=（cV）M，其中c代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL），M代表稀释倍数。7采用干热灭菌、灼烧灭菌、高压蒸汽灭菌、紫外线照射等几种方法，可分别杀死哪些部位的杂菌()A. 接种环、吸管、培养基、接种室B. 吸管、接种环、培养基、接种箱C. 培养基、接种环、吸管、接种箱D. 培养皿、吸管、培养基、双手【答案】B【解析】接种环属于接种用的金属工具，需要用灼烧灭菌；吸管在使用前保持干燥，需要用干热灭菌；培养基应该用高压蒸汽灭菌；接种室、接种箱需要用紫外线照射灭菌；双手可以用医用酒精消毒；综上所述，选B。【点睛】总结常见灭菌
8、方法的应用：高压蒸汽灭菌适用于对一般培养基和玻璃器皿的灭菌；干热灭菌适用于需要保持干燥的空玻璃器皿的灭菌，凡带有橡胶的物品和培养基，都不能进行干热灭菌；无菌室缓冲间和接种箱常用紫外线灯作空气灭菌；微生物接种时的金属接种工具和试管口可以用灼烧灭菌。8（2004江苏）通过选择培养基可以从混杂的微生物群体中分离出所需的微生物在缺乏氮源的培养基上大部分微生物无法生长；在培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌；在培养基中加入10%酚可以抑制细菌和霉菌利用下述方法能从混杂的微生物群体中分别分离出（ ）A.大肠杆菌 B.霉菌 C.放线菌 D.固氮细菌【答案】BCD【解析】试题分析：选择培养基的原理是：不同微
9、生物在代谢过程中所需要的营养物质和环境不同有的适于酸性环境，有的适于碱性环境；不同微生物对某些化学药品的抵抗力不同利用这些特点，我们便可配制出适于某些微生物生长而抑制其他微生物的选择培养基例如从土壤中分离放线菌时，可在培养基中加入10%的酚数滴，抑制细菌和真菌的生长；如培养酵母菌和霉菌，可在培养基中加入青霉素；培养金黄色葡萄球菌，可在培养基中加入高浓度的食盐解：A、大肠杆菌需要氮源、青霉素抑制大肠杆菌生长、酚也是抑制细菌的生长，A错误；B、霉菌是真菌，在培养基中加入青霉素后，青霉素可以抑制细菌和放线菌，但是不抑制真菌，所以加入青霉素的培养基可以选择出霉菌，B正确；C、培养基中加入10%酚可以抑
10、制细菌和霉菌，所以可以筛选放线菌，C正确；D、固氮菌的氮源氮气，在培养基中不需要氮源，所以缺乏氮源的培养基上大部分微生物无法生长，但是固氮细菌可以生长，D正确故选：B、C、D点评：本题的知识点是培养基对微生物的选择作用，加青霉素、苯酚、不含氮源的培养基都会对微生物的选择作用，主要考查学生对选择培养基的选择作用的理解和应用能力9（2014西安一模）2013年7月23日，央视记者分别在北京崇文门附近的麦当劳、肯德基以及真功夫3家大型快餐店取回可食用冰块进行抽样检测检测结果显示：3家快餐店食用冰块菌落总数严重超标下列说法正确的是（ ）A.肉毒杆菌有毒，可在其中加入硫酸铜使其变性后食用B.肉毒杆菌在体
11、内水解生成的氨基酸不能成为人体重要的营养物质C.大肠杆菌分子中不一定含羧基和氨基D.出血性大肠杆菌和油脂均为能水解的高分子化合物【答案】B【解析】试题分析：肉毒杆菌产生的肉毒毒素能阻断神经递质的传递，对人体有毒害作用，故在体内水解生成的氨基酸不能成为人体重要的营养物质，大肠杆菌含有蛋白质，故一定含羧基和氨基，油脂能水解，但不是高分子化合物，铜为重金属，有毒，加入后不能再食用解：A、铜为重金属，有毒，加入后不能再食用，A错误；B、肉毒杆菌产生的肉毒毒素能阻断神经递质的传递，对人体有毒害作用，故在体内水解生成的氨基酸不能成为人体重要的营养物质，B正确；C、大肠杆菌含有蛋白质，故一定含羧基和氨基，C
12、错误；D、油脂能水解，但不是高分子化合物，D错误故选：B点评：本题考查了生物中的微生物及其影响，意在考查学生的识记和理解能力，试题难度中等10（2014凉山州模拟）微生物需要从外界吸收营养物质并通过代谢来维持正常的生长和繁殖，下列与此有关的说法正确的是（ ）A.以尿素为唯一氮源的培养基上长出的一定是能分解尿素的细菌B.有的氮源可以作为细菌的能源物质C.加入酚红试剂的选择培养基，可以筛选能分解尿素的细菌D.大肠杆菌与硝化细菌所利用的碳源是相同的【答案】B【解析】试题分析：微生物的营养物质：水、碳源、氮源、无机盐、生长因子自养型的微生物以CO2作为碳素营养在细胞内合成有机物质，故不需要向它们提供现
13、成的有机碳化物作为碳素营养N源物质主要用做微生物合成含氮有机物质，一般不用做能源少数自养菌以NH4+作为氮源和能源解：A、以尿素为唯一氮源的培养基上长出的不都是尿素分解菌，还有可能是自生固氮菌，A错误；B、硝化细菌细菌是以NH3作为氮源和能源物质的，B正确；C、加入以尿素为唯一氮源的选择培养基，可以筛选能分解尿素的细菌，C错误；D、大肠杆菌利用的有机碳源，而硝化细菌可以利用无机碳源，D错误故选：B点评：本题考查了微生物分离与培养以及培养基对微生物的选择作用的相关知识，考生要能够识记一些特殊微生物的代谢类型，如硝化细菌能够利用无机NH3作为氮源和能源物质的，并能能够进行化能合成作用利用无机碳源；
14、部分细菌能够分解尿素等11将硝化细菌接种到下列培养基中，其中可以长出硝化细菌菌落的是()。A无氮培养基，试管密闭B无氮培养基，试管口用棉塞塞住C含氮培养基，试管密闭D含氮培养基，试管口用棉塞塞住【答案】D【解析】培养微生物的培养基应有碳源、氮源、水、无机盐、生长因子等营养物质，在提供主要营养物质的基础上，培养基还需满足微生物对pH、氧气等要求。硝化细菌是自养需氧型微生物，利用无机氮源，因此培养硝化细菌需含氮的培养基，试管口用棉塞塞住。12下列实验材料、试剂等，不必放入冰箱的是A. 层析光合色素后的滤纸 B. 长期保存得到的菌种C. 用于粗提取DNA的酒精 D. 保存PCR所需的Taq酶【答案】
15、A【解析】A. 层析光合色素后的滤纸不必放入冰箱，A符合题意；B. 长期保存得到的菌种需要放在低温条件下保持，B不符合题意；C. 用于粗提取DNA的酒精是冷却的，C不符合题意；D. 保存PCR所需的Taq酶，酶的保存需要低温条件，D不符合题意。故选A。13（2010桂林二模）下列有关叙述与细菌生长曲线相符的是（ ）A.细菌只有接种于固体培养基上，才能表现出图示生长曲线B.图中1时期大量合成酶、ATP及其他细胞成分C.图中3时期的细菌不再进行增殖D.图中4时期是获取次级代谢产物的最佳时期【答案】B【解析】试题分析：将生长曲线粗分为4个时期：调整期、对数期、稳定期、衰亡期（1）调整期：刚刚接种到培
16、养液中的细菌，由于新旧环境差异，在细菌的细胞内就要重新合成相应的诱导酶，以适应新环境（2）对数期：一方面，调整期为细胞分裂做了充分准备另一方面，营养物质丰富，空间宽裕，PH、温度、O2均适宜，即细胞处于无任何环境阻力的理想条件下；微生物个体间无种内竞争，种群年龄组成为增长型，绝大多数细菌细胞内合成代谢远远大于分解代谢因此出生率远远大于死亡率，导致种群密度上升，出现“J型生长曲线”（3）稳定期：随着种群密度增大，营养物的耗尽、有害代谢产物的积累、pH变化，进而使种群进入稳定期，在稳定期，环境阻力明显加大，年龄组成为稳定型，合成代谢=分解代谢，出生率=死亡率，微生物数目达到最高，整个生长曲线呈“S
17、”型（4）衰亡期：营养物质过度消耗，有害代谢产物大量积累、pH剧烈变化，外界环境对继续生长越来越不利，阻力进一步加大，种内竞争剧烈，出生率远远小于死亡率、呈负生长、种群密度显著下降此阶段生长曲线迅速下降解：A、细菌无论接种于固体培养基上还是液体培养基，均能表现出图示生长曲线，A错误；B、刚刚接种到培养液中的细菌，由于新旧环境差异，在细菌的细胞内就要重新合成相应的诱导酶和ATP及其他细胞成分，以适应新环境，B正确；C、进入稳定期后，由于环境条件的改变，繁殖率=死亡率，既有新细胞产生，也有细胞的死亡，活菌数达到最大值，C错误；D、获取次级代谢产物的最佳时期是3稳定期，D错误故选：B点评：本题考查的
18、是微生物生长曲线的有关内容，意在考查学生对微生物代谢知识的掌握情况，以及对相关问题的分析能力14关于平板划线法、稀释涂布平板法叙述错误的是A. 均将大肠杆菌接种在固体培养基的表面B. 获得的每个菌落均是由一个细胞繁殖而来的子细胞群C. 都应在酒精灯火焰附近进行操作，以防止杂菌污染D. 稀释分散菌种的原理不同，均能达到分离纯化大肠杆菌的目的【答案】B【解析】将微生物接种到固体培养基中的方法通常为平板划线法和稀释涂布平板法，A正确；用稀释涂布平板法时，如果稀释得当，在平板表面或琼脂培养基中就可出现分散的单个菌落，这个菌落可能是由一个细菌细胞繁殖形成的，B错误；平板划线法和稀释涂布平板法都应在火焰附
19、近进行操作，以防止杂菌污染，C正确；平板划线法和稀释涂布平板法稀释分散菌种的原理不同，但是能达到分离纯化大肠杆菌的目的，D正确。【点睛】微生物接种时应该在酒精灯火焰附近进行，因为酒精灯火焰附近温度较高而不含有微生物。15下列关于细菌的叙述，错误的是A. 根瘤菌能够固氮，因此是自养型微生物B. 硝化细菌可以利用化学能将CO2转化为有机物C. 在培养基中可以不加碳源进行硝化细菌的培养D. 含伊红美蓝试剂的培养基可以鉴别牛奶中的大肠杆菌【答案】A【解析】根瘤菌只有入侵到豆科植物根内才能固氮，利用豆科植物的有机物，属于异养型微生物，A错误；硝化细菌可以利用氨气氧化释放出的化学能，将二氧化碳和水等无机物
20、转化为有机物，属于生物圈中的生产者，B正确；硝化细菌属于自养型微生物，故培养硝化细菌可以不加碳源，C正确；伊红美蓝是专一鉴定大肠杆菌的指示剂，可以用来鉴别和计数大肠杆菌，D正确。16关于微生物的相关说法正确的是A. 微生物既包含无细胞结构的生物、又包含有细胞结构的生物，既包含原核生物、又包含真核生物，既包含单细胞生物、又包含多细胞生物B. 微生物就是是形体微小、肉眼无法看见的生物C. 芽、芽体、芽孢和孢子都具有繁殖功能D. 煮沸消毒法不能杀死芽孢【答案】A【解析】微生物是指一切肉眼看不到或看不清楚，因而需要借助显微镜观察的微小生物，包含无细胞结构的生物、又包含有细胞结构的生物，既包含原核生物、
21、又包含真核生物，既包含单细胞生物、又包含多细胞生物，A正确，B错误；孢子不具有繁殖功能，C错误；煮沸消毒法能杀死部分芽孢，D错误。【点睛】理清灭菌和消毒的区别：使用强烈的理化因素杀死物体内外一切微生物的细胞、芽孢和孢子的过程称为灭菌，消毒是指用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体体表或内部的一部分微生物的过程。17高温灭菌的原理是()A. 每种微生物生长的最适温度都是一定的B. 微生物对于高温环境不适应C. 高温降低了环境中氧的浓度D. 高温破坏了细胞内的蛋白质、核酸，影响其生命活动【答案】D【解析】高温灭菌的原理是利用高温能破坏了细胞内的蛋白质、核酸，达到影响其生命活动，最终杀灭细菌的目的，所
22、以选D。18（2013丰台区二模）下列有关实验的叙述不正确的是（ ）A.用于筛选杂交瘤细胞的培养基属于鉴别培养基B.诱导外植体脱分化需要用含有蔗糖的培养基避光培养C.平板划线法和稀释涂布平板法均可用于分离纯化菌种D.用稀释涂布平板法统计的菌落数往往比活菌实际数目低【答案】A【解析】试题分析：分析题干可知本题是与实验有关的题目，然后阅读选项，进一步确定与那些具体实验有关，根据没有选项涉及的内容进行分析综合做出判断解：A、鉴别培养基是在培养基中加入某种试剂或化学药品，使培养后会发生某种变化，从而区别不同类型的微生物的培养基用于筛选杂交瘤细胞的培养基不属于鉴别培养基，而应是选择培养基所以A描述错误B
23、、诱导外植体脱分化需要为其提供有机营养如蔗糖，同时需要避光培养所以B选项描述正确C、分离、纯化菌种常用的两种接种方法是平板划线法和稀释涂布平板法所以C描述正确D、在用稀释涂布平板法统计菌落数时，两个或两个以上的细菌连在一起时，往往统计成一个菌落，因此用稀释涂布平板法统计菌落数往往比活菌实际数目低所以D选项描述正确故答案应为：A点评：正确理解鉴别培养基和选择培养基是解决此题的关键19要从多种细菌中分离某种细菌，培养基要用()。A固体培养基B液体培养基C加青霉素的培养基D加入高浓度食盐的培养基【答案】A【解析】固体培养基主要用于微生物的分离、鉴定等；液体培养基用于工业生产；加入青霉素的选择培养基能
24、抑制细菌、放线菌的生长，从而分离酵母菌和霉菌；加入高浓度食盐可抑制多种细菌的生长，可分离金黄色葡萄球菌。本题没说明分离哪种细菌，故应用固体培养基，如在固体培养基上以划线方法接种，然后再分离出某种细菌。20（2013广州三模）为了比较不同清洁剂的抗菌效果，某学生用2种清洁剂在2种不同的家具上进行实验取样后将样品转入培养基中培养一段时间后，对细菌的菌落进行计数 （如下表）下列说法正确的是（ ） 家具表面 清洁剂种类 使用清洁剂前的菌落数 使用清洁剂后的菌落数1柜台a16022水槽a24043柜台b145284水槽b25060A.使用清洁剂前后均需检测细菌数 B.清洁剂a的清洁效果明显好于bC.对细
25、菌的计数采用平板划线法 D.测试前要用清水擦洗水槽和柜台【答案】AB【解析】试题分析：阅读题干和表格可知，本题是微生物培养在生活实践中的应用的题目，先阅读题干找出实验目的，然后分析表格中的实验数据，获取实验结论，然后根据选项描述综合判断解：A、由题意可知，本实验的目的是比较不同清洁剂的抗菌效果，使用清洁剂前后的差值就是清洁剂的杀菌效果；A正确B、分析实验数据可知，不论是柜台还是水槽，使用a清洁剂前后的差值都大于使用b清洁剂前后的差值，这说明清洁剂a的清洁效果明显好于b；B正确C、对细菌计数常用的接种方法是稀释涂布平板法，不是平板划线法；C错误D、因为测试前要检测细水槽和柜台的菌数目，所以不应用
26、清水擦洗水槽和柜台；D错误故应选AB点评：本题的知识点是统计样品菌落数，常用的接种方法，主要考查学生分析处理实验数据获取结论的能力和利用微生物培养的知识设计实验解决生活中相关问题的能力二、综合题（除特别说明外，每空2分，共40分）21人类正在利用纤维素和某微生物产生的酶开发一种新的能源乙醇。请回答相关问题：（1）筛选微生物时，常选择纤维素丰富的环境，原因是含有较多的_（生物）。在筛选此微生物时，人们发现了_染色法，这种方法能够通过颜色反应直接对微生物进行筛选，筛选过程所用的培养基一般采用_法灭菌。（2）从该筛选的微生物体内提取的酶首先要检测_，以便更好地将酶用于生产实践，衡量此酶这一指标可用_
27、表示，在生产葡萄糖的过程中，为了使酶能够被反复利用，可采用_技术。（3）可利用_（微生物）将葡萄糖生产为乙醇，可利用_技术使该微生物中的酶能够重复使用。【答案】 纤维素分解菌 刚果红 高压蒸汽灭菌 酶的活力（活性） 单位时间内产物的增加量（单位时间内底物的减少量） 固定化酶 酵母菌 固定化细胞【解析】试题分析：该题是对分解纤维素的微生物的分离、固定化酶与酵母细胞的固定化的考查，回忆相关的基础知识和实验设计，然后解答问题 (1) 在纤维素丰富的环境中，含有较多的纤维素分解菌。在筛选纤维素分解菌时，人们发现了刚果红染色法，其原理是：刚果红能与培养基中的纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分解后
28、，刚果红-纤维素的复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，因此通过颜色反应可直接对微生物进行筛选。一般采用高压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌。 (2) 从筛选的微生物体内提取的酶首先要检测酶的活力（活性），以便更好地将酶用于生产实践，可用单位时间内产物的增加量（单位时间内底物的减少量）来衡量此酶这一指标，在生产葡萄糖的过程中，采用固定化酶技术，可使酶能够被反复利用。(3) 可利用酵母菌将葡萄糖生产为乙醇，利用固定化细胞技术使该微生物中的酶能够重复使用。22下图表示分离、纯化及保存枯草芽孢杆菌菌株的简要过程，回答下列问题：（1）将土壤表层泥土稀释液煮沸15min后获得的样品中，
29、仍然含有一些活的菌种，原因是_。（2）图中将菌种接种到平板1的方法是_；将菌种接种到平板2之前，接种工具常用_法进行灭菌。为了逐步分离、纯化得到目的菌种，平板1和平板2中的培养类型都应该属于_培养基。对于使用频繁的菌种可接种到上图试管中的_培养基上临时保藏。（3）用稀释涂布平板法在5个平板上都接种稀释倍数为104的样品液0.1mL，培养一段时间后，平板长出来的菌落数分别为182、160、168、175和190，据此推测，每mL样品液中的细菌数量为_个。稀释涂布平板法能够通过统计平板上的菌落数来推测样品中的活菌数目，原因是_。【答案】 煮沸消毒法不能杀死细菌的全部芽孢和孢子 稀释涂布平板法 灼烧
30、灭菌（灼烧） 选择 固体斜面 1.75x107 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌【解析】【试题分析】1.因为芽孢对不良环境有较强的抗性。所以枯草在煮沸过程中，不含芽孢的细菌被杀死，而含有芽孢的枯草杆菌能够生存下来，在适宜的条件下进行繁殖生长。2. 微生物的接种方法很多，最常用的接种方法为平板划线法和稀释涂布平板法。在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基称为选择培养基。固体选择培养基有利于菌种的分离纯化。将菌种接种到试管的固体斜面培养基上是常用的临时保藏菌种的方法。3. 用稀释涂布平板法纯化细菌后可进行计数。每mL样品中的菌株数(CV)M，其中代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL），M代表稀释倍数。（1）煮沸消毒法不能杀死细菌的全部芽孢和孢子，因此将土壤表层泥土稀释液煮沸15min后获得的样品中，仍然会含有一些活
