1、生化基础培训材料临床检验基础知识培训1 临床检验的工作及分类临床检验是指将病人的血液、体液、分泌物、排泄物和脱落物等标本，通过目视观察、物理、化学、仪器或分子生物学方法检测，并强调对检验全过程（分析前、分析中、分析后）采取严密质量管理措施以确保检验质量；从而为临床对疾病提供诊断和治疗提供依据。1.1临床检验的分类 1.2血液检验样品的基本概念静脉血是最常用的样品。静脉穿刺抽取血液是最常用的方法。血清的上层淡黄：不加抗凝剂，血液凝固后离心分离色的液体。供生化、电解质、免疫等检测用。血浆：加抗凝剂混匀后离心分离的上层淡黄色液体。主要供凝血及检测用。全血：加入抗凝剂混匀后的均匀体。主要用于血细胞的分
2、析。血细胞：红细胞（RBC）、白细胞（WBC）、血小板（PLT）。 红细胞：起运输氧气和二氧化碳营养作用。正常人红细胞的范围是400500万/ul. 偏高：心肺疾病、烧伤、长期生活在高原的人等。 偏低：多种贫血，根据红细胞的数量可分为重度、重度、轻度贫血。 白细胞：吞噬、抵抗外来侵袭人体病原体，对人体起到保护作用。正常人白细胞的范围是400010000/ul。细菌性感染，白细胞数值升高；病毒性感染，白细胞数值正常或降低。 血小板：在止血过程起着重要的作用。正常的血小板范围是1030万/ul 血红蛋白：也称作血色素，是红细胞的成分，起着运输氧气和二氧化碳的作用。正常的范围110-160克/升2血
3、常规检验项目：红细胞、白细胞、血小板计数、血红蛋白测定、白细胞分类。手工检验方式：细胞计数：将血液按一定比例稀释后滴入专用的计数盘中，在显微镜的显示下，计数细胞的个数后乘以稀释倍数。这种方法误差大，结果不准确。白细胞分类：推成薄片，然后染色，在显微镜下计算出五种白细胞所占的比例，然后填写报告单。血细胞分析仪：现临床血常规检验普遍使用血细胞分析仪。替代手工检验，而且还能打印检验报告单。 A血细胞分析仪：功能：一定体积内血细胞数量及异质性进行分析的仪器，主要对白、红细胞，血小板计数，血红蛋白定量。分类：1、有三分类和五分类2、有双通和单通（双通道的有两个检测孔，把白细胞和红细胞分开来测，双通的每小
4、时可以做60个标本，单通的每小时可以做30个标本）3、全自动和半自动特点和卖点：1.采用国际领先的双核嵌入式数字化电路系统，提供强大、稳定的控制与分析能力，2.红白细胞分析采用独立双通道检测，测试结果更加准确，避免交叉勿染，同时降低了堵孔率。3.样本定量采用磁球定量器，是最经典、稳定精确地样本定量方式，特点是定量体积终生不漂移，而且不受管道污染影响，4.数据分析采用可编程逻辑控制数字电路，完全不受电磁信号干扰，提供最稳定的分析结果，5.操作简单，双通道操作方便速度快，免维护，模块化设计维修更快捷，6.试剂开放成本低，每个标本不超过1块钱，仪器设计寿命强，7.所有配件为高性能终生配件，采用够经典
5、设计具有高度的运行可靠性。国内一线品牌：深圳的迈瑞BC3000，2800,2600,2300江西特康二线品牌：深圳普康6000 6800 6300 桂林优利特 美思康 百特。三线品牌：长春和深圳一些小厂家。国外品牌：美国的贝克曼 日本的西思美康（原日本东亚）光电，法国的ABX根据对白细胞的区分：三分类（三分群），五分类。根据仪器工作时，在机内稀释或机外稀释情况：半自动、全自动。血细胞分析仪的工作原理：电阻抗原理（三分类）：利用白细胞的电阻大于电解质溶液（稀释液）的电阻，细胞通过微孔时，俩极之间的阻抗值增大，产生电压脉冲信号而进行血细胞计数和体积测定。（如下图所示）联合检测原理（五分类）：采用多
6、种现代高科技技术，如电阻抗、激光、高频电磁波、流式细胞术和化学染色，特殊融血剂等多方位联合检测同一个细胞。血液细胞分析检测系统：1.血细胞仪器 2.稀释剂 3.溶血剂 4.清洗剂 5.染色液 6.质控血 7.校准品。B生化分析仪一、 生化的功能测量人体各项生化指标二、 生化的分类1、 生化按自动化程度的高低可以分为全自动生化和半自动生化。2、 根据反应原理可分为：连续流动式、分立式、3、 按反应方式可分为普通液体型和干片型。4、 根据选择方式可分为随机任选式和固定项目式三、生化的发展趋势随意连续高速度，组合化，超微量化，智能化和尖端化四、全自动生化和半自动生化的区别1、半自动生化分析仪：在分析
7、过程中的部分操作是用手工完成的（如加样，加试剂，混匀和结果记录）而吸入反应液，保温比色测定，结果的计算和打印等功能是由仪器完成的。其特点在于体积小，结构简单灵活性大，价格便宜。2、全自动生化分析仪：从加样开始到打印结果都是由仪器自动完成的自动化仪器，操作者只需要将样品放到分析的特定位置上，选择程序开动仪器即可等去检验结果。其特点就是功能齐全，灵活性大易于操作，主观误差小，准确度，精密度和分析效率都高！五、生化分析仪三种常用方法1、终点法2、动力学法、速率法、连续监测法3、两点法 特点及卖点I型生化特点；全封闭的固态光学系统，性能为定不易受干扰，钛合金比色杯容积小，易于冲洗，最大限度减轻交叉污染
8、。吸液量可编程调节最低500微升即可满足测量精度要求。采用终点法的测量方法，由程控步进电动机驱动吸液，测量精度高等特点。I型生化的卖点：所有项目都可以做，价格便宜，试剂开放！V型生化特点：1、大屏幕液晶显示，中文显示，中文打印。2、全封闭固态光学系统。无机械单元，纯电子电路，性能稳定可靠，故障率低。3、八个干涉滤光片，滤光片密封，可以防止滤光片在潮湿的环境下发霉，特别适合在沿海地区使用。8个波长同时测量，零转换波长转换时间，真正意义上的同步双波长测量。4、采用意大利BT公司固态后分光核心技术，后分光技术一般都用在全自动生化上。5、钛合金比色杯容积小，易于冲洗，最大限度减轻交叉污染。6、可存储5
9、000个病人测量资料和200个试验项目。7，光源寿命长，使用寿命大于3000小时。卖点：采用生化分析技术的起源地意大利BT公司的固态后分光核心技术1、无机械单元，纯电子电路，性能稳定可靠，故障率低。2、滤光片密封，可防止滤光片在潮湿环境下长霉，特别适合沿海地区使用。3、8个波长同时测量，零转换波长响应时间，真正意义上的同步双波长测量。4、 全自动生化分光系统均采用后分光技术 分光片光 源 滤光片 比色池 光电传感器 340 380 492 405 510 546 578 630固态后分光光路原理IX型生化是在V生化的基础上加入计算机。市场上的竞争品牌：有深圳锦瑞，长春曼特诺，深圳的盛信康全自动
10、生化：全自动生化 就是生化分析中，取样、加试剂、混匀、孵育、检测、计算、显示、打印以及清洗等步骤都由计算机控制，按程序设定自动完成的仪器。 机械臂替代了人在使用半自动生化中的手工操作，准确度高，重复性好，稳定性好，大大降低劳动强度，提高检测效率。1全自动生化分类1.按比色方法分类 一：流动比色池 低档进口全自动生化如：SABA18（沙巴），EOS等 国产全自动生化如：D200，D300（英诺华仿EOS），A7（松上仿SABA),AMS18（奥普森仿SABA），雷杜，赛诺迈德，优利特二.分立式比色杯 200速度以上中高档全自动生化均采用这种比色方法2.按测试速度分类 一：低速 180测试/小时，
11、220测试/小时，240测试/小时， 二：中速 300测试/小时，400测试/小时， 三：高速 800测试/小时，1600测试/小时，及以上 3.全自动生化主要技术要点 一.速度 二.单，双试剂盘 三.试剂冷藏 四.单，双加样针 五.搅拌混匀 六.样本孵育，气浴，水浴 七.加样针及比色系统清洗2KHA320全自动生化简介1.速度：最大280测试/小时2.测量方法：动力学法，终点法，两点法等3.试剂盘：40个试剂位，可同时测试40个项目4.样品盘：63个样品位，含标准，质控，急诊位5.反应位：96个可重复使用的反应杯6.样品量：1100uL:1uL/步7.试剂量：300uL500uL8.试剂针：
12、有液面感应9.比色池：35ul10.冲洗：自动冲洗管路，耗水量0.2升/小时11.光源：长寿命6V 10W卤素灯12.波长：340，405，492，510，546，578，62013.吸光度：02.5Abs14.软件：中文界面，Windows XP或200015.质控：具有丰富的质控功能16.存储：200个项目，100万个结果3.同档次产品对比加样针，搅拌针，双盘，清洗4.市场策略一.市场定位：KHA320全自动生化适合：县级以下医院，乡镇卫生院，私人诊所，社区卫生服务站及大型医院急诊二.卓越的性价比三.替代半自动生化的首选机型，为低档的全自动生化四.五.与半自动生化比，大大降低了劳动强度，提
13、高了测量精度，完全脱离对检验员技术，手法的依赖六.随着乡镇卫生院购买力的增强，仪器价格的降低，该仪器将在2到3年时间内普及开来。特别是效益好，有一定规模的乡镇卫生院，将率先购买。目前，全国有乡15306个，镇19369个，市场前景广阔，潜力巨大。七.该产品量大、面广，适合采用经销制，但经销商报单，则可给予保护八.首付30，其余70安装调试完毕付清八.保修一年，上门服务5.竞争对手国产：迈瑞BS180 BS200 BS330 科华 迪瑞 英诺华艾诺 劳拉 森龙 蓝韵 优利特 锦瑞 鑫贝西 华天恒达进口：日立 奥林巴斯 东芝 贝克曼 罗氏3、临床化学（生化）检验 通常称为临床生化检验。是采用化学的
14、方法对临床标本（血清、脑脊液、尿液等）进行定性或定量分析，为临床对疾病的诊断和治疗提供依据。生化仪基础知识生化仪的工作原理是根据手工操作的流程设计制造的。检验某个生化项目，就是将一定量的样品和一定量的试剂混合后，在一定的温度下（37）条件下进行化学反应后产生颜色，测定其颜色吸光度（A）的大小，和已知的校准品（标准）进行比对，从而得计算出样品的浓度。手工生化操作流程:加试剂加样品孵育（37）混匀计算结果比色混匀或加二试剂 填写报告单 半自动生化仪：从加样品到比色前的工作由手工完成，比色、计算结果、打印报告由仪器完成。全自动生化仪：全部操作都由仪器完成。生化仪工作原理：主要运用了光谱技术的吸收光谱
15、法。波长：光是一电磁辐射波。波长从200nm400nm 的电磁辐射，为紫外光。波长从400nm700nm的电磁波辐射称可见光。以波长为（）为横坐标，以吸光度（A）为纵坐标绘制出的一条曲线成为吸收曲线。波长 最大吸收波长最小吸收波长 在一段波长范围内，有最大吸收波长 max 和最小的吸收波长 min ，在最大吸收波长处测定可获得最大的测定灵敏度。生化检测时，一般都选此波长。吸光度的意义 一束强度为I0 平行单色光通过一个含有浓度为C的吸光物质，厚度为L的吸收池时，如上图一些光被吸收，光的强度从I0衰减为It，则该溶液的吸光度（A）等于：A=-log It/I0= log I0/ItLamber
16、beer 定律：A= C L其中为吸光系数，C为溶液的浓度，L为吸收池的厚度（cm）。某溶液的吸光度等于该物质的吸光系数，浓度和光径L（cm）的乘积。当光径不变时，浓度和吸光度称正比，这是生化分析仪利用吸收光谱法进行定量测定的基础。如下图：Lamber beer 定律成立条件：1.被吸收光为单色平行光。2.待测的溶液为稀溶液。生化仪的分类 按自动化程度：半自动和全自动 按反应方式：流动比色池式、分立式、离心式、干式检测系统：仪器、试剂、校准品、质控品、操作程序组合成检测系统。生化仪的一些基本概念及术语解释：校准品：是和被检测样品（血清）属同一物质，但检验项目的浓度值是已知的。在测定过程中与未知
17、浓度的样品一同检测，检出其吸光度A值后，用来比对计算被测样品浓度值，主要是起校准作用。质控品：日常工作中随样品一同检测，记录其结用于观察监测果变化情况，系统可靠性和稳定性。常用生化检测项目： 总胆红素（TBILI）、直接胆红素(DBILI)、总蛋白（TP）、白蛋白(ALB)、肌酸激酶(CK)、碱性磷酸酶(ALP)、丙氨酸氨基转氨酶(ALT/GPT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST/GOT)、r-谷氨酰氨基转移酶(GGT/ r-GT)、乳酸脱氢酶(LDH-L)、肌酸激酶同功酶(CK-MB)、-羟丁酸脱氢酶(HBDH)、-淀粉酶(-AMS)、血糖(GLU)、尿素（UREA/BUN）、肌酐(Cre)、尿
18、酸(UA )、三酸甘油酯(TG)、胆固醇(CHO)、蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)、钙(Ca)、磷（P）、镁(Mg)等。双波长：在检测过程中，设置一个主波长和一个副波长同时进行检测。主波长指测定某物质时，产物颜色对光吸收的特有波长。副波长是指测高密度脂定某物质时，为消除其他干扰物质在主波长造成测定干扰所设定的波长。双试剂：检测某个项目时，先加入试剂，与标本的干扰物质起反应，五分钟后再加入试剂启动真正的测试反应，从而使测定结果更加准确。目的是：消除干扰物质对检测的影响，从而使结果更加接近真值。结果准确性：检测结果与真值之间的差异。速度：生化仪速度是指每小时检测多少个生化项目。交叉
19、污染：生化仪在加样过程中或加试剂过程中产生的携带从而对检测结果准确性产生的影响。生化仪的交叉污染率一般都小于1%，有些仪器甚至为零。反应杯空白：在特定波长时，光通过蒸馏水为反应体系所检测的吸光度值。一般生化仪在工作之前都要做此项检测以确定I0的值。试剂空白：在特定波长下，光通过相应测定项目试剂为反应体系所测吸光度值。样品空白：在特定波长下，光通过样品和不具备与样品反应的液体为反应体系所测的吸光度值。反应曲线：生化仪在检测过程中的实时反应曲线图形。就是以吸光度为纵坐标，以反应周期为横坐标，将每个反应周期所测的吸光度A连成线，起到观 察、监测、分析反应过程作用。前分光：流动比色池和半自动生化分析仪
20、都采用前分光。后分光：一般全自动生化仪都采用后分光。生化仪检测方法：1、终点法:是最常用的分析法。因为需要有校准品（标准），故又称比例终点法。是经过一系列反应时间后，当反应达到平衡（终点）的分析方法。有1点和2点终点法。a、1点终点法：取反应到达平衡时间后的一点吸光度值（A1）计算结果。见下面反应曲线图：A1b、二点终点法（双试剂）：首先样品与双试剂中不参与主反应的1试剂混合经过一定时间后读取吸光度A1。此时再加入正式反应的2试剂进行反应。到达终点时间后读取吸光度A2，用A2-A1计算结果。见下面反应曲线图：A1A22、二点法（速率）：在反应过程中选择适当两点测定其吸光度，计算出单位时间（常为
21、分钟）内吸光度的变化量计算待测物质浓度方法。主要用于Jaffe法测定肌酐和酶法尿素测定。不过上述两种项目也可用速率法替代。见下面曲线图。 A2A13、速率法（动力学法、连续监测法）： 是在测定酶的活性或酶代谢产物时，连续取反应曲线中呈线性变化吸光度值（A/min）来计算结果。因在反应线性时间内各点间的吸光度差值为零故又称谓零级反应。见下面曲线图形：检测线性区域4、多标准法（非线性法）：当有些物质的浓度和吸光度不成比例时选用此方法。其原理是使用多个（3-6）浓度的校准品，在选定波长下测定其吸光度值，利用浓度和吸光度之间的关系绘制非线性标准曲线。生化分析仪多采用Logig-log等方法进行拟合计算
22、出曲线各常数。适用于免疫分析方法，如C-反应蛋白、类湿因子、免疫球蛋白、抗“O”、载脂蛋白等等。样品浓度结果计算公式1、终点法： 校准品浓度值（已知） 被检样品浓度（C）= 被检样品吸光度 校准品吸光度（A）2、速率法： TV 酶 U / L = A / min _ 1000 SV S P：（依白赛努）被测物质的摩尔吸光度TV：反应液总量（试剂+样品）SV：样品量SP：光径 （1 cm ）光栅：实际上就是一种的特殊的材料上刻蚀一些列相距很近的平行排列的狭缝，当平行光束照射到狭缝上时，反射出不同波长的单色光谱供生化检测选择用。但光栅在紫外区域的分光效果不是很理想。滤光片（干涉滤片）：使用透明材质
23、，通过镀膜或调整电层的厚度，使光源灯 发出的平行光透过此材料时产生特定波长的单色光。用滤光片轮的转动来选择不同波长的滤光片更加快速便捷，特别适用于半自动和流动池式生化分析仪。温度：生化反应是化学反应对温度要求很高。温度不稳定的将直接导致结果不准确。生化仪采用多方法、高精密控制，使温度波动0.1.光源灯：一般生化仪使用的都是石英卤素灯。石英卤素灯的输出强度及寿命都高于钨丝灯。卤素（常用碘）可将灯丝的热点上升的钨运回灯丝，因此可以提高灯的工作电流又可以延长灯的寿命。石英在高温下不会软化，且不吸收紫外线，能加强紫外部分的辐射。质量控制：在生化仪检测过程中，为了监控整个检测系统的稳定性和可靠性，发现和
24、寻找检测过程中的误差及产生的原因，确保检测结果在允许误差范围内的一种手段。质控方法：对质控品连续检测20次，计算其平均值，将此值作为靶。同时计算出20次的标准差（SD）和变异系数（cv%）绘制成质控图。每天在工作时，质控品随标本同时检测将其结果绘制在质控图中，观察其与靶值的偏离程度。每天质控品的结果应控制在2SD范围内。质控图：Levey-Jennings图 C血凝仪功能：测量血液凝固时间分类：有单通双通和四通检测方法：1、光学法（比浊法），深圳、武汉、南京和长春2、光电磁珠法 济南 亚森3、双磁路磁珠法 中勤世帝，普利生，赛克西得,太平洋特点及卖点：采用双磁路磁珠法，性能稳定，不易受干扰。中
25、文显示，中文报告输出，可存储100项检测项目、1000个病人的检测结果。试剂开放，而且用量极少。双磁路磁珠法可以消除黄胆、溶血和乳糜等对测试结果的影响。光学法对血样要求很高，杯子不透明，或有气泡等原因都会影响测试结果。竞争品牌：中勤世帝，普利生，赛克西得也是采用双磁路磁珠法，但是价格比较高。血凝仪原理：一 、透射比浊法：当向样品（血浆）中加入凝血激活剂（试剂）后，凝血开始，反应管中纤维蛋白凝块形成，吸光度也逐渐增强，当凝块完全形成后，吸光度恒定不发生变化，此时仪器自动记录下的时间即为凝血时间。二、 磁珠法：测试杯的俩侧各有一组驱动线圈，它们产生恒定的交替电磁场，使检测杯内特制的去磁小钢珠保持等
26、幅振荡运动。凝血激 活剂加入后，随着纤维蛋白的产生增多，血浆的粘稠度增加，小钢珠的运动振幅逐渐减弱，仪器根据另一组测量线圈感应到小钢珠运动的变化，将运动幅度衰减到50%时确定为凝固终点。三、 散射比浊法：在检测通道的单色光源与检测放大器成九十度直角，当向样品中（血浆）中加入凝血激活剂（试剂）后，凝血开始，反应管中纤维蛋白凝块形成，样品的散射光强度逐步增强，仪器把这种光学变化描绘成凝固曲线，当样品完全凝固后，散射光的强度不再变化，此时仪器自动记录下的时间即为凝血时间。血凝仪检测项目：凝血酶原时间(PT)部分凝血活酶(APTT)凝血酶时间(TT)纤维蛋白原（FIB） 用途：一、 手和血栓性术前常规
27、检测项目二 、对出血疾病诊断三 、在抗凝治疗过程中起检测作用D电解质分析仪功能：了解病人的电解质的平衡情况，辅助医师诊断分类：1、按测试项目分可分为2项、3项、4项和多项分析仪。2、按自动化程度分为全自动和半自动3、按工作方式分可分为干式和湿式特点及卖点：1.PVC外壳2.离子电极寿命长，电极一年之内免费更换3.随机赠送半年的试剂，4.试剂成本低，测试成本低，如上海迅达一组试剂需要300块钱左右，公司试剂只需200块钱左右。5.测量方法是采用离子选择性电极直接法。竞争对手：希莱恒 康立 迅达 奥迪康原理：在一种电解液中，大多数盐电离成离子，在此电解液中插入离子选择电极(指示电极)作为电池的正极
28、,参比电极作为电池负极，组成原电池。在相关的离子选择电极和参比电极之间形成一电极电位差，即电池电动势。通过测量电池电动势即可测出相应的离子浓度。检测项目：K、Na、Cl、CaF尿液分析仪十项 十一项兼容设计，中文操作界面，可以打出十三项中文报告单，具有单条测试连续测试两种分析模式，可以与尿沉渣工作站联机，测试速度：120个标本每小时。卖点：颜色和浊度可以从报告单上打印出来尿仪技术要点：1、速度 2、测量项目竞争对手：长春 深圳原理： 试剂带：有数个含有各种试剂的试剂垫，各自与尿中相应检测成分独立反应，而显示不同颜色，颜色的深浅与尿液中所含浓度呈正比。吸附有尿液的试剂带产生化学发应而出现不同颜色
29、，但仪器光源灯照射，其照射后，其反应光被球面积分析仪接收，自动计算出反射率，然后与标准曲线比较自动打印出各种相应的成分的反应。实际上尿液分析仪就是一台简单的定性干式生化仪。 尿液检测项目：PH、亚硝酸盐（NIT）、蛋白（PRO）、葡萄糖（GLU）、隐血（BLD）、酮体（KET）、尿胆元（URO）、白细胞（LEU）、抗坏血酸（VC）、肌酐（Cre）、离子钙（Ca）、胆红素（BIL）、比重（SG）。 分析仪使用的工作环境：应远离于强磁场的干扰电压;110v/220v(最好配用稳压电源或UPS，功率要在2KW以上)温度：1530湿度：85%仪器用水：电导率1 ul 建立配套的分析系统：方法、仪器、试
30、剂、校准物、指控品相配套，组成一个分析系统。自动生化分析技术的实践证明：只用使用相配套的校准分析仪系统，才能得到准确可靠的结果。G微量元素分析仪功能：是测人体内钙 铁 锌 镁 铜 铅等元素的含量的仪器测量方法分类：1、电化学 2、原子吸收：普析 博辉特点及卖点：1.双通道机型2.是国内同类产品中唯一配备静汞电极的微量元素3.极谱法和溶出法相结合的微量元素4.试剂成本低，6项单人次两块钱/次.5.静汞电极的优点是不容易污染，目前其他厂家还在用滴汞电极（如贵阳彩月，青岛三凯）6.可以做头发和末梢血（做头发是要外+天平和焚烧炉）青岛三凯和天津兰标只有一种测试方法（极谱法，不能用来测血铅）竞争对手：山东电讯七厂，济南齐力，济宁东盛，贵阳彩月H血 流 变功能：测人体血液粘稠度的仪器。必须和电脑打印进联机，检测过程中只需
