1、.,诱导多能干细胞技术(induced pluripotent stem cells,iPS Cells),杨 通E-mail:,内部资料，仅供参考,.,捷易生物,特色技术平台：iPS技术平台（外周血、尿液等非整合诱导及多种分化）CRISPR/Cas9基因编辑（敲除效率高，非整合）二代测序建库和数据分析（可做单细胞或极少量样本建库）产品平台：总代理KAPA BIOSYSTEMS,abm等北美优质工具酶（如二代测序）,.,（二）重点任务,科技部“十三五”重点专项,干细胞与转化医学,遗传相关疾病,.,胚胎干细胞（embryonic stem cell，ESCs）,Wikipedia,体细胞重编程,
2、.,诱导多能干细胞（induced pluripotent stem cells,iPS cells）最初是日本人山中申弥（Shinya Yamanaka）于2006年利用病毒载体将四个转录因子（Oct4,Sox2,Klf4 和c-Myc）的组合转入分化的体细胞中，使其重编程而得到的类似胚胎干细胞（ES）的一种细胞类型。,iPS细胞,.,人诱导多能干细胞（hiPS)研究简介,Yamanaka,Cell.2009,Rescued by genome editing(CRISPR/Cas9,TALEN),iPSC-based therapy,.,患者体细胞取材的创伤性。hiPS细胞诱导时外源基因的
3、插入。细胞培养液中动物源性成份的使用。传统基因打靶的低效率。,hiPS面临的挑战,.,捷易的优势1取材灵活（外周血、尿液）,.,捷易的优势2非整合型质粒电转（无整合）,.,捷易的优势3Xeno-free培养（无异源性物质）,.,捷易的优势4CRISPR/Cas9基因编辑,特色：1）Cas9 mRNA和sgRNA电转2）单链DNA 做Doner3）Cas9蛋白和sgRNA电转,Recovery or Construction of disease model in iPSCsPoint mutationMulti-gene mutationLarge fragment deletionLarge
4、 fragment insertion,.,非整合型hiPS建系的周期及价格,8.8万元,.,疾病特异hiPS在遗传病疾病机制研究中的思路,1）建立病人特异iPS细胞模型（比较与正常的差异）；2）CRISPR/Cas9基因修复验证遗传突变的重要性；3）高通量测序寻找疾病机制,.,建立DISC1突变家系来源的iPS细胞系（包括正常和突变），并分化成神经元，比较差异；用基因编辑技术确认DISC1的作用；二代测序寻找机制,.,Figure 1|Normal neural differentiation,but markedly reduced totalDISC1 protein levels in
5、 forebrain neurons derived from patient iPS cellscarrying the DISC1 mutation.,.,Figure 2|Defects of glutamatergic synapses in forebrain neurons carryingthe DISC1 mutation.,.,Figure 3|A causal role of the DISC1 mutation in regulating synapse formation in human forebrain neurons.,.,Figure 4|Dysregulat
6、ion of neuronal transcriptome encoding a subset ofpresynaptic proteins,DISC1-interacting proteins and mental-disorder associated proteins in human forebrain neurons carrying the DISC1 mutation.,.,疾病特异hiPS在遗传病基因治疗中的思路,1）建立病人特异iPS细胞模型；2）基因编辑技术修复基因突变；3）检测基因修复后相关基因的表达。,.,建立乙型地中海贫血病人来源的iPS细胞系；运用CRISPR/Cas9技术修复突变基因；病人来源iPS和修复的iPS分化成HSC,检测HBB基因表达。,.,.,Thanks for your attention!,
